Name: 척수 허혈 - 재관류의 생쥐 모델에서 흉부 대동맥 폐색에 의해 재생산 할 하반신 마비 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2014-03-03T21:55:00.000+00:00
Duration: 5 min 59 s
Description: 배우세요 생쥐 모델에서 흉부 대동맥 폐색을 통한 척수 허혈-재관류 손상 연구 방법을. 이 기법은 하반신 마비 유도 및 신경학적 결손 평가에 활용됩니다.

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우리는이 프로젝트의 재정적 지원에 대한 연구와 교육을위한 흉부 외과 재단에게 감사의 말씀을 전합니다.

1. 수술 준비 및 마취 <ol><li> 절차에 걸쳐 무균 기술을 준수해야합니다. 모든 악기를 배치합니다. </li><li> 그것은 적절한 온도 (36.5 ℃)에 따뜻하게 할 수 있도록 이전의 마취 유도에 온도 조절 침대를 켭니다. 레이저 도플러 혈류 모니터에 전원이 유도하는 동안 부팅 할 수 있도록. </li><li> 유도 챔버에 마우스를 놓습니다. <ol><li> 조심스럽게 유도하는 동안 마우스의 호흡 속도를 모니터링 할 수 있습니다. </li><li> 즉시 호흡 시각적으로 둔화로 유도 챔버에서 마우스를 제거합니다. </li><li> 마취의 적절성을 평가하기 위해 발가락 핀치를 수행합니다. </li></ol></li><li> 앙와위에서 마우스가 제대로 마취로, 장소 마우스. </li><li> 코 콘에 얼굴을 넣고 가열 테이블에 모든 사지를 고정합니다. <ol><li> 사지가 더 deviati으로, 해부학 적 위치에 고정되는 것을 보장하기 위해 특별한주의를 지불한쪽에. 마우스가 부적절하게 배치되는 경우, 흉골 중에 속 가슴 동맥 절개를 피하기 어렵다. </li></ol></li><li> 가위 또는 상업적으로 이용 가능한 제모 크림을 사용하여 중간 선 가슴에서 머리를 제거하고 낮은 말단 복부 표면을 떠났다. <ol><li> 제모 크림을 사용하면,보다 큰 30 초 장소에서 크림을 남기지 않도록하면, 알칼리 화상이 발생할 수 있습니다. </li></ol></li><li> 적절한 마취를 유지하기 위해 휘발성 마취제를 기화기 농도를 적정한다. <ol><li> 높은 흐름 O 2 이소 플루 란 (isoflurane)을 이용 1~5% 사이에 예상 기화기의 분수입니다. </li><li> 휘발성 마취제를 기화기 농도는 자발 호흡을 유지하면서 자극 수술 중에 마취를 유지하도록 적정되어야한다. </li></ol></li></ol> 2. 직장 프로브 레이저 도플러 배치 <ol><li> 마우스의 직장에 기름을 바른 직장 프로브를 삽입합니다. 가 Oper 장소에 고정침대 ating. </li><li> 36.5 ℃의 대상 직장 온도에 가열 침대를 조정 </li><li> 마우스의 대퇴 동맥에 작은 절개를 멀리 피하 조직으로부터 피부를 해부하다. </li><li> 대퇴 동맥을 통해 레이저 도플러 프로브를 삽입합니다. </li><li> 관류 모니터가 800 관류 단위 이상 등록 될 때까지 프로브의 위치를​​ 조정합니다. <ol><li> 장소에 단단히 보안 조사. 부적절하게 확보 프로브는 거짓으로 낮은 관류 측정을 할 수 있습니다. </li></ol></li></ol> 3. 대동맥 궁 / 쇄골 하 동맥의 해부 <ol><li> 흉골 노치 위 2cm의 피부 절개를 부드럽게 멀리 피하 조직으로부터 피부를 해부하다. </li><li> 악하선 무료 해부. <ol><li> 출혈이 발생하는 경우, 완만 한 압력은 면봉으로 적용될 수있다. </li><li> 무 혈관 평면에 중간 선을 통해 악하선 나눈다. </li></ol></li><li> 부드럽게 집게로 흉골 및 sciss를 사용하여 리프트ORS는 흉골의 중간 선을 통해 1cm의 중간 선 흉골 절개를합니다. 중간 선에서 벗어나 제어하기 어려울 것 내흉 동맥 출혈이 발생할 수 있습니다. </li><li> 흉골의 가장자리에 각 측에 5-0 후퇴 봉합을 놓고 옆으로 운영 침대에 봉합을 확보 흉골을 철회. 기흉을 방지하기 위해 너무 옆으로 후퇴 봉합을 두지 마십시오. </li><li> 기관에 따라 무딘 절개 무료 스트랩 근육을 사용. 왼쪽 스트랩 근육이 노출을 개선하기 위해 가위로 나눌 수 있습니다. </li><li> 조직을 둘러싼에서 흉선을 무료로 해부하다. 큰 혈관이 가시화 될 때까지 무딘 절개를 계속합니다. 흉막 공간에 입구를 방지하기 위해 각별한주의를 기울이십시오. </li><li> 대동맥 궁과 좌측 쇄골 하 동맥에 혈관 클램프를 놓습니다. </li><li> 확인 원심 흐름이 적절하게 방해하고있다. 이 관류 단위&gt; 90 % 감소로 볼 수 있습니다. <ol><li> DESI 가림 계속4-8 분에 대 한. </li></ol></li><li> 혈관 클램프를 제거하고 가슴의 폐쇄하기 전에 지혈을 확인합니다. </li></ol> 4. 흉골 절개하고 피부의 폐쇄 <ol><li> 마우스의 좌측 후퇴 봉합사를 제거한다. </li><li> 오른쪽 후퇴 봉합과 흉골 절개를 닫습니다. <ol><li> (이전에 배치 철회 스티치를 사용하여) 하나의 흉골 봉합 흉골 폐쇄 적합합니다. 다른 스티치를 배치하는 것은 불필요하고, 기흉과 출혈의 위험을 증가시킨다. </li></ol></li><li> 5-0 스티치를 실행과 밀접한 피부. </li></ol> 5. 회복과 수술 후 평가 <ol><li> 복구 케이지에 마우스를 전송합니다. 케이지 회수 챔버의 주변 온도를 증가시키고 환경으로의 열 손실을 감소시키는 가열 패드에 배치되어야한다. </li><li> 밀접 징후 호흡 곤란이나 발작 마우스를 모니터링 할 수 있습니다. 기관의 가이드 라인을 진통제를 관리 할 수​​ 있습니다. Euthanize 마우스는 즉시 발작이나 호흡 곤란이 관찰됩니다. <ol><li> CO 2 챔버 안락사는 우리의 선호하는 방법입니다. CO 2를 사용할 수없는 경우 자궁 경부 전위는 또 다른 옵션입니다. </li><li> 완쾌 사용 휘발성 마취제 및 농도의 길이에 따라, 1-2 시간에 예상 될 수있다. </li></ol></li><li> 일반 케이지에 마우스를 반환합니다. 케이지의 바닥에 음식과 물 장소를 놓습니다. </li><li> 로코 모션 8에 바소 마우스 척도를 사용하여 12 시간 간격으로 신경 학적 상태를 평가합니다. </li></ol>

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</ol>

저자는 더 경쟁 재정적 이익을 선언하지 않습니다.

척수 허혈 재관류에 보조 하반신 마비가 제대로 이해 병리 9의 복잡한의 결과입니다. 이 가장 일반적으로 흉 복부 대동맥 수술 후 볼 수 있지만, 이러한 대동맥 박리증, 외상, 색 전성 현상, 혈관염, 및 전신 저혈압 (10) 등의 모욕의 다양한 하반신 마비가 발생할 수 있습니다. 이 상해 더 이해하고이 부상을 제거하기 위해 미래의 목표를 제공하기 위해, 동물 모델은 필요성이있다. 환자는이 합병증 전시 중 하나를 즉시 또는 지연 마비 시달리다. 이 모델과 다른 사람들이 적절하게 임상 적으로 볼 마비의 11 바이 모달 분포를 평행. 중간 허혈 (4 분)는 지연 마비를 생산하는 동안, 장시간 허혈 (8 분) 즉각적이고 영구적 인 마비의 결과. 제시된 모델은 알을 필요로하는 사람에 비해 장점이 있습니다ateral 개흉술 (12, 13). 중간 흉골 절개술...

하체 마비는 흉 복부 개입을 복잡하게하고 있습니다. 척수 허혈 - 재관류 손상 (SCIR)로 알려진 부상, 위험이 높은 환자 (1)의 최대 20 %에 마비가 발생합니다. 같은 왼쪽 심장 바이 패스, 허리 cerbrospinal 유체 배수구, 저체온 순환 정지 및 늑간 동맥 재 치환술로 수술 부속이 합병증 2의 발생을 감소하지만, 너무 많은 환자가 영향을 계속합니다. 임상 적으로 척수 허혈 및 재관류 손상은 개입 3 다음 마비 즉시 또는 지연 중 하나로 볼 수있다. 그러나이 부상에 대한 우리의 이해는 기계적인 세부 사항의 부족으로 질식하고있다. 그 결과, 몇 가지 옵션이 발생하면 부상을 약하게 할 수 있습니다. 따라서 우리는 척수 허혈의 작은 동물, 쥐, 모델 입대 및 재관류 손상에있다더 잘 발병을 특징. 지금까지 대부분의 연구는이 부상, 즉 쥐 4, 5 토끼, 돼지 6 모델의 특징을 큰 동물 모델을 사용하고 있습니다. 그러나 이러한 그들의 비용, 복잡성, 변수 재현성, 그리고 가장 중요한, 유전자 조작에 사용할 기술의 부족에 의해 제한됩니다. 이러한 게시 된 동물 모델의 가장 신뢰할 수있는 토끼의 복부 대동맥의 신동맥 크로스 클램프를 포함한다. 그러나, 인간의 전방 척추 신경은 대부분 더 근위 지점 7에서 자신의 혈관 공급을 유도. 이 모델에서 척수의 변수 혈관 해부학 임상 사용에 결과를 전환에 어려움을 추가합니다. 이 원고는 임상 적으로 관련성과 사용하기 쉬운 흉부 대동맥 폐색 다음 즉시 또는 지연 하반신 마비에 대한 모델을 제시한다. 미니 sternoto를 통해 대동맥 궁 노출내 덜 침습적이며, 최소한의 병적 상태와 사망률과 높은 재현성 결과를 이끌어 낼 수 있습니다. 기술적 과제 뉘앙스하지 않고이 모델은,이 쉽게 구현 될 수있다 뒷다리 마비의 모델을 생성하기 위해 조심 해부 조직 처리로 극복 될 수 있지만.

<table><tbody><tr><td>VMS 마취 기계</td><td>MDS Matrx</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Isoflurane</td><td>Vet One</td><td>13985-528-60</td><td>2.0% 코 콘을 통해&nbsp;</td></tr><tr><td>인덕션 챔버</td><td>수의사 장비</td><td>941444</td><td></td></tr><tr><td>난방 침대</td><td>Vestavia Scientific</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Lazer 도플러 모니터</td><td>무어 기기</td><td>VMS-LDF1</td><td></td></tr><tr><td>5-0 봉합사, 폴리 에스테르</td><td>Surgidac</td><td>VD-551</td><td>테이퍼 바늘</td></tr><tr><td>미세 해부 클립</td><td>생물 의학 연구 기기</td><td>14-1030, 14-1060</td><td></td></tr><tr><td>외과 기구</td><td>: 정밀 수술 기구</td><td></td>, <td>집게, 바늘 홀더</td></tr></tbody></table>

척수 허혈 - 재관류의 생쥐 모델에서 흉부 대동맥 폐색에 의해 재생산 할 하반신 마비

Reproducable Paraplegia by Thoracic Aortic Occlusion in a Murine Model of Spinal Cord Ischemia-reperfusion

배경 하체 마비는 관상 동맥 중재를 복잡하게하고 있습니다. 기본 병리에 대한 이해의 부족은 발생에게이 부상을 줄이기 위해 발전을 방해하고있다. 현재의 모델은 흉부 대동맥 폐색 다음 재현 하체 마비를 보여줍니다. 방법 성인 남성 C57BL6 마우스는 이소 플루 란으로 마취 하였다. cervicosternal 절개를 통해 대동맥을 노출했다. 하행 흉부 대동맥과 좌측 쇄골 하 동맥은 흉막 공간에 입학하지 않고 확인되었다. 이러한 동맥의 골격 화는 4 분 (보통 국소 빈혈), 8 분 (연장 국소 빈혈)에 대한 즉각적인 폐쇄 (샴) 또는 폐색으로 이어졌습니다. 흉골 절개하고 피부가 폐쇄 된 마우스 복구를 위해 온난화의 침대로 옮겨졌다. 복구 후, 기능 분석은 48 시간까지 12 시간 간격으로 얻었다. 결과 가짜 수술을 시행 한 쥐가 더 관찰 뒷다리 적자를 보여 주었다. 4 분 정도 국소 빈혈을 실시 마우스는 48 시간에 마비를 완료하기 위해 진행 한 다음 12 시간에 최소한의 기능적인 적자를했다. 장시간 허혈을 실시 마우스는 수술 후 기간에 어느 시점에서 관찰되지 뒷다리 사지 운동 즉시 마비가 있었다. 더 관찰 수술 중 또는 수술 후 사망은 없었다. 결론 여부를 즉시 또는 지연 재현 하체 마비는 쥐 모델에서 달성 될 수있다. 또한, 중간 흉골 절개술 및주의 절개 높은 생존율과 재현성을 사용함으로써 달성 될 수있다.

마우스는 가짜 수술 (N = 3) 또는 4 (N = 3) 8 분 대동맥 폐색 (N = 3). 수술 후 마우스는 바소 마우스 점수 (그림 1)에 의해 등급을 매겼다. 가짜 수술을받은 마우스는 수술 후 어느 시점에서 더 관찰 기능 적자를했다. 보통 국소 빈혈 (4 분)을 실시 마우스는 48 시간에 의해 마비를 완료하기 위해 진보적 인 기능 저하와 함께 12 시간에 정상 뒷다리 사지 기능 근처에 있었다. 장시간 허혈 그룹 (8 분)에있는 마우스는 복구 할 수있는 기능이없는 수술 (그림 2) 다음과 같은 완전한 마비를했다. <img alt="그림 1" fo:content-width="5in" fo:src="/files/ftp_upload/50910/50910fig1highres.jpg" src="/files/ftp_upload/50910/50910fig1.j...

척수 허혈 재관류 손상의 기전 이해의 부족은 고위험 대동맥 연산 다음 마비를 방지하기 위해 상기 부속 장치를 방해했다. 따라서, 동물 모델의 개발이 필수적이다. 이 원고는 쥐 모델에서 흉부 대동맥 폐색 다음 재현 하체 마비를 보여줍니다.

Background
Lower extremity paralysis continues to complicate aortic interventions. The lack of understanding of the underlying pathology has hindered ...

다음 실험의 전반적인 목표는 쥐 모델에서 척수 허혈의 영향을 연구하는 것입니다. 이를 위해 먼저 대퇴동맥 위에 레이저 도플러 프로브를 삽입합니다. 다음으로, 대동맥궁과 좌측 쇄골하동맥에 접근하기 위해 흉골 절개술을 수행합니다.그 다음, 척수로 가는 동맥 혈류를 충분히 감소시키기 위해 대동맥과 쇄골하동맥을 조심스럽게 박리합니다. 결과가 도출됩니다. Baso 마우스 점수를 기반으로 한 수술 후 신경학적 결손인 cho를 측정합니다.측방 흉강 절개술과 같은 다른 기존 방법들에 비해 이 기술이 갖는 주요 장점은 흉막강을 침범하지 않는다는 점입니다. 이 방법은 척수의 병태생리나 허혈성 관류 손상에 관한 의문에 답하는 데 도움이 될 수 있으며, 약물학적 중재의 가능성을 제공합니다. 이 기술의 함의는 척수 허혈 후 하반신 마비를 예방하는 치료법으로 확장됩니다.이 방법은 흉부 수술을 어렵게 만드는 하반신 마비에 대한 통찰을 제공할 수 있을 뿐만 아니라, 저혈압이나 혈관 질환과 같이 급성 척수 허혈을 유발하는 다른 질병 과정에도 적용될 수 있습니다. 일반적으로 이 기술을 처음 접하는 연구자는 사망, 출혈 또는 기흉을 방지하기 위해 극도의 주의가 필요하므로 대동맥궁 박리에 어려움을 겪을 수 있습니다. 따라서 우리는 문헌에 널리 발표되어 있지만 우리 동물 실험에서는 더 높은 사망률과 연관되었던 외측 흉벽 절개 접근법으로 인해 여러 어려움을 겪은 후 이 기술을 처음 고안하게 되었습니다.종격동 박리 과정 중 수술 중 사망을 방지하기 위해 극도의 주의가 필요하므로, 이 방법의 시각적 시연이 매우 중요합니다. 텍스트 프로토콜에 따라 마우스를 마취한 후, 충분히 진정되었는지 확인하고 흉부 정중선과 왼쪽 하지 복측 표면의 털을 제거하십시오. 윤활 처리된 직장 프로브를 마우스의 직장에 삽입하고 수술대 상의 적절한 위치에 고정합니다. 가열 베드를 조정하여 목표 직장 온도를 36.5 °C로 설정하십시오.다음으로 대퇴동맥 위를 작게 절개하고 피부를 피하 조직에서 분리하여 박리합니다. 그런 다음 대퇴동맥 위에 레이저 도플러 프로브를 삽입합니다. 대동맥궁과 쇄골하동맥의 박리를 수행하기 위해 관류 모니터에 800 perfusion units 이상의 수치가 기록될 때까지 프로브의 위치를 조정합니다.흉골 절흔(sternal notch) 위쪽으로 2 cm 길이의 피부 절개를 가하고, 피부를 피하 조직으로부터 조심스럽게 박리합니다. 출혈이 발생할 경우 하악선(s

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연구

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Medicine

의학

일방적 hindlimb의 국소 빈혈의 유도에 대한 수술은 레이저 도플러 재관류 이미징에 의해 국소 빈혈의 확인과 증명합니다.

Hindlimb 국소 빈혈의 Murine 모델

호흡 장애는 경추 척수 손상 후 사망의 주요 원인이다. 부분 자궁 경부 손상에 의해 유도 된 호흡의, 재생 가능한 정량화하고, 신뢰할 수있는 전임상 동물 모델을 갖는 것은 이후 호흡 및 비 호흡 신경 가소성을 이해하는 데 도움이 및 추정 복구 전략을 테스트 할 수 있습니다.

후 병변 호흡 신경 가소성을 연구하기 위해 자궁 경부 척수 손상의 생쥐 모델

광혈전증은 척수에 국소 허혈을 유발하는 최소 침습적이고 재현성이 높은 시술이며 생쥐의 척수 손상 모델 역할을 합니다.

쥐의 척수 손상의 모델로 초점 국소 빈혈을 Photothrombosis는 유도

이 기사에서는 신생아 마우스에서 재현 가능한 척수 압박 손상(SCI)을 생성하는 방법에 대해 설명합니다. 이 모델은 자발적인 기능 회복의 기초가 되는 적응 가소성의 메커니즘을 연구하는 데 유리한 플랫폼을 제공합니다.

신생아 마우스 척수 압축 부상 모델

동맥 발가 벗김 부상 다음 재에 내피 세포의 세포 및 분자 메커니즘을 이해하는 것은 혈전증과 동맥의 재 협착을 방지하는 가장 중요하다. 여기에서 우리는 infrarenal 복부 대동맥의 재현 동맥 발가 벗김 부상에 대한 프로토콜을 설명합니다. 절차는 마우스 모델을 사용하여 내피 세포 재생을 조절하는 기전을 연구하기 위해 개발되었다.

쥐 모델에서 Infrarenal 복부 대동맥 클램핑에 의해 재현 동맥 발가 벗김 부상

이 연구는 쥐에서 척수 허혈의 최소 침습적이고 쉽게 재현 가능한 모델을 만드는 기술을 보여줍니다. 대동맥 폐색 시간을 조절하여 다양한 정도의 뒷다리 운동 장애를 일으킬 수 있습니다.

척수 쇄 허혈 모델에서 대동맥 폐쇄 후 재현성 운동 부족

중간 대뇌 동맥의 Intraluminal 필 라 멘 트 폐색 설치류 실험 뇌졸중의 가장 자주 사용 된 vivo에서 모델입니다. 일반적인 경 동맥 복구를 허용 하는 다른 수술 접근 여기, 일반적인 경 동맥의 reperfusion 및 중간 대뇌 동맥 영역 전체 reperfusion 수 있습니다 수행 됩니다.

쥐에 있는 일반적인 경 동맥 수리 통해 Reperfusion를 허용 하는 중간 대뇌 동맥 폐색

대뇌 국 소 빈 혈 reperfusion의 마우스 모델 선의 이상 조사를 설립 하다. 우리는 distally 오른쪽 중간 대뇌 동맥과 바로 일반적인 경 동맥 선 하 고 국 소 빈 혈의 10 또는 40 분 후 혈액 흐름을 복원.

대뇌 국 소 빈 혈 reperfusion의 2 배 폐색 마우스 모델

이 프로토콜은 척수 손상 연구에 대한 최소한의 부수적 손상과 함께 마우스 모델에서 안정적인 횡부 형 척수 손상을 유도하기위한 정확한 라미네절절제술을 만드는 방법을 설명합니다.

마우스에서 완전한 Transection 형 척수 손상의 유도

척수 미세 순환은 척수 손상에 중추적 인 역할을합니다. 대부분의 방법은 미세 순환 표적 치료의 발달을 위해 필수적인 척수 미세 순환의 실시간 평가를 허용하지 않습니다. 여기에서, 우리는 허혈 / 재퍼퓨전의 큰 동물 모델에서 레이저 도플러 - 흐름 바늘 프로브를 사용하여 프로토콜을 제안한다.

허혈/재관류의 돼지 모델에서 척수 미세 퍼퍼퓨전의 실시간 평가

설치류에서 널리 사용되는 장 허혈 재관류 손상(IRI) 수술 모델을 생성하는 방법을 설명합니다. 이 시술은 상장간막 동맥의 폐색과 혈류의 회복을 포함합니다. 이 모델은 수의학 및 인간 의학 모두에서 장내 IRI의 폐색 원인을 조사하는 연구에 유용합니다.

상장간막 동맥의 폐색을 통한 장 허혈-재관류 손상의 설치류 모델

배우세요 생쥐 모델에서 흉부 대동맥 폐색을 통한 척수 허혈-재관류 손상 연구 방법을. 이 기법은 하반신 마비 유도 및 신경학적 결손 평가에 활용됩니다.

척수 허혈 - 재관류의 생쥐 모델에서 흉부 대동맥 폐색에 의해 재생산 할 하반신 마비

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