Name: 실험실 쥐에 Tastants의 강화 속성을 평가하기위한 새로운 방법 : 조작 적 구강 자기 관리 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2014-02-06T13:15:00.000+00:00
Duration: 11 min 16 s
Description: 학습하세요 실험실 쥐에서 구강 자기투여를 통한 단맛 용액의 강화 효과를 평가하는 방법입니다. 이 기술은 뇌과학 및 행동심리학 연구에서 보상 메커니즘을 이해하는 데 활용됩니다.

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이러한 연구는 AM.L.에 NSERC에서 플로리다와 캐나다 대학원 장학금 (CGSD) 캐나다의 자연 과학 및 공학 연구위원회 (NSERC)에서 교부금에 의해 지원되었다

1. 동물 관리 및 주택 모든 실험은 구 엘프 대학의 동물 관리위원회의 승인을, 그리고 동물 보호에 캐나다위원회의 권고에 따라 수행된다. 현재의 연구는 실험 시작시 200~225g 무게 22 성숙한 수컷 스프 라그 - 돌리 래트 (찰스 리버, QC)를 포함한다. <ol><li> 단독 주택의 쥐와 후진 등 / 어두운주기 (오전 7:00 OFF - 오후 7 ON)에이를 유지 보수 지시, 또는 활성주기 동안 발생하는 행동 테스트하는 동안 때를 제외하고 음식과 물에 대한 무제한 사료 액세스. </li><li> 수술 전 1 주일 동안 매일 무게에 의해 식민지 룸과 인간의 처리 쥐를 길들. </li></ol> 2. 구강 내 삽관 수술 : 재료 및 절차 구강 (IO) 수술과 재료는 Limebeer 등. 14에 설명되어 있습니다 <ol><li> construc에T IO 정맥은 길이 약 130mm (0.86 ㎜, 1.27 ㎜, 외경, 내경)에 폴리에틸렌 플라스틱 배관의 조각을 잘라. </li><li> 구강에 고정되는 관은 플랜지 끝 (~ 직경 5 ㎜)가 필요합니다. 2-5 초 동안 납땜 인두와 튜브의 끝을 가열 한 후 즉시 평평한 표면에 대한 튜브의 가열 가장자리를 평평하게하여 플랜지 끝을 만듭니다. 수술 메쉬 디스크 (정맥의 플랜지 끝 부분의 직경을 주위에 맞게 약 6~7밀리미터 지름) 절단 및 디스크 IO 정맥의 플랜지 끝의 뒷면에 닿을 때까지 튜브의 길이에 그것을 실. </li><li> 각 IO 캐 뉼러를 들어, 하나의 추가 수술 메쉬 디스크 (직경 8mm)과 고무 밴드의 세 가지 사각형 컷 (x 6mm 6mm를, 그림 1 참조). </li><li> 수술 전에 24 시간의 최소 항균 용액에 IO 정맥 수술 메쉬 디스크, 탄력있는 사각형을 소독. </li><li> 이전 수술에모든 수술 도구를 utoclave하고 수술 부위를 소독. 수술 사이 도구를 살균하는 유리 구슬 살균기를 사용하고 무균 상태를 유지하기 위해 헤어 네트, 니트릴 장갑, 수술 마스크를 착용한다. </li></ol> 무통 마취 <ol start="6"><li> 수술 전에 약 30 분 항생제 Depocillin (0.33 ㎎ / ㎏) 및 진통제 멜 록시 캄 (5 ㎎ / ㎏ SC)의 피하 (SC) 주사를 관리. </li><li> 아이소 플루 란 (4 % 3 % 유도 및 유지 보수)를 사용하여 전신 마취를 유도한다. </li><li> 쥐가 발가락 핀치에 응답하고, 이전의 어떤 절개를 만들기 위해,면 정맥이 이식하는 쥐의 내부 왼쪽 뺨을 따라 국소 마취를 관리하기 위해 면봉을 스쳐 사용하고,에서와 같은 리도카인 염산과 같은 국소 마취제를 주입하면 생검 바늘 (목베이스)과 헤드 캡 (두피)에 대한 절개. </li><li> 종래의 서지 처음에 양쪽 눈에 안연고 윤활 적용공예. </li></ol> 수술 <ol start="10"><li> 목의 기초에 머리의 10mm X 10mm 패치를 면도. 항균 비누, 이소 프로필 70 % 알코올과 베타 딘 : 다음과 같은 순서로 면도 영역을 채취하고 정화하는 멸균 거즈를 사용합니다. </li><li> 목의 기초에 15 G 스테인리스 바늘을 삽입하고 왼쪽 뺨에 귀 주위에 피하 이동합니다. 바늘 끝의 위치와 구강의 안쪽에 제 1 대구치 뒤에 뺨을 통해 전달합니다. </li><li> 구강 돌출 바늘의 팁을 통해 IO 정맥을 통과 한 후 만 IO 정맥을 떠나 바늘을 제거합니다. </li><li> IO 정맥의 외부 부분에 세 개의 사각형 탄성 디스크 다음에 하나 수술 메쉬 디스크를 실하고 안정을 목에의 뒷면에 노출 된 피부에 그립니다. </li><li> 항균 구강 헹굼 IO 정맥을 세척 </li><li> 수술 이전의 시작 부분에, 나일론 볼트를 수정할(28 mm 길이, 4mm 포인트, 8 밀리 머리) 머리를 제거하고 실의 길이를 따라 2mm 홈을 조각 (그림 2 참조). </li><li> 머리의 정중선을 따라 머리의 10mm X 20mm 스트립을 면도. 항균 비누, 이소 프로필 70 % 알코올과 베타 딘 : 다음과 같은 순서로 면도 영역을 채취하고 정화하는 멸균 거즈를 사용합니다. </li><li> 시상 봉합을 따라 20 mm 길이의 절개를하는 수술 메스를 사용합니다. 4 구멍 (봉합사의 각면에 2)하고 두개골에 네 개의 보석상 나사를 고정 소형 스크루 드라이버를 사용하는 핸드 드릴을 사용합니다. </li><li> 동물의 후방으로 배치 된 홈에 네 개의 보석상 나사의 중앙에 볼트를 배치합니다. 치과 용 시멘트 (보석상 나사의 표면을 커버하기에 충분한 치과 시멘트를 사용)와 headcap를 구축하여 쥐의 두개골에 볼트를 장착합니다. 치과 시멘트 수술 분야에서 동물을 제거하기 전에 건조 마취를 종료 할 수 있습니다. </li></ol><p클래스 = &quot;jove_content&quot;&gt; 수술 후 모니터링 및 관리 <ol start="19"><li> 개별 침대 케이지의 집 쥐은 즉시 수술을 다음과 밀접하게 24 시간 동안 모니터링 할 수 있습니다. </li><li> 진통 멜 록시 캄 24 시간 수술 후 두 번째 주사를 관리하고 사흘 동안 항균 구강 헹굼 1 회 / 1 일에 IO 정맥을 세척하십시오. </li></ol> 쥐에게 이전 실험의 시작 부분에 수술에서 회복하는 3 ~ 5 일주세요. 3. IO 자기 관리 절차 기구 자기 관리의 경우, 플렉시 유리 조건화 챔버가 사용되며, 각 챔버는 큰 소리 감쇠 합판 상자에 동봉되어 있습니다. 각 조건화 챔버는 8cm 바닥에서 챔버의 반대편에있는 빛 집 (28 V)와 두 개의 개폐식 레버 (활성 및 비활성)가 있습니다. 활성 레버는 주입 펌프에 위치 사에 접속된다IDE 사운드 절연 챔버와 흰색 빛 (28 W)를 그 위에 3cm가 IO 시달렸다의 전달과 쌍을 자극 빛의 역할을 할 수 있습니다. 비활성 레버 기준, nonreinforced 조작 적 동작을 제어하는​​ 역할을,이 레버를 누르면 어떤 결과가 없지만, 모든 프레스가 기록됩니다. 음식 <ol><li> 자신의 홈 케이지의 표준 쥐 차우 (3.1 킬로 칼로리 / g)과 쥐를 제공합니다. </li><li> 역삼 투 물을 사용하여 세 가지 다른 농도 (;, 25 %는 = 0.08 kcal/80 μL 주입 50 % = 0.17 kcal/80 μL 주입 8 % = 0.026 kcal/80 μL 주입)에 고 과당 옥수수 시럽 (55 % 식)를 희석. 각각의 실험 장치 (주사기와 튜브, 즉 직경) 주어진 빠른 (2.5 초) IO의 주입을 제공 할 적절한 점도를 생산하기 때문에 이러한 농도가 선택됩니다. </li></ol> 음식 부족 의 획득을 용이하게하기 위해IO의 자기 관리하지만, 정상적인 성장을 촉진는 쥐가 음식 부족 및 표준 쥐 차우에 임의로 액세스의 기간을 통해 순환된다. <ol start="3"><li> 오후 7시 매일 쥐를 달아 케이지의 공급 저점 우를 제거합니다. </li><li> 다음 날 오후 12시 (약 18 시간 후)에 쥐의 무게를 13:00 시까 IO의 자기 관리를 시작합니다. </li><li> 오후 4시 자신의 홈 케이지에 쥐를 반환하고 연속으로 3 시간 동안이 국수 임의로 액세스를 제공합니다. 그 후, 래트의 중량 및 세 시간 동안 소비 차우의 전체 양을 기록한다. 설명한 바와 같이 음식 부족을 다시 시작합니다. </li></ol> 일반적으로 IO 자기 관리 절차 HFCS의 IO의 주입에 대한 응답 조건화는 PR 및 강화를 지속적으로 일정에 따라 평가된다. 활성 및 INAC 사이에 응답 1) 상당한 차이 :에 의해 정의 된대로 섭취가 안정 될 때까지 쥐가 IO의 자기 관리에 테스트최소 2 연속 세션 레버를 심하게 배, 2 연속 세션에 대한 세션 당 적립 주입 수의 2) 20 % 미만의 변화. 각 세션은 어두운주기에 6 시간을 시작하고 3 시간 동안 지속됩니다. 수집 단계는 강화의 연속 일정에 10 연속 IO 자기 관리 세션으로 구성, 쥐 최종 인수 세션 (PR 테스트 후 단일 PR 테스트 24 전에 인수의 시작 시간 (PR 테스트 I)과 24 시간을받을 II). PR 테스트의 경우, 브레이크 포인트 (BP)은 이전에 적어도 1 시간 18의 활성 레버 응답의 중단에 마지막으로 수신 한 주입으로 정의된다. <ol start="6"><li> 8 %, 25 %, 또는 50 % : 이전 실험의 시작 3 일 동안 수행하고 HFCS 세 농도 중 하나의자가 - 투여에 래트를 할당 가중치에 기초하여 평형 쥐. </li><li> 오후 12시에서 쥐를 달아 자신의 홈 케이지에있는 테스트 룸에 식민지 방에서 그들을 전송합니다. 음식이나 침구 고정을 제거하려면NG 그 끝에 연결된 폴리에틸렌 튜브 (1.14 ㎜, 1.57 ㎜, 외경, 내경) 50 mm의 16 G 바늘로 고정 12 ML의 주사기를 사용하여 정맥을 통해 공기 펌프, IO 정맥에 축적 할 수 있습니다. </li><li> 조작 적 챔버에서 수정 된 20 G 바늘 (플라스틱 허브와 경 팁을 제거)으로 구성 샤프트에 의해 타이곤 튜브 (0.02 ㎜, 1.53 ㎜, 외경, 내경)에 IO 정맥을 연결합니다. (즉, 가까운 동물로) 볼트의 숲 내 튜브의 하단 부분을 놓습니다. 튜브의 높은 부분은 회전에 연결하고, 스프링에 의해 보호됩니다. 쥐의 머리에 장착 된 볼트의 나사에 스프링의베이스를 연결합니다. </li><li> 쥐에게 조작 적 챔버에 순응하고 IO 자기 관리 세션을 시작 5 분만 시간을 줘. IO 자기 관리 세션은 빛 집, 두 개폐식 레버의 항목과의 조명의 활성화로 시작30 초 동안 활성 레버 위의 빛 자극. </li><li> PR 테스트 I의 경우, 리처드슨과 Roberts18에 의해 기술 된 PR 일정 (응답 비율 상승 = (5 E (분사 수 × 0.2)) - 5)를 사용합니다.보기 </li><li> 수집 세션의 경우 1-10, 강화의 연속 스케줄을 사용함으로써 2.5 초 이상 시험 용액의 80 μL 주입의 전달에서 활성 레버 결과의 각 키를 누릅니다. </li><li> , 섭취를위한 충분한 시간을 허용 활성 레버가 철회되고 자극 라이트 (즉 쥐가 IO 주입마다 30 초를 얻을 수 있습니다) 활성화되는 동안 27.5 초의 시간 제한 기간을 부과. 각 IO 자기 관리 세션 내 수득 주입의 수에 제한을 부과하지 않는다. </li><li> 쥐가 연속 20 분 동안 활성 레버에 응답을하지 않는 경우, 주요 쥐 (조작 적 챔버를 열고 활성 레버를 한 번 눌러 쥐를 촉진). 국무 동물마다 20 분까지 뒤 5x/session에만을 취득 제 삼일 링. </li><li> 단계 3.10에 기재된 파라미터를 이용하여 제 PR 시험을 관리. </li><li> IO 자기 관리 세션에 이어, 조작 적 챔버에서 쥐를 제거 3.7에 설명 된 것과 동일한 재료를 사용하여 2.0 ml의 물과 함께 IO 정맥을 세척하고, 식민지의 방에 자신의 홈 케이지에 쥐를 반환합니다. </li><li> 쥐 차우에 광고를 무제한으로 접속 3 시간 후, 오후 7시 체중의 쥐가 먹이 통에서 음식을 제거하고 음식의 박탈을 다시 시작합니다. </li></ol> 자기 관리 데이터는 분산 (ANOVA)의 두 가지 요소의 반복 측정 분석을 사용하여 분석 하였다. 학생 - 뉴먼-Keuls 방법 (α = 0.05)를 사용하여 여러 비교는 의미있는 상호 작용 또는 주 효과를 탐구하기 위해 사용되었다.

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공개 아무것도가없는 저자.

현재의 연구는 전통적으로 남용 (정맥 조작 적 자기 관리)의 약물에 의해 동기 동작을 연구하고 tastants의 기호성 (구강 내 주입을 통해 맛의 반응성)을 평가하기 위해 사용되는 방법을 결합하여 달콤한 솔루션의 강화 특성을 평가하기위한 새로운 접근 방식을 보여줍니다. 이를 위해, 아주 짧은 이소 플루 란 유도 마취, 쥐가 직접 자신의 입으로 테스트 솔루션의 제공을 허용 IO 정맥으로 주입된다. 그들은 테스트 솔루션의 IO의 주입을받을 수있는 레버를 누를 수있다 수술 회복 후, 동물은 조작 적 자기 관리 챔버에서 테스트됩니다. IO 자기 관리 절차를 사용하여 우리는 그 설립 : 1) 쥐를 획득하고 HFCS의 다양한 농도의 IO의 자기 관리를 유지, 2) 쥐 HFCS의 서로 다른 농도에 따라 자신의 자기 관리 행동을 조정, 3) 높은 concentratio<html> HFCS의 NS는 자기 관리의 홍보 일정에 응답을 더 낳다. <p class="jove_content"...

음식 중독의 신경 생물학 및 행동 기준의 연구는 유사 약물 남용에, 입에 음식의 과도한 소비 행동 의존도 1-4을 촉진, 관찰에 의존하고 모두 인간의 뇌 보상 회로에 변화를 유도 5-6 실험실 동물 7-8. 그러나, 여러 프로토콜 및 실험실 쥐에 약물 남용의 중독성을 공부 독특한 도전을 제공 음식에 의해 유발 &quot;중독성&quot;행동을 평가하기 위해 이러한 방법을 채택하는 절차가있다. 본 연구의 목적은 구강 (IO) 주입에 의해 전달 달콤한 솔루션의 조작 적 자기 관리의 조사에 조작 적 정맥 주사 (IV) 약물 자기 관리의 원칙을 적용하는 것이 었습니다. 논란이 있지만, HFCS가 비만 9-12의 현대 전염병에 연결 될 수 있다는 증거가있다, 때문에 사용되는 달콤한 고 과당 옥수수 시럽 (HFCS)이었다. 전통적으로, IO 시달렸다는 맛 반응 실험 13 tastants의 기호성을 연구하기 위해 제공됩니다. 간단히, IO 정맥이 수술 쥐와 다양한 솔루션의 IO 시달렸다의 뺨에 이식은 수동적으로 14 전달됩니다. 목적은 tastants에 동물의 구강 안면 반응을 연구하는 것입니다. 그러나, IO 캐 뉼러는 그들이 직접 자신의 구강에 자기를 주입 솔루션에 레버를 눌러 배울 것인지 결정하기 위해 쥐의 미각에 만성적으로 이식 된, 따라서 용어 IO 자체 주입 15-17. 현재의 연구에서, 우리는 작은 수술을 활용하고 장기 조작 적 자기 관리 테스트 할 수있는 절차를 설명합니다. 이 절차는 주둥이 고체 펠릿에 대한 응답 () 또는 조작 적에서 솔루션을 마시는 포함하는 기존의 절차를 통해 몇 가지 중요한 장점을 가지고 용기에 전달되는 액체 방울에 대한 응답 (B), 또는 조작 적(c). (a)에 비해, IO자가 - 투여 (즉, 레버를 가압) 조작 적 반응을 수반하고, 따라서 응답 요구 및 IO의 주입의 전달 사이의 관계를 조절하는 스케줄을 변경할 수있다. 예를 들어, 연속적인 주입에 요구 응답 세션 (18) 내에서 기하 급수적으로 증가함으로써 프로그레시브 비 (PR) 스케줄을 채용함으로써, 다음 주입 (19)을 &quot;원&quot;얼마나 많은 동물 평가하는 것이 가능하다. 유체 전달을 제어하고 응답을 모니터링하는 특수 장치가 (20)를 사용하지 않는 동물, 주둥이에서 솔루션을 마실 때 &quot;추구&quot;행동이 중요한 측면을 평가 할 수 없습니다. 또한, IO의 자기 관리는 다른 강화 자극에 의​​해 동기 행동을 비교하는 평균을 제공한다. 즉, 과자와 같은 약물 남용의 다른 강화 물에 의해 유지 응답하는 조작 적 비교하는 것이 가능하다그래서 &quot;대체 연구&quot;라고합니다. (B)에 비해, IO의 자기 관리는 농도의 시험 및 수용성 식품 첨가물의 양을 수 있습니다. 우리가 아는 한, 서로 다른 비율로 상업적으로 사용 가능한 고체 과당의 펠렛, 또는 과당 포도당 조합이 없기 때문에이 같은 HFCS 등의 과자에 의해 동기 행동을 연구하는 것이 중요합니다, 그 조작 적 챔버에 적합 할 것입니다. 또한, 농도 / 체적비를 제어 및 조작의 중요성은 섭취 (영양소 특정 포만 선도) 용액의 열량 값과 관련 내에 소비 될 수 얼마나 그 용액에 의해 모두 변조 될 수있는 실험 필수 시간 (즉, 충만) 21의 기간. IO의자가 - 투여는 조작 적 응답 및 차 강화제의 전달, 수집 및 MAINTE에서 중요한 역할을 인자 사이의 지연 시간을 단축조작 적 행동 16,22-23의 보수. 마지막으로, (c)와 비교하여, IO자가 - 투여는 시험 용액의 제어 된 양의 패시브 IO의 주입의 전달을 허용하고, 이로써 (예 탄 돌기 (24)와 같은 대물 쾌락 반응 「좋아」의 구강 안면의 응답을 측정 할 수있게 -25)과 이러한 응답은 IO의 자기 관리시 변경 여부를 확인합니다. 또한, 수동 IO의 주입을 관리 할 수​​있는 능력은 음식 추구에 재발의 연구에 중요한 응용 프로그램을하고 있습니다. 즉, 멸종의 기간 다음, IV 약물 자기 관리의 연구에서, 약물 소수 (약 26의 작은 용량의 즉, 정부는) 27 ~ 28 응답을 &quot;복원&quot;할 수 있습니다. 따라서 동물의 부분에 대한 조치없이 IO의 주입을 제공 할 수있는 능력은 음식과 사이에 &quot;음식&quot;뇌관을 회복뿐만 아니라 잠재적 인 크로스 복직을 연구하는 데 사용할 수 있습니다약물 남용. 달콤한 솔루션의 IO의 자기 관리는 IV와 내 위의 자기 관리하는 것이 바람직하다. 인간과 동물 실험 모두에서 과당의 IV 주입 구강 소비 29-31 다음 관찰 된 것과 유사한 생리적 인 결과를 생산하고 있지만 사실,이 과자는 일반적으로 (즉, 경구) 소비하는 방법의 빈약 한 모델입니다. 또한, 저작에 의해 생성 미각 신호는 식품의 기호성에 대한 중요한 정보를 부여하고, 소화 과정이 단계가 생략되는 경우, 과식 등 부적응 행동의 개발은 32-33을 감소된다.

<table><tbody><tr><td colspan="4">시약</td></tr><tr><td>Meloxicam</td><td>Boehringer Ingelheim Canada Ltd.</td><td></td><td>온타리오 수의과 대학 약국</td></tr>에서 <tr><td>프로카인 페니실린 G</td><td>펜 수성, Wyeth 동물 건강</td><td></td><td>온타리오 수의과 대학 약국</td></tr><tr><td>리도카인 HCl 2%</td><td></td><td></td><td>온타리오 수의과 대학 약국</td></tr><tr><td>마르카인 0.5 %</td><td></td><td></td><td>온타리오 수의과 대학 약국</td></tr><tr><td>윤활 눈 연고</td><td></td><td></td><td>에서제품은 모든 약국에서 구입할 수 있습니다</td></tr><tr><td>2% 리도카인 점성 구강(국소 마취제)</td><td>Pharmascience Inc.</td><td>CDMV # 14705</td><td>100 ml 병</td></tr><tr><td>Isoflurane USP</td><td>Pharmaceutical Partners of Canada</td><td>CDMV # 108737</td><td>250 ml 병</td></tr><tr><td>Bacti-Stat</td><td>Merck Sante Animale</td><td>CDMV # 6449</td><td>3.785 L 병</td></tr><tr><td>이소 프로필 알코올 (70 %)</td> <td>Perdu Pharma</td><td>Fisher # MPX18404</td><td>4 L 병</td></tr><tr><td>Betadine 10 %</td> <td>McKesson Canada</td><td>CDMV # 104826</td><td>500 ml 병</td></tr><tr><td>슈퍼 게르미펜</td><td>Ceva 동물 건강</td><td>CDMV # 103629</td><td>454 ml 병</td></tr><tr><td>Chlorhexidene (Novadent)</td><td>Zoetis</td><td>CDMV # 8908</td><td>236 ml 병</td></tr><tr><td>고과당 옥수수 시럽</td><td>Natures Flavours</td><td>HFCS-55</td><td>1 gal bottle</td></tr><tr><td colspan="4">Materials</td></tr><tr><td>PE90 튜빙</td><td>Becton Dickinson and Company</td><td>VWR # CA-63019-080A</td><td>100 ft/coil</td></tr><tr><td>PE160 튜빙</td><td>Becton Dickinson and Company</td><td>VWR # CA-63018-747</td><td>100 ft/coil</td></tr><tr><td>폴리프로필렌 메쉬</td><td>소형 부품 Inc.</td><td>CMP-0297-D</td><td></td></tr><tr><td>납땜 인두</td><td></td><td></td><td>제품은 모든 철물점에서 구입할 수 있습니다</td></tr><tr><td>.#64 탄성 밴드</td><td>스테이플 사무용품</td><td>항목 # 13556</td><td>제품은 모든 사무용품점에서 구입할 수 있습니다</td></tr>. <tr><td>15G 얇은 벽 3.5인치 바늘</td><td></td><td>VWR # CABD1108</td><td>12개/팩</td></tr><tr><td>전기 면도기(1/2인치 와이드 블레이드)</td><td></td><td></td><td>제품은 모든 애완동물에서 구입할 수 있습니다. 공급 상점</td></tr><tr><td>Precision Glide Needles 20 G 바늘 (1&frac12; in)</td><td>Becton Dickinson and Company</td><td>Fisher # 14-826D</td><td></td></tr><tr><td>Precision Glide Needles 16 G 바늘 (1&frac12; in)</td><td>Becton Dickinson and Company</td><td>Fisher # 14-826-5D</td><td></td></tr><tr><td>작동 컨디셔닝 챔버</td><td>Med Associates Inc.</td><td>ENV-008-CTC</td><td></td></tr><tr><td>사운드 감쇠 챔버</td><td>Med Associates Inc.</td><td>ENV-018M</td><td></td></tr><tr><td>MED PC IV 소프트웨어</td><td>Med Associates Inc.</td><td>SOF-735</td><td></td></tr><tr><td>주사기 펌프</td><td>Razel Scientific Instruments</td><td></td><td></td></tr><tr><td>일회용 플라스틱 스위블 어셈블리</td><td>Med Associates Inc.</td><td>PHM-115I</td><td></td></tr><tr><td>Tygone Microbore 튜빙</td><td>Saint Gobain Performance Plastics</td><td>Fisher # 1417015B</td><td>500 ft/coil</td></tr></tbody></table>

실험실 쥐에 tastants의 강화 속성을 평가하기위한 새로운 방법 : 조작 적 구강 자기 관리

A Novel Procedure for Evaluating the Reinforcing Properties of Tastants in Laboratory Rats: Operant Intraoral Self-administration

이 논문은 음식 중독의 바이오 행동 기준을 연구하기위한 새로운 방법에 대해 설명합니다. 이 방법은 약물의 조작 적 자기 관리의 행동 양상에 맛 반응성의 수술 적 요소를 결합합니다. 아주 간단한 전신 마취에서 쥐가 구강에 직접 테스트 솔루션의 제공을 허용하는 구강 (IO) 정맥으로 주입된다. 그들은 테스트 솔루션의 IO의 주입을받을 수있는 레버를 누를 수있다 동물은 다음 조작 적 자기 관리 챔버에서 테스트됩니다. IO의 자기 관리 고체 펠릿 또는 콘센트에 전달 솔루션에 대한 응답 주둥이 또는 조작 적에서 솔루션을 마시는 관련 실험 절차에 비해 몇 가지 장점을 가지고있다. 여기, 우리는 IO의 자기 관리가 높은 과당 옥수수 시럽 (HFCS)의 자기 관리를 연구하는데 이용 될 수 있다는 것을 보여줍니다. 쥐가 먼저 영업 이익의 최대 크기를 평가하는 진보적 인 비율 (PR) 일정에 자기 관리에 대한 검사를했다HFCS의 서로 다른 농도 (즉, 8 %, 25 %, 50 %)에 방출 될 것입니다 erant 행동. 이 테스트에 따라, 보강의 연속 일정으로 10 일 연속 (각 레버 프레스 즉, 하나의 주입) (1 세션 / 일, 각 지속 3 시간)에 쥐의 자기 관리이 농도, 다음 그들이 PR 일정에 다시 테스트했다 . HFCS의 가장 낮은 농도 (8 %)이 더 많은 변수를 자기 관리를 유지하고 있지만 지속적으로 보강 일정에, 쥐, 높은 농도의 적은 주입했다. 또한, PR 시험은 8 % 25 % 50 %보다 낮은 값을 보강 한 것으로 나타났습니다. 이러한 결과는 IO의 자기 관리가 수집 및 달콤한 솔루션에 대한 응답의 유지 보수를 연구하는데 이용 될 수 있음을 나타냅니다. 집중과 강화의 일정의 차이에 조작 적 반응의 민감도는 IO의 자기 관리 O를 자주 섭취의 신경 생물학을 연구하는 이상적인 절차 만든다F 과자입니다.

IO의 자기 관리의 취득 그림 3은 연속 10 세션의 8 %, 25 %, 또는 50 % HFCS의 자기 관리 중에 활성 및 비활성 레버를 조작 적 응답을 나타냅니다. 쥐는 제 3 회 이내에 HFCS의 IO자가 - 투여를 획득 및 수집의 나머지 (전술 한 바와 같이) 응답을 안정적 활성 레버를 유지한다. 활성 레버 응답에서 농도 의존적​​ 차이는 분명 25 %에 비해, 응답은 쥐 자기 관리 50 % HFCS 크게 낮다. 테스트 가장 낮은 농도 (8 %) 섭취 높은 개인의 다양성을 특징으로 응답하는 조건화의 중간 수준을 유지합니다. 진보적 인 비율 테스트 PR 테스트에 활성 레버 반응과 BP는 각각 그림 4와 5에 표시됩니다. 테스트 I에서 겸손이<html> HFCS의 모든 농도에 대한 응답. 그...

구강 자기 관리 : 현재의 연구는 실험실 쥐의 입맛 솔루션의 보강 효과를 평가하기위한 새로운 절차를 평가합니다. 이를 위해 조작 적 서로 다른 농도의 달콤한 솔루션의 구강 내 주입을위한 (즉, 레버를 눌러) 응답은 강화를 지속적으로 진보적 인 비율의 일정에 따라 측정 하였다.

실험실 쥐에 Tastants의 강화 속성을 평가하기위한 새로운 방법 : 조작 적 구강 자기 관리

This paper describes a novel method for studying the bio-behavioral basis of addiction to food. This method combines the surgical component of taste ...

본 절차의 전반적인 목표는 조작적 정맥 내 약물 자가 투여 원리를 구강 내 주입으로 전달되는 당 용액의 조작적 자가 투여 연구에 적용하는 것입니다. 이는 먼저 쥐에게 IO 캐뉼라와 헤드 캡을 외과적으로 이식함으로써 수행됩니다. 본 절차의 두 번째 단계는 관심 대상인 당을 선택하고, 조작적 챔버 내 자가 투여를 위해 적절한 농도의 용액을 준비하는 것입니다.절차의 세 번째 단계는 쥐를 조작 chamber에 넣고, IO 캐뉼라를 적절한 튜브에 연결한 다음, 서로 다른 농도와 강화 계획에 따라 쥐가 당분 솔루션을 IO 주입으로 자가 투여하도록 하는 것입니다. 절차의 마지막 단계는 쥐를 조작 chamber에서 꺼내고 다음 자가 투여 세션을 준비하기 위해 캐뉼라를 물로 세척하는 것입니다. 결과적으로, 쥐가 당분 솔루션의 자가 투여를 습득하고 유지하며, IO 자가 투여를 통해 솔루션의 농도 변화와 적용된 강화 계획에 대해 행동이 민감하게 반응한다는 결과를 얻을 수 있습니다.스파우트에서 용액을 마시거나 고체 펠릿에 대해 개방형 반응을 유도하는 기존 방법과 비교했을 때 이 기술의 주요 장점은, 이 금속 장치를 통해 모든 수용성 식품 첨가물의 모든 농도와 부피를 테스트할 수 있다는 점입니다. 더 중요한 것은, 동물의 별도 행동 없이도 제어된 양의 용액을 수동 간격 주입으로 전달할 수 있다는 점입니다. 이를 통해 활동성 테스트를 이용하여 기호성에 대한 인위적 반응을 측정하는 것이 가능해집니다.재발 및 간격 투여에 관한 모든 연구는 프라이밍 유도 재발뿐만 아니라 감미료 용액과 남용 약물 간의 잠재적인 교차 재발을 연구하는 데 활용될 수 있습니다. 이 방법은 강박적인 단맛 추구의 습득, 유지 및 재발을 담당하는 신경 기질을 규명하고 식이 유도성 비만과 관련된 요인을 식별하는 등, 음식 중독 및 비만 분야의 핵심 질문에 답하는 데 도움이 될 수 있습니다. 또한, 강박적인 음식 추구 발달에 관여하는 유전적 및 후성유전적 요인을 연구하는 것도 가능할 것입니다.모든 실험은 Guelph 대학교 동물 보호 위원회의 승인을 받았으며, 캐나다 동물 관리 위원회(Canadian Council on Animal Care)의 권고 사항에 따라 수행되었습니다. IO 캐뉼라를 제작하려면, 구강 내에 고정하기 위한 플랜지(flanged) 끝부분을 만들기 위해 폴리에틸렌 플라스틱 튜브를 약 130 millimeters 길이로 자릅니다. 인두기로 튜브의 끝부분을 2~5초 동안 가열한 후, 가열된 튜브의 가장자리를 평평한 표면에 대고 즉시 납작하게 누릅니다.지름 약 6~7mm의 수술용 메쉬 디스크를 절단하여 캐뉼라의 F 플랜지 끝단 뒷면에 닿을 때까지 튜브 길이를 따라 끼웁니다. 각 IO 캐뉼라당 지름 약 8mm의 수술용 메쉬 디스크 1개와 6x6mm 크기의 탄성 밴드 정사각형 3개를 추가로 절단하여 수술 전 최소 24시간 동안 준비합니다. 수술 약 30분 전에 IO 캐뉼라, 수술용 메쉬 디스크 및 탄성 정사각형을 항균 용액으로 멸균합니다.항생제 dein과 진통제 meloxicam을 피하 주사합니다. 텍스트 프로토콜에 따라 isof fluorine을 사용하여 전신 마취를 유도하고 발가락 꼬집기(toe pinch)로 진정 상태를 확인한 후, 면봉을 사용하여 캐뉼라가 삽입될 왼쪽 뺨 안쪽에 국소 마취제를 도포합니다. 그런 다음 생검 바늘과 헤드 캡을 위한 절개 부위에 lidocaine HCL과 같은 국소 마취제를 주사합니다.양쪽 눈에 윤활성 안연고를 도포합니다. 다음으로, 목 하단부의 털을 10 by 10 millimeter 크기로 제모합니다. 멸균 거즈를 사용하여 항균 비누로 해당 부위를 닦아내어 세척한 후, 70% alcohol로 소독합니다.마지막으로 Betadine을 사용합니다. 그 다음, 목 기저부에 15 gauge 스테인리스강 바늘을 삽입하고 귀 주변을 따라 왼쪽 뺨까지 피하로 이동시킵니다. 바늘 끝의 위치를 잡고 구강 내 첫 번째 어금니 뒤쪽의 뺨을 통해 통과시킵니다.IO 캐뉼라를 돌출된 바늘의 끝부분을 통해 통과시킨 다음, 바늘을 제거하여 캐뉼라만 남깁니다. 수술용 메쉬 디스크 1개와 정사각형 탄성 디스크 3개를 순서대로 캐뉼라의 외부 부분에 끼운 후, 목 뒤쪽의 노출된 피부까지 밀어 넣어 고정합니다. 그 다음 머리 상단 수술 전, 항균 구강 세정액을 사용하여 IO 캐뉼라 내부를 세척합니다. 나일론 볼트의 머리 부분을 제거하여 수정하고, 나사산의 길이를 따라 2mm 홈을 팝니다.머리 중앙선을 따라 10 by 20 millimeter 너비의 털을 깎아낸 후, 앞서 뺨 부위에서 보여준 것과 같이 멸균 거즈를 사용하여 면도한 부위를 닦고 세척합니다. 외과용 메스로 시상봉합선을 따라 20 millimeter 길이로 절개합니다. 그런 다음 핸드 드릴을 사용하여 봉합선 양측에 각각 두 개씩, 총 네 개의 구멍을 뚫습니다. 마지막으로, 수술 후 주얼러 나사와 치과용 시멘트를 사용하여 볼트를 두개골에 고정합니다.쥐를 개별 케이지에 수용하고 24시간 동안 모니터링합니다. 조작실(operant chamber)에서 수행되는 실험의 경우, IO 캐뉼라의 추가 관리 및 세척 방법은 텍스트 프로토콜을 참조하십시오. 해당 내용은 텍스트 프로토콜에 기술되어 있습니다.역삼투압수를 사용하여 55% 고과당 옥수수 시럽(HFCS)의 8%, 25% 및 50% 희석액을 제조하고, 쥐의 무게를 측정한 후 홈 케이지에 넣어 테스트 룸으로 이동시킵니다. 오퍼런트 챔버 내의 IO 캐뉼라에 축적될 수 있는 먹이나 베딩을 제거하기 위해, 16 gauge 바늘과 50 millimeters 폴리에틸렌 튜브가 장착된 12 milliliter 주사기를 사용하여 캐뉼라를 통해 공기를 펌핑합니다. IO 캐뉼라를 tigon 튜브에 연결하기 위한 샤프트로 20 gauge 바늘을 사용합니다.튜빙의 하단부를 벨트의 홈 안에 고정하고, 상단부를 스윙으로 보호된 스위벨에 연결합니다. 그런 다음 스프링의 하단을 쥐의 머리에 장착된 볼트의 나사산에 연결합니다. 쥐가 챔버 내에서 5분 동안 적응하도록 한 뒤, 하우스 라이트를 켜서 자가 투여 세션을 시작합니다.두 개의 수축식 레버를 소개하고, 활성 레버 위의 빛 자극을 30초 동안 점등합니다. 첫 번째 및 이후의 모든 점진적 비율(PR) 테스트의 경우, 반응 비율 증가분이 5 × E^(주입 횟수 × 0.2 - 5)와 같은 Richardson 및 Roberts가 기술한 PR 스케줄을 사용합니다. 1회부터 10회까지의 습득 세션에서는, 활성 레버를 누를 때마다 테스트 용액 80 µL가 2.5초에 걸쳐 주입되어 충분한 섭취 시간을 제공하는 연속 강화 스케줄을 사용하며, 활성 레버가 수축되고 자극등이 활성화되는 27.5초의 타임아웃 기간을 설정합니다.각 IO 자가 투여 세션 내에서 가능한 투여 횟수에 제한을 두지 마십시오. 쥐가 20분 연속으로 활성 레버에 반응하지 않는 경우, 활성 레버를 한 번 누르도록 유도하여 쥐를 프라이밍하십시오. 자가 투여 세션이 끝나면 쥐를 조작 챔버에서 꺼내십시오.2 mL의 물을 사용하여 IO 캐뉼라를 세척한 후, 쥐를 군집실의 홈 케이지로 돌려보냅니다. 텍스트 프로토콜에 기재된 급여 일정을 따르십시오. 이 그림은 10회 연속 세션 동안 8, 25 또는 50% HFCS를 자가 투여하는 동안 활성 및 비활성 레버에 대한 반응 횟수를 보여줍니다.쥐들은 처음 3회 세션 내에 HFCS의 IO 자가투여를 습득하며, 습득 기간의 나머지 시간 동안 안정적인 능동 레버 반응을 유지합니다. 농도에 따른 능동 레버 반응의 차이 또한 뚜렷하게 나타납니다. 예를 들어, 25%HFCS와 비교했을 때 50%HFCS를 자가투여하는 쥐들의 반응은 유의하게 더 낮습니다.쥐들은 8%HFCS를 투여받았을 때 중간 수준의 조작적 반응을 유지하며, 섭취 활성 레버 반응과 브레이크포인트(breakpoint, 최소 1시간 동안 활성 레버 반응이 없어 마지막으로 투여받은 주입량으로 정의됨)에서 더 큰 개체 간 변동성을 보이며, 이는 각각 이 그래프들에 제시되어 있습니다. PR 테스트 1에서는 모든 HFCS 농도에서 반응 빈도가 완만하게 나타납니다. 그러나 테스트 2에서는 그룹 간 차이가 나타나며, 농도가 높을수록 더 많은 반응과 더 높은 브레이크포인트가 유도됩니다.이 절차를 수행하는 동안, 자가 투여 세션 중에 헤드 캡에 액체가 고이거나 누수가 발생하는지 동물을 빈번하게 확인하는 것이 중요합니다. 또한, 동물들이 자가 투여 세션 사이에 캐뉼라를 뽑거나 갉아 끊은 경우 IO 캐뉼라 삽입 수술을 두 번 수행할 수 있으므로, 이러한 실험에서 개체 손실은 최소화되어야 합니다. 이 영상을 시청한 후에는 실험용 쥐를 대상으로 구강 내 자가 투여 실험을 수행하기 위해 수술 절차와 오픈 챔버를 수정하는 방법에 대해 충분히 이해하게 될 것입니다.

a-novel-procedure-for-evaluating-reinforcing-properties-tastants

Research

연구

JoVE Journal

Behavior

행동

Operant 약물 자기 관리 및 냉방 장소 환경 설정 (CPP) 절차는 expansively 인간의 마약 강화, 소비, 그리고 중독의 다양한 구성 요소를 모델로 연구에 사용됩니다. 이 보고서에서는, 우리는 쥐가에서 마약 강화 및 중독을 연구하는 새로운 접근 방식으로 기존의 CPP과 자기 관리 방법을 결합하여.

약물 보강 소설 장치 및 방법

이 프로토콜에서는 마우스의 reinforcer으로 감각 자극을 사용하여 operant 학습하는 방법을 설명합니다. 이것은 사전에 훈련이나 음식 제한을 필요로하지 않으며 그것은 같은 음식으로 약리 또는 자연 reinforcer를 사용하지 않고 동기 행동의 연구를 수 있습니다.

마우스의 추구 Operant 감각

음식이나 약물 이점 단서에 대한 응답을하는 것은 금욕의 기간 동안 증가하고 이것은 재발 행동으로 증가 자화율과 관련 있습니다. 자기 관리 자당을 가지고 쥐이 '갈망의 배양 "을 평가하기위한 우리가 세부 절차를.

쥐에서 자당의 갈망의 보육을 평가하기위한 일반적인 방법

세포외 도파민(DA)의 급격한 변동은 포유류의 보상 처리와 동기 부여 행동을 모두 중재합니다. 이 원고는 깨어 있고 자유롭게 움직이는 쥐에서 타스탄트가 빠른 도파민 방출을 어떻게 변경하는지 결정하기 위해 FSCV(Fast Scan Cyclic Volammetry)와 구강 내 타스탄트 투여의 조합을 설명합니다.

깨어 쥐의 구강 내 Tastant 관리하는 동안 빠른 스캔 순환 전압 전류 법으로 빠른 도파민 역학 시험

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물 박탈, 사카린 페이딩 또는 확장 액세스 교육을받지 않은 쥐에 에탄올의 강화 속성을 평가하는 방법

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구강 안면 조작 통증 분석을 사용한 쥐의 신경 손상 유발 기계적 과민증 평가

학습하세요 실험실 쥐에서 구강 자기투여를 통한 단맛 용액의 강화 효과를 평가하는 방법입니다. 이 기술은 뇌과학 및 행동심리학 연구에서 보상 메커니즘을 이해하는 데 활용됩니다.

실험실 쥐에 Tastants의 강화 속성을 평가하기위한 새로운 방법 : 조작 적 구강 자기 관리

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