Name: 마우스의 Intralymphatic 면역 및 예방 접종 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2014-02-02T14:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 33 s
Description: 배우세요 마우스의 림프절 내 직접 백신 주사를 통한 면역 반응 촉진 기법. 이 방법은 기존 피하 주사보다 효능을 높이고 백신 용량을 줄일 수 있는 신뢰할 수 있는 기술입니다.

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저자는 아이리스 Erdmann의, 바바라 폰 Beust, 줄리아 마르티네즈 마리아 고메즈의 생쥐 intralymphatic 예방 접종의 방법을 개발하는 실험적인 도움에 대해 감사합니다. 우리는이 비디오 제작에 대한 자신의 수술 극장을 사용셔서 또한 Maggy의 아라스와 니콜라 Cesarovic 감사합니다.

1. 쥐의 마취 <ol><li> 완충 식염수에 케타민 (해리 성 마취제)과 자일 라진 (진정제 및 진통제)을 혼합하여 마취제를 준비합니다. 최종 솔루션에서 케타민과 자일 라진의 농도는 각각 12.5, 2 ㎎ / ㎖이다. </li><li> 25 ~ 30 G 바늘과 주사기를 사용하여 복강 내 투여하여 마우스에 마취제를 주입한다. 체중의 0.1 ml/10 g을 사용합니다. </li><li> 각막의 건조 아웃을 방지하기 위해 마우스의 눈에 안과 연고를 적용합니다. </li><li> 마우스가 충분히 집게와의 발이나 발가락을 집어 마취 확신한다. 마우스가 핀치에 반사와 반응하지 않는 경우 수술을 진행합니다. 마우스는 반사 신경이나 근육의 수축과 핀치에 반응하는 경우, 1 ~ 2 분 정도 기다린 핀치 테스트를 반복합니다. 마우스가 여전히 반응의 경우, 새로운 동물로 마우스를 대체하고 이후 단계 1.2의 절차를 반복합니다. </li></ol> 2. 외과 I마우스의 사타구니 지역의 ncision <ol><li> 그 뒷면에 마우스를 놓습니다. </li><li> 소독 에탄올 (70 %)와 하나의 서혜부 십니다. 더 나은 소독을 제공하기 위해, 서혜부 에탄올 모피 전에 소독을 제거하는 면도 할 수있다. </li><li> 뒷다리를 가지고 고관절의 약 90 °의 각도를 생산하는 엉덩이 관절을 구부립니다. </li><li> 곡선 microdissecting 집게를 사용하여 엉덩이 관절이 구부러 서혜부에서 마우스 스킨을 약간 적신 피부를 당겨. </li><li> 집게로 피부를 누른 상태에서, 외과 용 가위를 사용하여 피부를 통해 작은 절개 (&lt;5 mm)를 절단. </li><li> 절개 부위에 폐쇄 가위의 끝을 놓고 더 절개 안쪽을 잡고 가위를 열어 절개를 엽니 다. 이 찢어 및 10 mm 이하의 직경을 생산한다 피부를 일으킬 것이다. 주 :가요 라이트 가이드 등으로 감기 광원 시인성을 향상시키기 위해 사용될 수있다. 이전에마우스, 특히 남성, 림프절의 식별 인해 사타구니 지역에있는 지방이 많은 조직에 어려울 수 있습니다. </li></ol> 3. Intralymphatic 주입 <ol><li> 28 ~ 30 G 피하 주사 바늘과 주사기 (0.5 ㎖ 이하)을 준비, 짧은 베벨 긴 베벨 것이 바람직 할 수있다. 백신의 대기음 10 ㎕를 주입 주사기가 공기 무료입니다 확신합니다. </li><li> 곡선 포셉의 도움 폐쇄 가위의 끝을 가진 서혜부 림프절 지역화. 림프절은 더 흰 지방 조직 내에서 회색 표시되고 추가로 입력하고 림프절을 떠나 심성 및 원심성 모세 혈관을 통해 확인할 수 있습니다. </li><li> 곡선 포셉의 가지 사이를 잡고 림프절을 고정시킨다. </li><li> 주사기를 타고 위로 향하게 경사와 림프절에 바늘을 삽입하고 전체 경사가 림프절을 들어 확인하고. </li><li> 백신 (10 μL)을 주입한다. 만약 림프 고개를 끄덕전자는 (폭파) 팽창되고, 주입이 성공적으로 가정 할 수있다. 바늘이 림프절에 깊은 충분히 배치되어 있지 않은 경우, 일부 또는 전체 백신은 누출 및 림프 노드를 입력 할 수 있습니다. 바늘이 너무 깊이 삽입하면, 주입 된 백신은 피하 림프 노드 아래에 발표 될 예정이다. 후자의 경우, 주사를 반복하거나 새로운 미처리 마우스로 마우스를 교체. </li></ol> 4. 봉합하여 절개 닫기 <ol><li> 무균 수술 봉합의 팩을 엽니 다. </li><li> 바늘 몸의 말단 부분에 바늘 홀더 봉합 바늘을 잡아. 첫 번째 래칫 어획량까지 짜내서 바늘 홀더를 조입니다. </li><li> (톱니 또는 취소 톱니 포셉이나 피부 후크 사용될 수있는 외과 의사의 선호도에 따라) 집게를 사용하여 절개의 한면에서 피부의 보류를 가져 가라. 바늘 CA입니까. 2-3mm을 절개의 가장자리에서, 피부의 외부로부터 입력. </li><li> 이보게집게로 피부의 유지 EN과 집게로 절개의 반대편을 파악. 바늘 CA입니까. 2-3mm을 절개의 가장자리에서, 피부의 내부로부터 입력. </li><li> 바늘 홀더를 풀고 집게로 바늘 끝을 잡고. 여러 마우스가 처리 될 경우, 짧은 끝을 떠나 (제 1 바늘 삽입 지점 외부 트레드 편리한 길이를 떠나, 피부를 통해 접지면과 바늘을 빼낼 수 있지만, 5 ~ 10 마우스는 하나의 봉합 바늘에 운영 할 수있다 /) 밟다. </li><li> 표준 외과 의사의 프로토콜에 따라 선호하는 매듭을합니다. 절개 부위가 10mm 이하인 경우 하나의 스티치가 충분하다. 큰 절개를 들어, 두 번째 스티치를합니다. </li></ol> 5. 후 운영 처리 <ol><li> 새장에 마우스를 놓고 보온하는 조직 커버. 여러 쥐를 치료​​하면, 따뜻하게 서로에게 가까이 놓습니다. 그들이 깨어 때까지 다른 방법으로는, 따뜻한 패드에 마우스를 배치최대. </li><li> 그들이 일어날 때까지 쥐를 관찰합니다. </li><li> 치유뿐만 아니라 상처 감염과 같은 다른 임상 증상을 상처에 관해서는 매일 쥐를 관찰합니다. 상처는 일반적으로 충분히 이틀 폐쇄 절차의 7 일 이내에 치유됩니다. </li></ol>

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</ol>

TMK는 남자 intralymphatic 면역 요법을 다루는 특허의 발명자로 지정됩니다. TMK는 과학 고문되었으며 ImVisioN GmbH를, Cytos 생명 공학, MannKind 공사 및 XBiotech 미국 주식 PJ가 공개하는 충돌의 관심이없는에서 여행 경비를 받았다.

Intralymphatic 예방 접종 및 면역 항체 반응과 T 세포 반응을 모두 자극에 적절한 것으로 표시되었습니다. 이 비디오 문서에서 알 수 있듯이, 예방 접종의 intralymphatic 절차는 생쥐에 강한 면역 반응을 자극하기위한 빠르고 쉬운 방법입니다. 숙련 된 외과 의사가 3 ~ 4 분 동안 절차를 수행 할 수 있습니다. 세션은 또한 하나가 일반적 마취와 봉합을 수행하고 제 외과 절개 및 주입을하고이 외과 의사 사이에서 공유 될 수있다. 절차의 효율성은 외과 의사가 아직 잘 훈련되지 특히, 다른 예방 접종 방법보다 더 의존 연산자입니다. 그러나, 숙련 된 작업자는 면역 반응 분석에 의해 모니터링으로 또한 정량적으로 실험 결과를 재현 할 수있다. 방법의 변경은 비장 1,2에 백신을 주입하는 것입니다. 제제 intralymphatic 주입 마찬가지이지만 번째절개의 E의 크기는 일반적으로 크게 두 개의 바늘이 그것을 닫 만들어진 것입니다. 니들 삽입 또는 주입에 기인 림프절의 손상이 수반 것이지만 그러...

백신은 일반적으로 면역 반응의 자극을 위해 피하 또는 근육 주사합니다. 이 절차의 성공은 항원 제시 세포는 T-와 B-세포 반응의 생성을 위해 림프구와 상호 작용할 수있는 림프절에 백신의 효율적인 배수를 필요로합니다. 또, 강도 및 유도 면역 반응의 유형은 밀도 또는 주파수와 같은 상호 작용뿐만 아니라 미세 환경 자체, 사이토 카인, 특히 콘텐츠에 의존한다. 말초 조직에 주입 백신의 단지 작은 분획이 림프절에 도달 할 때, 림프절로 백신의 직접 주입에 의해 생쥐와 인간의 접종은, 사이트가 면역 반응을 생성하고, 수행되었다. 사람에서의 절차는 초음파, 또한 림프 시스템의 시각화 및 진단을위한 이미징 요원의 관리에 사용되는 절차에 의해 안내된다. 마우스에서, 절차는 침습적이다. 여기에, 작은 (5 ~ 10 ㎜) incisioN 마취 된 동물 1의 서혜부 제, 림프 노드는 지역화 포셉 고정화하고, 백신의 10 ~ 20 μL의 부피는 시각 제어에 주입되고, 10 ㎕를 먼저 주사에 사용되는 젊은 생쥐 작은 림프 노드와, 반면에 20 ㎕의 큰 림프절이 림프 세의 노드 또는 이미 끝났다 마우스에 주입 할 수있다. 절개 수술 봉합사를 사용하여 하나의 스티치 닫을 수 있습니다. 이 방법으로, 마우스는 플라스미드 DNA, 3, 메신저 RNA 4, 펩타이드 1,3,5,6, 단백질 7 ~ 10, 11를 입자, 박테리아 (12)뿐만 아니라 보조제 7,13, 면역의 강력한 개선과 예방 접종 백신의 모든 유형에 대한 반응이 관찰되었다. 예방 접종의 intralymphatic 방법은 기존의 예방 접종이 부족한 면역을 생산 또는 사용 가능한 백신의 양이 제한 또는 버전입니다 상황에서 특히 적합하다비용이 많이 드는 예. 인간의, 예방 접종의 intralymphatic 방법은 알레르기 환자 14, 15 또는 암 16-21 환자에 적용되었습니다. 현재의 개념이 intralymphatic 방법 등 근육 및 피하 주사 등의 주사 방법보다 더 침습적 인 것입니다 만, 고통의 인식은 정맥 천자 (15) 후보다 높은 없습니다. 그것은 intralymphatic 예방 접종은 질병 예방 및 치료, 특히 예방 접종의 다른 방법에 대한 대안 또는 보완 될 것으로 예상된다. 이 문서 intralymphatic 예방 접종의 절차가 생쥐에서 수행하는 방법을 상세하게 설명합니다. 설명 모든 절차는 취리히의 주립 수의학 기관의 승인을 스위스 연방 정부의 가이드 라인과 과학적인 목적으로 사용되는 동물의 보호에 관한 지침에 따라 수행 하였다.

<table><tbody><tr><td>케타민 (Ketasol-100)</td><td>Graeub AG, 스위스</td><td></td><td>마취제</td></tr><tr><td>자일라진 (Rompun)</td><td>바이엘, 독일</td><td></td><td>마취제</td></tr><tr><td>Viscotears Eye-Gel</td><td>Novartis, 스위스</td><td></td><td>마취 중 눈이 건조해지는 것을 방지합니다.</td></tr><tr><td>BD Micro-Fine 0.5 ml</td><td>BD Medical, 프랑스</td><td></td><td>29 G 인슐린 주사기와 영구적으로 부착된 바늘</td></tr><tr><td>6-0 Dermalon 모노필라멘트 나일론</td><td>Covidien, MA, 미국</td><td></td><td>봉합사용(0.7 미터법, 18 G, 45 cm, 파란색)</td></tr><tr><td>곡선 겸자, 4.5 in</td><td>Polymed, 스위스</td><td></td><td>림프절 절개 및 고정용</td></tr><tr><td>스트레이트 수술용 가위, 4.5 in</td><td>Polymed, 스위스</td><td></td><td>절개</td></tr><tr><td>바늘 홀더, 5.5 in</td><td>Polymed, 스위스</td><td></td><td>봉합사로 절개를 닫으려면</td></tr></tbody></table>

마우스의 intralymphatic 면역 및 예방 접종

Intralymphatic Immunotherapy and Vaccination in Mice

백신은 일반적으로 면역 반응의 자극을 위해 피하 또는 근육 주사합니다. 이것의 성공은 항원 제시 세포가 원하는 면역 반응의 생성을 위해 림프구와 상호 작용할 수있는 림프절에 백신의 효율적인 배수를 필요로합니다. 강도 및 유도 된 면역 반응의 유형은 밀도 또는 주파수의 상호 작용뿐만 아니라, 미세 환경, 사이토킨, 특히 콘텐츠에 의존한다. 말초 주입 백신만을 분 분획 림프절에 도달 할 때, 마우스 및 인간의 예방 접종 서혜부 림프절, 즉 intralymphatic 주사로 백신의 직접 주입에 의해 수행되었다. 남자에서, 절차는 초음파에 의해 안내된다. 마우스에서, 작은 (5-10 ㎜) 절개, 림프절 지역화 및 집게로 고정화는 마취 된 동물의 서혜부 영역에 만들어지고, 백신의 20 μL의 부피는 카메라 제어하에 주입한다.절개 수술 봉합사를 사용하여 하나의 스티치 닫힙니다. 마우스는 플라스미드 DNA, RNA, 펩타이드, 단백질, 입자, 박테리아뿐만 아니라 보조제 접종하고, 백신의 모든 유형에 대한 면역 반응의 강력한 개선이 관찰되었다. 예방 접종의 intralymphatic 방법은 기존의 예방 접종이 부족 면제 또는 가능한 경우 백신의 양이 한정되어 생산 상황에 특히 적합합니다.

생쥐 intralymphatic 주사의 절차는 수술 성격에도 불구하고, 정직하고 상대적으로 빠르다. 훈련을받은 사람이 3 ~ 4 분의 절차를 수행 할 수 있습니다. 한 스티치 폐쇄 절개 일반적으로 두 일 이내에 치유 (그림 1) Intralymphatic 백신 또는 면역이 mRNA를 사용하여 수행되었으며, 플라스미드 DNA, 펩타이드, 단백질, 바이러스 및 박테리아. 2 단백질 포스 포 리파제 A2 (PLA2), 주요 봉독 알레르겐 접종 후에 항체 생산을 도시도. CBA 마우스는 0.01, 0.1, 또는 피하 (SC) 또는 intralymphatic (ILN) 주사하여 수산화 알루미늄에 흡착 된 10 μg PLA2로 0 일, 14 일 및 28 일에 면역시켰다. PLA2 특이 항체 (의 IgG2a가) 8 주 후에 혈액에서 측정 한 결과 때 U 10 μg PLA2가 필요하면서 0.01 μg...

예방 및 치료 백신은 종종 노드와 면역 세포의 결과로 가난한 참여 림프로 인해 백신의 주 배수에 강한 면역 반응을 자극하는 데 실패합니다. 림프절 백신의 직접 주사에 의해, 소위 intralymphatic 주입은 백신 효능 강하게 개선 될 수 있으며, 백신의 투여 량을 저감 할 수있다.

마우스의 Intralymphatic 면역 및 예방 접종

Vaccines are typically injected subcutaneously or intramuscularly for stimulation of immune responses. The success of this requires efficient drainage of ...

본 실험 절차의 전반적인 목적은 백신을 림프절에 직접 주입하여 마우스의 면역 반응을 자극하는 것입니다. 이를 위해 먼저 마우스를 마취시킨 후 서혜부 영역에 작은 절개를 가합니다. 그다음, 서혜 림프절의 위치를 찾아 고정합니다.마지막 단계는 서혜 림프절에 백신을 주입하는 것입니다. 궁극적으로, 림프 내 백신 투여는 그 반응을 측정하고 피하 주사와 같은 전통적인 전달 방법과 비교함으로써 평가할 수 있습니다. 일반적으로 이 방법에 익숙하지 않은 사람들은 백신으로 림프절을 정확히 조준하는 데 어려움을 겪습니다.림프절의 고정, 바늘의 삽입, 그리고 백신의 주입을 동시에 조율하는 데는 어느 정도의 숙련도가 필요할 수 있는데, 이는 바늘이 쉽게 위치를 벗어나 백신이 림프절 외부로 주입될 수 있기 때문입니다. 먼저 함께 제공된 텍스트 프로토콜에 따라 마우스를 마취하십시오. 각막이 건조해지는 것을 방지하기 위해 가능한 한 빨리 마우스의 눈에 안연고를 도포하십시오.그 다음 마우스를 배측으로 눕히고, 포셉으로 마우스의 발을 집어 마취가 충분히 되었는지 확인합니다. 반응이 없으면, 빛으로부터 보호하기 위해 마우스의 머리 위에 조직을 덮고 서혜부 한 곳을 70% ethanol로 소독합니다. 그런 다음 뒷다리를 들어 올려 고관절을 90도 각도로 굽힙니다.이제 곡선형 미세 해부 핀셋을 사용하여 굴곡진 부분의 피부를 들어 올리고, 피부를 통해 작은 절개를 합니다. 그 다음, 닫힌 가위의 끝부분을 절개 부위에 넣습니다. 가위를 벌려 서혜부 영역에서 직경 10 mm 미만의 구멍을 냅니다.주변의 더 하얀 지방 조직과 대비되는 구형의 회색 외형을 통해 림프절을 식별합니다. 28 gauge short bevel 피하 주사 바늘이 장착된 0.5 milliliter 주사기를 사용하여 주입할 백신 10 microliters를 흡인합니다. 이제 곡선 핀셋의 가지 사이에 림프절을 고정합니다.그 다음 베벨(bevel)이 위를 향하게 하여 주사기 바늘을 림프절에 삽입합니다. 베벨 전체가 림프절 내부로 들어갔는지 확인하십시오. 백신을 주입하고, 주입이 성공했음을 나타내는 부종이 있는지 확인합니다.니들 홀더를 사용하여 멸균 외과용 봉합사 팩을 엽니다. 바늘 몸체의 원위부에서 봉합 바늘을 잡습니다. 그런 다음 첫 번째 래칫이 걸릴 때까지 니들 홀더를 꽉 조여 고정한 후 실을 끌어당깁니다.다음으로, 절개 부위 한쪽의 피부를 잡습니다. 절개선 가장자리의 피부 바깥쪽에서

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Research

연구

JoVE Journal

Immunology and Infection

면역학 및 감염학

우리는기도를 통해 anesthetized 생쥐의 폐에 시험 물질의 비 수술 전달을 보여줍니다. 이 방법은 세균과 바이러스 병원균, 크린 시토킨, 항체, 구슬, 화학, 또는 염료로 폐 노출 수 있습니다. 우리는 더 이상 수확 및 유동세포계측법에 대한 폐, 폐 배수 림프절 (LDLNs) 처리 설명합니다.

유동세포계측법에 의해 폐, 폐 배수 림프절의 분석과 마우스의 비 수술 Intratracheal 떨어뜨림

이 비디오는 세포 기반 종양 백신 접종 분석을 보여줍니다. 종양 형성을 위해 B16-F10 흑색종 세포를 피내 주입한 마우스는 발병한 종양 근처에서 Flt3L 사이토카인을 분비하는 B16-F10 세포를 접종합니다. 백신에서 분비된 Flt3L은 수지상 세포의 성숙 및 증식을 촉진한 후 림프절의 T 세포에 종양 항원을 제시하여 표적 항종양 면역 반응을 유발합니다.

Tumor Implantation and Injection of a Tumor Vaccine in a Mouse 모델에서의 종양 백신

림프절은 면역 반응을 조율하고 백신을 위한 중요한 표적인 면역 조직입니다. 생체 재료는 더 나은 표적 림프절을 위해 채택되고 항원 또는 유수품의 전달을 통제하기 위하여 채택되었습니다. 이 논문은 이러한 아이디어를 결합하여 생체 적합성 폴리머 입자를 림프절에 주입하는 기술을 설명합니다.

생분해성 폴리머 입자의 림프절 내 주입

본 연구는 폐의 선천성 면역 반응을 촉진하고 마우스의 급성 폐렴구균성 폐렴을 예방하기 위해 설하 면역요법을 사용하는 것의 편리함을 보여줍니다.

대안으로 설하 면역 요법은 급성 호흡기 감염에 대한 보호를 유도하기 위해

본 문서에서는 마우스 모델에서 BCG를 사용하여 비강 내 및 피하 면역에 의해 유도된 보호 효능 및 폐 면역 반응을 비교하기 위해 따랐던 방법론을 자세히 설명합니다. 본 연구의 결과는 폐 백신 접종의 이점을 보여주며, 백신 유도 보호에서 IL17 매개 반응의 역할을 시사한다.

보호 효능 및 폐 면역 반응은 마우스에 피하 및 비강 BCG 관리에 따라

설명 된 항 원 자주 나노 입자와 자극 B 세포 활성화에서 생체 외에서 그리고 vivo에서에서 그들의 사용의 준비가 이다. 일관 되 고 강력한 항 체 응답 새로운 땅콩 알레르기 모델의 개발을 주도. 항 원 리를 생성 하기 위한 프로토콜은 다른 항 원 및 예방 모델을 확장할 수 있습니다.

질병-특정 항 체의 생성에 대 한 항 원 리

여기 소개 된 프로토콜 vivo에서 염증 성 조건 하에서 기본 인간 림프 톨의 폐 유도 용량 특성을 수 있습니다. 알레르기 염증의 마우스 모델에서 adoptively 전송된 인간의 면역 세포의 폐 침투 몇 군데 하 고 화학적으로 허가 폐 조직의 빛 시트 형광 현미경 검사 법에 의해 측정할 수 있습니다.

고급 폐 유도 빛 시트 현미경 검사 법에 따라 알레르기 염증의 Vivo 모델에서 실험에서 인간 림프 톨의 이미징

우리는 쥐에 있는 이종 성 복부 심혼 이식의 모형을 기술합니다, 현재 전략의 수정을 암시하는, 이는 단순화한 외과 접근으로 이끌어 내는. 추가적으로, 우리는 쥐에 있는 추가 이식 면역학 분석을 허용하는 중요한 심장 근육 세포의 귀 주입에 의하여 새로운 거부 모델을 기술합니다.

쥐에 있는 이종 심혼 및 심장 근육 세포 이식을 위한 면역학 모형

이 프로토콜은 Flt3L 발현 B16-F10 흑색종으로 세포 기반 종양 백신 접종을 사용하는 암 면역 요법 모델을 제시합니다. 이 프로토콜은 배양된 종양 세포의 준비, 종양 이식, 세포 조사, 종양 성장 측정, 종양내 면역 세포의 분리 및 유세포 분석을 포함한 절차를 보여줍니다.

조혈 사이토카인을 사용한 종양 백신 접종을 이용한 실험적 흑색종 면역요법 모델

본 프로토콜은 개복 수술의 위험을 피하고 맹검 경피 주사의 정확도를 향상시키기 위해 마우스에서 흉선 내 주사를 위해 확립 된 중재 적 방사선 절차를 설명합니다.

마우스에서 흉강내 주사를 위한 최소 침습적이고 정확하며 효율적인 기술

이 연구는 표피(EC) 면역을 통해 생쥐의 면역 반응을 조절하는 피부의 역할을 보여줍니다. 단백질 항원을 사용한 EC 면역은 병원체 관련 분자 패턴과 결합할 때 접촉 과민증 또는 피부 유도 억제에서 면역 반응을 억제할 수 있습니다. EC 면역은 면역 요법에 대한 효과적이고 주사 바늘이 없는 접근 방식으로서 가능성을 보여줍니다.

표피 유도 면역조절의 쥐 모델(Murine Model of Epicutanely-Induced Immunomodulation)

배우세요 마우스의 림프절 내 직접 백신 주사를 통한 면역 반응 촉진 기법. 이 방법은 기존 피하 주사보다 효능을 높이고 백신 용량을 줄일 수 있는 신뢰할 수 있는 기술입니다.

마우스의 Intralymphatic 면역 및 예방 접종

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