야생 동물의 기생충 수집 및 식별

이 절차의 전반적인 목표는 야생동물로부터 헬민스(helmints)를 수집, 보존 및 식별하는 것입니다. 이는 먼저 야생동물에 대해 부검을 실시함으로써 이루어집니다. 그 다음, 다양한 장기에서 헬민스를 수집하고, 이후 식별을 위해 다양한 기술을 사용하여 헬민스를 보존합니다.

마지막으로, 헬멧을 투명화 및 염색한 후 마운트하여 종을 식별합니다. 결과적으로 투명화 및 염색 기법을 통해 특정 헬멧 구조를 확인할 수 있으며, 이는 종 식별에 큰 도움이 됩니다. 이 방법은 포유류, 조류, 파충류 및 양서류의 헬멧 식별에도 적용할 수 있습니다.

이 방법은 어류와 같은 다른 생물에도 적용할 수 있습니다. 우선 동물을 평평한 표면에 놓고 돋보기를 사용하여 귀, 구강, 눈을 포함한 모든 외부 개구부에 선충, CSE, 발가락, 흡충이 있는지 검사합니다. 날카로운 면도날 또는 칼과 해부용 핀셋을 사용합니다.

장기가 파열되지 않도록 주의하며 복강 부위를 절개합니다. 그런 다음 골절단기 또는 필요한 경우 소형 핸드소(handheld saw)를 사용하여 흉강을 엽니다. 두 강 내에 조충(fal), 회충 및 대형 흡충이 있는지 검사합니다.

그런 다음 검사를 위해 식도 시작 부분 근처와 대장 끝부분에 각각 실로 묶어줍니다. 실체 현미경 하에서 심장과 주요 혈관, 기관 및 폐를 각각 개별 페트리 접시에 분리합니다. 간, 담낭 및 담췌관, 비장, 신장, 그리고 방광을 적출하여 실체 현미경으로 관찰합니다.

그 다음 소화 기관 전체를 제거하여 각 부분을 유리 접시에 담습니다. 장기를 제거한 후, 0.9% saline을 채운 호스나 분무병을 사용하여 체강을 세척하고, 세척액이 106 micrometer 메쉬 체를 통과하게 합니다. 체에 걸러진 내용물을 페트리 접시에 다시 씻어내고, 스테레오 현미경 하에서 Fal worms 또는 혈액 흡충(blood trematodes)이 있는지 확인합니다. 가위를 사용하여 각 소화관 절편을 절개합니다.

점막을 긁어내어 대형 기생충의 존재 여부를 세심하게 검사하십시오. encanto cephas의 psci는 종종 장벽 깊숙이 박혀 있습니다. 따라서 필요한 경우, 포셉이나 작은 가위를 사용하여 조직에서 이를 조심스럽게 떼어내십시오.

각 개방된 부위를 흐르는 물 아래에 두고 내용물을 106 µm 체로 씻어 내립니다. 그다음 심장과 주요 혈관, 기관, 요낭 및 쓸개물을 열어 내용물을 검사합니다. 동일한 방식으로, 날카로운 칼과 핀셋을 사용하여 간, 폐, 신장, 비장, 췌장과 같은 고형 장기를 절개하고 분리한 후 내용물을 씻어 검사합니다. 기생충의 종류를 기록합니다.

각 유형의 개수와 발견된 기관을 확인하십시오. 이후의 유전적 연구를 위해 헬멧을 보존할 수 있도록, 연필로 표시한 작은 무지 인덱스 카드를 바이알이나 병 안에 넣어 라벨을 붙이십시오. 우선 헬멧을 에탄올에 직접 넣으십시오.

샘플을 1일에서 수일 동안 고정한 후, 장기 보관을 위해 70% ethanol이 채워진 5 mL 유리 바이알로 옮깁니다. 흡충류(Trematodes)를 보존하려면, 살아있는 표본을 식염수 한 방울이 떨어져 있는 유리 현미경 슬라이드 위에 놓고 유리 커버슬립을 덮은 뒤, 식염수가 끓지 않도록 주의하며 슬라이드를 불꽃 위로 빠르게 통과시킵니다. 그런 다음 슬라이드를 알코올, 포르민 아세트산 또는 FA가 담긴 페트리 접시에 넣어 커버슬립이 자연스럽게 떨어지도록 합니다.

사멸한 흡충은 FA 또는 10% buffered formalin에 48시간 동안 고정한 후, 장기 보관을 위해 70% ethanol이 채워진 병으로 옮깁니다. 고정을 위해 살아있는 동물은 페트리 접시에 넣고 거의 끓는 물을 부어 이완시킨 다음, 장기 보관을 위해 70% ethanol이 채워진 병으로 옮깁니다. 살아있는 encanto cephas는 수돗물이 담긴 페트리 접시에 넣어 냉장고에 1시간에서 수 시간 동안 보관하여 proboscis가 완전히 함입될 때까지 이완시킵니다.

장기 보관을 위해 70% ethanol 또는 FA가 채워진 병으로 옮기십시오. 작거나 약한 선충은 70% ethanol 가열 처리 후 5% glycerin이 함유된 70% ethanol이 채워진 병에 넣어 보관하십시오. 중형 및 대형 선충의 경우에도 동일하게 처리하여 사멸시키십시오.

이를 차가운 빙초산에 넣고 15분 후, 70% ethanol과 5% glycerin이 채워진 병으로 옮깁니다. hematin과 알코올을 용해시키고, ammonium aluminum sulfate를 가열된 물에 용해시켜 Harris Hematin을 준비합니다. 두 용액을 혼합하고 끓입니다.

그 후 요오드산나트륨을 첨가하고 2~3분 동안 끓입니다. 용액이 식으면 5 41 여과지를 사용하여 용액을 여과하여 흡충(Trematodes)을 걸러내고 상층액을 따라냅니다. 샘플을 염색하기 위해 Harris Hematin 또는 semicon Carmine에 하룻밤 동안 담가 둡니다. 장기가 보일 때까지 70% 산성 에탄올에 보관합니다.

염색을 중단하려면 표본을 70% basic ethanol에 최소 30분 동안 옮겨둡니다. 에탄올 시리즈로 시료를 탈수시키고, xylene 또는 methyl salicylate를 사용하여 투명화한 후 현미경 슬라이드에 표본을 마운트하고 Canada Balsam 한 방울과 커버 슬립을 추가합니다. 하룻밤 동안 건조시킵니다. 작거나 중간 크기의 선충 및 encanto cephas는 현미경 슬라이드 위의 lact phenol 마운트에 놓고 커버 슬립으로 15분에서 30분 동안 덮어 투명화합니다. 큰 선충 및 encanto Cephas의 경우에도 동일하게 처리합니다.

최대 60분 동안 80% phenol에 담가 둡니다. 광학 현미경으로 관찰하여 culex atos를 검사하기 위해 작은 구조들이 투명해졌는지 확인합니다. 이를 절단하여 일정량의 lacto phenol 위에 놓습니다.

현미경 슬라이드 위에서 작업을 수행합니다. 커버스립을 사용하여 culex를 압착함으로써 rose stellar hooks의 측정과 계수가 가능하게 합니다. 앞쪽 끝부분을 절단하여 현미경의 Foss에 고정합니다.

영구 표본 제작을 위해 락토페놀(lact phenol) 몇 방울을 떨어뜨리거나 글리세린 젤리에 슬라이드를 놓습니다. 광학 현미경으로 구강 부위를 관찰하십시오. 대형 선충의 꼬리 부분을 절단하여 락토페놀에 마운팅한 후, 본 영상에서 설명한 방법을 사용하여 광학 현미경으로 수컷의 복부 파필라(ventral papillae)와 교미침(spicule) 형태를 관찰하십시오.

몬태나주 미술라 카운티에서 가면땃쥐(mask shrew) Sox 시나리오의 헬멧에 대한 조사가 수행되었습니다. 2007년부터 2011년 사이에 총 56마리의 땃쥐를 피트폴 트랩으로 채집하여 사후 2시간 이내에 검사하였습니다.

전체 감염 유병률은 96%였으며, 단 두 마리의 땃쥐만이 기생충이 없었습니다. esto 9종과 선충 6종을 포함하여 총 15종의 헬멧이 확인되었습니다. Esto 속의 staphylo authorities 한 종은 이전에 기술된 적이 없는 종이었습니다.

감염이 확인된 장기는 소장, 위, 폐 및 방광을 포함하였습니다. 감염된 숙주당 총 감염 강도는 7~234마리의 벌레 범위였으며, 감염된 숙주당 종 풍부도 또는 헬멧 종의 수는 1~8종이었고 평균은 4.1이었습니다. 이 기술을 숙달하면 다람쥐와 같은 소형 포유류에서는 1~2회, 라쿤과 같은 대형 포유류에서는 4~5회 내에 수행할 수 있습니다.

이 영상을 시청한 후, 야생 동물로부터 헬멧을 수집, 보존 및 식별하는 방법에 대해 충분히 이해하게 될 것입니다.