마우스 및 꿰 문착 사슴 우유 수집 방법

본 절차의 전반적인 목표는 다양한 과학 실험에 사용하기 위해 마우스 또는 푸드로(reeve's mutt jack deer)로부터 우유를 채취하는 방법을 시연하는 것입니다. 이는 먼저 동물에게 옥시토신을 투여하여 유즙 분비를 자극한 후, 동물을 마취시킴으로써 수행됩니다. 그 다음, 한 명의 연구자가 수동으로 우유를 짜내면 다른 연구자가 이를 채취합니다.

마지막 단계는 동물이 마취에서 회복되는 동안 안전을 확보하는 것입니다. 결과적으로, 1회당 약 5~30 mL의 mutt jack 우유 또는 최대 450 µL의 마우스 우유를 수집할 수 있습니다. 특수 장비가 필요한 기존 방법들과 비교했을 때 이 기술의 주요 장점은 상대적으로 비용이 저렴하고 배우기 쉽다는 점입니다.

이 방법은 병원균이 모유를 통해 모체에서 새끼로 전달될 수 있는지와 같은 여러 과학적 질문에 답하는 데 도움이 될 수 있습니다. 이 방법이 처음인 사람은 일반적으로 모유를 제대로 짜내는 데 숙련 기간이 필요하기 때문에 어려움을 겪을 수 있습니다. 수유 중인 마우스의 모유 분비를 자극하기 위해 저희 실험실의 테크니션인 Stephanie full away가 이 과정을 도와줄 것입니다.

우유를 채취하기 직전에 옥시토신을 kg당 2 international units의 용량으로 복강 내 투여하고, 마우스를 마취시킨 후 마취제가 효과를 나타낼 때까지 기다리는 동안 마우스의 눈이 건조해지는 것을 방지하기 위해 각 눈에 소량의 안구 윤활제를 도포합니다. 멸균 알코올 솜, P 200 피펫맨, 멸균 피펫 팁, 그리고 1.5 milliliter 에펜도르프 튜브나 1.2 milliliter 크라이오 바이알과 같이 우유를 담을 용기를 준비합니다. 우유 채취에는 두 명의 연구원이 필요합니다.

한 사람은 동물을 고정하고 우유를 짜내며, 다른 사람은 수집 용기가 오염되지 않도록 주의하며 우유를 수집합니다. 우유를 짜는 사람은 착유 전에 멸균 알코올 솜을 사용하여 유방 부위를 부드럽게 닦아냅니다.

옥시토신 주입 후 1~2분 이내에 생쥐의 유선 부위에서 유즙 사출이 관찰됩니다. 엄지와 검지를 사용하여 유선 조직을 위쪽 방향으로 부드럽게 마사지하고 짜내어, 유두 기부에 눈에 보이는 유즙 방울이 형성될 때까지 수동으로 유즙을 채취합니다. 그 다음 유즙 채취자는 P 200 피펫의 플런저를 첫 번째 정지 지점까지 눌러 피펫 팁의 공기를 배출하고 유즙 채취를 준비합니다.

그 다음 우유 채취자는 피펫 팁을 우유 방울의 상단에 위치시킵니다. 팁이 유두나 피부에 너무 가까이 닿지 않도록 주의하며, 플런저의 압력을 천천히 해제하여 우유를 피펫 팁 안으로 빨아들인 후, 액체가 손실되지 않도록 피펫 팁을 채취 튜브의 벽면에 밀착시킵니다. 우유 채취자는 엄지손가락을 사용하여 플런저를 첫 번째 정지 지점 너머로 눌러 용기 안에 우유를 배출합니다.

시계 방향 또는 반시계 방향으로 이동하며 각 유두에서 수동으로 계속 착유하십시오. 특히 특정 유두에서 다른 유두보다 더 많은 우유가 나오는 경우, 이전 유두로 돌아가 더 많은 우유를 착유해도 무방합니다. 우유 수집이 끝나면 마우스가 마취에서 깨어나도록 하십시오.

어미 짐승이 케이지 안에서 원활하게 움직이면, 젖 분비를 자극하기 위해 새끼들과 함께 원래의 케이지로 다시 옮깁니다. 수유 중인 리브스 뮤트 잭 사슴(reeve's mut jack deer)에게 옥시토신 10 international units/kg을 근육 내로 투여한 후, 즉시 뮤트 잭을 마취시킵니다. 귀를 만졌을 때 가벼운 반사 반응만 나타나고, 우유 짜는 사람이 뮤트 잭을 잡았을 때 저항이 없다면 마취 수준이 적절한 것으로 간주합니다.

다음으로, mut jack의 눈이 건조해지는 것을 방지하기 위해 각 눈에 소량의 윤활제를 도포합니다. 밀크 익스프레서와 밀크 컬렉터에 에탄올에 적신 거즈와 우유를 담을 수 있는 15 milliliter 원추형 폴리프로필렌 튜브 여러 개를 준비합니다. 옥시토신이 작용하기 시작하면 mutt jack의 유선 부위에서 유즙 분비가 나타납니다.

착유자와 우유 수집자 모두 장갑을 착용하고 에탄올을 적신 거즈로 소독해야 합니다. 또한 동물의 머리를 편안한 위치에 고정하여 호흡을 원활하게 하고 반추위 역류를 방지하면서, 에탄올 적신 거즈를 사용하여 유방 전체와 각각의 유두를 소독하십시오. 우유 수집자는 수집 튜브가 피부에 닿지 않도록 주의하며 착유 중인 유두 가까이에 배치합니다.

착유기는 엄지와 검지를 사용하여 유방 조직을 위쪽으로 부드럽게 압박하여 유두에 젖이 찰 때까지 밀어 올린 다음, 유두에서 튜브 안으로 젖이 부드럽게 흘러 나오게 하여 모유 수집기가 이를 받아내도록 합니다. 젖은 줄기 형태로 나오므로, 젖이 낭비되지 않도록 수집 튜브의 위치를 잘 잡는 것이 중요합니다. Mt Jack의 유방은 4분면으로 나뉘어 있습니다.

유즙 짜개는 우유가 더 이상 쉽게 흐르지 않을 때까지 각 구역에서 계속해서 유즙을 채취합니다. 한쪽 젖꼭지에서 유즙을 채취할 수 없는 경우, 첫 번째 젖꼭지로 돌아가기 전에 다른 모든 젖꼭지에서 먼저 채취합니다. 유즙 채취가 끝나면 bam 마취를 빠르게 되돌리기 위해 aamaz를 피하 투여하고, 마지막으로 암컷 쥐가 스스로 걷고 먹고 마실 수 있을 때까지 상태를 관찰합니다. 이 수치는 수유 중인 생쥐로부터 100 to 450 µL의 유즙을 얻을 수 있음을 나타냅니다.

최대 우유 부피는 옥시토신 2 IU/kg을 투여하여 분만 후 8~12일에 수집하였습니다. 여기에는 리브스 뮤트 잭 Deer의 새끼 수에 따라 도식화한 포유 마우스의 대략적인 우유 생산량이 표시되어 있습니다. 세션당 수집된 우유의 부피는 사용된 마취제와 분만 후 우유 수집 시작 및 종료 날짜에 따라 5~30 mL 범위였습니다. 뮤트 잭 모우의 수집 일정은 이 표에 나와 있습니다.

우유는 평균 80일(범위 18~150일) 동안 수집되었습니다. 이 기술에 숙달되면, 한 세션에서 수집하고자 하는 동물의 수에 따라 약 1시간 내에 수행할 수 있습니다. 이 절차를 시도할 때는 항상 동물의 안전을 최우선으로 생각하는 것이 중요합니다. 이 절차 이후에는 우유 처리가 필요할 수 있으며, 이어서 우유 성분에 관한 추가적인 질문을 해결하는 데 도움이 될 수 있는 인 비트로(in vitro) 테스트 또는 생물학적 분석(bioassays)을 수행할 수 있습니다.