파킨슨 병에서 감수성 메커니즘을 마스크를 해제하는 유전자 환경 상호 작용 모델

다음 실험의 전반적인 목표는 파킨슨병과 관련된 흑질선조체 퇴행에서 리폭시게나제 ISO 효소의 역할을 이해하는 것입니다. 이를 위해 흑질선조체(Nigro SAL) 병변을 유발하는 신경독소를 정밀하게 준비합니다. 그다음, 녹아웃 결핍 마우스에 MPTP 용액을 4일 연속 매일 주입하며, 마지막 주입 후 7일이 지난 시점에 관찰합니다.

시료를 수집하여 생화학 또는 면역조직화학 분석에 사용합니다. 결과에 따르면 1215 locks는 흑질선조체 MPTP 독성에 영향을 미치지 않는 것으로 나타났습니다. 그러나 다섯 개의 locks는 독성 조건 하에서 손상에 기여합니다.

TS 방법은 파킨슨병 분야의 핵심 질문에 답하는 데 도움이 될 수 있습니다. 유전자-환경 상호작용이 nistri 취약성에 미치는 영향이 무엇인지 제안하십시오. 유전자-환경 모델을 사용하여 ISO 선택적 기능을 식별할 수 있었으며 5가지 lipes의 이중성에 대한 통찰을 얻을 수 있었습니다.

적절히 교육받은 인력은 다음 절차 전반에 걸쳐 적합한 개인 보호 장구를 착용해야 합니다. 먼저 신경독 솔루션 준비에 필요한 모든 계산을 수행하십시오. 다음으로, 필요한 모든 장비, 소모품 및 시약을 준비하십시오.

또한, 잠재적인 유출 사고에 대비할 수 있는 재료를 준비하십시오. 저울 주변 영역을 패드나 종이 타월로 덮으십시오. 유출된 분말로 인한 위험을 줄이기 위해 10% bleach solution으로 적신 티슈와 10% bleach solution을 예방 차원에서 근처에 두십시오.

준비가 되면 적절한 보관 장소에서 원료 바이알을 꺼내십시오. 유리 바이알에 MPTP, 농도 및 날짜를 기입하여 라벨을 붙이십시오. 흄 후드 내에 위치한 분석 저울을 사용하여 10% 표백제에 적신 티슈가 들어 있는 2차 밀폐 용기 내의 유리 바이알에 MPTP 50 milligrams를 정량하십시오.

다음으로, 원액 바이알을 닫고 외부를 10% bleach로 천천히 닦아냅니다. 바이알에 13.763 milliliters의 멸균 식염수를 넣고 닫은 후, 후드 내에서 완전히 혼합합니다. MPTP 용액을 10% bleach에 적신 티슈가 들어 있는 2차 용기 내의 라벨이 부착된 주사 바이알에 조심스럽게 여과 및 멸균하여 옮깁니다.

압력을 낮추기 위해 MPTP 여과 용액이 들어 있는 바이알의 캡을 약간 풉니다. 흘린 액체는 표백제에 적신 티슈로 닦아내고, 사용한 재료는 적절하게 라벨이 부착된 생물학적 위험 폐기물 용기에 버립니다. 동물 실험실로 이동하는 동안 바이알에 담긴 MPTP 용액은 표백제에 적신 티슈와 함께 2차 용기에 보관하십시오.

MPTP 원액 바이알을 2차 용기에 넣고 적절한 보관 장소로 되돌려 놓습니다. 마지막으로, 10% bleach를 사용하여 스패출러, 분석 저울 및 후드 표면을 10분 동안 오염 제거합니다.

동물에게 주입하기 전, 필터가 달린 타공 덮개가 있는 일회용 케이지를 준비합니다. MPTP라고 표시하십시오. 일회용 케이지 라이너, 미리 적신 먹이 펠릿, 그리고 수분 공급원으로서의 하이드로젤을 넣습니다.

다음으로, 모든 동물의 체중을 측정하고 15 mg/kg 용량의 주사에 필요한 MPTP 용액의 부피를 기록합니다. 준비가 되면, 일회용 흡수 패드 위에 마우스를 조심스럽게 잡고 MPTP 용액을 주입합니다. 이 절차를 4일 동안 매일 반복하며, 사용한 바늘은 캡을 씌우지 않은 상태로 MPTP 전용 생물학적 위험 폐기물 용기에 넣습니다.

10% 표백제 용액과 티슈를 가까이 둡니다. 실수로 흘린 액체를 닦아내기 위해, MPTP가 투여된 동물들을 앞서 준비한 일회용 케이지에 넣고 개방형 랙에 배치합니다. 다음으로 MPTP를 투여합니다.

마지막 주사 후 72시간이 지날 때까지 랙과 사육실 문에 표지판을 게시하십시오. 작업 표면을 표백제로 소독하십시오. 매회 사용 후, 남은 MPTP 용액에 동일한 부피의 10% 표백제를 첨가하여 폐기하십시오.

이를 생물학적 위험 액체 폐기물로 처리하고, 사용한 모든 PPE는 전용 폐기함에 버리며, 필요 시 폐기 전 10% bleach로 살균하십시오. 이 과정 동안 동물들의 상태를 정기적으로 확인하고 매일 먹이와 물을 보충하는 것이 중요합니다. 마지막 주사 3일 후, 모든 재료를 폐기하고 동물들을 일반 사육장으로 복귀시키십시오.

미리 정해진 실험 시점에 동물들을 회수하여 조직 채취 및 처리를 수행합니다. 야생형 및 five locks knockout 마우스의 dopamine 수치를 측정하기 위해 saline 또는 MPTP를 투여한 후 Stri AAL homogenous를 사용하였습니다. saline 투여군에서는 DA 수치에 유의미한 유전자형 영향이 있었으며, 형질전환 마우스에서 DA 수치가 더 낮게 나타났습니다. 그러나 MPTP 투여 후, five locks 결핍 마우스는 SAL DA 고갈로부터 보호되었습니다.

MPTP 군의 five locks knockout 마우스는 식염수 군의 five locks knockout 마우스와 유사한 수준의 DA 수치를 보였습니다. 반면, 1215 locks knockout 마우스의 경우 처리 군에 관계없이 유전자형이 도파민 수치에 영향을 미치지 않았습니다. 흑질(substantial nigra)의 TH 및 GFAP 면역형광 염색 결과, 야생형 MPTP 군에서 별표로 표시된 TH 양성 세포체가 감소하고 GFAP 면역 반응성이 강화된 것이 확인되었습니다. 미세아교세포의 DAB 염색 결과, 식염수 처리 마우스에서는 분지형 세포체와 긴 분지 돌기가 나타난 반면, MPTP 처리 마우스에서는 둥근 세포체와 짧고 굵은 돌기를 가진 활성화된 미세아교세포가 관찰되었습니다. SAL, TH 및 GFAP의 면역 블로팅 결과는 MPTP 처리에 의한 손상과 신경 염증에 대한 추가적인 근거를 제공하였습니다.

이러한 효과는 five locks isy 결핍 마우스에서 감소되었습니다. MPTP를 다루는 작업은 매우 위험할 수 있습니다. 이 절차를 수행하는 동안에는 개인 보호 장비를 착용하고, 혼합물을 위해 10% bridge를 준비하는 것과 같은 예방 조치를 항상 취해야 합니다.