옥수수와 테오신테 라인에 우스틸라고 성 실증의 병원성을 평가하기위한 신속하고 효율적인 방법

이 절차의 전반적인 목표는 바늘 주입, USTA Lago maus 세포 현탁 배양을 통해 접종하고 maze tete 및 maze teosinte cross intres lines의 질병 내성 반응 스크리닝을 수행하는 것입니다. 이는 먼저 접종 및 스크리닝을 위한 식물 라인을 선택하여 수행됩니다. 다음으로, 실험 및 대조 바늘 주입 접종 실험을 위한 씨앗을 심습니다.

10일 후, U로 만든 세포 현탁액을 각 식물의 줄기에 주입합니다. 마지막으로, 실험 플랜트와 제어 플랜트의 저항 반응을 비교합니다. 궁극적으로, 당신과 함께 접종된 식물의 표현형을 시각화하여 성공적인 바늘 주입 접종을 보여주는 결과를 얻을 수 있습니다. 마이스.

이 기술의 가장 큰 장점은 병원체를 잎 사이에 직접 전달한다는 것입니다. 이것은 병원체 침투 문제를 제거합니다. 여기에 나타난 바와 같이 접종 및 스크리닝을 위한 식물 라인을 선택하기 위해 U Mais에 대한 특성이 없는 저항성이 있는 2개의 미로 라인, 5개의 테오신테 라인 및 40개의 미로 테오신테 교차선을 실험 및 대조 바늘 주입 접종 실험을 위해 본 연구에 사용되었습니다.

손가락으로 씨앗을 흙 속으로 반 인치 정도 밀어 넣고 흙으로 가볍게 덮어 각 식물 라인의 씨앗 4개를 작은 평지에 심습니다. 그런 다음 식물을 성장실에 넣고 씨앗이 젖을 때까지 물을 주고 물을 준 후 토양 아래에 남아 있는지 확인합니다. 섭씨 28도와 20도의 낮과 밤 환경, 각각 14시간과 10시간의 빛과 어둠 주기로 식물을 키웁니다.

그리고 캐노피 상단에서 초당 약 500 마이크로 몰의 광합성 활성 방사선. 낮과 밤의 상대 습도를 각각 약 70%와 90%로 유지하고, 모든 식물을 동일한 생장실에 두어 실험 전반에 걸쳐 일치하는 생장 환경을 유지한다. 씨앗을 심은 후 8일 후, 멸균 루프를 사용하여 냉동 글리세롤 스톡의 후이스를 감자 포도당 한천 또는 PDA 플레이트에 줄무늬를 만들고, 섭씨 30도에서 이틀 동안 배양하고, 층류 후드 아래에서 잘 자라고 있는지 정기적으로 모니터링합니다.

멸균 이쑤시개를 사용하여 각 균주에 대한 단일 콜로니를 선택하고 PD 육수 3ml 튜브에 넣습니다. 배양물을 섭씨 30도 및 200RPM에서 이틀 동안 배양하고 주기적으로 성장을 확인합니다. 다음으로, 배양물의 OD 600을 측정하여 OD 1.0으로 성장했는지 확인합니다.

물을 사용하여 배양물을 30ml의 최종 부피에서 밀리리터당 100만 개의 세포의 최종 농도로 만듭니다. 이러한 병원성 세포 현탁액의 농도는 지속적으로 식물의 좋은 감염을 초래합니다. 그런 다음 접종하기 전에 균주로 만든 두 가지를 동일한 부피로 혼합하십시오.

3ml 주사기에 세포 현탁액을 채우기 전에 제어 주사기에 물을 채워 식물에 대한 손상을 최소화하면서 주입하십시오. 조직은 각 주사기 끝에 457mm x 1.3cm 피하 주사 바늘을 부착합니다. 성장 챔버에서 식물을 제거하고 토양 선 바로 위에 90도 각도로 주입합니다.

U maus의 바늘을 실험 식물의 줄기에 줄기 중앙이 될 때까지 조심스럽게 삽입하십시오. 약 100마이크로리터의 세포 현탁액을 주입합니다. 그것은 줄기를 통해 밀어 넣고 식물의 소용돌이 속으로 이동할 때 볼 수 있습니다.

주사기가 비워질 때까지 추가 실험용 식물을 계속 주입합니다. 그런 다음 물을 채워 식물 조직의 바늘을 청소하고 모든 식물이 주입될 때까지 주사기를 다시 채웁니다. 물 주사기를 사용하여 유사한 방식으로 대조 식물을 주입합니다.

주입이 완료되면. 매일 식물을 성장 챔버에 다시 넣으십시오. 토양에만 물을 주고 병원균 발생 및 식물 저항성 반응을 확인하십시오.

1-5 저항 반응 등급을 사용하여 접종 후 7일, 10일, 14일 및 21일 또는 DPI에 대한 각 식물의 저항 반응을 평가, 점수 및 기록합니다. 등급 척도의 수치는 질병의 중증도가 증가함에 따라 증가합니다. 예를 들어, A1C, 1 A 또는 2 저항 반응은 저항을 나타냅니다.

3, 4 또는 5 저항 반응은 감수성을 나타냅니다. 실험 플랜트와 대조 플랜트의 저항 반응을 비교하고 A1C, 1, a 또는 2 저항 반응 등급의 실험 플랜트를 선택합니다. 이 식물은 마티스에 대한 저항성으로 간주됩니다.

이 실험에서 부식질을 접종한 대부분의 식물은 감염에 취약했습니다. 식물은 검은 텔리오 포자를 동반한 줄기와 기저 담즙 형성에 의해 심각한 질병 발병을 보였습니다. 질병의 심각성으로 인해 접종 후 여러 식물이 죽었습니다.

대조적으로, 대조군은 매우 깨끗하고 식물의 어느 부분에서도 병원균 발생을 보이지 않았는데, 이는 실험 식물에서의 병원체 발달이 U Mais에 내성이 있는 3개의 Mais Teosinte 교차 공격선을 이용한 바늘 주입 접종으로 인한 것임을 나타내며, 경미한 경화증에 의해 성공적인 접종이 확인되었으며, 생산 시 시안색 또는 작은 잎 담즙 형성. 이 기술은 재현성과 함께 매우 효율적인 방식으로 수행할 수 있습니다. 이것은 많은 수의 식물에 접종하고 표현형을 분석하는 데 도움이 됩니다.