Name: 압력 Myography를 사용하여 저항 장간막 동맥에서 근육 조직 대응 및 Vasoactivity 평가 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2015-07-06T13:00:00.000+00:00
Duration: 10 min 48 s
Description: 배우세요 쥐 저항성 장간막 동맥에서 압력 유도 혈관 긴장도를 평가하는 압력 근측정법을 이용한 근육 조직 대응 및 혈관 활성 측정 방법. 이 기술은 심혈관 기능 연구에 필수적인 도구입니다.

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여기에 표시된 예는 조지아 리전트 대학에서 IACUC의 승인을 실험이다 - 프로토콜 번호 : # 2011-0408 시약 1. 준비 <ol><li> 해부 솔루션 주식을 준비 : 스톡 해부 용액 (5 배)의 500 ml를 들어, 21.18 g의 NaCl, 0.875 g의 KCl, 0.739 g을 황산, 1.049 g을 MOPS와 밀리 Q 물 450 ㎖ 중의 0.019 g의 EDTA를 녹인다. 1 N의 NaOH를 사용하여 7.3-7.4로 산도를 조정합니다. 밀리 Q 물 500 ml의에 볼륨을 확인합니다. 원액 7-10 일 저장할 수 있습니다. 화학 물질과 그들의 공급 업체의 목록은 표 1을 참조하십시오. mM의 농도는 표 2를 참조하십시오. </li><li> 작업 해부 솔루션을 준비 : 매일 신선한 작업 해부 솔루션을 준비합니다. 100 ㎖ 작업 솔루션의 경우, 0.091 g의 포도당, 밀리 Q 물 79.8 용액에 0.016 그램의 NaH 2 PO 4, 0.022 g의 피루브산 나트륨을 용해. volu을 가지고 0.2 ml의 1M 염화칼슘이 20 ml의 해부 솔루션 주식을 추가100 ㎖에 나. </li><li> 생리 식염수 (PSS)를 준비 : 950 ml의에, 1000 ml의 PSS를 준비하려면 0.365 g의 KCl, 6.545 g의 NaCl, 0.296 g을 황산, 0.163 g의 KH 2 PO 4를 용해, 2.072 g의 포도당, 2.184 g을 수 NaHCO3 및 2.383 g을 HEPES 밀리 Q 물. 1 N의 NaOH를 사용하여 7.3-7.4로 산도를 조정합니다. 밀리 Q 물 1,000 ㎖의에 볼륨을 확인합니다. 용액 2 ㎖를 제거하고 1 M CaCl2를 2 ㎖로 교체합니다. (신선한 PSS는 매일 준비해야합니다) </li><li> , 칼슘없이 100 ㎖ PSS의 경우 0.036 g의 KCl, 0.654 g의 NaCl, 0.029 g을 황산, 0.016 g의 KH 2 PO 4, 0.207 g의 포도당, 0.218 g을 NaHCO3를, 0.238을 용해 : 칼슘 (Ca 2+) 무료 PSS 준비 G HEPES, 0.015 g을 EGTA 및 0.0026 g의 나트륨 니트 로프 루시드 (SNP) 밀리-Q의 95 ml의 물에. 1 N의 NaOH를 사용하여 7.3-7.4로 산도를 조정합니다. 밀리 Q 물 100 ㎖에 볼륨을 확인합니다. </li></ol> 유리 캐 뉼러 2. 준비 <ol><li> 유리 피펫을 당겨제조업체의 지침에 따라 피펫 풀러를 사용하여 100 ~ 150 μm의 팁 캐 뉼러를 생성합니다. </li><li> 베벨 beveller 미세 전극을 이용하여 유리 캐 뉼러 팁 화재 그들 연마 및 히터 프로브를 사용하여 45 ~ 유리 캐 뉼러 팁 구부러. </li><li> 마이크로 피펫 홀더에 캐 뉼러를 넣고 관류 챔버에 마이크로 피펫 홀더를 연결합니다. </li></ol> 관류 상공 회의소 3. 준비 <ol><li> 5 분마다 해부 솔루션 다음에 밀리-Q의 물로 씻어 관류 실. 해부 시액 2 mL로 챔버를 넣습니다. </li><li> 정맥을 통해 흡입 해부 솔루션 10 ML의 주사기를 사용하여 조심스럽게 기포없이 전체 정맥과 연결된 튜브를 입력합니다. 거품의 발생을 방지하기 위해 부드럽게 흡입을 적용한다. </li><li> 각 무딘 집게를 사용하여 반 매듭이 봉합을 준비합니다. 안과 모노 필라멘트 나일론 봉합사 때문에 (10-0, 0.2 메트릭) 만있는 노트를 준비하는 데 사용됩니다직경 1-2mm은, 해부 현미경이 필요 할 수있다. </li><li> 해부 현미경으로 시각화, 약간 멀리 끝에서 부분적으로 폐쇄 봉합 매듭으로 모두 캐 뉼러를로드 해부 집게를 사용합니다. 나중에이 노트는 유관 동맥 끝 부분에 조심스럽게 미끄러되고 완전히 마감했다. </li></ol> 흰쥐에서 장간막 동맥 아케이드 4. 컬렉션 <ol><li> 이 실험을 수행하기 전에 지역 기관 동물 관리 및 사용위원회 (IACUC)의 승인을 얻을 수 있습니다. 제어 온도와 조명과 물을 무료로 이용할 수 있도록하고 상업 쥐 차우와 동물 시설 하우스 동물. </li><li> 케타민 복강 주사 하였다 (80 mg / kg)과 자일 라진 (10 밀리그램 / kg)로 쥐를 마취. 발가락 핀치에 의해 필요한 관리] 추가 마취제 경우 깊은 마취를 확인합니다. </li><li> 외과 적 마취를 확인한 후, 단두하여 동물을 안락사. 요로 감염에 대한 AAALAC의 지침을 따르십시오동물 안락사에 대한 적절한 방법을 LIZING. </li><li> 흉골 골반으로부터 중심선 개복 수술을 수행하기 위해 해부 가위와 집게를 사용한다. 이 두 단계로 수행된다 : 첫째, 피부를 절개하고 둘째, 기본 근육층 절개. 케어는 복강 내 장기를 손상하지 않도록주의해야합니다. </li><li> 유문에 장 가까이 ileo - 맹장 접합에 가까운 선단의 근위 끝을 잘라. 모두 미즙 때문에 입욕 세포 용액의 오염을 방지 배설물 누설을 방지하기 위해 별도로 묶어 종료한다. 급전 혈관 즉, 상 장간막 동맥 근처의 기지 장간막을 절개하고 빙냉 해부 용액을 함유하는 50 ㎖의 비커에 전체 소장 장간막 침대 옮긴다. </li><li> 수확 된 조직이 5 분 동안 차가운 얼음 해부 용액에 머물면서 혈액 없애 신선한 해부 용액으로 씻어 수 있습니다. </li></ol> 5. 분리 및 제 4의 캐 뉼러 </SUP&gt; 주문 장간막 동맥 <ol><li> 실 가드 코팅 접시에 오른쪽에 소장의 기단부 아래에 핀. (도 1) 장간막 확산 아래 세그먼트를 피닝 및 혈관 노출, 반 시계 방향의 경로에 남아있는 부위를 확장. 참고 : 우리는 실온에서 동맥 세그먼트를 격리 할 것. 그렇지 않으면 우리는 얼음에 접시를 포함하는 장간막 아케이드를 놓습니다. 우리 기관에 포함 일부 실험실, 4 ℃에서 동맥을 해부하기 위해 냉각 장치를 사용합니다. </li><li> 스테레오 줌 현미경 위해 작은 장간막 동맥 제 3 차 및 4 작은 가위를 사용하여 소장에 (~ 260 μm의) 평행을 해부하다. 우선 피복 지방을 멀리 해부하다. 그런 다음 정맥을 해부하고 V 자형 분기점과 동맥을 격리 할 것. 선택된 세그먼트에 구멍을하지 않도록주의하십시오. 2 차 주문 지점 근처에 지방을 해부 시작하고 3 번째 또는 4 번째 ORD에 방법을 찾아어 선박. <ol><li> 주 : 동맥과 정맥들은 벽의 두께에 기초하여 구별 될 수있다 - 동맥 벽 혈관의보다 두껍다. 또한, 결합 조직 인접 때하는 동맥하지 쉽게하면서 혈관, 정맥의 붕괴를 조심스럽게 수직으로 당겨진다. 루멘 직경 동맥 때문에 &lt;400 μm의 우리가 (직경 &lt;300 μm의 루멘) 주문 쥐 장간막 동맥 번째 4를 사용하는이 프로토콜에 대한 전신 혈관 저항의 주요 사이트입니다. </li></ol></li><li> 소장에 동맥 평행 4-5mm 섹션을 분리합니다. 소장에 포함 된 모든 5 번째 순서 지점을 시각화하고 약간 떨어진 지점의 원점에서 그들을 잘라 일부를 보존 할 수 있습니다. 지점이 보존 된 부분은 이후 자신의 삽관을 안내, 관류 챔버에 동맥 세그먼트를 전송 (해부 포셉) 사이트를 잡고 역할을한다. </li><li> 이어서 2 절개 원위함으로써 동맥 세그먼트를 잘라5 번째 순서의 동맥의 각각의 측면에 분기 및 관류 챔버로 이동시켜 (도 1C 및 범례 참조). </li><li> (: 100-150 ㎛의 직경) 해부 집게 동맥 세그먼트의 끝을 잡고 해부 집게를 사용하여 유리 마이크로 피펫의 하나에 용기의 한쪽 끝을 Cannulate. 유관 끝에 이전에로드 된 부분적으로 폐쇄 봉합을 밀어 고정합니다. 주 : 동맥의 기단부는 동일계 환경에서 모방하는 서보 제어 압력 조절 장치에 연결되어 유리 캐 뉼러로 캐 뉼러를 삽입 할 수있다. </li><li> 박리 용액을 캐 뉼러와 스톱 콕을 접속 배관에 박리 액을 주사기에두고 병합되도록이 캐 뉼러에 접속 콕에 10 ㎖ 주사기를 연결로드. 조심스럽게 주사기를 올립니다. 용액에 중력이 용기의 개방 단부에서의 혈관 내 혈액을 제거 할 것이다. 동맥 혈액을 제거한 후,, 꼭지를 닫습니다. 대안 적으로, 상기 압력 컨트롤러에 콕을 부착를 켜 부드럽게 동일한 결과를 얻을 5-10 mmHg 이상으로 압력을 증가 참고. </li><li> 신중 동맥 세그먼트의 묶이지 단부에 가능한 한 가까운 다른 뉼러를 가져와 2 유리 캐 뉼러 상 혈관의 말단부 넥타이. 유관 끝에 이전에로드 된 부분적으로 폐쇄 봉합을 밀어 고정합니다. 케어는 예인선 또는 동맥 세그먼트 당기지 않도록주의해야합니다. 모두 캐 뉼러에 부착 된 마개가 닫혀 있는지 확인하십시오. </li><li> 라이브 비디오 녹화를 갖춘 거꾸로 현미경의 무대에 관류 챔버를 전송합니다. </li><li> 서보 제어 압력 조절 장치에 동맥 세그먼트 (segment)의 기단부에 연결 정맥의 꼭지를 연결하고 안정된 관내 압력을 유지하기 위해 폐쇄 상태를 유지 꼭지는 다른 정맥에 연결해야합니다. </li><li> 이어서, 흡입 포트를 진공 튜빙을 첨부ND 관류 챔버의 관류 포트 튜빙. 참고 : 경 사진 바늘 포트가 관류에 대한 흡입 및 무딘 바늘 포트에 사용됩니다. </li><li> 단일 인라인 용액 히터 통해 따뜻한 PSS와 용기의 관류 시작 (37 ° C, 기체 혼합물로 평형화 : 중성 pH 및 충분한 산소 (17)을 유지하기 위해 5 % CO 2, 5 % O 2, 90 % N)이 용액에 / min의 연동 펌프. 뿐만 아니라에 진공을 돌립니다. 연속적으로 온도를 모니터링하기 위해 챔버 내에 서미스터를 배치. </li><li> 챔버의 PSS의 온도가 가까워지면 ~ 37 ° C (보통 5 분 이내), 천천히 20 ~ 100 mmHg로에서 관내 압력을 증가시키고 혈관 누출을 확인합니다. 이것은 압력 조절기의 압력을 자동 설정을 사용하여 수행된다. 누출과 혈관을 취소하고 다른 세그먼트로 교체. 누수와 혈관의 압력을 유지 할 수 없습니다. </li><li> 100 mmHg의 압력에서 유지하면서 굽힘위한 동맥 분절을 평가.나사 레버를 사용하여 동맥 세그먼트를 곧게 캐 뉼러를 이동합니다. 이상 동맥 세그먼트를 늘리지 않습니다; 목표는 생체 동맥 세그먼트 길이에 모방하는 것이다. </li><li> 70 mmHg로에 압력을 감소 (장간막 아케이드 (18) 생체 내 압력의 모방)과 동맥 세그먼트 안정과 근육 조직 톤을 개발 할 수 있습니다. 동맥은 (40 ~ 70 mmHg로) 실험 전략 및 혈관 침대에 따라 가변적으로 가압 할 수있다. 이전에 출판 된 리뷰는 다른 혈관 침대 8에서 동맥 부문에서 MT에 변화의 우수한 리뷰를 제공합니다. </li></ol> 동맥 직경의 6 측정 <ol><li> 단색 영상 전하 결합 소자 카메라를 구비 10X 현미경 대물 렌즈에 볼 동맥. 비디오 프레임 그래버 실시간 에지 검출 시스템을 사용하여 내강 직경을 측정한다. 사용 된 장비의 목록은 표 3에 제공된다. </li><li> 모니터 및 기록 용기 D계속 iameter. </li><li> MT의 개발을위한 관찰한다. 참고 : 우리는 쥐 장간막 저항 동맥, 70 mmHg로에서, MT의 개발은 직​​경이 20 % 감소 ~ 특징입니다 것을 관찰했다. MT는 혈관 침대와 동물 종에 따라 달라집니다. </li><li> 1 μM의 페닐 (Phe가) 1 μm의 아세틸 콜린 (ACH)에 혈관 수축과 혈관 확장 반응을 평가하여 혈관 가능성을 확인합니다. </li><li> 각 실험의 끝에서 20 분 동안 불 함유 PSS 칼슘으로 동맥을 배양함으로써 수동적 직경 (PD)를 결정한다. </li></ol> 7. 근육 조직 응답 <ol><li> 20mm 수은에 압력을 줄이고 직경이 안정 될 수 있도록. 증분 단계 (20, 40, 60, 80, 100)의 관내 압력을 증가시키고, 각 압력 단계에서 동맥 (통상 5 분 이내) 직경 안정을 달성 할 수있다. </li><li> 20 mmHg로에 관내 압력을 줄이고 2+ - 무료 PSS 0.39 mM의를 포함하는 칼슘의 동맥 세그먼트를 품다EGTA 및 0.1 mM의 SNP. 동맥 직경이 (보통 15 분)을 안정화 할 수 있습니다. </li><li> 0.39 mM의 EGTA 0.1 mM의 SNP를 포함하는 칼슘 - 무료 PSS의 압력 단계의 응답을 반복합니다. </li></ol> 데이터의 결과 및 계산 8. 해석 <ol><li> 칼슘 관찰 직경 %의 차이는 다음과 같은 계산에 따라 각 압력에서 2 + - 무료 PSS 칼슘에 비해 함유로 MT를 계산한다 : <img alt="식 (1)" fo:src="/files/ftp_upload/50997/50997eq1highres.jpg" src="/files/ftp_upload/50997/50997eq1.jpg" /></li><li> 직경 vasomotion 겪고 동맥 들어 1 분 동안 플래 위상을 평균함으로써 계산 될 수있다. 관계에 따라 최대 휴식 (%의 PD)의 퍼센트로 수집 된 데이터를 표현 %의 PD = 100 × [ΔD / PD] ΔD 전에 어떤 임상 화합물 (예 : Phe가)을 첨가 한 후, 직경의 차이이고; PD는 패시브 직경 (인최대 직경). </li></ol>

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중요한 단계, 문제 해결 및 수정 전형적인 동중 선박 대비, 동맥 따뜻한 (37 ° C) PSS와 관류이 유리 캐 뉼러 사이에 70 mmHg로에서 가압된다. 30-45 분 후에, 동맥 20-30 분에서 안정화 직경 감소에 의해 자발적 특징 MT 개발. 다양한 혈관 침대에서 저항 동맥 변수 MT를 개발한다. cremastric 동맥 PD의 MT ~ 40 %를 달성 할 수있다 예를 쥐 저항 장간막 동맥 ~ PD의 25 %를 MT를 개발한다. 60 분 이내에 MT를 개발하지 않는 동맥은 폐기되어야한다 이 기간은 혈관 침대와 종류에 따라 달라질 수 있습니다. 부적절한 응답 동맥 프하고 ACh에도 폐기해야합니다. pH 및 온도는 PSS의 MT의 개발에 상당한 영향을 미친다. 포기하지 않고 오랜 기간 동안 앉아 PSS,,의 pH는 증가 할 수 있습니다. 또한, 상온에서의 동맥 D 않을 것이다evelop MT. 따라서, PSS는 지속적으로 모...

작은 저항 동맥 SVR의 주요 결정 요인이며, 많은 질병 1, 2의 병태 생리에 중요한 역할을한다. 당뇨병 3, 임신 4, 허혈 - 재관류 5, 비만과 고혈압 6,7 등의 조건은 자주 변경된 미세 혈관 기능과 연관되어 있습니다. 혈관 myography 다양한 질환에서 미세 혈관 기능의 변화에​​ 중요한 통찰력을 제공 할뿐만 아니라, 치료 목표를 식별하고 혈관 활성 화합물의 효능을 평가할 수 있습니다뿐만 아니라. 혈관 기능이 아이소 메트릭 또는 등압 선박 조건 (8)에서 고립 된 작은 동맥을 이용하여 연구하고있다. 아이소 myography의 상세한 설명은도 9 곳이 제공된다. 그러나 동중 준비 10 ~ 12 대 아이소 메트릭에서 얻은 정보에 차이가 있습니다. 가압 된 제제는 동맥 거의 생리적 조건에서 미세 혈관 기능 연구를 허용하기 때문에,얻어진 결과는 혈관 침대 8, 13의 생체 내 행동을 더 잘 상관 관계 수 있습니다. 1902 년 베일리스 먼저 혈관 직경 14 전층 압력의 효과를 설명했다. 그는 압력의 감소는 혈관 확장으로 이어졌습니다 토끼, 개와 고양이의 다양한 혈관 침대에서 작은 저항 동맥에서 관찰, 압력의 증가는 혈관 수축으로 이어졌습니다. 이 현상은 근육 조직 반응으로 알려져있다. 베일리스 이후 연구자들은 동중 조건에서 작은 저항 동맥 MT (15, 16)로 알려진 지속적인 수축을 개발하는 것을 관찰했다. 근육 조직 응답 및 MT 모두 myography 압력 (PM) 기법을 사용하여 평가할 수있다. 오후는 작은 동맥, 정맥 및 기타 선박의 vasoactivity를 결정하는 데 주로 사용된다. 이름에서 알 수 있듯이 - - 혈관 직경의 혈관 활성 화합물의 효과를 평가뿐만 아니라, 혈관 내 압력 PM 매개 CH 관용법혈관 직경에 ANGES. 지난 수십 년 동안 비디오 현미경 유리 피펫은, PM을 수행하기 쉽게 만든 당기기 향상된 컴퓨터 소프트웨어에 진행한다. 그러나, 작은 혈관의 가능한 손상 부분의 절개는 지루하고 때로는 도전 남아있다. 여기에서 우리는 쥐에서 고립 된 작은 장간막 저항 동맥의 근육 조직 반응을 연구하기 위해 상세한 프로토콜을 설명합니다.

<table><tbody><tr><td colspan="4"><강>화학적</강></td></tr><tr><td>아세틸콜린</td><td>시그마 알드리치</td><td>A6625</td><td></td></tr><tr><td>염화칼슘(CaCl2)</td><td>시그마 알드리치</td><td>223506</td><td></td></tr><tr><td>D-(+)-포도</td>당 <td>시그마 알드리치</td><td>G5767</td><td></td></tr><tr><td>에틸렌 글리콜-비스(2-아미노에틸에테르)-N,N,N',N'-테트라 아세트산(EGTA)</td><td>시그마 알드리치</td><td>E3889</td><td></td></tr><tr><td>에틸렌 디아민 테트라 아세트산 (EDTA)</td><td>시그마 알드리치</td><td>E9884</td><td></td></tr><tr><td>HEPES</td><td>시그마 알드리치</td><td>H3784</td><td></td></tr><tr><td>황산 마그네슘 (MgSO4)</td><td>시그마 알드리치</td><td>M7506</td><td></td></tr><tr><td>MOPS</td><td>시그마 알드리치</td><td>M5162</td><td></td></tr><tr><td>페닐에프린</td><td>시그마 알드리치</td><td>P6126</td><td></td></tr><tr><td>염화칼륨 (KCl)</td><td>Sigma Aldrich</td><td>P3911</td><td></td></tr><tr><td>인산칼륨 (KH2PO4)</td><td>Sigma Aldrich</td><td>P5655</td><td></td></tr><tr><td>중탄산나트륨 (NaHCO3 )</td><td>Sigma Aldrich</td><td>S6014</td><td></td></tr><tr><td>염화나트륨 (NaCl)</td><td>Sigma Aldrich</td><td>S7653</td><td></td></tr><tr><td>수산화나트륨 (NaOH)</td><td>Sigma Aldrich</td><td>S5881</td><td></td></tr><tr><td>나트륨 니트로 프루스 시드</td><td>Sigma Aldrich</td><td>13451</td><td></td></tr><tr><td>인산 나트륨 일 염기성 일 수화물 (NaH 2 PO4)</td> <td>Sigma Aldrich</td><td>S9638</td><td></td></tr><tr><td>피루브 산 나트륨</td><td>Sigma Aldrich</td><td>P8574</td><td></td></tr><tr><td colspan = "4">표 1.</td></tr><tr><td colspan = "4"><table border="1"> <tbody> <tr> <td>생리학적 염 용액(1,000ml)</td> <td> mM</td> <td></td> </tr> <tr> <td>KCl</td> <td>4.9</td> <td>0.365 g</ td> </tr> <tr> <td>NaCl</td> <td>112</td> <td>6.545 g</td> </tr> <tr> <td>MgSO4.7H2O</td> <td>1.2</td> <td>0.296 g</td> </ tr> <tr> <td>KH2PO4</td> <td>1.2</td> <td>0.163 g</td> </tr> <tr> <td>포도당</td> <td>11.5</td> <td>2.072 g</td> </tr> <tr> <td>NaHCO3</td> <td>26</td> <td>2.184 g</td> </tr> <tr> <td>HEPES</td> <td>10</td> <td>2.383 g</td> </tr> <tr> <td>CaCl2 </td> <td>2</td> <td>2 ml (1M 재고)</td> </tr> <td> <td>탈이온수</td> <td></td> <td>998 ml</td> </tr> <tr> <td>Ca2+ 유리 생리염 용액(100ml)</td> <td> mM</td> <td></td> </tr> <tr> <td>KCl</td> <td>4.9</td> <td>0.036 g</td> </tr> <tr> <td>NaCl</td> <td>112</td> <td> 0.645 g</td> </tr> <tr> <td>MgSO4.7H2O</td> <td>1.2</td> <td>0.029 g</td> </tr> <tr> <td>KH2PO4</ td> <td>1.2</td> <td>0.016 g</td> </tr> <tr> <td>포도당</td> <td>11.5</td> <td>0.207 g</td> </tr> <tr> <td>NaHCO3</td> <td>26</td> <td> 0.218 g</td> </tr> <tr> <td>HEPES</td> <td>10</td> <td>0.238 g</td> </tr> <tr> <td>EGTA </td> <td>0.39</td> <td>0.015 g</td> </tr> <tr> <td>니트로프루스 나트륨 </td> <td>0.1</td> <td>0.0026 g</td> </tr> <tr> <td>탈이온수</td> <td></td> <td>100 ml</td> </tr> <tr> <td>Dissection solution, 재고 (500 ml) < / td> <td > mM < / td > < td >< / td > < / tr> <tr > <td > NaCl< / td > < td > 145 < / td > < td > 21.18 g < / td > < / tr> <tr > < td > KCl< / td > < td > 4.7 < / td> <td>0.875 g</td> </tr> <tr> <td>MgSO4</td> <td>1.2</td> <td>0.739 g</td> </tr> <tr> <td>MOPS</td> <td>2</td> <td>1.049 g</td> </tr> <tr> <td>EDTA</td> <td>0.02</td> <td>0.019 g</td> </tr> <tr> <td>탈이온수</td> <td></td> <td>500 ml</td> </tr> <tr> <td>Working dissection solution (100 ml)</td> <td> mM</td> <td></td> </tr> <tr> <td>해부 용액 재고</td> <td>20 ml</td> </tr> <tr> <td>포도당</td> <td>1.2</td> <td>0.091 g</td> </tr> < tr> <td>NaH2PO4</td> <td>5</td> <td>0.016 g</td> </tr> <tr> <td>피루브산나트륨</td> <td>2</td> <td>0.022 g</td> </tr> <tr> < td>CaCl2</td> <td>2</td> <td>0.2 ml (1M 재고)</td> </tr> <td> <td>탈이온수</td> <td></td> <td>79.8 ml</td> </tr> </tbody> </table></td></tr><tr><td colspan="4">표 2. Experimetnal solutions의 구성</td></tr> <td colspan = "4">EquipmentCCD 흑백 카메라 이미징 소스 DMK 21AU04 단일 인라인 솔루션 히터 Warner Instruments 64-0102 서미스터 Warner Instruments 64-0108 이중 자동 온도 컨트롤러 Warner Instruments <tr></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td>TC-344B</td><td></td></tr><tr><td>불타는/갈색 마이크로피펫 풀러</td><td>셔터 기기</td><td>P-97</td><td></td></tr><tr><td>형광 시스템 인터페이스</td><td>IonOptix</td><td>모델 FSI-700</td><td></td></tr><tr><td>집게 및 가위 </td><td>세계 정밀 기기</td><td></td><td></td></tr><tr><td>이온 마법사 코어 및 분석</td><td>IonOptix</td><td>이온 마법사 6.0</td><td></td></tr><tr><td>실험실 튜빙</td><td>실라스틱</td><td>508-005</td><td></td></tr><tr><td>수컷 Sprague Dawley 쥐</td><td>Harlan Laboratories</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Master 플렉스 콘솔 드라이브</td><td>Cole-parmer</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Milli-Q Plus 초순수 시스템</td><td>Millipore</td><td>ZD5211584</td><td></td></tr><tr><td>안과 모노필라멘트 나일론 봉합 </td> 사 <td>Ethicon</td><td>9007G</td><td></td></tr><tr><td>측광 및 치수 측정 현미경</td><td>Motic</td> 연동 펌프 및 압력 변환기가 있는 <td>AE31</td><td></td></tr><tr><td>압력 서보 컨트롤러</td><td>리빙 시스템 계측</td><td>PS-200</td><td></td></tr><tr><td>실체 현미경</td><td>Nikon Instruments Inc</td><td>SMZ660</td><td></td></tr><tr><td>용기 챔버</td><td>생활 시스템 계측</td><td>CH-1</td><td></td></tr><tr><td>해부 접시</td><td>생활 시스템 계측</td><td>DD-90-S</td><td></td></tr><tr><td>얇은 벽 유리 모세 필러리</td><td>세계 정밀 기기</td><td>TW120-6</td><td></td></tr><tr><td>Microforge</td><td>Stoelting</td><td>51550</td><td></td></tr><tr><td colspan = "4">Table 3.</td></tr></tbody></table>

압력 myography를 사용하여 저항 장간막 동맥에서 근육 조직 대응 및 vasoactivity 평가

Assessing Myogenic Response and Vasoactivity In Resistance Mesenteric Arteries Using Pressure Myography

작은 저항 동맥 수축 증가 또는 관내 압력의 감소에 응답하여 각각 팽창; 근육 조직 응답이라고하는이 현상은 로컬 혈류 키 레귤레이터이다. 동중 조건에서 작은 저항 동맥 전신 혈관 저항 (SVR)의 주요 결정 요인 인 근육 조직 톤 (MT)로 알려진 수축을 지속 개발한다. 따라서, 작은 저항 동맥의 생체 가압 준비는 거의 생리적 상태에서 미세 혈관의 기능을 연구하는 중요한 도구입니다. 이를 달성하기 위해, 작은 저항 동맥 (~ 260 μm의 직경)의 갓 고립 세그먼트는 손대지 개의 작은 유리 캐 뉼러 및 가압에 장착된다. 이들 제제는 생체 동맥의 특성과 실시간으로 혈관의 색조 평가에 허용 최대한 유지. 여기에서 우리는 쥐에서 가압 작은 저항 장간막 동맥에 vasoactivity을 평가하기위한 상세한 프로토콜을 제공한다; 이러한 동맥 개발지속적인 혈관 수축 - 최대 직경의 약 25 % - 70 mmHg로에서 가압. 이러한 동맥 제제는 다양한 질병의 동물 모델에서 미세 혈관 기능의 변화를 동맥 압력 및 vasoactivity 사이의 관계에 대한 임상 시험 화합물의 효과를 연구하고 결정하는데 사용될 수있다.

전형적인 압력 myograph 설정의 개략적 인 대표도 1에 도시된다. 용기의 양단은 유리 마이크로 피펫으로 삽관과 양측 봉합사로 고정된다. 배관 및 오픈 콕 통해 하나 뉼러는 서보 제어식 압력 조절기에 접속되고; 다른 캐 뉼러가 클로즈 콕에 접속된다. 챔버는 CCD 카메라와 접속 도립 현미경으로 관찰 PSS 및 혈관 직경의 변화와 관류된다. 70 mmHg로 가압하는 동맥 분절은 2-4 ㎖ / 분으로 동맥 챔버 밖으로 흐르는 흡입 갓 준비한 따뜻한 PSS에서 배양된다. 동맥 직경은 모니터링 및 videomicroscopy 및 에지 검출 소프트웨어를 사용하여 기록한다. ~ 40 분 후, 동맥 세그먼트는 그들의 초기 직경 (도 2A) 20-40 %만큼 자발적으로 수축. 우리의 손에 작은 쥐의 저항 동맥은 25 % -30 % (평균 VARI에 의해 수축ES 설정, 운영자 및 동맥 침대에 따라). 그런 다음, 기능적인 가능...

압력 myography는 가압 할 때 지속적인 수축을 개발하는 작은 동맥의 vasoactivity을 평가하는 데 사용됩니다. 이 원고는 쥐, vasoactivity 혈관 직경에 관내 압력의 영향에서 작은 장간막 동맥의 고립 된 세그먼트에서 평가하기위한 세부 프로토콜을 제공합니다.

압력 Myography를 사용하여 저항 장간막 동맥에서 근육 조직 대응 및 Vasoactivity 평가

Small resistance arteries constrict and dilate respectively in response to increased or decreased intraluminal pressure; this phenomenon known as myogenic ...

본 절차의 전체적인 목표는 약물 또는 질환 상태가 소저항 장간막 동맥의 압력 유도 혈관 긴장도에 미치는 영향을 결정하는 것입니다. 이를 위해 먼저 마우스 모델로부터 장간막 아케이드(mesenteric arcade)를 분리합니다. 두 번째 단계는 4차 소저항 동맥을 박리하는 것입니다.다음 단계는 동맥 표본의 캐뉼레이션, 가압 및 배양입니다. PSS에서 마지막 단계는 동맥 표본의 생리적 무결성을 평가하는 것이며, 이는 혈관 긴장도의 자발적 발달과 혈관 수축제 및 혈관 확장제에 대한 적절하고 가역적인 반응을 통해 입증됩니다. 최종적으로 압력 유도 수축을 측정할 수 있습니다.이 기술의 함의는 고혈압, 저혈압 또는 혈관 기능 장애의 치료나 진단으로 확장됩니다. 본 기술은 혈관 저항, 관류 및 혈압의 핵심 결정 요인인 혈관 긴장도의 압력 유도 변화에 기저가 되는 핵심 메커니즘을 규명하기 때문입니다. 본 절차는 저희 실험실의 박사후 연구원인 Dr.Jja가 시연하겠습니다.글라스 캐뉼라를 마이크로 피펫 홀더에 장착하고, 마이크로 피펫 홀더를 관류 챔버에 부착하여 관류 챔버를 준비하는 것으로 이 절차를 시작합니다. Milli Q수로 헹군 후, 해부 용액으로 각각 5분 동안 헹굽니다. 그런 다음 챔버에 해부 용액 2 mL를 채웁니다.다음으로, 기포가 생기지 않도록 캐뉼라 전체와 연결된 튜빙을 조심스럽게 채웁니다. 해부 현미경 하에서 둔탁한 핀셋을 사용하여 반 매듭이 지어진 봉합사 두 개를 준비합니다. 해부용 핀셋을 사용하여 두 캐뉼라의 끝부분에서 약간 떨어진 곳에 부분적으로 묶인 봉합사 매듭을 장착합니다.다음으로, 마취된 쥐의 골반에서 흉골까지 피부를 절개한 후 하부 근육층을 차례로 절개하여 정중선 개복술을 수행합니다. 이때 복강 내 장기가 손상되지 않도록 주의해야 합니다. 세포 외 배양액의 오염을 방지하기 위해 소화물과 분변이 새어 나오지 않도록 양 끝단을 각각 묶어줍니다.그 후, 공(pori)에 가까운 소장의 근위단과 회맹접합부에 가까운 원위단을 절단합니다. 그런 다음, 영양 혈관 근처의 장간막 기저부를 절개합니다. 이어서 소장 장간막 전체를 얼음처럼 차가운 해부 용액이 담긴 50 milliliter 비커로 옮겨 5분 동안 배양합니다.그런 다음 신선한 해부액으로 헹구어 혈액을 제거합니다. 이제 장의 근위단 끝부분을 장판이 깔린 접시의 우측에 고정하고, 나머지 장을 반시계 방향으로 펼칩니다. 실체 현미경 하에서 장간막을 펼치고

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Research

연구

JoVE Journal

Medicine

의학

절연 mesenteric의 동맥에 힘 측정을위한 자동 myography 방법이 설명되어 있습니다. 그것은 phenylephrine 및 세포외 칼슘에 대한 답변을 결정하기 위해 510A Mulvany - Halpern 자동 듀얼 와이어 Myograph을 사용합니다. 300 μm의, 독립적으로 - 방법은 60 직경의 작은 선박에 agonists에 사시 응답 일관성있는 결정 수 있습니다.

자동 와이어 Myography를 사용 Mesenteric 동맥 수축과 휴식 연구

압축시키는 것 / 확장시키는 반응 (압력 myography를 사용하여)의 측정 병렬 절연 동맥 근세포 (패치가 el​​ectrophysiological 기술 클램프 사용)에서 Kv7 (KCNQ) 칼륨 채널 활동의 측정은 혈관 평활근의 생리학에 Kv7 채널의 역할에 대한 중요한 정보를 공개 할 수 있습니다 약리학.

패치 클램프 전기 생리학 및 압력 Myography를 사용하여 간선 평활근 Kv7 칼륨 채널 기능을 탐색

압력 myography에서 혈관의 손상 작은 세그먼트는 두 개의 작은 캐 뉼러에 장착하고 적절한 내강 압력으로 가압. 여기, 우리는 마우스 3의 혈관 이완 반응을 측정하는 방법을...

압력 Myography를 사용 쥐과 저항 동맥의 기능을 평가

이 원고는 쥐 대뇌 저항 동맥 혈관 기능을 평가 하기 위한 비디오 현미경 검사 법 프로토콜을 체 외에 설명 합니다. 원고는 또한 레이저 도플러 Flowmetry를 사용 하 여 붙일 레이블된 lectin과 조직 관류와 microvessel 밀도 평가 하기 위한 기법을 설명 합니다.

쥐의 고립 된 저항 동맥의 비디오 현미경을 이용 하 여 혈관 제어 메커니즘의 평가

선법 myograph 혈관 부드러운 근육 기능과 화면 새로운 약물을 조사 하는 데 사용 됩니다. 우리 보고 마우스 mesenteric 동맥의 isometric 수축 측정 및 혈관 평활 근의 새로운 relaxants 심사에 대 한 자세한 프로토콜.

Myography 와이어를 사용 하 여 마우스 Mesenteric 동맥의 isometric 수축 측정

이 프로토콜은 마우스에서 분리 된 장 간 막 동맥의 경 벽 등각 장력을 평가 하는 와이어 묘 조 그래피의 사용을 설명 하며, 내 피 세포 및 혈관 주위 지방 조직에서 방출 되는 요인에의 한 변조를 특별히 고려 합니다.

혈관 주위 지방 조직에 의해 변조에 초점을 맞춘 분리 된 장 간 동맥을 사용 하 여 혈관 톤 응답성의 평가

본 프로토콜은 마우스 대동맥 내피 기능의 실험적 생체외 평가에서 다중 챔버 근초음파 시스템을 사용하는 텐소메트릭 근초음파 기술의 개념 및 기술적 적용을 기술한다.

Tensometric Small Volume Chamber Myography 를 이용한 마우스 흉부 대동맥의 내피 의존성 혈관 이완 측정

두개골 내의 압력을 기록하는 소설 기법이 설명되어 있습니다. 최소한 침략적 방법은 정확하게 심각한 뇌 손상을 유발하지 않고 anaesthetized 쥐에게 intracranial 압력 (ICP)를 측정하기위한 광섬유 압력 감지 시스템을 사용합니다. 기술은 실험적 모델의 넓은 범위에서 사용할 수 있습니다.

광섬유 압력 변환기를 사용하여 쥐에서 경막외 Intracranial 압력 측정

소장은 자주 혈액 흐름에 부정적인 영향을주고 영양분 흡수에 영향을 미칠 수있는 독소에 노출된다. , 화합물 또는 관심의 독소를 multimyograph 및 장간막 동맥을 사용하고 정맥 분리하는 vasoactivity에 대한 검사를 할 수 있습니다.

생물 검정으로 소 장간막 동맥과 정맥의 섹션을 분리하고 사용하면 소장에서 Vasoactivity을 테스트

이 원고는 임신 중 자궁 내 압력을 측정하기 위해 마우스에 텔레미터를 이식하는 프로토콜을 제공합니다.

자궁 원격 측정은 마우스 수축 압력을 측정하는<em&gt; 생체</em

배우세요 쥐 저항성 장간막 동맥에서 압력 유도 혈관 긴장도를 평가하는 압력 근측정법을 이용한 근육 조직 대응 및 혈관 활성 측정 방법. 이 기술은 심혈관 기능 연구에 필수적인 도구입니다.

압력 Myography를 사용하여 저항 장간막 동맥에서 근육 조직 대응 및 Vasoactivity 평가

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