Name: Xenopus의 난자 절개 바셀린 갭 전압 클램프 기술 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2014-03-11T14:55:00.000+00:00
Duration: 10 min 57 s
Description: 배우세요 Xenopus 난자에서 절개 바셀린 갭 전압 클램프 기술을 이용하여 저잡음 이온 전류 기록을 수행하는 방법을. 이 기술은 전압 의존성 이온 채널의 빠른 역학을 고해상도로 분석하는 데 필수적입니다.

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모든 세인트 루이스 심장 분자 공학 연구실에있는 워싱턴 대학의 구성원. 버로우즈는 과학 인터페이스에서 기금 경력 상을 오신 것을 환영합니다 - 1010299을 (JS에).

<ol><li>Kalstrup, T., Blunck, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dynamics+of+internal+pore+opening+in+KV+channels+probed+by+a+fluorescent+unnatural+amino+acid%5BTitle%5D)+AND+%22Proc.+Natl.+Acad.+Sci.+U.S.A%22%5BJournal%5D)">Dynamics of internal pore opening in KV channels probed by a fluorescent unnatural amino acid.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 110, 8272-8277 (2013).</li>
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</ol>

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절개 난자 바셀린 갭 전압 클램프 기술은 데이터의 신속한 해결이 가능, 낮은 노이즈, 상대적으로 긴 프로토콜 19을 통해 내부 솔루션 및 외부 용액 조성물을 제어하고, 안정된 레코딩을 증가했다. 이러한 장점 떨어져 표준 두 전극 전압 클램프 및 패치 클램프 기술에서이 기술을 설정합니다. 전문 장비가 필요하고 프로토콜이 상대적으로 어려운 있지만 시스템이 최적화되면, 아주 몇 가지 문제가 발생합니다. 이것은 나트륨 (HNA V 1.5) 및 기타 빠르게 활성화 채널의 재현 녹음 할 수 있습니다. 프로토콜에서 가장 중요한 단계는 V1 전극과 난자와 말뚝으로 찌르는 형벌에 최고 실의 배치입니다. 셀과 실 구멍의 가장자리 사이의 밀착되어 레코딩 품질에 큰 영향을 미치고 있습니다. 상부 챔버는 가장 높은 재를 달성하기 위해 셀을 푸시 다운 할 수 있어야합니다난자를 손상시키지 않고 sistance. 이것은 난자 부푼 만들기 요구하고 평평하지만, 셀 품...

특수 전압 클램핑 기술은 제어 된 막 전위에서 이온 전류의 기록을 허용한다. 널리 두 전극 전압 클램프 (TEVC)를 사용하고 패치 클램프 기술은 많은 이온 채널의 특성에 대한 신뢰성있는 전기 생리 정보를 제공한다. 그러나, 이러한 방법은 모두 빠른 전압 문 나트륨 채널과 같은 Xenopus의 난자의 세포막에있는 것과 같은 다른 빠른 활성화 채널에 대한 신뢰할 수있는 데이터의 취득을 방지 단점이 있습니다. Bezanilla과 스테파니 연구소는 따라서 난자 2의 절개 바셀린 갭 전압 클램프 기술 (COVG)를 개발했다. 기법은, 나 +, K +, 및 칼슘 2 + 채널 3-8을 기록 널리 적용되어왔다. COVG 기록하는 동안, 이종 단백질 발현 난자의 막을 세 지역으로 나누어 져 있습니다. 이온 전류 데이터로서 난자의 상부 영역으로부터 기록된다정상 영역을 둘러싸 욕을 용이하고 신속하게 변경 될 수있는 명령 전위에 클램프된다. 중간 영역의 상부 영역 (9)과 동일한 전위에 클램프 됨으로써 누설 전류에 대하여 가드. 난자 개구 (절개) 사포닌 용액 또는 정맥의 사용을 통해 발생하는 위치를 하단 영역입니다. 화학적 또는 저부 영역에서 멤브레인의 수동 개방은 접지에 클램프 내부 전위의 제어를 허용하고, 하부 챔버 용액과 인접 셀 내부를 렌더링한다. 상부 챔버의 솔루션 교환이 외부 환경을 변경하는 반면 하부 챔버에 솔루션을 살포는 내부 환경의 특성을 조정할 수 있습니다. <img alt="그림 1" fo:content-width="5in" fo:src="/files/ftp_upload/51040/51040fig1highres.jpg" src="/files/ftp_upload/51040/51040fig1.jpg" width="500px" /> 그림 1. 난자 절개 전압 클램프 욕실 설치 다이어그램. (A) 최고서로 분리 된 세 개의 화장실의 아래로보기. COVG의 챔버의 치수는 그림에 표시됩니다. (B) 테스트 위치에 화장실 설치의 측면보기. <a href="http://www.jove.com/files/ftp_upload/51040/51040fig1highres.jpg" target="_blank">더 큰 이미지를 보려면 여기를 클릭하십시오</a> . COVG 기법의 이점은 낮은 전류 노이즈 (3 kHz에서 1 NA), 외부 미디어의 이온 조성, 내부 용지, 빠른 시간 해상도 (의 붕괴 20-100 마이크로 초 시간 상수를 조절하는 능력의 제어를 포함 용량이 과도), 몇 시간 9 안정 녹음. 단점은 특수 장비를 필요로하며 두 전극 전압 클램프 (TEVC) (10)에 비해 수행하기 더 어려운 것이있다. COVG 접근 방식은 고도의 전문 장비와 복잡한 절차 적 요소가 필요하지만, 그것은 VALU의 인수를 허용 할 수 있습니다수 전기 생리학 데이터. 같은 빠른 반응 속도와 꼬리 전류 4 전류를 게이팅 등이 데이터는, 채널 런 다운 등 다른 전압 클램핑 프로토콜과 관련된 몇 가지 문제없이 녹음 할 수 있습니다. COVG 설정에 약간의 수정은 온도 조절기와 전압 클램프 형광 측정 (VCF)의 사용을 허용 할 수있다. COVG 조립체 내의 전압 클램프 형광 측정 요소의 포함은 동시에 현재 11-13을 촬영하면서 단백질 형태 적 변화를 모니터링하는 기능을 부여하여 데이터 출력을 증강 할 수있다.

<table><tbody><tr><td>외부 솔루션</td><td>브랜드</td><td>카탈로그 번호</td><td>[최종], 중량 또는 부피</td></tr><tr><td>N-메틸-D-글루카민(NMDG)</td><td>시그마-알드리치</td><td>M2004</td><td>25mM</td></tr><tr><td>MES 나트륨 염</td><td>시그마-알드리치</td><td>M5057</td><td>90mM</td></tr><tr><td>HEPES</td><td>Research Products International</td><td>H75030</td><td>20mM</td></tr><tr><td>수산화칼슘</td><td>시그마-알드리치</td><td>239232</td><td>2mM</td></tr><tr><td>MES 수화물</td><td>시그마-알드리치</td><td>M8250</td><td>가변(pH 7.4)</td></tr><tr><td>내부 용액</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>N-메틸-D-글루카민(NMDG)</td><td>시그마-알드리치</td><td>M2004</td><td>105mM</td></tr><tr><td>MES 나트륨염</td><td>시그마-알드리치</td><td>M5057</td><td>10mM</td></tr><tr><td>HEPES</td><td>연구 제품 국제</td><td>H75030</td><td>20mM</td></tr><tr><td>에틸렌 글리콜 -비스 (2- 아미노 에틸 에테르) -N, N, N', N'-테트라 아세트산 (EGTA)</td> <td>시그마 -알드리치</td><td>E4378</td><td>2mM</td></tr><tr><td>MES 수화물</td><td>시그마 -알드리치</td><td>M8250</td><td>가변 (pH 7.4)</td></tr> <tr><td>탈분극 용액</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>KCl</td><td>시그마-알드리치</td><td>221473</td><td>110mM</td></tr><tr><td>염화 마그네슘</td><td>시그마-알드리치</td><td>M8266</td><td>1.5mM</td></tr><tr><td>염화칼슘</td><td>케이슨</td><td>C021</td><td>0.8mM</td></tr><tr><td>HEPES</td><td>Research Products International</td><td>H75030</td><td>10mM</td></tr><tr><td>피펫 솔루션</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>KCl</td><td>시그마-알드리치</td><td>221473</td><td>3M</td></tr><tr><td>사포닌 솔루션</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>사포닌</td><td>시그마-알드리치</td><td>47036</td><td>0.125g</td></tr><tr><td>내부 용액</td><td>: 위</td><td></td> 참조 <td>: 50mL</td></tr><tr><td>한천 다리 용액</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>: N- 메틸 -D- 글루카민 (NMDG)</td> <td>시그마 - 알드리치</td><td>M2004</td><td>100ml 1M</td></tr><tr><td>HEPES</td><td>Research Products International</td><td>H75030</td><td>1.2g</td></tr><tr><td>MES 수화물</td><td>시그마 - 알드리치</td><td>M8250</td><td>가변 (pH 7.4)</td></tr> <tr><td>과립 한천</td><td>연구 제품 International</td><td>A20250</td><td>3%</td></tr><tr><td>NMDG 저장 솔루션</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>NMDG, HEPES, MES 수화물 용액</td><td>위</td><td></td> 참조 <td>40ml</td></tr><tr><td>물</td><td></td><td></td><td>60ml</td></tr><tr><td>재료/장비 회사 이름</td><td></td><td>카탈로그 번호</td><td>코멘트/설명</td></tr><tr><td>고성능 난모 세포 클램프</td><td>Dagan</td><td>CA-1B</td><td></td></tr><tr><td>데이터 수집 시스템</td><td>Axon CNS</td><td>&nbsp; Digidata 1440A</td><td></td></tr><tr><td>오실로스코프</td><td>Tektronix&nbsp;</td><td>TDS 210</td><td></td></tr><tr><td>랙 전원 필터</td><td>APC&nbsp;</td><td>G5</td><td></td></tr><tr><td>가열/냉각 수조 온도 컨트롤러</td><td>Dagan</td><td>HCC-100A</td><td></td></tr><tr><td>PC</td><td>Dell</td><td>Optiplex 990</td><td></td></tr><tr><td>pCLAMP 10.3 전압 클램프 소프트웨어</td><td>Molecular Devices, LLC</td><td>pCLAMP10.3</td><td></td></tr><tr><td>TMC 진동 제어 탁상용 플랫폼</td><td>TMC</td><td>64 시리즈</td><td></td></tr><tr><td>TMC 진동 제어 에어 테이블</td><td>TMC</td><td><a name="범위! C10">20 시리즈&nbsp; </A></td><td></td></tr><tr><td>V1/I 전극 데이터 수집기</td><td></td><td>Dagan CA-1B</td><td></td></tr><tr><td>MX10L Micromanipulator</td><td>Siskiyou</td><td>MX10L</td><td></td></tr><tr><td>배스/가드(I/V) 헤드스테이지(적절한 커넥터 포함)</td> <td>CA-1B</td><td></td>현미경의 <td>Dagan</td> 부분</tr><tr><td></td><td>Omano</td><td>OM2300S-JW11</td><td></td></tr><tr><td>온도 제어 배스</td><td>사용자 정의 또는 Dagan</td><td>사용자 정의 또는 HE-204C</td><td>Cool Polymers (D 시리즈)의 재료로 만든 맞춤형 챔버. Dagan은 또한 사전 사용 가능한 스테이지(HE-204C)를 제공합니다.</td></tr><tr><td>사용자 정의 AgCl 펠렛 용기</td><td>사용자</td><td>정의</td><td>사용자 정의 가공</td></tr><tr><td>Ag / AgCl 전극, 펠렛, 2.0 mm</td><td>Warner</td><td>E-206</td><td></td></tr><tr><td>외부 난모 세포 목욕</td><td>사용자 정의 또는 Dagan</td><td>사용자 정의 또는 CC-1-T-LB</td><td>사용자 정의 기계 가공 또는 Dagan</td></tr><tr><td>내부 난모 세포 목욕</td><td>사용자 정의 또는</td><td>Dagan 사용자 정의 또는 CC-TG-ND</td><td>사용자 정의 기계 가공 또는 Dagan</td></tr><tr><td>에서 구매한천 다리 및 당겨진 전극 용 모세 혈관</td><td>Warner</td><td>G150T-4</td><td></td></tr><tr><td>현미경, 미세 조작기 및 욕조 용 회전 가능한 마운트</td><td>Siskiyou</td><td>SD-1280P</td><td></td></tr><tr><td>Fiber-Lite</td><td>Dolan-Jenner</td><td>LMI-600</td><td></td></tr><tr><td>Regular</td><td>Bleach Clorox</td><td>470174-764</td><td></td></tr><tr><td>Xenopus laevis Oocytes</td><td>Nasco</td><td>LM535M (성적으로 성숙한 여성)</td><td></td></tr><tr><td>90 Na+ 외부 솔루션</td><td>솔루션 시트</td><td></td><td></td></tr><tr><td>참조 10 Na+ 내부 솔루션</td><td>솔루션 시트</td><td></td><td></td></tr><tr><td>참조 3 M KCL</td><td>솔루션</td><td></td><td></td>시트</tr><tr><td>보기 Saponin</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>47036</td><td></td></tr><tr><td>NMDG 스토리지 솔루션</td><td>솔루션 시트</td><td></td><td></td></tr> <tr><td>보기5mL 전사 피펫</td><td>SciMart</td><td>GS-52</td><td></td></tr><tr><td>Modified KCl 전극 인젝터</td><td>BD</td><td>309659</td><td>플라스틱 주사기 팁이 용융되어 전극에 용액을 주입할 수 있습니다. 또는 WPI의 Microfil을 구입할 수 있습니다.</td></tr><tr><td>Microvaccum</td><td>맞춤형</td><td>펜</td><td></td></tr><tr><td>치</td><td>VWR</td><td>63040-458</td><td></td></tr><tr><td>난자 처리 도구 (피펫 펌프)</td><td>VWR</td><td>53502-222</td><td></td></tr><tr><td>탈이온수 분출 병</td><td>VWR</td><td>16649-911</td><td></td></tr><tr><td>바셀린 석유 젤리</td><td>Fisher Scientific</td><td>19-086-291&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>VCF 기록에 필요한 추가 재료:</td><td></td><td></td><td></td></tr> <tr><td>VCF 현미경</td>, <td>Nikon</td><td>Eclipse, FN1</td><td></td></tr>, <tr><td>Nikon CFI, APO 40XW, NIR 대물</td>렌즈, <td>Nikon</td><td>N40X-NIR</td><td></td></tr><tr><td>X-Y 고정 스테이지 정립 현미경용 변환기 시스템,</td><td>Sutter Instruments</td>, <td>MT500-586</td><td></td></tr>, <tr><td>외부 VCF 난자 수조</td><td>사용자 정의</td><td></td><td>맞춤 가공. 챔버 크기는 2.7 x 1.9 x 0.4cm입니다.</td></tr><tr><td>내부 VCF 난모세포 목욕</td><td>맞춤형</td><td></td><td>가공. 챔버 치수는 1.6 x 1.6 x 0.4cm입니다.</td></tr><tr><td>Modified Temperature Control Bath Custom</td><td></td><td></td><td>Cushion은 Cool Polymers (D 시리즈)의 재료로 제작되었습니다. 수정된 온도 조절기 수조의 챔버 치수는 수평 챔버의 경우 2.7 x 1.9 x 0.3cm이고 수직 챔버의 경우 1 x 2.5 x 0.5cm입니다.</td></tr></tbody></table>

<em&gt; xenopus의</em형광 측정으로&gt; 난자 절개 바셀린 갭 전압 클램프 기술

The Xenopus Oocyte Cut-open Vaseline Gap Voltage-clamp Technique With Fluorometry

절개 난자 바셀린 갭 (COVG) 전압 클램프 기술은 난자의 이종 이온 채널의 전기 생리학과 운동 특성을 분석 할 수 있습니다. 절개 설정에서 녹음 낮은 크기의 게이트 전류, 빠른 이온 전류의 활성화 및 비활성화를 해결하는 데 특히 유용합니다. 두 전극 전압 클램프 (TEVC) 기법을 통해 주요 장점은 증가 된 클램프 속도, 개선 된 신호대 잡음비, 및 세포 내 및 세포 외 환경을 조절하는 능력을 포함한다. 여기서는 절개 설정 및 프로토콜뿐만 아니라 전압 클램프 형광 측정 기능을 추가하는 데 필요한 변형을 설명하기 위해, (HNA V 1.5), 아프리카 손톱 개구리의 난모 세포에서 발현 인간 심장 나트륨 채널을 이용한다. 이러한 HNA V 1.5 빨리 활성화 이온 채널의 특성은 완전히 whic에서 TEVC를 사용하여 상온 근처에 해결 될 수없는난자의 세포막의 시간 전체가 전압 제어가 어려워 고정된다. 그러나 절개 기술에서 세포막의 단지 작은 부분의 절연은 패치 클램프 기술과 연관된 채널 황폐 방지하면서 정확하게 빠른 반응 속도를 기록 할 필요 급속한 클램핑을 허용한다. COVG 기술, 이온 채널 속도론 및 전기 생리 특성과 함께 추가로 단백질 움직임이 세포 외로 적용 형광체, 유전자에 의해 코딩 형광 단백질의 삽입 또는 부자연 아미노산의 혼입 시스테인 공액 통해 추적되는 전압 클램프 형광 측정을 사용하여 정량 할 수있다 관심 1의 영역으로. 이러한 추가적인 데이터는 형광 분자를 둘러싸는 미세 변화를 통한 단백질의 전압 의존성 구조적 재 배열 대해 운동 정보를 산출한다.

도 4는 디스플레이 사포닌 용액으로서 난자의 투과성의 변화는 난자의 ​​바닥 부에인가된다. 5 사포닌 permeabilization 다음 확산에 의해 세포 내 용액의 교환 율을 보여 도표. 20 ~ 40 분은 정상 상태 2,18에 와서해야합니다. 기록 프로토콜에서 생성 된 그림 6A 쇼 흔적. 그림은 전압 프로토콜 (삽입)에 대한 응답 (P/-8 누출 공제 후) 이온 전류를 보여줍니다. 그림의 각 트레이스는 다른인가 전압을 나타냅니다. 느린 반응 속도와 흔적은 나트륨 채널을 열 수있는 가장 낮은 전위를 나타낸다. 일반적으로, 기존의 방법을 사용하여, 그것을 안쪽 전류 막 탈분극 때문에 이러한 낮은 전위에 대한 전압 제어를 유지하는 것이 곤란하다. 차례로이 탈분극은 긍정적 인 피드백 루프를 만들어 더 많은 채널을 활성화<html> . 절개...

절개 바셀린 갭 접근 방식은 빠른 채널 반응 속도의 높은 해상도와 Xenopus의 난자에서 발현 전압 - 의존성 이온 채널에서 이온 및 게이팅 전류의 낮은 잡음 녹음을 얻는 데 사용됩니다. 사소한 변형에, 전압 클램프 형광 측정은 절개 난자 프로토콜에 연결될 수있다.

<em&gt; Xenopus의</em형광 측정으로&gt; 난자 절개 바셀린 갭 전압 클램프 기술

The cut-open oocyte Vaseline gap (COVG) voltage clamp technique allows for analysis of electrophysiological and kinetic properties of heterologous ion ...

이 절차의 전반적인 목적은 zap cytes에 발현된 전압 작동 이온 통로로부터 이온 및 게이팅 전류의 저잡음 기록을 획득하여, 빠른 채널 키네틱스의 높은 시간 분해능을 확보하는 것입니다. 이는 먼저 기록된 이온 통로 mRNA를 개구리 난모세포에 주입함으로써 달성됩니다. 두 번째 단계는 모세관 튜브를 성형하고 염을 함유한 아가 용액으로 튜브를 채워 아가 브릿지를 제작하는 것입니다.다음으로, UO 부위와 아가르 브리지를 포함한 모든 구성 요소를 지정된 위치에 배치하여 절개된 장치를 실험 준비 상태로 만듭니다. 마지막 단계로, 전압 고정 기록이 가능하도록 마이크로 전극을 UO 부위에 삽입합니다. 최종적으로, 기록 프로토콜을 통해 난자 막에 위치한 이온 채널로부터의 이온 전류를 보여줍니다.cut open voltage clamp 기술의 주요 장점은 매우 많은 수의 이온 채널에 대해 노이즈가 적고 안정적인 기록이 가능하다는 것입니다. 또한 채널 역학(kinetics)을 신속하게 분석할 수 있습니다. O site, 상단 챔버 및 아가 브리지(agar bridge)의 배치와 같은 일부 단계는 학습하기 어렵기 때문에, 이 방법의 시각적 시연이 매우 중요합니다.이 절차에서는 붕규산염 모세관 튜브의 한쪽 끝을 중간 정도의 불꽃으로 가열하여 최소 6개의 한천 브리지를 만듭니다. 이때 각 모세관 튜브의 끝부분이 푸른 불꽃의 상단부에 위치하도록 하십시오.모세관이 가열되면 핀셋을 사용하여 90도 각도로 구부립니다. 구부리는 지점은 급격한 모서리가 아닌 매끄러운 곡선을 이루어야 하며, 그렇지 않으면 유리의 내경이 크게 줄어들어 충전이 어려워지고 브리지의 저항이 증가할 수 있습니다. 이어서, 구부리지 않은 끝단에서 약 25 millimeters 떨어진 지점의 모세관을 가열합니다.첫 번째 굽힘과 같은 방향으로 이 위치에서 두 번째 90도 굽힘을 만듭니다. 모세관이 식은 후, 다이아몬드 팁 유리 절단기를 사용하여 브리지의 다리 부분을 약 5mm 길이로 다듬습니다. 다음으로, 세 개의 전류 공급 브리지 모세관에 백금선을 삽입합니다.튜브 외부로 노출된 백금선이 없도록 여분의 백금선을 잘라냅니다. 끝이 뾰족한 도구를 사용하여 백금선을 모세관 안으로 더 밀어 넣어, 모세관 양쪽 끝의 유리보다 백금선이 1 mm 더 짧게 위치하도록 합니다. 그런 다음, 다리 부분이 위를 향하게 하여 미리 준비된 한천 용액에 모세관 브리지를 하나씩 추가합니다.브리지에

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Research

연구

JoVE Journal

Biology

생물학

이것은 Xenopus laevis oocytes에서 클​​램프의 녹음 패치에 대한 소개로서 것입니다. 그것은 vitelline 막 제거, gigaohm 인감 (gigaseal)의 형성, 그리고 외부 아웃 토폴로지에 패치의 선택 변환을 다룹니다.

Xenopus Oocytes의 표현 이온 채널 패치 클램프 녹음

BK 채널 이온 전류는 패치 클램프 기법을 사용하여 기록됩니다. BK 채널로...

이온 채널 유학을위한 패치 클램프 및 재관류 기법으로 표현 Xenopus oocytes

우리는 하나의 세포에서 형광을 사용하여 conformational 변화의 특정 사이트 분석과 함께 막 단백질의 이온 전달의 속도론을 측정하는 방법을 설명합니다. 이 기술은 이온 채널 전송기 및 이온 펌프에 적응하고 단백질 subunits 사이의 거리 제한을 결정하기 위해 이용하실 수 있습니다.

막 단백질의 Conformational 역학 검사 현장에서 사이트 이동 형광 라벨링과

우리는 Xenopus 난모세포에서 효소의 이종 발현을 통해 K+-역수송 P형 ATPase의 활성을 정량화하고 원자 흡수 분광 광도법으로 개별 세포로의 Rb+ 또는 Li+ 흡수를 측정하는 방법을 설명합니다. 이 방법은 방사성 동위원소 플럭스 실험에 대한 민감하고 안전한 대안으로 복잡한 동역학 연구를 용이하게 합니다.

오세영, K와 H, K-ATPase에 의해 양이온 교통 측정<em&gt; Xenopus</em원자 흡수 분광 광도법에 의한&gt; Oocytes : 방사성 동위 원소의 Assays에 대한 대안

TRPV4의 연구에 일반적으로 사용되는 방법을 보완하기 위해 두 가지 방법이 설명되어 있습니다 : 그것의 mechanosensitivity는 저자 삼투 도전에 따라 형질 전환 효모에서 칼슘 2 + - 애큐 오린 luminometry으로 공부하실 수 있습니다. 그것은 또한 TRPV4-RNA에서 조사 할 수있는 온 - 셀 또는 절제 모드 클램프 전체 셀 두 전극 전압 클램프 또는 패치로 Xenopus의 난자를 주입했다.

효모 Luminometric 및 Xenopus의 난자 전기 생리 시험

유전적으로 암호화된 전압 지표를 사용하여 막 전위의 변화를 이미징하는 방법에 대해 설명합니다.

유전자 인코딩 된 형광 전압 센서의 두 가지 유형의 잠재적 이미징 막

단일 여포의 분리, 세포질 RNA 미세 주입, 주변 세포층 제거 및 Xenopus 난모세포의 단백질 발현을 위한 최적화된 절차에 대해 설명합니다. 또한 리간드 게이트 이온 채널을 사용한 전기생리학적 실험에서 빠른 용액 변화를 위한 간단한 방법이 제시됩니다.

Xenopus의 난 모세포 : 미세 주입을위한 최적화 방법, 여포 세포 레이어의 제거 및 전기 생리 실험에서 빠른 해결 방법 변경

이 기사에서는 이온 채널에서 구조적 재배치를 조사하기 위해 말레이 미드 염료 대신 형광 비정상적인 아미노산 (fUAA)이 사용되는 기존의 VCF (Voltage-Clamp Fluorometry)의 향상에 대해 설명합니다. 이 절차에는 Xenopus oocyte DNA 주입, RNA / fUAA 동시 주입, 동시 전류 및 형광 측정이 포함됩니다.

전압 클램프 형광 측정법<em&gt; Xenopus</em&gt; 형광성 비 자연 아미노산을 이용한 난 모세포

Drosophila melanogaster photoreceptor의 전체 세포 기록은 다양한 조건 에서 자연스런 어두운 범프, 양자 범프, 빛에 대한 거시적 반응 및 전류 - 전압 관계를 측정 할 수있게합니다. D. melanogaster 유전자 조작 도구와 결합하여이 방법은 유비쿼터스 이노시톨 - 지질 신호 전달 경로와 그 표적 인 TRP 채널에 대한 연구를 가능하게합니다.

전 세포 전압 클램프 기록을위한 전기 생리 학적 방법<em&gt; Drosophila</em&gt; 광 수용체

우리는 Xenopus laevis 알에서 희석되지 않은 세포질 추출물의 제조 및 라이브 이미징 방법을 설명합니다.

제노푸스 라에비스 동적 세포질 조직을 시각화하기 위한 계란 추출물 준비 및 라이브 이미징 방법

여기서 우리는 Xenopus 난모세포에서 갭 접합 단백질을 발현하고 하이 사이드 전류 측정 모드에서 이중 난모세포 전압 클램프 기록을 위해 설계된 상용 증폭기를 사용하여 두 개의 apposed 난모세포 사이의 접합 전류를 기록하는 프로토콜을 제시합니다.

제노푸스 난모세포로부터의 갭 접합 전류 기록

배우세요 Xenopus 난자에서 절개 바셀린 갭 전압 클램프 기술을 이용하여 저잡음 이온 전류 기록을 수행하는 방법을. 이 기술은 전압 의존성 이온 채널의 빠른 역학을 고해상도로 분석하는 데 필수적입니다.

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