Question 1

RNA 간섭은 C. elegans에서 유전자를 침묵시키기 위해 어떻게 작용하는가?

Accepted Answer

이중 가닥 RNA는 섭취 후 C. elegans 세포에 들어갑니다. Dicer 효소는 dsRNA를 21-23 뉴클레오티드 길이의 짧은 간섭 RNA(siRNA)로 분할합니다. siRNA는 RNA 유도 침묵 복합체(RISC)와 결합하여 상보적 염기 쌍을 통해 표적 mRNA에 결합하여 mRNA 분해와 유전자 노크다운으로 이어집니다.

Question 2

RNAi 실험을 위한 박테리아 준비의 첫 번째 단계는 무엇입니까?

Accepted Answer

표적 dsRNA를 인코딩하는 플라스미드를 RNA 폴리머라제 III이 결핍된 상태이고 IPTG-유도형 T7 DNA 폴리머라제 유전자를 포함하는 HT115(DE3) E. coli 균주로 변형하십시오. 또한 대조군으로 빈 플라스미드를 포함하는 박테리아도 변형하십시오. 변형된 박테리아를 테트라사이클린과 카르베니실린이 함유된 LB 아가 플레이트에 퍼뜨린 후 37°C에서 밤새 배양하십시오.

Question 3

RNAi 처리 전에 선충 동기화가 왜 중요한가요?

Accepted Answer

발달 단계를 동기화하면 관찰된 표현형의 차이가 발달 변이가 아닌 유전자 억제로 인한 것임을 확인할 수 있습니다. L4 선충을 20°C에서 RNAi 플레이트에 밤새 두어 어린 성체가 되게 한 다음 새로운 플레이트로 옮겨 6-8시간 동안 알을 낳게 합니다. 이렇게 하면 분석을 위한 발달적으로 동기화된 자손을 생산할 수 있습니다.

Question 4

연구자들은 어떻게 RNAi를 사용하여 역학적 유전자 스크리닝을 수행합니까?

Accepted Answer

역학적 유전자 검색은 라이브러리에서 알려진 유전자를 검출하고 표현형 결과를 평가하여 유전자 기능을 발견합니다. 연구자들은 다공판에 C. elegans의 많은 유전자에 대한 dsRNA를 발현하는 박테리아를 배양하고 이를 선충에게 먹입니다. 표현형 효과는 정상적인 생체 내 유전자 기능을 밝히고 수천 개의 유전자에 대한 고처리량 분석을 위해 자동화할 수 있습니다.

Question 5

박테리아 배양 준비 단계에서는 어떤 일이 발생합니까?

Accepted Answer

단일 박테리아 콜로니를 선택하고 100 μg/ml 암피실린이 함유된 1 ml LB 브로스에 첨가합니다. 37°C에서 교반하여 하룻밤 동안 배양합니다. 그런 다음 암피실린이 함유된 신선한 LB 브로스 5 ml를 첨가하고 37°C에서 4-6시간 동안 배양합니다. 이 배양물은 RNAi 웜 플레이트에 첨가되어 박테리아 잔디를 만들기 위해 37°C에서 하룻밤 동안 배양됩니다.

Question 6

RNAi-처리된 선충을 분석할 때 어떤 표현형을 관찰할 수 있습니까?

Accepted Answer

RNAi 노크다운 선충을 대조군과 비교하고 크기, 발달 단계, 형태, 형광 표지 단백질의 국소화 패턴의 차이를 기록합니다. 과학자들은 또한 유전자가 노크다운될 때 발달을 지연시키는 유전자 또는 기관 개발 및 및 다른 생물학적 과정에 관련된 유전자와 같은 발달 타이밍 효과를 평가할 수 있습니다.

Question 7

C. elegans를 관찰하기 위해 현미경 슬라이드는 어떻게 준비됩니까?

Accepted Answer

라벨링 테이프로 두 개의 유리 슬라이드를 스페이서로 붙입니다. 그 사이에 깨끗한 슬라이드를 놓고 4% 용융 아가르 150 μl를 그 위에 파이펫으로 떨어뜨립니다. 수직인 슬라이드로 덮은 다음 부드럽게 분리합니다. 아가르 패드에 10 μl의 아지드 나트륨 마취제를 추가하고, 백금선 픽을 사용하여 벌레를 이동시키고, 슬라이드를 추가하고, 현미경으로 관찰합니다.

예쁜 꼬마 선충에 RNAi의 적용 - 평가 퀴즈