Name: 성인 Zebrafish의를 Gavaging (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2013-08-11T14:00:00.000+00:00
Duration: 3 min 9 s
Description: 배우세요 성체 제브라피시 경관위관법으로 정확한 용액 투여 기술을. 이 방법은 구강-분변 경로를 통한 병원체 연구에 필수적이며, 실험의 정밀도를 높여줍니다.

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록펠러 대학 비교 생명 과학 센터는이 프로젝트에 대한 지원을 제공했습니다. 우리는 기술 지원을 쟈넬 Monnas 감사합니다.

1. 마취 용액을 제조 <ol><li> 원액이나 분말 형태에서 하나의 시스템 물 150 ㎎ / MS-222 L의 용액을 준비합니다. </li><li> 산도 측정기를 사용하여 pH를 확인합니다. </li><li> pH가 7-7.5 사이까지 중탄산 나트륨 버퍼가 필요. </li><li> 복구 시간을 안으로 복구하는 물고기는 일반적으로보다 1 분입니다에 대한 MS-222에서 무료로 시스템 물 탱크를 준비합니다. </li></ol> 2. 투여 장치를 준비 <ol><li> 입에서 물고기의 장 전구에 대략 길이보다 조금 더에 분명 22-G 주입 튜브를 잘라. 처음에는, 우리는 필요한 길이에 대한 최선의 추정치를 얻을하는 데 사용되는 각 새 그룹에 대해 하나의 물고기를 마취하는 것이 좋습니다. </li><li> 그것은 안전하고 분리의 위험이 없을 때까지 ½ 인치 22-G 바늘 위에 컷 명확한 주입 튜브를 밀어 넣습니다. ½ 22-C 바늘을 사용할 수없는 경우, 응용 프로그램에 더 이상 바늘을 잘라roximately 그 길이입니다. </li><li> 완료되면, 카테터 주입 튜브 1 바늘의 끝에서 cm, 또는 물고기가 작은 경우 짧은 대해 확장해야합니다. </li><li> 1-CC luerlok 주사기에 22 G 바늘 허브를 연결합니다. </li></ol> 3. 위관을위한 준비 <ol><li> 메스 블레이드와 스폰지로 홈을 잘라. </li><li> MS-222에서 무료로 시스템 물에 스폰지를 적시십시오. </li><li> 평평한 표면에 적신 스폰지를 놓습니다. </li><li> 22 G 카테터 튜브와 1-CC 주사기로 투여에 해당하는 5 μL 솔루션을 그립니다. </li></ol> 4. 마취 투여 <ol><li> 빠른 절차를하기 전에 적어도 24 시간 동안 물고기. </li><li> 그것의 바로 잡기 반사를 잃고, 그리고 꼬리 지느러미 핀치에 응답하지 않지만, 아가미의 움직임을 유지 할 때까지 MS-222 솔루션에있는 물고기를 놓습니다. 이는 일반적으로 약 2-3 분 걸립니다. </li><li> 마취 용액에서 물고기를 제거하고에 배치머리를 약간 스폰지에서 튀어 나온 스폰지의 홈하지만, 아가미 스폰지에 의해 덮여. </li><li> 수직 위치에 스폰지를 이동합니다. </li><li> 22 G 카테터 튜브를 사용하여 제브라 피쉬의 입을 엽니 다. </li><li> 팁 아가미 (약 cm 또는 튜브의 길이) 과거 때까지 부드럽게 튜브를 삽입합니다. 주입 튜브 강제 할 필요는 없습니다. 저항 튜브 아가미 아치 또는 심장을 타격 할 수 있습니다 제안합니다. </li><li> 저항이있을 경우, 부드럽게, 철회 위치를 변경하고 다시 시도하십시오. </li><li> 천천히 물질을 주입. </li><li> 주입하는 동안 솔루션은 아가미 나 입을 통해 종료되지 않습니다 있는지 확인하십시오. </li><li> 복구 탱크로 스폰지 곳에서 물고기를 제거합니다. </li><li> 복구는 일반적으로 이하 1 분에 발생 똑바로 수영과 균형을 유지 물고기로 표시됩니다. </li><li> 적극적으로 M 추방 물고기를 시각화하여 그림과 같이 역류에 대한 물고기를 모니터링입하거나, 아가미 운동에서 aterial. </li><li> 그들이 회복되면 물고기들은 정기적으로 탱크로 반환 할 수 있습니다. </li></ol>

<ol><li>Royes, J. -A. B., Chapman, F. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aRoyes%2C+J-AB+%22Preparing+Your+Own+Fish+Feeds%22">Preparing Your Own Fish Feeds</a>. , Department of Fisheries and Aquatic Sciences, Florida Cooperative Extension Service, Insitute of Food and Agricultural Sciences, University of Florida. (2009).</li>
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</ol>

저자는 그들이 더 경쟁 재정적 이익이 없다는 것을 선언합니다.

의미 이 기술은 개선 성인 제브라 피쉬를 gavaging에 대한 두 가지 이전에 설명한 기술에 비해 몇 가지 장점을 제공합니다. 첫째, 물고기를 억제하는 스폰지의 사용은 두 사람이 필요로 설명한 기술을 반대 한 사람이 절차를 수행 할 수 있습니다. 7 둘째, 카테터 주입 튜브 인해 차 외상을 최소화 할 수있는 IV 카테터보다 더 유연 유사 무딘 팁 주사기를 사용하여 천공한다. 7,8 셋째, 명확한 튜브를 사용하여 솔루션을 쉽게 물고기를 입력 시각화 할 수 있습니다. 그리고 마지막으로, 투여 장치는 많은 물고기가 gavaged해야 할 때 신속하고 효율적으로 재사용 할 수 있도록 안정적입니다. 일반적으로 투여 기술은 소비와 제브라 피쉬에 경구 화합물 관리의 다른 방법에서 볼 수 농도 변화를 감소시키고, 같은도 P에 필요한 물고기의 양을 줄일 수 있습니다실험을 erform. 1-5 ...

제브라 피쉬에 구두 화합물을 관리하기위한 현재의 방법은 관리 화합물 공급 위에 상단 코팅, 젤라틴 다이어트 1로 혼합, 소금물 새우 2에 bioencapsulated, 지질 캡슐 다이어트 3, 왁스 스프레이 구슬 4에 글루텐 기반의 다이어트를 통해 혼합 (가) 있습니다. 5 제한 경구 투여의 방법들은 높은 침출 속도와 각 물고기에 의해 불완전하거나 예측할 수없는 복합 소비를 이용하실 수 있습니다. 전염성 질병 연구에, 물고기에 투여 감염 복용량 연구의 성공을위한 중요한 수 있습니다 알고 있기 때문에 이러한 변수는 문제가 있습니다. 또한, 전작 수조에 투여 특정 화합물은 연구 중에있을 수 있습니다 창자 효과가 발생하기 전에 아가미를 제브라 피쉬에 독성 병변을 일으킬 것으로 나타났습니다. 6 위관 알래스카와 제품의 정확한 수량을 관리하는 다른 실험실 동물 종에 사용되는 표준 방법입니다생물 의학 및 제약 연구에 연구를위한 nown 농도. 최근에 문헌에 기술 된 제브라 피쉬를 gavaging하는 방법이 있습니다. 설명 하나의 기술 솔루션의 5 μL를 전달하기 위해 2-20 μL 피펫에 부착 된 24 G 카테터 칼집을 사용하여 두 사람 방법입니다. 설명 7 방법은 첫 번째와 두 번째의 사망률 8.7 %의 속도와 39 %를했다 각각 재판, 사망의 대부분은 임신하는 여성에 기인 하였다. 두 번째 투여 기술은 5 medakas에 대한 솔루션의 μL (Oryzias의 latipes). 사망률 8 정보가 제공되지 않았으며 투여 설명되지 않았습니다 수행하는 정확한 과정을 관리하는 데 사용 무딘 팁 투여 주사기를 설명했다. 위로 물고기의 체중의 1 % 동물 관리 및 실험실 제브라 피쉬에 캐나다위원회에 따르면, 위관을 통해 관리 할 수 있습니다. 9,10 우리의 목표는 COM 정확한 양을 전달하는 반복, 안전하고 효율적인 방법을 개발하는 것이 었습니다파운드 구두 남녀 성인 제브라 피쉬에와 재생의 모든 단계합니다. 이 절차는 화합물의 정확한 경구 투여가 요구되는 모든 연구에 적용 할 수있다.

<table><tbody><tr><td colspan="4">Equipment</td></tr><tr><td>스폰지</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>1cc 루어 잠금 주사기</td><td>Becton Dickinson Co</td><td></td><td></td></tr><tr><td>22-G Micro-Renathane 임플란트 튜빙(컷)</td><td>Braintree Scientific, Inc.</td><td></td><td></td></tr><tr><td>1 22-G 바늘 (절단, 필요한 경우)</td> <td>Becton Dickinson Co</td><td></td><td></td></tr><tr><td>pH 측정기</td><td>Hanna 프로브</td><td></td><td></td></tr><tr><td>1 메스 블레이드</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr> < td colspan ="4"> [헤더]</td></tr><tr> < td colspan = "4 "> 시약 / 재료 </td></tr><tr><td>MS-222 (Finquel)</td> <td>Argent Laboratories</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

성인 zebrafish의를 gavaging

Gavaging Adult Zebrafish

제브라 피쉬는 생물 의학 연구에서 생체 내 모델에서 중요 해지고있다. 효과적인 방법이 개발 및 과학 연구를위한 솔루션 화합물 또는 대리인을 제공하기 위해 활용해야합니다. 성인 zebrafish의 구두로 화합물을 관리하기위한 현재의 방법은 물고기의 자발적 소비의 변화로 인해 부정확합니다. 위관 절차는 생물 의학 연구에 연구 제브라하는 병원체의 정확한 양을 제공하기 위해 개발되었다. 생후 6 개월 성인 제브라 피쉬는 150 ㎎ / L로 마취 MS-222을 버퍼링 컷 22-G 바늘 팁에 부착 된 유연한 카테터 주입 튜브를 사용하여 용액 5 μL와 gavaged. 튜브의 끝이 아가미 (약 1cm)을지나 연장까지 유연한 튜브는 제브라 피쉬의 구강으로 낮아졌다. 이 솔루션은 천천히 창자에 주입 하였다. 이 방법은 물고기가 평온 무사하게 회복과 함께, 시간의 88 % 효과가 있었다. 이한 사람이 한 시간 20-30 물고기를 투여 수있는 절차도 효율적입니다. 이 방법은 정확하게 성인 zebrafish에있는 전염성 질병 연구, 또는 다른 화합물의 연구에 에이전트를 관리하는 데 사용할 수 있습니다.

임신하는 여성을 포함한 물고기의 남녀가 성공적으로 (그림 1) gavaged 하였다. 성공적인 절차는 아가미 나 구강을 종료 볼 수없는 액체를 분 미만 소요됩니다. 튜브 카테터 제거에 볼 수없는 피, 힘없이 쉽게 들어갑니다. 이 절차는 약 10 분 물고기 당 30 ~ 45 초, 평균 3-4 물고기를 투여 할 필요 빠르다. 제브라 피쉬는 모든 솔루션의 5 μL로 gavaged 할 수 없습니다. 10 μL 솔루션 위관은 50 %의 성공률 (그림 2)의 결과. 10 μL의 투여가 임신하는 여성도 완전 실패했습니다. 본 연구에서는 성인 물고기 0.2g을 각각의 평균 무게. CCAC의 권고하여,이 솔루션의 4 μL 각 물고기에 투여 할 수 있다는 것을 의미한다. 5 μL의 현재 사용은 이러한 권장 사항에 부합 될 것이다. 이 기술은 약 10 % mortalit했다다음날 시체로 발견 된 임신하는 여성에 주로 기인 Y 속도. 이...

동물 모델로 제브라 피쉬의 사용 증가 화합물 및 솔루션의 알려진 양의 전달을위한 효과적인 방법의 개발이 필요합니다. 아래에 설명 된 위관 절차는 성인 zebrafish의를 안전하고 효율적으로, 안정적으로 솔루션 정확한 양의 경구 제공 할 수 있습니다.

성인 Zebrafish의를 Gavaging

The zebrafish has become an important in vivo model in biomedical research. Effective methods must be developed and utilized to deliver compounds or ...

이 영상의 전체적인 목적은 성체 제브라피쉬에게 경관물을 투여하는 기술을 시연하는 것입니다. 저희는 구강-분변 경로를 통해 전염되는 병원성 미생물을 연구하기 위해 이 기술을 개발했습니다. 이 기술을 통해 정확한 양의 용액을 투여할 수 있습니다.성체 제브라피시 연구를 위한 과정입니다. 전체 과정은 네 단계로 구성됩니다. 첫 번째 단계는 가바지(gavage) 장치를 준비하는 것입니다.두 번째 단계는 150 mg/L의 완충 MS 2 22로 물고기를 마취시키는 것입니다. 세 번째 단계는 준비한 용액을 물고기에게 존데로 강제 경구 투여하는 것입니다. 마지막으로 물고기의 회복 상태를 확인하고 부작용 유무를 모니터링합니다.강제 경구 투여 장치를 만들기 위해, 22게이지 임플란테이션 튜브를 물고기에게 적합한 길이로 자른 후 22게이지 바늘에 연결하고 1mL 루어 락 시린지에 고정합니다. 용액이 준비되면 장치 안으로 흡입합니다. 제브라피쉬에게 투여할 때는 스펀지에 메스 날이나 가위로 틈을 내어, 물고기를 스펀지에 놓았을 때 안정적으로 고정될 수 있도록 합니다.스펀지는 습기를 유지하기 위해 시스템 워터에 미리 적셔 두어야 합니다. 또한 시술이 완료된 후 물고기를 옮길 수 있도록 마취제가 없는 시스템 워터로 구성된 회복 탱크를 준비해야 합니다. 시술 전 최소 24시간 동안 물고기를 굶기십시오.뜰채를 사용하여 물고기를 MS 2 22 마취 수조로 옮깁니다. 꼬리지느러미를 꼬집었을 때 반응이 없는 것으로 마취되었음이 확인되면, 물고기를 마취액에서 꺼내 스펀지 위에 올립니다. 이때 머리는 스펀지 밖으로 약간 돌출되되 아가미는 덮이도록 배치합니다. 스펀지를 수직 상태로 세우고 22 gauge 식립 튜브를 사용하여 제브라피시의 입을 엽니다.튜브의 팁이 심장 높이를 지날 때까지 조심스럽게 삽입합니다. 삽입 길이는 물고기의 크기에 따라 다르며, 저항이 느껴지면 조심스럽게 튜브를 뺀 후 위치를 조정하여 다시 시도하십시오. 제브라피시의 장관으로 튜브를 강제로 밀어 넣을 필요는 없습니다.적절한 위치에 도달하면 용액을 주입하고 튜브를 제거합니다. 스펀지에서 물고기를 놓아 회복 수조로 옮깁니다. 올바르게 수행되었다면, 튜브가 제브라피시의 장관 속으로 부드럽게 들어갔을 것입니다.아가미나 입으로 용액이 배출되는 것이 보이지 않아야 합니다. 튜브 끝단이나 물고기의 아가미에서 혈액이 관찰되지 않아야 합니다. 가장 흔한 문제는 입이나 아가미를 통해 액체가 배출되는 것이며, 이는 튜브가 물고기 내부로 충분히 깊게 삽입되지 않았음을 나타냅니다.이 절차의 전체 성공률은 88%입니다. 적절하게 수행되었을 때, 액체 투여량은 5 µL 이하여야 하며, 이를 초과할 경우 절차의 성공률이 심각하게 저하됩니다. 10 µL의 용액을 투여하려고 시도했을 때, 전체 성공률은 50%로 떨어졌습니다. 본 영상에서는 성체 제브라피쉬의 경관 영양법(gavage) 수행 방법을 시연하였습니다. 이 절차는 제브라피쉬에게 정해진 양의 용액을 정밀하게 전달하는 데 사용될 수 있습니다.이 기술이 이전에 설명된 기술들에 비해 갖는 장점은 더 유연한 재료를 사용하여 임신한 암컷에게 더 효과적으로 존데 투여(gavage)를 할 수 있다는 점입니다. 시청해 주셔서 감사하며, 연구에 좋은 결과가 있기를 바랍니다.

Research

연구

JoVE Journal

Biology

생물학

본 연구에서는 표준 배아 미세주입 및 실체현미경 장비를 활용한 제브라피쉬 치어의 새로운 미세강제투여(microgavage) 방법을 제시합니다. 우리는 미세강제투여가 다양한 물질을 제브라피쉬 치어의 장관 내로 정밀하게 정량 투여하는 데 유용한 안전하고 효율적인 기술임을 입증합니다.

Zebrafish 애벌레의 Microgavage

제브라 피쉬 배아 발달 생물학 연구를위한 훌륭한 모델입니다. 배아 동안, 제브라 피쉬의 샘플 관찰 및 분석을위한 세 가지 차원의 과제를 제시하는 노른자 대량으로 개발할 수 있습니다. 이 프로토콜은 현장 (WISH) 스테인드 제브라 피쉬 배아 표본 전체 마운트의 2 차원 평면 장착 준비를 만드는 방법에 대해 설명합니다.

전체 마운트하여 제브라 피쉬 배아 시편 스테인드 관찰 및 분석을위한 평면 마운트 준비<em&gt; 현장에서</em&gt; 하이브리드

심혈관 연구를 위한 제브라피쉬의 사용은 성인 심장에 대한 연구로 확장되고 있습니다. 이러한 응용 분야의 경우, 심장 조직을 빠르고 간단하게 분리하는 것이 사후 변화를 피하고 적절한 수의 샘플을 얻는 데 중요합니다. 여기에서는 성체 제브라피시 심장을 빠르고 재현 가능한 방법으로 해부할 수 있습니다.

높은 처리량 응용 프로그램에 대한 성인 Zebrafish의 마음의 복구

여기서 우리는 제브라 피쉬 섹스의 분화 및 유지 보수의 조사를 용이하게 애벌레 제브라 피쉬의 성선 조직을 분리하기위한 프로토콜을 제시한다.

애벌레 Zebrafish의 생식소 조직의 해부

이 프로토콜의 목표 높은 처리량 패션에 애벌레 zebrafish의 용기를 통해 붙일 레이블 음식의 통과 시간을 측정 하는 것입니다.

애벌레 Zebrafish를 사용 하 여 창 자 환승 시간의 높은 처리량 측정

골격 근 재생 조직 상주 근육 줄기 세포에 의해 구동, 근육 이영양증 등 많은 근육 질환에서 손상 되는, 그리고이 재생 하는 근육의 무능력 결과. 여기서는 근육 질환의 제브라피시 모델에서 근육 재생을 검사할 수 있는 프로토콜을 설명합니다.

근육 질환의 제브라피시 모델에서 근육 재생 검토

이 프로토콜은 간 재생의 연구를 가능하게 하기 위하여 성인 얼룩말물고기에 있는 간의 복부 엽을 제거하기 위한 절차를 기술합니다.

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여기 우리는 성인 zebrafish에서 역전사 궤도 주사를하는 방법을 보여줍니다.

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