Name: 헤로인은 절제 쥐의 추구에 장시간 음식 제한의 효과를 연구하기위한 절차 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2013-11-11T20:00:00.000+00:00
Duration: 10 min 35 s
Description: 학습하세요 쥐의 헤로인 자기투여 및 금단 단계에서 장기간 음식 제한이 약물 추구 행동에 미치는 영향을 평가하는 방법을. 이 절차는 중독 재발 메커니즘과 환경 요인의 역할을 이해하는 데 활용됩니다.

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이 작품은 자연 과학 및 공학위원회 디스커버리 프로그램 (미국 : 298915)에 의해 지원되었다, 퐁 드 공들인 뒤 퀘벡 - 상테 (CSBN), 그리고 캐나다 연구 프로그램 (미국) 의자.

1. 동물 모든 쥐 동물 관리에 캐나다위원회의 가이드 라인과 모든 실험 절차에 대한 승인이 콩 코디 아 대학의 동물 연구 윤리위원회에 의해 부여 된에 따라 처리됩니다. <ol><li> 275~300g (남성) 또는 225-250g (여성)에 쥐를 얻습니다. 옥수수 침구 및 파쇄 된 종이를 포함하는 표준 플라스틱 케이지에서 수술까지 쌍의 주택 쥐. </li><li> 반전 명암주기 (오전 9시 30 분 소등)에 쥐를 유지한다. </li><li> 확실히 음식과 물이 금욕 기간을 제외하고 임의로 사용할 수 있습니다합니다. 우리는 일정한 쥐 차우 (20.9 %의 단백질, 67.2 %의 탄수화물과 11.8 %의 지방을)를 사용합니다. </li></ol> 2. 카테터 및 커넥터 <ol><li> 대량으로 카테터를 확인하고 오토 클레이브 멸균 다음 오랜 기간 동안 필요에 따라 사용합니다. </li><li> 12cm 길이의 조각에 실라 스​​틱 튜브를 잘라. <ol><li> 작은 배치, 이쑤시개를 사용카테터 주위에 실리콘의 하락, 끝에서 3cm. </li><li> 24 시간 동안 실리콘 건조하자 다음 압력솥과 카테터를 저장합니다. </li></ol></li><li> 벤드 플라스틱 받침대에 직각, 연결이 될 것입니다 &quot;10까지&quot;정맥의 긴 튜브, 다음 압력솥 및 저장. </li><li> , 조립 무균 플라스틱 받침대에 약 절반 &quot;5 - 업&quot;정맥의 구부러진 금속 튜브를 통해 실라 스​​틱 튜브의 &quot;긴&quot;쪽을 눌러 수술 당일에 카테터. <ol><li> 타이곤 튜브 및 멸균 식염수로 채워진 1 ML의 주사기에 무디게 22 G 바늘을 통해 &quot;10까지&quot;튜브를 연결합니다. </li><li> 방해받지 않는 흐​​름을 보장하기 위해 카테터를 통해 식염수 세척합니다. </li></ol></li></ol> 3. 정맥 도관 수술 <ol><li> 수술을하기 전에 동물 보호 시설 (ACF)의 쥐 적응 일주일 허용합니다. 하체 무게와 쥐의 수술을 수행하지 마십시오3백-3백25g (남성) 또는 250~275그램 (여성)보다. </li><li> 수술 전에 무게와 케타민 / 자일 라진의 혼합물로 쥐를 마취 (13분의 90 ㎎ / kg, IP). <ol><li> 면도 후 알코올 및 수술 스크럽 머리와 (근접 목의 기초에) 오른쪽 어깨의 영역을 청소합니다. </li><li> 감염을 방지하기 위해 페니실린 (450,000 IU / 쥐, 사우스 캐롤라이나)을 주입하고, 수화에 대한 식염수 (SC)의 2 ㎖. 마취에 의해 유도 된 건조를 방지하기 위해 쥐의 눈에 눈물 젤을 적용합니다. </li></ol></li><li> 그 복부에 쥐를 놓고 눈 사이의 머리의 상단에 메스를 사용하여 절개를하고, 꼬리 쪽 쥐의 귀를 향해. </li><li> 표면에 테이프로 팔과의 뒷면에있는 쥐를 놓습니다. 집게와 함께, 단지 쇄골에 주동이의 절개 영역의 피부를 들어 올리고 세로 작은 가위로 잘라 1cm를 확인합니다. </li><li> 두 직선 집게를 사용하여, 외부 경정맥의 VEI 때까지 지방과 다른 조직을 분리N은 노출되어있다. </li><li> 주변 조직에서 혈관을 들어 올려 분리하는 정맥에서 바로 포셉의 팁을 밀어 넣습니다. 주의 깊게 준수 조직에서 혈관을 청소 한 후 들어 올려 약간 뻗어 유지하기 위해 정맥에서 곡선 집게를 삽입합니다. </li><li> 확인 작고, V 자형 작은 봄 가위를 사용하여 혈관의 상면에 잘라. <ol><li> 컷은 혈관 확장제를 사용하여 열 잡고 실리콘 하락 절개 포인트가 될 때까지 심장을 향해 정맥에 카테터의 &quot;짧은&quot;, 3cm 팁을 진행. </li><li> 가능한 한 멀리 꼬리 하나, 실리콘 드롭 단지 주동이의 하나 가능한 한 멀리 주동이의 세번째 : 3 봉합 정맥에 카테터를 연결. </li><li> 그것이 방해 상태를 유지하고 봉합이 너무 꽉 아니라는 것을 보장하기 위해 각 봉합 다음 카테터를 통해 식염수를 전달합니다. </li></ol></li><li> 팔 주위에 테이프를 제거하고 아래로 쥐의 복부 측면을 배치합니다. <ol><li> 지혈 (T)를 삽입머리 절개의 꼬리 쪽의 hrough 및 피하 &quot;포켓&quot;를 만들기 위해 기본 조직으로부터 피부를 분리하려면이 버튼을 누릅니다. </li><li> 카테터가 삽입 된 어깨에 오프닝으로 피부 아래에 지혈을 안내합니다. </li><li> 지혈을 사용하여 결합 조직을 통해 휴식, 단단히의 기초 아래, 가장 주동이의 시점에서 카테터를 클램프 &quot;10입니다.&quot; </li></ol></li><li> &quot;5 - 업&quot;을 분리하고 피부 아래와 쥐의 머리의 상단에있는 절개 밖으로 카테터의 긴 끝을 실. <ol><li> 지혈이 고정 된 위치 아래에 카테터를 절단의 긴 끝 다시 연결하기 위해 가위를 사용하여 &quot;10 업을.&quot; </li><li> 모든 방법 플라스틱 받침대에 &quot;10까지&quot;의 금속 샤프트를 따라 카테터를 빼냅니다. 자유로운 흐름을 보장하기를 통해 식염수를 전달합니다. </li></ol></li><li> 그 뒷면에있는 쥐를 놓고 쇄골 근처에만 절개를 봉합. 헤드 절개 레마한다열려있는. </li><li> 정위 장치에서 쥐를 놓습니다. 불독 클램프 및 청소를 사용하여 머리의 상단에있는 절개의 피부를 멀리 당겨 두개골의 표면을 건조. </li><li> 두개골에 4-5 구멍을 드릴 헤드 캡을위한 발판 역할을하는 구멍에 기계 나사를 삽입, 수동 드릴 비트를 사용합니다. <ol><li> 나사 사이에 &quot;10까지&quot;커넥터를 배치하고 이전에 지혈을 사용하여 만들어 피하 &quot;포켓&quot;에 카테터의 과잉 길이를 감싸. </li></ol></li><li> 두개골의 상단에 &quot;10까지&quot;를 부착하는 치과 용 시멘트를 사용합니다. 시멘트가 완전히 말린 후 정위 장치에서 쥐를 제거합니다. </li><li> (, 5 ㎎ / ㎏, 사우스 캐롤라이나 진통제)과 식염수 2 ㎖ (SC) 케토 프로 펜으로 구성되어 쥐의 수술 치료를 제공합니다. 통증 관리를 지원하기 위해 수술을 다음과 추가로 2 일 동안 케토 프로 펜을 관리 할 수​​ 있습니다. </li><li> 매일 시작 48 시간 수술 후, 플러시 쥐 w멸균 식염수에 헤파린과 겐타 마이신의 i 번째 혼합물 (7.5 IU + 12 μg, 0.2-0.3 ml)에 1 ~ 2 일 복구 기간 동안과 헤로인 자기 관리의 단계를 통해. </li></ol> 4. 행동 절차 헤로인 추구의 음식 제한에 의한 증가의 절차에 대한 타임 라인은 그림 1에 제시되어있다. <ol><li> 조건화 실. <ol><li> 집에 쥐가 개별적으로 조건화 실에 팬이 장착 나무 구획을 감쇠 소리에 둘러싸인. </li><li> 각 챔버는 스테인레스 스틸 금속 격자 바닥, 전면 및 후면 유리 야 벽과 두 개의 금속 패널 측벽으로 구성되어 있습니다. 마운트 두 개의 9cm 오른쪽 측벽의 바닥에서 철회 레버에게, 각 레버 위의 큐 - 빛을 찾습니다. 비 약물 페어링 (비활성) 레버에 응답하는 것은 어떤 프로그램 결과가 없을 때 약물 쌍 (활성) 레버에 응답하는 것은 주입 펌프를 활성화합니다. &lt;/ 리&gt; <li> 활성 레버 위에 톤 모듈 (2.9 kHz에서)를 찾아 왼쪽 측벽의 상단 중앙에 빨간 집 빛을 놓습니다. </li><li> 금속 스프링을 보호하는 액체 회전과 타이곤 튜브를 통해 카테터로 약물 펌프를 연결합니다. 또한, 식품 호퍼와 음식과 물에 대한 무제한 액세스를 허용 물병 각 실을 장비. </li></ol></li><li> 습관 일 : <ol><li> 수술에서 회복 다음에는 조작 적 훈련 챔버에 쥐를 이동하고 24 시간 습관화 기간 동안 수 있습니다. </li><li> 금속 스프링에 쥐를 연결하지 않고 cue-light/tone 단지를 활성화하지 않습니다. </li><li> 활성 레버가 수축 된 남아 있는지 확인하지만, 비활성 레버가 훈련 도중 두 개의 레버 사이의 차별에 도움이 확장되어 있는지 확인합니다. </li></ol></li><li> 헤로인 자기 관리 : <ol><li> 타이곤 튜브에 5 위로 커넥터를 연결하고 금속 스프링에 연결합니다. </li><li> 자기 ADM에 쥐를 허용3 시간 간격으로 구분 된 세 개의 3 시간 세션 동안 10 일 동안 inister 헤로인 (0.1 ㎎ / ㎏ / 주입). </li><li> 활성 및 비활성 레버의 확장뿐만 아니라, 집안 조명과의 cue-light/tone 단지의 활성화의 조명 (실험실 9:30 분경) 어두운 단계의 시작 다음 각 세션 시작 30 초. </li><li> 집에 조명이 꺼져 활성 레버 위의 큐 라이트 / 톤 복잡한이되는 동안 약물 펌프 (5 초, 0.13 ㎖ / 주입)과 20 초 시간 초과 기간의 개시의 활성화 활성 레버 결과에 대한 응답 (FR-1, 20 초 시간 제한) 활성화. 제한 시간 동안 활성 레버 응답은 기록 만 강화되지 않습니다. 비활성 레버 응답은 기록하지만 프로그램 결과가 없습니다. </li><li> 비활성 레버가 1 시간은 다음 날의 첫 번째 세션 이전까지 연장 유지하는 반면 각 3 시간 세션에 이어, 활성 레버가 들어가 있습니다. </li></ol></li><li>절제와 음식 제한 : <ol><li> 자기 관리 교육에 이어, 조건화 챔버에서 쥐를 제거하고 개별적으로 ACF에서 그들을 집, 하나의 약물 유실 하루에 음식과 물에 대한 무제한 액세스를 제공합니다. </li><li> 음식 (FDR) 제한 또는 물리게, 체중, 훈련의 마지막 오일에서 혼합 및 활성 레버 응답의 수에 따라 일치하는 두 개의 그룹으로 쥐를 나눈다. </li><li> 약물 유실 일 후, FDR 쥐 &#39;음식을 제거하고, 13:30 그들에게 쥐 차우의 약 15 g의 먹이. 자신의 기준 BW의 약 90 %로 FDR 쥐 &#39;체중 (BW)를 유지하기 위해 금욕 14 일에 걸쳐 음식의 양을 조절합니다. </li></ol></li><li> 약물 추구 시험 : 금욕 날 (14)의 아침에, 조건화 챔버에 쥐를 반환하고 금속 스프링에 연결합니다. 활성 및 비활성 레버 응답은 동일한 결과를 가지고있는 동안 1 시간 또는 3 시간 세션을 사용(즉, 소멸 조건에서) 약물의 가용성을 제외하고 자기 관리 교육에서의. </li></ol>

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<li>Caprioli, D., Celentano, M., Dubla, A., Lucantonio, F., Nencini, P., Badiani, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ambience+and+drug+choice%3A+cocaine-+and+heroin-taking+as+a+function+of+environmental+context+in+humans+and+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Biol.+Psychiatry%22%5BJournal%5D)">Ambience and drug choice: cocaine- and heroin-taking as a function of environmental context in humans and rats.</a> Biol. Psychiatry. 65, 893-899 (2009).</li>
</ol>

모든 실험 절차에 대한 승인은 동물 보호에 캐나다위원회의 지침에 따라, 콘 코디 아 대학의 동물 연구 윤리위원회에 의해 수여되었다. 저자는 더 경쟁 재정적 이익이 없다는 것을 선언합니다. FS 및 TD 동등하게 여기 원고의 작성에 제시된 절차의 개발에 기여했다.

1) 자발적 약물 섭취와 약물 투여에 대한 제어를 위해, 2) 인간 중독자에서 흔히 투여 경로를 사용 할 수 있기 때문에 여기에서 설명하는 절차는 강한 얼굴의 유효 기간을 가지고, 3) 약물 노출의 (상대적으로) 연장 기간을 반영 과 절제, 그리고 4)는 복직 절차에 필수이지만, 거의 인간의 중독자 14에서 관찰되는 약물 추구 시험 전에 멸종 훈련을 피할 수 있습니다. 또, 절차 모델 5를 찾는 약물에 칼로리 제한의 효과를 고려할 때 중요한 것으로 생각되고 장기간 음식 제한 조건. 우리가 여기에서 설명하는 프로토콜에서 쥐 약물 자기 관리 기간 (24 시간 / 일)를 통해 조건화 실에 보관되어 있습니다. 또한 래트의 ACF로 다시 전송되는 &quot;분대&quot;프로토콜을 이용하여 데이터 수집의 효율을 증가시킬 수있을매일 훈련을 여러 그룹에 대한 허용 따고 하나의 매일 훈련을,. 헤로인이 바람직하다 &quot;홈&quot;환경 ...

약물 중독의 치료에 큰 어려움 중 하나는 심지어 금욕 1,2 연장 기간 후 재발의 높은 비율이다. 인간 중독자의 연구는 재발하는 마약 관련 개별 큐 또는 환경 3 스트레스 생활 사건 4에 대한 노출과 같은 환경 문제의 중요한 기여를, 발견했습니다. 약물 복용과 갈망에 영향을 미칠 것으로 밝혀졌다 일반적인 환경 문제는 만성 음식 제한입니다. 예를 들어, 만성 칼로리 제한은 증가 된 담배를 흡연 5와 연관되어 있다고보고되어있다. &#160; 또한, 다이어트 심각도 (칼로리 제한)을 적극적으로 젊은 여성 6 약물 사용의 증가 유행과 상관된다. 그러나 기본이되는 뇌의 메커니즘은 완전히 이해되지 않습니다. 때문에 인간 연구, 동물 모델의 H에 관한 실용적이고 윤리적 고려 사항관련 신경 메커니즘을 식별하기 위해 개발되었다 번가. 우리는 이전에 급성 (48 시간) 음식 부족 9,10에 노출 된 쥐의 추구 끄는 약물의 재개를 보여주기 위해 복직 절차 7,8를 사용했습니다. 그러나, 회복 과정의 필수적인 부분은 약물 중독 치료 (11)의 일반적인 기능없는 (그러나 회복 절차의 유효성에 대한 포괄적 인 설명은 엡스타인 외. 12 참조) 소등 기간이다. 또한, 인간 만이 만성 음식 제한하지만, 급성없는 음식 부족식이 조작의 특별한 경우에 효과적으로 약물 복용 5,13을 증가 표시했다. 결과적으로, 우리는 약물 추구 만성 음식 제한의 효과에 대한 연구를 허용하는 &quot;절제 절차&quot;(14)를 제안했습니다. 우리가 최근 h의 강력한 증가를 보여 주었다이 절차를 사용하여eroin 가벼운 음식 제한 15 14 일에 노출 된 후 절제 쥐의 추구.

<table><tbody><tr><td>이름</td><td>회사</td><td>카탈로그 번호</td><td></td></tr><tr><td>케타민 (Vetalar, 100 mg/ml)</td><td>바이오니쉬 동물 건강</td><td>현지 유통업체</td><td></td></tr><tr><td>Xylazine (Rompun, 100 mg/ml)</td><td>현지</td><td>유통업체</td><td></td></tr><tr><td>Heroin HCl</td><td>National Institute for Drug Abuse, Research Triangle Park, NC, USA</td><td></td><td></td></tr>를 통해 획득 <tr><td>Anafen 주사 1 mg/ ml 바이알/20ml</td><td>CDMV, 캐나다</td><td>12868</td><td></td></tr><tr><td>장비</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>명</td><td>회사</td><td>카탈로그 번호</td><td></td></tr><tr><td>실라스틱 튜빙(ID 0.02, OD 0.037)</td><td>Fisher Scientific</td><td>1118915A</td><td></td></tr><tr><td>GE 해양 실리콘</td><td>GE</td><td>SE-1134</td><td></td></tr><tr><td>Tygon 튜빙(ID 0.02, OD 0.060)</td><td>VWR</td><td>63018-044</td><td></td></tr><tr><td>캐뉼러(22G, 5개)</td><td>플라스틱 One</td><td>C313G-5up</td><td></td></tr><tr><td>액체 스위블, 플라스틱, 22G</td><td>Lomir Biomedical, Inc.</td><td>RSP1</td><td></td></tr><tr><td>고정 속도 주입 펌프 (3.3 rpm)</td> <td>Coulbourn Instruments</td><td>A73-01-3.3</td><td></td></tr><tr><td>쥐 테스트 케이지</td><td>Coulbourn Instruments</td><td>H10-11R-TC</td><td></td></tr><tr><td>스테인레스 스틸 그리드 바닥</td><td>Coulbourn Instruments</td><td>H10-11R-TC-SF</td><td></td></tr><tr><td>House light-rat</td><td>Coulbourn Instruments</td><td>H11-01R</td><td></td></tr><tr><td>단일 고휘도 큐 랫</td><td>Coulbourn Instruments</td><td>H11-03R</td><td></td></tr><tr><td>톤 모듈 2.9kHz</td><td>Coulbourn Instruments</td><td>H12-02R-2.9</td><td></td></tr><tr><td>개폐식 레버 랫</td><td>Coulbourn Instruments</td><td>H23-17RA</td><td></td></tr><tr><td>밸런스 암</td><td>Coulbourn Instruments</td><td>H29-01</td><td></td></tr><tr><td>사운드 감쇠 상자</td><td>Concordia University</td><td>Home made</td><td></td></tr><tr><td>시스템 컨트롤러 2</td><td>Coulbourn Instruments</td><td>SYS CTRL 2</td><td></td></tr><tr><td>시스템 전원 베이스</td><td>Coulbourn Instruments</td><td>H01-01</td><td></td></tr><tr><td>Habitest Universal Linc</td><td>Coulbourn Instruments</td><td>H02-08</td><td></td></tr><tr><td>환경 연결 보드 & Linc 케이블</td><td>Coulbourn Instruments</td><td>H03-04</td><td></td></tr><tr><td>그래픽 상태 표기법 3</td><td>Coulbourn Instruments</td><td>GS3</td><td></td></tr></tbody></table>

헤로인은 절제 쥐의 추구에 장시간 음식 제한의 효과를 연구하기위한 절차

A Procedure to Study the Effect of Prolonged Food Restriction on Heroin Seeking in Abstinent Rats

인간의 마약 중독자에 마약 관련 단서 또는 이전에 약물 복용과 연관된 환경에 노출 절제시 재발을 트리거 할 수 있습니다. 또한, 다양한 환​​경 적 도전이 효과뿐만 아니라 증가 지속적인 약물 섭취를 악화시킬 수있다. 우리가 여기에서 설명하는 절차는 절제 쥐에서 추구하는 약물의 증가로 표현 약물 갈망에 일반적인 환경 문제, 음식 제한의 영향을 강조한다. 쥐 만성 정맥 정맥 카테터와 이식 한 다음의 레버를 눌러 훈련 10~12일에 걸쳐 IV 헤로인. 헤로인 자기 관리 단계 다음 래트 조건화 챔버에서 제거되고, 적어도 14 일 동안 동물 관리 시설에서 보관. 한 그룹은 음식 (물리게 그룹)에 대한 무제한 액세스에서 유지하면서, 제 2 그룹 (FDR 그룹)은 MI에 노출자신의 체중 결과 LD 음식 제한식이 요법은 nonrestricted 체중의 90 %로 유지. 음식 제한의 날 14 일 쥐가 다시 약물 교육 환경에 전송하고, 약물 추구하는 시험 (예. 레버 프레스 헤로인 배송에 포함되지 않는) 멸종 조건에서 실행됩니다. 여기에 제시된 절차는 음식 제한 쥐에 시험 당일에 헤로인 추구의 매우 강력한 증가가 발생합니다. 또한, 우리는 이전에 사용했던 심각한 식량 부족 조작에 비해, 현재의 절차는 약물 추구에 칼로리 제한의 영향에 대한 더 많은 임상 관련 모델입니다. 또한, 쥐가 인기 복직 절차의 중요한 구성 요소 인 약물 추구 시험 전에 멸종 훈련 단계를 통해 갈 필요가 없습니다으로 인간의 조건에 가까운 수 있습니다.

시간이 지남에 따라 체중은 : 일반적인 결과는 체중이 헤로인 자기 관리 교육을 통해 안정적으로 유지 것을 보여줍니다. 자신의 체중을 증가 버리는 수있는 무제한 액세스 절제, 쥐, 동안 음식을 제한하는 것과 자신의 원래 체중의 약 90 % 물리게 쥐 &#39;체중 75-80% (그림 2)에 자신의 체중을 감소하면서 . 주입, 교육을 통해 활성 및 비활성 레버 응답 : 혼합 및 교육 일에 증가를 응답 활성 레버 반면, 응답 비활성 레버를하지 않습니다 (그림 3). 일반적으로 활성 레버 교육 전반에 걸쳐 증가 응답 및 응답의 높은 속도로 안정. 응답 비활성 레버는 쥐가 제대로 두 레버 사이에 차별 것을 의미, 교육을 통해 최소한의 유지. 마지막으로, 촬영 번호 주입 교육 전반에 걸쳐 증가 할 것이다활성 레버 응답보다 낮은 속도로 안정적으로 유지. 이 해리 인해 약물 주입 다음 20 초 타임 아웃이...

음식 제한 쥐에서 추구하는 약물의 강력한 확대의 데모를 허용하는 절차가 설명되어 있습니다. 헤로인 자기 관리 교육에 이어, 쥐들은 약간 제한하는 음식이 기간 동안, 마약없는 환경에서, 금욕 기간을 통해 이동합니다. 약물 추구는 다음 약물 관련 환경에서 테스트됩니다.

In human drug addicts, exposure to drug-associated cues or environments that were previously associated with drug taking can trigger relapse during ...

이 절차의 전반적인 목적은 금단 상태의 실험실 쥐에서 만성적인 음식 제한과 같은 환경적 조작이 헤로인 추구의 재발에 미치는 영향을 연구하는 것입니다. 이를 위해 먼저 쥐의 경정맥에 정맥 카테터를 외과적으로 삽입하여 회복 기간 후 헤로인 자가 투여가 가능하도록 합니다. 쥐들은 10일 동안 조작적 조건 형성 챔버에서 헤로인을 자가 투여하도록 훈련받습니다.절차의 다음 단계는 금욕 단계로, 쥐들을 동물 시설로 운반하여 먹이 섭취를 제한하거나 제한하지 않는 기간을 갖게 합니다. 마지막으로, 쥐들을 다시 조작적 조건화 챔버로 옮겨 헤로인 탐색 테스트를 진행하며, 이때 헤로인 결핍 레버를 누르는 반응은 헤로인 투여 없이 단서인 빛과 소리의 활성화로 이어집니다. 결과적으로, 헤로인 자가 투여 이력이 있는 만성 먹이 제한 쥐들은 약물 투여 환경 및 약물 관련 단서에 다시 노출됨으로써 금단 상태에서 헤로인 탐색 행동이 강력하게 증가하는 모습을 보일 것입니다.재정립 절차(reinstatement procedure)와 같은 기존 방법과 비교했을 때 이 기술의 주요 장점은, 인간의 상태에서는 관찰되지 않는 명시적인 조작적 소거(operant extinction) 과정이 없다는 점입니다. 또한, 급성 조작 대신 만성 조작을 사용함으로써 인간의 상태에 대한 구인 타당도를 높일 수 있습니다. 이 방법은 약물 및 음식 탐색 행동의 기저에 있는 공통적인 신경학적 메커니즘과 같이, 약물 중독 분야의 핵심 질문들에 답하는 데 도움을 줄 수 있습니다.카테터는 대량으로 준비하여 오토클레이브로 멸균한 후 장기간 사용합니다. 카테터를 제작하려면, 먼저 탄성 튜브를 12 centimeter 길이로 자릅니다. 이쑤시개나 18 gauge 바늘을 사용하여 카테터 끝에서 3 centimeter 떨어진 지점 주변에 실리콘을 소량 도포합니다.실리콘을 24시간 동안 건조시킨 후 오토클레이브 멸균을 진행하며, 커넥터 역할을 할 five up cannula의 긴 튜브를 플라스틱 받침대와 직각이 되도록 구부린 후 멸균합니다. 수술 당일 카테터를 조립하려면, scholastic 튜브의 긴 쪽을 five up cannula의 구부러진 금속 튜브 위로 플라스틱 받침대의 중간 지점까지 밀어 넣습니다. Tigon 튜브와 22 gauge 바늘을 사용하여 five up 튜브를 멸균 생리식염수가 채워진 1 mL 주사기에 연결합니다.카테터를 통해 식염수를 흘려보내 흐름에 막힘이 없는지 확인합니다. 먼저 동물을 마취한 후, 오른쪽 어깨와 머리 부위를 면도하고 알코올과 외과용 세정제로 세척합니다. 안구 건조를 방지하기 위해 겔을 도포한 후, 감염과 탈수를 예방하기 위해 페니실린과 식염수를 주입합니다.주변 조직으로부터 분리된 외경정맥을 표준 기술을 사용하여 노출시킵니다. 정맥 아래에 곡선형 포셉을 삽입하여 정맥을 들어 올린 상태로 약간 신장시킵니다. 정맥에 작은 V자형 절개를 가하고 절개 부위를 벌려 유지합니다.혈관 확장기를 사용하여 카테터의 3 cm 길이의 짧은 팁을 실리콘 드롭이 절개 부위에 올 때까지 심장 방향의 정맥 내로 삽입합니다. 세 군데의 봉합사로 카테터를 정맥에 고정하는데, 하나는 가능한 한 미측(caudal)으로, 하나는 실리콘 드롭의 바로 두측(rostral)에, 세 번째는 가능한 한 두측(rostral)으로 묶어줍니다.카테터에 식염수를 통과시켜 폐쇄되지 않았는지 확인하고 봉합사가 너무 조이지 않았는지 확인하십시오. 다음으로 쥐를 복측이 아래로 향하도록 놓습니다. 머리 부분을 절개하고 지혈鉗(hemostat)을 삽입하여 피부를 하부 조직과 분리하고 피하 포켓을 만듭니다.지혈집게를 피부 아래로 밀어 넣어 카테터가 삽입된 어깨 쪽 개구부를 향하게 합니다. 결합 조직을 뚫고 5-up 기저부 아래의 가장 전방 지점에서 카테터를 단단히 고정합니다. 5-up을 제거하고 카테터의 긴 끝부분을 피부 아래로 통과시켜 머리 상단에 위치한 절개 부위 밖으로 끌어냅니다.가위로 지혈집게(hemostat)가 고정된 지점 아래의 카테터를 자르고, five-up의 긴 끝부분을 다시 연결합니다. 카테터를 five-up의 금속 샤프트를 따라 플라스틱 받침대까지 완전히 밀어 넣은 후, 식염수를 통과시켜 흐름이 원활한지 확인합니다. 봉합사로 상처 부위를 봉합한 후, 쥐를 정위 고정 장치(stereotaxic apparatus)에 배치합니다.노출된 두개골을 깨끗이 닦고 건조시킨 후, 수동 드릴 비트를 사용하여 표면에 4~5개의 구멍을 뚫습니다. 다음으로, 헤드 캡의 지지대 역할을 할 머신 나사를 구멍에 삽입합니다. 나사 사이에 5-up 커넥터를 배치하고, 카테터의 남은 길이는 이전에 만든 피하 포켓 속에 밀어 넣습니다.마지막으로, 치과용 시멘트를 사용하여 5개의 전극을 두개골 상단에 고정합니다. 시멘트가 완전히 건조되면 쥐를 정위 고정 장치에서 분리하고 완전히 회복될 때까지 관찰합니다. 쥐는 조작적 조건 형성 챔버에 개별적으로 수용됩니다.팬이 장착된 방음실 내에 설치되어 있습니다. 오른쪽 측벽 바닥에서 9 cm 위에 두 개의 리트랙터블 레버가 장착되어 있으며, 각 레버 위에는 큐 라이트가 있습니다. 활성화된 레버 위에는 톤 모듈이 배치되어 있고, 왼쪽 측벽 상단 중앙에는 빨간색 하우스 라이트가 위치합니다.먹이와 물은 자유롭게 섭취할 수 있도록 제공합니다. 약물 펌프는 액체 스위블(liquid swivel)과 금속 스프링으로 보호된 타이곤(tigon) 튜브를 통해 카테터에 연결합니다. 수술 후 회복 기간과 24시간의 적응 기간을 거친 후 헤로인 자가 투여를 시작합니다.먼저, 카테터를 heparin gentamycin 용액으로 세척하십시오. 다음으로, 5-up 커넥터를 Tigon 튜브에 연결하고 금속 스프링을 부착하십시오. 각 세션은 암기 시작 시점에 활성 및 비활성 레버를 확장함과 동시에 하우스 라이트를 점등하고 Q 라이트 톤 복합음을 활성화하며 시작합니다.랫트가 10일 동안 3시간 간격으로 배치된 세 번의 3시간 세션 동안 30초씩 헤로인을 자가 투여하도록 합니다. 활성 레버를 누르면 약물 펌프가 작동하고 22초의 타임아웃 기간이 시작되며, 이 기간 동안 하우스 라이트는 꺼지고 활성 레버 위의 Q 라이트 톤 복합체가 활성화됩니다. 비활성 레버 반응은 기록되지만, 프로그래밍된 결과는 발생하지 않습니다.자가 투여 훈련 후, 쥐를 조작적 조건 형성 챔버에서 꺼내 동물 시설 내 개별 케이지에 수용하고 먹이와 물을 제한 없이 제공합니다. 다음 날 약물 세척(washout) 기간 동안, 포만군(sated group)에는 먹이를 계속 제한 없이 제공하는 한편, 식이 제한군(food restricted group)은 금단 기간을 시작하기 위해 먹이의 양을 줄입니다. 금단 상태의 첫날 아침에 약물 탐색 검사를 수행합니다.14일째에 쥐들을 조작적 조건형성 챔버로 다시 옮기고 금속 스프링에 고정합니다. 약물 제공을 제외하고 활성 및 비활성 레버 반응이 자기투여 훈련과 동일한 결과를 갖는 1시간 또는 3시간 세션을 진행합니다. 이러한 결과는 헤로인 투여 기간 동안 체중이 안정적으로 유지됨을 보여줍니다.자가 투여 훈련 금욕 기간 동안, 자유롭게 사료를 섭취한 쥐들은 체중이 증가한 반면, 식이 제한을 받은 쥐들은 체중이 약 10에서 15% 감소했습니다. 여기에서 보는 바와 같이, 훈련 일수가 경과함에 따라 주입 횟수와 능동 레버 반응은 증가했으나, 비능동 레버 반응은 증가하지 않았습니다. 금욕 기간 이후, 식이 제한 쥐들의 능동 레버 반응은 포만 상태의 쥐들에 비해 유의미하게 증가했습니다. 반면, 이 절차 이후 비능동 레버 반응은 매우 낮았으며 그룹 간에 유사한 수준이었습니다.특정 신경화학 및 약리학적 시스템을 표적으로 하기 위해 두개내 주입, 미세투석, 웨스턴 블로팅 및 면역조직화학 기법과 같은 다른 방법들을 사용할 수 있습니다. 이 영상을 시청한 후에는 쥐의 경정맥에 정맥 카테터를 외과적으로 삽입하는 방법과 표준 조작 조건 형성 챔버에서 헤로인 자가 투여 절차를 수행하는 방법을 명확히 이해하게 될 것입니다.

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Research

연구

JoVE Journal

Behavior

행동

복직 절차로 알려진 재발의 동물 모델은, 약물 추구하는 재발 스트레스의 역할을 연구하기 위해 널리 사용되었습니다. 여기, 우리는 온화, 간헐적인 전기 footshock에 급성 노출을 통해 실험실 쥐에서 찾는 코카인의 복직을 유도하는 방법에 대한 리포트입니다.

실험실 쥐의 추구 코카인 Footshock 유발 복직을 유학을위한 절차

음식이나 약물 이점 단서에 대한 응답을하는 것은 금욕의 기간 동안 증가하고 이것은 재발 행동으로 증가 자화율과 관련 있습니다. 자기 관리 자당을 가지고 쥐이 '갈망의 배양 "을 평가하기위한 우리가 세부 절차를.

쥐에서 자당의 갈망의 보육을 평가하기위한 일반적인 방법

출처: Rich, MT, et al. 광유전학을 사용하여 신경가소성을 역전시키고 쥐의 코카인 탐색을 억제합니다. J. Vis. 경험. (2021년)이 비디오는 광유전학을 사용하여 내측 슬상 핵에서 외측 편도체(MGN-LA) 시냅스에 장기 우울증(LTD)을 유도하여 쥐 모델에서 단서 유발 마약 추구 행동을 약화시키는 방법을 보여줍니다. 외과적으로 광섬유를 이식하고 빛에 민감한 이온 채널을 발현하기 위해 바이러스 형질도입된 쥐는 저주파 광펄스로 광유전학적 자극을 받아 신경 전달 물질 방출과 시냅스 약화를 유발합니다. 이 과정은 신경 전달 물질 수용체 내재화를 통해 MGN-LA 시냅스 전달을 감소시켜 궁극적으로 단서와 약물 추구 행동 사이의 연관성을 방해합니다.

쥐의 마약 추구 행동 억제를 위한 장기 우울증의 광유전학적 유도

구강 자기 관리 : 현재의 연구는 실험실 쥐의 입맛 솔루션의 보강 효과를 평가하기위한 새로운 절차를 평가합니다. 이를 위해 조작 적 서로 다른 농도의 달콤한 솔루션의 구강 내 주입을위한 (즉, 레버를 눌러) 응답은 강화를 지속적으로 진보적 인 비율의 일정에 따라 측정 하였다.

실험실 쥐에 Tastants의 강화 속성을 평가하기위한 새로운 방법 : 조작 적 구강 자기 관리

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처벌이 부과 된 금욕을 추구하는 헤로인에 대한 강력한 급성 식량 박탈로 인한 재발을 보여주는 절차가 설명되어 있습니다. 처벌 부과 금욕 모델은 헤로인 자기 관리를위한 추구 및 테이크 체인 일정을 사용하여 성공적으로 구현되었습니다. 헤로인 추구 테스트는 24 시간의 식량 부족 스트레스 후에 수행됩니다.

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