2014년 11월 16일
우리는 온전한 나무 체관부를 보존하고 관찰을 위해 준비하는 기술을 제공합니다. 우리는 체관부 샌드위치(phloem sandwich)라는 장치를 만들어 절지동물, 미생물 및 체관부 조직에 서식하는 기타 유기체를 도입하고 관찰할 수 있도록 합니다.
이 절차의 전반적인 목표는 AOL 샌드위치라는 장치를 만드는 것인데, 이를 통해 가을 조직에 서식하는 절지동물, 미생물 및 기타 유기체를 도입하고 관찰할 수 있습니다. 제공된 프로토콜은 때때로 약간의 변형이 있지만 연구자와 교육자가 나무 껍질 딱정벌레, 진드기, 선충류 및 곰팡이를 연구하는 데 효과적인 도구였습니다. 먼저 적절한 나무가 있습니다.
그런 다음 껍질을 제거하여 F 플롬 층을 드러냅니다. 플롬이 제거되면 실험실로 다시 가져오거나 두 개의 플렉시 유리 사이에 놓습니다. 일단 밀봉되고 단단히 고정되면 유기체를 도입할 준비가 된 것입니다.
연구 중인 소나무는 두께가 수 mm에 달할 수 있는 독특한 흐름층을 가지고 있습니다. 연구 중인 유기체는 어떤 종류의 F 흐름이 필요한지 지시합니다. 여기 우리는 애리조나 북부의 폰데로사 소나무 숲에 있습니다.
우리는 적당한 크기, 큰 왕관, 낮은 가지가 거의 없는 이상적인 나무를 찾고 있습니다. 여기에서 적합한 나무를 찾았습니다. 이러한 특성은 흐름을 제거할 때 모든 분기를 잘라야 하기 때문에 두껍고 제거하기 쉬운 흐름을 제공할 수 있습니다.
다음은 나무를 수확하는 데 사용하는 장비의 예입니다. 나무를 채우는 것은 위험하며 적절한 안전 장비를 갖춘 숙련된 사람만 수행해야 한다는 것을 기억하십시오. 나무가 안전하게 땅에 닿으면 가지를 제거하기 시작합니다.
그런 다음 공을 나무의 지름에 따라 보통 6-8피트 정도의 관리 가능한 조각으로 자릅니다. 이제 나무 껍질을 제거할 차례입니다. 다음은 이 작업을 수행하는 데 사용하는 도구의 예입니다.
존 아이스 (John Ice)는이 과정에서 없어서는 안될 필수 요소이며, 흰색 또는 밝은 황갈색의 힌트가 나타나거나 흐름 층을 나타내는 것이 보일 때까지 나무 껍질을 조심스럽게 긁어 내십시오. 이 레이어는 나중에 유용성을 크게 감소시키므로 가우징하지 않는 것이 중요합니다. 나무의 일부가 적절하게 껍질을 벗겨지면 칼을 사용하여 풀람 조각을 잘라냅니다.
필요한 경우 밑면을 자르면서 이 레이어를 조심스럽게 위로 당깁니다. 일부 나무는 다른 나무보다 쓰러진 나무를 더 쉽게 제거할 수 있습니다. 인내심이 핵심입니다.
어려운 나무로 작업할 때 여름은 일반적으로 쓰러진 나무를 제거하기에 더 쉬운 시기입니다. 비닐 봉지에 5-7 개를 모으면 이것을 진공 밀봉 백으로 옮겨 현장으로 가져옵니다. 이 가방은 영하보다 약간 높은 곳에 보관하는 것이 가장 좋습니다.
이제 이 프로토콜의 필드 구성 요소를 완료하고 실험실로 돌아가 샌드위치를 만듭니다. 샌드위치를 만드는 데 사용하는 것은 다음과 같습니다. 바닥을 따라 다양한 플렉시 유리 플레이트와 쌍이 있습니다.
Paraform은 가장자리를 밀봉하는 데 사용되며 클램프는 플렉시 유리와 흐름 사이에 공간이 없도록 하는 데 사용됩니다. 플렉시 유리 조각을 자르고 뚫으면 90% 이상으로 살균됩니다. 에탄올은 흐름과 크기의 새로운 조각을 제거하여 샌드위치를 구성하기 시작합니다.
플렉시 유리 조각에 적합합니다. 유리는 플렉시 유리를 대체할 수도 있습니다. 다양한 크기의 샌드위치도 다양한 유기체와 시험 길이에 맞게 만들 수 있습니다.
예를 들어, 한 쌍의 나무 껍질 딱정벌레는 한 달 동안 4 데미터 제곱의 떨어진 조각을 사용할 수 있지만 연구가 며칠 이내에 이루어지는 경우 1 데메테르 제곱 조각만 필요합니다. 플렉시 유리의 진입점 수를 변경하여 한 번에 여러 유기체를 도입할 수도 있습니다. 이것은 다른 종의 경쟁이나 포식을 관찰하는 데 유용합니다.
이제 2인치 파라폼을 사용하여 가장자리를 밀봉합니다. Non-G 접착 에폭시 또는 바셀린과 같은 다른 재료를 사용하여 밀봉할 수 있습니다. 다음으로, 플렉시 유리를 유동층에 단단히 고정할 수 있도록 가장자리 주위에 충분한 수의 클램프를 배치합니다.
이제 유기체에 대한 연구를 소개할 준비가 되었습니다. 우리 실험실에서는 종종 Provided 프로토콜을 사용하여 나무 껍질 딱정벌레 및 관련 유기체를 관찰합니다. 그것은 다른 많은 것들 중에서도 일일 터널 길이와 계란 생산과 같은 것들을 관찰 할 수있는 좋은 기회를 제공합니다.
또한 화학 물질 배출물을 추출하고, 딱정벌레를 유발하고, 나중에 생산 및 분석하거나, 처리를 시작하고 반응을 관찰할 수 있습니다. 여기에서 나무 껍질 딱정벌레는 음향 처리에서 벗어나려고 시도하고 있습니다. 우리는 또한 이 프로토콜을 사용하여 진드기, 선충류 및 곤충 포식자를 관찰했습니다.
이 비디오를 시청한 후에는 플라잉 샌드위치를 만들고 특정 학습 요구 사항에 맞게 수정할 수 있어야 합니다. 이 절차는 효과적인 연구 도구일 뿐만 아니라 초등학생부터 대학 수준에 이르는 학생들을 위한 교육 및 발견 목적에 탁월합니다.
본 논문은 나무의 체관부를 보존하고 관찰 가능하도록 준비하는 방법을 제시합니다. 이 기술은 체관 조직에 서식하는 다양한 생물을 연구하는 데 용이한 "체관 샌드위치"를 만드는 과정을 포함합니다.
나무 조직 내의 절지동물 및 미생물 군집을 연구하면 생물 살충제 개발과 산림 건강 관리에 정보를 제공할 수 있는 생태적 상호작용에 대한 통찰력을 얻을 수 있습니다. phloem sandwich 기법은 유기체의 행동을 제어하며 관찰할 수 있게 하여, 해충 방제 연구에서 표적 검증을 지원합니다. 이러한 접근 방식은 중개 바이오마커 식별과 관련된 숙주-병원체 및 숙주-곤충 역학을 명확히 함으로써 초기 단계 발견의 리스크를 줄이는 데 도움을 줍니다.
본 방법은 가설 검증부터 리드 물질 발굴에 이르는 발견 연속체 내에 위치하며, 초기 단계의 생물학적 리스크 감소 및 분석법 개발 워크플로우를 지원합니다.