휴대 통신 분석을위한 단일 세포 미세 주입

안녕하세요, 제 이름은 아나엘입니다. 저는 Oswaldo Cruz Foundation의 Cellular Communication Laboratory에서 일하고 있습니다. 우리는 여기에서 면역 체계와 간의 맥락에서 P2 수용체와 갭 주사를 연구합니다.

오늘은 세포의 미세 주입을 소개하겠습니다. 갭 주사는 시냅스 전달, 심장 수축 등과 같은 생리학적 역할을 합니다. 이 기술의 경우 갭 주입이 기능적인지 여부를 연구할 수 있습니다.

자, 미세 주입 설정의 기본 구성 요소를 살펴 보겠습니다. 여기 우리가 세포를 볼 수 있는 거꾸로 된 형광 현미경이 있습니다. 결과를 기록하기 위한 CCD 카메라입니다.

우리는 여기에 염료를 세포에 도입 할 전류 발생기를 가지고 있습니다. 다음으로 미세 전극이 연결된 홀더가 있습니다. 그리고 홀더에 연결되어 Z, Y, X의 3축에서 미세전극의 이동을 허용하는 미세매니퓰레이터는 실험을 시작하기 전에 미세전극을 만들어야 합니다.

우리는 이 붕규산 유리 모세관과 polar라는 장비를 사용합니다. 여기에 붕규산 모세관을 부착합니다. 이 텅스텐 필라멘트를 가열하여 두 개의 미세 전극을 만듭니다.

이제 텅스텐 필라멘트의 가열과 여기의 파동을 통해 두 개의 미세 전극을 만들기 위해 아래로 당길 것입니다. 쉬운. 첫 번째 단계는 미세 전극에 염료를 채우는 것입니다. 여기서 한 가지 팁은 실험을 수행하기 위해 팁에만 몇 마이크로리터를 채워야 한다는 것입니다.

모든 것을 채울 필요는 없습니다. 자세한 내용을 메모하십시오. 끝부분만 채웁니다.

실험을 시작해 보겠습니다. 우리는 여기 나트륨 용액의 페트리 접시에 세포를 가지고 있습니다. 현재 발전기에 연결된 은색선.

이제 헤드 스테이지에 미세 전극을 부착해야 합니다. 여기 헤드 스테이지에는 전류 발생기에 연결된 또 다른 은색선이 있습니다. 마이크로 전극이 부착되면 욕조 내부에 넣을 수 있습니다.

피펫의 끝이 욕조에 조심스럽게 닿고 있습니다. 이 절차는 페트리 접시 바닥에 있는 팁이 충돌하지 않도록 매우 신중하게 수행됩니다. 욕조 안으로 들어가면 현미경으로 이동하여 마이크로 피펫의 그림자를 찾을 수 있습니다.

확대 렌즈를 살펴보기 시작하는 것이 좋습니다. 피펫의 그림자를 찾으면 미세 조작기를 사용하여 미세 전극을 세포 쪽으로 이동할 수 있습니다. 일단 세포에 매우 가까워지면 미세 전극이 막히지 않았는지 확인하기 위해 테스트 포스트를 수행할 수 있습니다.

우리는 다음에 어떻게 볼 것인가. 여기서 우리는 마이크로피펫을 보고 있으며 마이크로피펫을 세포에 매우 가깝게 조정하고 있습니다. 세포의 좌우 움직임을 볼 수 있습니다.

그런 다음 필터, 형광 필터로 변경합니다. 과분극 펄스를 적용하여 피펫 끝이 막히지 않았는지 테스트할 수 있습니다. 마이크로피펫은 세포 내부에 있기 때문에 과분극 펄스를 적용하여 세포에 염료를 주입할 수 있습니다.

우리는 여기에 느슨한 무료 노란색 염료를 사용합니다. 세포에 염료를 주입한 후 이웃 세포가 갭 주입으로 연결되어 있으면 몇 분 동안 기다리면 이러한 갭 주입에 의한 염료의 확산으로 이웃 세포가 밝아지는 것을 볼 수 있습니다. 우리의 실험에서 우리는 별이 표시된 5 개의 세포가 형광을 나타내는 것을 볼 수 있습니다.

여기에 흉선 상피 세포에서 미세 주입의 실험의 좋은 예가 있으며, 그림 C와 D B.In A와 D는 느슨한 자유 노란색 및 다른 염료의 흉선 불활성 세포에 미세 주입을 보여주며, 삽입물에 나타난 갭 주입을 투과하지 않습니다. 그림 E 및 F의 흉선 상피 세포주는 느슨한 자유 황색으로 미세 주입되고 삽입물에는 느슨한 자유 황색과 갭 주입 블록이 있습니다. 결과는 느슨한 자유 노란색이 이웃 세포로 퍼지지 않았음을 보여줍니다.

다음으로 우리는 덱사메타손의 존재 하에서 흉선 상피 세포에 미세주입을 보고 B.덱사메타손의 정량화는 그림 B.100 주사 중 3개 또는 4개의 세포가 연결된 수가 이 약물의 존재 하에서 더 빈번하게 결합의 정도를 증가시켰습니다. 초보자가 셀룰러 통신 연구에 이 중요한 기술을 수행하는 데 도움이 될 수 있기를 바랍니다. 고맙고 안녕히 계세요.