Name: 의 애벌레 먹이 회로의 기능적 분석 초파리 /i (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2013-11-19T16:45:00.000+00:00
Duration: 9 min 23 s
Description: 배우세요 Drosophila melanogaster 애벌레의 먹이 행동과 신경 회로의 관계를 행동 분석 및 면역형광 현미경으로 연구하는 방법입니다. 이 기술은 신경 발달과 행동 변화의 상관관계를 밝히는 데 활용됩니다.

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저자는 WSN에 수여 세인트 루이스 대학에서 대통령의 연구 기금을 인정하고 싶습니다

1. 인구 케이지의 유지 보수 <ol><li> 12 시간의 명암주기에 25 ° C에서 인구의 새장을 유지한다. 한 컨트롤과 실험군은 동일 조명 조건에 노출 될 때,이 기술은 표준 실험실 설정에서 수행 될 수있다. </li><li> 여성은 사과 주스 한천 플레이트에서 하룻밤 알을 낳을 수 있도록 허용합니다. </li><li> 24 시간 동안 25 ° C에서 새로 입금 계란 판을 유지하여 부화 된 유생을 수집합니다. 부화 유충을 유치하기 위해 판의 중심에 효모의 작은 덩어​​리를 놓습니다. </li><li> 사과 주스 플레이트의 중앙에 효모 붙여 넣기로 마이그레이션 한 1 차 령 애벌레를 수집합니다. 신선한 사과 주스 플레이트를 전송하는 금속 주걱을 사용합니다. 그 밖의 효모 페이스트 분석법이 수행 될 때까지 적절한 식품가되도록 첨가 할 수있다. 포도 주스 플레이트는 사과 주스 플레이트 대신에 사용될 수있다. </li><li> 후반 2 차 - 초 3 차 령 리터를 얻1 일이 40 ~ 48 시간 동안 나이 령충 수 있도록하여 arvae. 이 범위 내에서 공급 비율은 13 일정하다. 각 유충의 탈피와이 구조에 뚜렷한 변화가 있기 때문에 나이가 입 후크의 시험에 의해 확인 될 수있다. </li><li> 늦은 2 차 - 초 3 차 령 유충은 부드럽게 광범위하게 물에 사과 주스 플레이트의 세척 및 메쉬 필터에 애벌레를 수집하여 행동 분석을 위해 수집됩니다. 유충은 다음 한천 플레이트에 전송됩니다. </li><li> 모든 분석은 제어 및 실험 동물을 사용하여 병렬로 수행됩니다. </li></ol> 2. 행동 패러다임 - 로코 모션 <ol><li> 100mm 조직 배양 접시에 2 % 한천 기판 상에 하나의 3 차 령 유충을 배치하고 유충은 30 초에 적응 할 수 있습니다. 애벌레는 한천 기판의 표면을 가로 질러 자신의 몸을 추진하기 위해 cephalopharyngeal 경피 (입 후크)를 사용합니다. 이것은 별도의 접시에 이루어 때문에t는 동물이 거의 효모과 같은 색으로 효모 용액 보디 수축을 시각화하기 더 어렵다. </li><li> 1 분 동안 기판 상에 전방의 움직임에 각 후방을 관찰하고 기록한다. N = 각 유전자형 20. 더 이상 10 이상의 동물은 접시 당 정량되어야한다. </li></ol> 3. 행동 패러다임 - 수유 <ol><li> 무딘 INOX # 5 핀셋으로 조심스럽게 2 % 활성화 빵 효모 액 5 ㎖로 겹쳐 한천 충전 판의 중앙에 전위 한천 플레이트에서 3 차 령 유충을 전송합니다. 효모는 시간이 지남에 따라 해결되므로이 솔루션은 동질 있는지 확인합니다. 때 효모 솔루션, 유충은 주로 행동의 관찰을 용이하게, 장소 및 사료에 남아있을 것입니다. 입 걸이 수축 속도는 직접적으로 23 섭취 음식의 양의 상관 관계. </li><li> 유충은 30 초 동안 적응 할 수 있습니다. </li><li> 관찰의 수를 기록1 분 동안 입을 걸이 수축. N = 각 유전자형 20. </li></ol> 4. 애벌레 인내심 해부 <ol><li> 3 잘 자리 유리 1X 인산염 완충 생리 식염수 (PBS) 및 장소에서 4 % EM-등급 포름 알데히드 고정 솔루션을합니다. </li><li> 조심스럽게, 1X PBS 용액을 이용하여 3 - 웰 유리 접시에 늦게 3 차 령 유충의 내장을 방황 proventriculus가 그대로 유지되어 있는지마다 만드는 해부. 하나 forcep으로, 후방 끝을 잡고 다른 손으로, 입 후크를 개최합니다. 후방 끝 움직를 누른 상태에서 조심스럽게 용기에 액세스 할 입 후크를 잡아. 연관된 조직 (침샘, 뇌, 지방 시체 등)을 제거한 다음, 포름 알데히드 수정이 포함 된 3 - 잘 접시에 각각의 창자를 전송합니다. 3 차 령 유충을 방황으로 인해 개발이 단계에서, 유충이 pupariation에 대비 공급 중단 사용되며, proventriculus은 효모 삭제됩니다. </li> &lt;리&gt; 불투명 한 조직 배양 상자에 4 ° C에서 하룻밤 용기를 품어. </li><li> 우물에서 포름 알데히드 고정 솔루션을 제거하기 전에 위의 caeca를 제거하고 돌기가 명확 장애물없이 볼 수 있도록 proventriculus에서 ~ 150 μm의 2 중장 클립. </li><li> 우물에서 포름 알데히드 수정 프로그램을 제거하고 1X PBT (1X PBS, 0.1 %의 단백질 분해 효소가없는 소 혈청 알부민, 0.1 % 트리톤 X-100) 완충 용액으로 교체합니다. 철저하게 1X PBT에서 10 분 동안 용기에게 배의 세척. 세척하는 동안 기계적인 회전에서 조직 샘플을 놓습니다. </li><li> 10 -6 M 세로토닌 신호를 강화하는 5-HT 1 시간 동안 4 ° C에서 알을 품다. 철저하게 1X PBT에서 10 분 동안 용기에게 배의 세척. 이전 연구는 외인성 5-HT의 농도가이 면역 조직 화학 분석에서 신경원 아키텍처 또는 정맥류 밀도에 영향을 미치지 않는다는 것을 증명하고 단순히 잡음비 15-16에 신호를 강화 하였다. </li><li> 4 품어 &amp;# 176; C 하룻밤 항 세로토닌 차 항체 (마우스 또는 토끼에서 제기 클론에서 제기 된 단일 클론)에서. 철저하게 1X PBT에서 10 분 동안 용기에게 배의 세척. 세척하는 동안 기계적인 회전에서 조직 샘플을 놓습니다. </li><li> (; 1:400 희석 알렉사 플 루어 568 염소 항 - 마우스 또는 항 - 토끼 IgG를) 이차 항체에 90 분 동안 4 ° C에서 알을 품다. 철저하게 1X PBT에서 10 분 동안 용기에게 배의 세척. 세척하는 동안 기계적인 회전에서 조직 샘플을 놓습니다. </li><li> 기계적 회에 10 분 동안 4 mM의 탄산나트륨에서 부화 한 후 n-프로필 gallate/20 MM의 탄산나트륨 4 %에서 마운트 형광에서 볼 수 있습니다. 탄산나트륨의 mountant 매체에 사용되는 버퍼와 pH로 샘플을 변환하는 데 사용된다. </li><li> 분석을위한 400 배의 배율로 면역 염색 조직 샘플의 이미지를 캡처합니다. </li></ol> 5. 신경 회로의 분석 <ol><li> 신경 돌기 섬유 (정량화 된 숫자와 정맥류의 크기및 분) Neuroleucida 및 Neuroexplorer를 사용하여. 그러나, 이는 수동으로 수행하거나 단순 신경 돌기 트레이서 (온라인으로 다운로드 할 수없는 애플리케이션)을 사용 할 수있다. </li><li> proventriculus에 뇌에서 개별 섬유의 전망을 추적하고 정맥류 번호, 지점 및 단위 길이 당 큰 정맥류의 수를 정량화. 뇌로부터 돌출 축삭 섬유는 recurrens 신경에 번들 그들은 그들이 분리 proventriculus 및 총생에 도달 할 때까지 분석을 위해 액세스 할 수 없습니다 있습니다. </li></ol>

<ol><li>Weiss, E., Maness, P., Lauder, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Why+do+neurotransmitters+act+like+growth+factors%3F%5BTitle%5D)+AND+%22Perspect+Dev+Neurobiol%22%5BJournal%5D)">Why do neurotransmitters act like growth factors?</a> Perspect Dev Neurobiol. 5, 323-335 Forthcoming.</li>
<li>Herlenius, E., Lagercrantz, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neurotransmitters+and+neuromodulators+during+early+human+development%5BTitle%5D)+AND+%22Early+Hum.+Dev%22%5BJournal%5D)">Neurotransmitters and neuromodulators during early human development.</a> Early Hum. Dev. 65, 21-37 Forthcoming.</li>
<li>Budnik, V., Wu, C., White, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Altered+branching+of+serotonin-containing+neurons+in+Drosophila+mutants+unable+to+synthesize+serotonin+and+dopamine%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Altered branching of serotonin-containing neurons in Drosophila mutants unable to synthesize serotonin and dopamine.</a> J. Neurosci. 9, 2866-2877 (1989).</li>
<li>Sodhi, M., Sanders-Bush, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Serotonin+and+brain+development%5BTitle%5D)+AND+%22International+Review+of+Neurobiol%22%5BJournal%5D)">Serotonin and brain development.</a> International Review of Neurobiol. 59, 111-174 (2004).</li>
<li>Goldberg, J., Kater, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Expression+and+function+of+the+neurotransmitter+serotonin+during+development+of+the+Helisoma+nervous+system%5BTitle%5D)+AND+%22Dev.+Biol%22%5BJournal%5D)">Expression and function of the neurotransmitter serotonin during development of the Helisoma nervous system.</a> Dev. Biol. 131, 483-495 (1989).</li>
<li>Goldberg, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Serotonin+regulation+of+neurite+outgrowth+in+identified+neurons+from+mature+and+embryonic+Helisoma+triyolvis%5BTitle%5D)+AND+%22Perspect+Dev+Neurobiol%22%5BJournal%5D)">Serotonin regulation of neurite outgrowth in identified neurons from mature and embryonic Helisoma triyolvis.</a> Perspect Dev Neurobiol. 5, 373-387 (1998).</li>
<li>Haydon, P., McCobb, P., Kater, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Serotonin+selectively+inhibits+growth+cone+motility+and+synaptogenesis+of+specific+identified+neurons%5BTitle%5D)+AND+%22Sci%22%5BJournal%5D)">Serotonin selectively inhibits growth cone motility and synaptogenesis of specific identified neurons.</a> Sci. 226, 561-564 (1984).</li>
<li>Neckameyer, W. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+trophic+role+for+serotonin+in+the+development+of+a+simple+feeding+circuit%5BTitle%5D)+AND+%22Dev.+Neurosci%22%5BJournal%5D)">A trophic role for serotonin in the development of a simple feeding circuit.</a> Dev. Neurosci. 32, 217-237 Forthcoming.</li>
<li>De Vry, J., Schreiber, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+selected+serotonin+5-HT+1+and+5-HT+2+receptor+agonists+on+feeding+behavior%3A+possible+mechanisms+of+action%5BTitle%5D)+AND+%22Neurosci.+Biobehav.+Rev%22%5BJournal%5D)">Effects of selected serotonin 5-HT 1 and 5-HT 2 receptor agonists on feeding behavior: possible mechanisms of action.</a> Neurosci. Biobehav. Rev. 24, 341-353 (2000).</li>
<li>Schoofs, A., Niederegger, S., van Ooyen, A., Heinzel, H., Spieß, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+brain+can+eat%3A+Establishing+the+existence+of+a+central+pattern+generator+for+feeding+in+third+instar+larvae+of+Drosophila+virilis+and+Drosophila+melanogaster%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Insect+Physiol%22%5BJournal%5D)">The brain can eat: Establishing the existence of a central pattern generator for feeding in third instar larvae of Drosophila virilis and Drosophila melanogaster.</a> J. Insect Physiol. 56, 695-705 (2010).</li>
<li>Spieß, R., Schoofs, A., Heinzel, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Anatomy+of+the+stomatogastric+nervous+system+associated+with+the+foregut+in+Drosophila+melanogaster+and+Calliphora+vicin+third+instar+larvae%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Morphol%22%5BJournal%5D)">Anatomy of the stomatogastric nervous system associated with the foregut in Drosophila melanogaster and Calliphora vicin third instar larvae.</a> J. Morphol. 269, 272-282 (2008).</li>
<li>Neckameyer, W. S., Bhatt, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neurotrophic+actions+of+dopamine+on+the+development+of+a+serotonergic+feeding+circuit+in+Drosophila+melanogaster%5BTitle%5D)+AND+%22Biomed+Cent+NeuroSci%22%5BJournal%5D)">Neurotrophic actions of dopamine on the development of a serotonergic feeding circuit in Drosophila melanogaster.</a> Biomed Cent NeuroSci. 13, 26(2012).</li>
<li>Sewall, D., Burnet, B., Connolly, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genetic+analysis+of+larval+feeding+behavior+in+Drosophila+melanogaste%5BTitle%5D)+AND+%22Genet.+Res%22%5BJournal%5D)">Genetic analysis of larval feeding behavior in Drosophila melanogaste.</a> Genet. Res. 24, 163-173 (1975).</li>
<li>Joshi, A., Mueller, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evolution+of+higher+feeding+rate+in+Drosophila+due+to+density-dependent+natural+selection%5BTitle%5D)+AND+%22Evolution%22%5BJournal%5D)">Evolution of higher feeding rate in Drosophila due to density-dependent natural selection.</a> Evolution. 42, 1090-1093 (1988).</li>
<li>Budnik, V., Wu, C., White, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Altered+branching+of+serotonin-containing+neurons+in+Drosophila+mutants+unable+to+synthesize+serotonin+and+dopamine%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Altered branching of serotonin-containing neurons in Drosophila mutants unable to synthesize serotonin and dopamine.</a> J. Neurosci. 9, 2866-2877 (1989).</li>
<li>Sykes, P., Condron, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+and+sensitivity+to+serotonin+of+Drosophila+varicosities+in+the+central+nervous+system%5BTitle%5D)+AND+%22Dev.+Biol%22%5BJournal%5D)">Development and sensitivity to serotonin of Drosophila varicosities in the central nervous system.</a> Dev. Biol. 286, 207-216 (2005).</li>
<li>Garrity, P. A., Goodman, M. B., Samuel, A. D., Sengupta, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Running+hot+and+cold%3A+behavioral+strategies%2C+neural+circuits%2C+and+the+molecular+machinery+for+thermotaxis+inC.+elegansand+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Genes+Dev%22%5BJournal%5D)">Running hot and cold: behavioral strategies, neural circuits, and the molecular machinery for thermotaxis inC. elegansand Drosophila.</a> Genes Dev. 24, 2365-2382 (2010).</li>
<li>McKemy, D. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Temperature+sensing+across+species%5BTitle%5D)+AND+%22Pflugers+Archives%22%5BJournal%5D)">Temperature sensing across species.</a> Pflugers Archives. 454, 777-791 (2007).</li>
</ol>

우리는 공개 아무것도 없어.

후반 배아 중 발생하는 세로토닌 stomatogastric 회로의 탈선 개발, 자사의 성숙한 기능에 영향을 미칠 것입니다. 신경 돌기 구조의 변화는 용기가 (효모 용액에 입 후크의 수축에 의해 측정) 비율을 공급하는 회로의 기능 출력 (그림 1)과 상관 관계가 될 수있다 지배하는. 초파리 UAS-인 Gal4 양자 시스템을 사용함으로써, 특히 특정 조직에 관련 증명서의 상향 또는 하향 조절 식을 대상으로 할 수있다; 관련 단백질의 발현의 변화를 정확하게 적절한 도구 관련 정량화 될 수있다. 이 기술은 뇌 영역, 및 특정 신경 회로의 개발에 필요한에도 신경 서브셋을 명료하게 할 수있다. 전위의 분석은 애벌레는 달리 생리적으로 손상되지 않음을 확인하는 데 사용됩니다, 따라서 40 체벽의 수축 이하 소와 유충자민련은 분석 (그림 2A)에서 제외 될 수있다. 유전자형이 실제 이상 원인이되기 때문에, 또는 개별...

초파리는 급속한 생성 시간, 저렴한 실험 비용 및 유전 적 및 환경 적 요인을 조작하고 제어하는 능력을 신경 회로의 개발을위한 연구 매우 강력한 모델 시스템이다. 신경, 신경 경로 찾기 및 시냅스는 인간과 초파리 사이에 보존되어 있으므로, 작성 유지하고 신경 회로를 수정의 메커니즘뿐만 아니라 보존됩니다. 세로토닌 (5 - 하이드 록시 트립 타민, 5-HT)와 같은 고전적인 신경 전달 물질, 성숙한 신경 회로 1-3 신호 분자로 자신의 역할을 채택하기 전에 성장 인자 역할을 할 수 있습니다 이전 연구는 성숙한 신경 세포 (4)의 연결을 변경 배아 동안 5-HT의 수준을 교란하는 것으로 나타났습니다. 기타 교양 Helisoma 신경 세포에 5-HT의 자궁외 응용 프로그램이 신경 돌기 가지뿐만 아니라 시냅스 5-7을 억제하는 것으로 나타났습니다. D에rosophila는 발달 5-HT 수준은 반비례 CNS (8)로부터 foregut에 돌출 신경 돌기의 길이를 따라 정맥류의 수와 크기뿐만 아니라 aborization의 정도와 관련된다. 세로토닌 신경 전달 초파리 8-9를 포함, 다양한 종류의 먹이 행동을 조절하는 것으로 알려져있다. 초파리 급전 회로 foregut에 뇌로부터 축삭 돌기의 발달의 변화와 기능적 출력 (급전)를 상관시키는 모델로서 이용 될 수있는 비교적 간단한 회로이다. Schoofs 등. 초파리 유충의 먹이가 근육 (10)에 영향을 미치는 중앙 패턴 발생기에 의해 조절되는 것으로 나타났습니다. 특정 근육 해부학이 완전히 이해되지 않지만, 그것은 더듬이 신경, 상악 신경, 그리고 prothoracic 액세서리 신경에 관련된 근육의 대상에 대해 책임이 있음을 보였다동작을 먹이. 무척추 동물 먹이의 근육과 신경 해부학을 포함하는 대부분의 데이터는 Calliphora 애벌레로 제한됩니다. 두 번째 령 유충의 먹이 속도는 cephalopharyngeal 경피 (입 후크)의 수축에 의해 평가하고, 재현성 및 높은 처리량입니다 수 있습니다. cephalopharyngeal 플레이트는 정면 신경을 통해 중앙의 5-HT의 신경 세포에서 섬유에 의해 신경 지배된다. proventriculus, 또는 foregut은 중장에서 총생 (그림 1) 11 ~ 12 foregut의 수축에 대한 책임은 세로토닌 섬유 (신경을 recurrens)에 의해 신경 지배한다. 축삭 분기의 변경, 및 신경 돌기 길이를 따라 정맥류의 개수 및 크기는, 면역 조직 화학적 기법을 사용하여 정량 할 수있다. 직접 또는 간접적으로 개발 중에 신경 5-HT를 조작하는 것은 morpholo 변화로 평가되고 상관 될 수있는이 급전 회로의 출력 기능을 변경할 수신경 돌기 구조의 GY.

<table><tbody><tr><td>Eclipse E-800 현미경</td><td>Nikon Instruments</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Neuroleucida</td><td>MBF Biosciences</td><td>NL-15</td><td>내장 섬유 구조를 분석하는 데 사용되며</td></tr><tr><td>Northern Eclipse</td><td>Empix Inc</td><td></td><td>이미징 소프트웨어</td></tr><tr><td>G-2E/C TRITC EX 528-553</td><td>Nikon Instruments</td><td>96312</td><td>특정 2차 항체 필터</td></tr><tr><td>북미 0.75; W.D. 0.72 mm; DIC 프리즘 : 40xI, 40x IC; 단순</td> 뉴라이트 트레이서 NIH 이미징<td>에 사용되는</td>스프링 로드 <td>Nikon Instruments</td><td>MRH00400</td> Objective</tr><tr><td></td><td>Image J</td><td></td><td><a href="http://fiji.sc/Simple_Neurite_Tracer">http://fiji.sc/Simple_Neurite_Tracer</a></td></tr></tbody></table>

의 애벌레 먹이 회로의 기능적 분석 초파리</i

Functional Analysis of the Larval Feeding Circuit in Drosophila

초파리 유충에서 세로토닌 공급 회로는 회로의 개발 과정에서 매우 중요한 신경 기판을 조사하는데 사용될 수있다. 회로의 출력 기능을 이용하여, 수유, stomatogastric 시스템의 신경 구조의 변화는 가시화 될 수있다. 먹이는 행동은 뇌에서 신경 지배를받는 입 후크의 후퇴 속도를 관찰하여 기록 할 수 있습니다. 애벌레 한천 기판을 가로 질러 통과 할 자신의 입 후크를 사용하기 때문에 전위의 동작은, 먹이에 대한 생리 학적 제어로 사용됩니다. 먹이는 행동의 변화는 신경 돌기의 축삭 구조와 상관 관계 될 수있는 창자를 지배하는. 면역 조직 화학을 사용하여 이들 변경을 가시화하고 정량 할 수있다. 그들이 조작에 매우 민감로 행동 패러다임 동안 유충을 잘못 취급하면 데이터를 변경할 수 있습니다. 신경 돌기 아키텍처 지배하는 적절한 영상창자는 정확한 정맥류의 수와 크기의 정량뿐만 아니라 분기 노드의 범위에 대한 중요합니다. 대부분의 회로의 분석에만 신경 돌기 아키텍처 또는 행동 효과의 가시화를 허용하지만,이 모델은 하나의 연결 구조에 장애가있는 회로의 기능적인 출력을 상관시킬 수있다.

초파리 유충에서 세로토닌 공급 회로는 신경계 발달에 특정 요인의 영향을 관찰 할 수있는 매우 효과적인 모델이 될 수 있습니다. 공급 비율을 정량함으로써, 그 기능의 출력 (도 1)와 급전 회로의 축삭 아키텍처를 연결하는 것이 가능하다. 유충은 한천의 표면을 가로 질러 자신을 추진하기 위해 입 후크를 사용하기 때문에 전위의 분석은, 입 후크의 철회에 대한 생리 학적 제어로 사용됩니다. 돌연변이는 공급 회로 (8) (그림 2A)에 영향을 경우 제어 및 돌연변이 유전자형 사이의 전위의 반응에 차이가 없어야합니다. 유의 한 차이가 발생 할 경우, 애벌레 행동이 부적절한 취급에 의해 손상되었다 할 수있다. 분석 기간 동안 애벌레 정지 한천 기판을 파고하려고하는 경우, 그들은 너무 오래된 일 수 있고, 가능성이 령충을 방황으로 전환됩니다.그것은 한천 기판이 어려운 애벌레 입 고리가 한천 기판을 잡아 위해 만드는 따라서, 너무 어려울 수 있습니...

초파리 유충의 먹이 회로는 공급 속도의 변화가 stomatogastric 신경 회로의 변화와 상관 관계가 될 수있는 간단하면서도 강력한 모델을 제공합니다. 이 회로는 입 후크 돌기뿐만 아니라 foregut 보내 중앙 세로토닌 성 신경 세포로 구성된다.

The serotonergic  feeding circuit in Drosophila  melanogaster larvae can be used to investigate neuronal substrates of  critical importance during the ...

이 절차의 전반적인 목표는 초파리 모델 시스템을 활용하여 행동 출력과 신경 구조 변화 사이의 상관관계를 분석하는 것입니다. 이는 먼저 성체 초파리의 집단 케이지를 설정하여 유충을 수집함으로써 수행됩니다. 절차의 다음 단계는 2령 후기에서 3령 초기에 해당하는 유충의 운동 능력을 평가하는 것입니다.세 번째 단계는 마우스 훅(mouth hook)의 확장 및 수축을 관찰하여 유충의 섭식 행동을 평가하는 것입니다. 마지막 단계는 면역조직화학적 기법을 사용하여 3령 후기 유충으로부터 검증된 심실 샘플을 박리하고 준비하는 것입니다. 최종적으로 행동 분석과 면역형광 현미경법을 결합하여 사용함으로써, 발달 과정 중 신경 구조의 이상이 행동 변화와 어떤 관련이 있는지 결과로 보여줄 수 있습니다.이 기술의 함의는 신경 구조 발달에 대한 이해를 높이는 데 있으며, 이를 통해 신경계 질환의 진행 과정을 더 잘 이해할 수 있습니다. 본 절차의 시연은 내 실험실의 대학원생이 수행할 것입니다. 초파리 개체군 케이지를 12시간 명암 주기, 25 °C에서 유지하십시오.대조군과 실험군이 동일한 조명 조건에 노출되는 한, 이 기술은 일반적인 실험실 환경에서 수행할 수 있습니다. 기성 집단을 사용하여 암컷이 하룻밤 동안 사과 주스에 알을 낳도록 하여 유충을 수집하십시오. 아가 플레이트를 아침에 교체하고, 수집된 플레이트 중앙에 효모를 소량 얹어 놓습니다.효모는 부화한 유충을 유인합니다. 알을 25 °C에서 24시간 동안 발육시킨 후, 다음 날 페이스트에서 1령 유충을 수집합니다. 금속 스패튤러를 사용하여 유충을 신선한 사과 주스 또는 포도 주스 플레이트로 옮깁니다. 2령 및 초기 3령 유충을 수집하기 위한 분석을 수행할 때까지 유충에게 영양을 공급하기 위해 효모 페이스트를 추가로 첨가할 수 있으며, 1령 유충이 40에서 48시간 동안 성장하도록 둡니다.이 기간 동안, 수집을 위해 먹이 공급률을 일정하게 유지합니다. 3령 후기 유충은 병 내에서 사육합니다. 3령 후기 유충을 주스 플레이트에서 사육하는 것은 체성 위장 계통에 응고물이 축적되어 유해할 수 있습니다.구강 갈고리 형태에 뚜렷한 변화가 나타나므로 이를 통해 유충의 연령을 확인할 수 있습니다. 각 유충 단계마다, 주스 플레이트를 물로 부드럽고 충분히 세척하여 2령 후기 및 3령 초기 유충을 수집하고 메쉬 필터에 부은 다음, 행동 분석을 진행하십시오. 100mm 조직 배양 접시에 담긴 2% a

functional-analysis-of-the-larval-feeding-circuit-in-drosophila

Research

연구

JoVE Journal

Neuroscience

신경과학

확인된 뉴런과 먹이 행동에서 칼슘 신호의 동시 녹화 Drosophila melanogaster</em

Drosophila의 애벌레는 gustatory 보상과 냄새 자극을 연결 할 수 있습니다. 여기 appetitive 연관 후각 학습의 분석을 할 수있는 간단한 행동 패러다임을 설명합니다.

에 Appetitive 연관 강한 학습<em&gt; Drosophila</em&gt; 애벌레

이 동영상은 근접 결찰 분석법(PLA)을 사용하여 초파리 신경근 접합부(NMJ)에서 단백질-단백질 상호 작용의 시각화를 보여줍니다. 체벽을 분리한 후 상호 작용하는 단백질을 1차 항체 및 PLA 접합 2차 항체로 조사합니다. 상호 작용하는 단백질의 근접성은 커넥터 올리고뉴클레오티드와 프로브의 결찰을 용이하게 하여 원형 DNA를 형성한 다음 롤링 서클 증폭에 의해 증폭됩니다. 형광 프로브는 증폭된 DNA에 결합하여 NMJ에서 단백질-단백질 상호 작용을 시각화할 수 있습니다.

Detection of Protein-Protein Interactions in Drosophila larvae using a Proximity Ligation Assay(근접 결찰 분석을 사용한 초파리 유충의 단백질-단백질 상호작용 검출)

CApillary FEeder (CAFE) 분석은 음식 섭취의 기저에 있는 메커니즘을 조사하기 위한 간단하고 예산 친화적이며 매우 신뢰할 수 있는 방법입니다. 다재다능한 유전자 모델 유기체인 Drosophila melanogaster와 함께 사용되는 이 제품은 음식 섭취의 조절 메커니즘에 대한 새로운 통찰력을 얻을 수 있는 강력한 수단을 제공합니다.

모세관 공급 분석은 식품 섭취를 측정<em&gt; 노랑 초파리</em

염색 음식 양이 많은 음식 섭취 량 분석 제공 하는 강력한 고 높은 처리량 먹이 동기 평가를 의미 합니다. 결합 식품 소비 분석 결과 thermogenetic 및 optogenetic 스크린은 성인에서 식욕을 기본 신경 회로 조사 하는 강력한 접근 방식을 초파리 melanogaster.

양이 많은 음식 섭취 량 분석을 결합 하 고 강제로 초파리 에서 식욕을 공부 하는 뉴런을 활성화

이 프로토콜의 목표는 드로소필라 용기의 작물 수축을 측정하고 식품 유통을 정량화하는 것입니다.

드로소필라에서 작물 운동성과 음식 패시징 측정

여기에 설명된 프로토콜은 다른 다량 영양소 품질의 식단에 노출된 Drosophila 멜라노가스터 애벌레에 의해 정의된 시간 간격 내에 섭취되는 음식의 양을 정량화할 수 있도록 하는 프로토콜이다. 이 소는 신경 열유전학 스크린의 맥락에서 행해질 것입니다.

드로소필라 애벌레를 사용하여 열유전학 신경 화면에서 다량 영양소 섭취의 정량화

우리는 파리에 대한 두 선택 먹이 분석에 대한 프로토콜을 제시한다. 이 수유 분석은 빠르고 실행하기 쉬우며 소규모 실험실 연구뿐만 아니라 파리의 고처리량 행동 스크린에도 적합합니다.

드로소필라의 신속한 식품 선호 분석

마이크로 플레이트 피더 분석법은 Drosophila에서액체 음식 소비를 정량화하기 위한 경제적이고 높은 처리량 방법을 제공합니다. 3D 프린팅 장치는 파리가 트레이서 염료로 공급 용액을 소비하는 1536웰 마이크로 플레이트에 파리가 보관되는 96웰 마이크로 플레이트를 연결합니다. 용액 량 감소는 분광계로 측정됩니다.

드로소필라에서 소비의 정량화를 위한 높은 처리량 마이크로 플레이트 피더 분석

여기에서 우리는 생리학적 조건에서 세포 및 세포 내 역학을 관찰하기 위해 Drosophila melanogaster 세 번째 instar 유충에서 살아있는 외식편 뇌를 준비, 해부, 장착 및 이미지화하는 워크플로에 대해 논의합니다.

Drosophila melanogaster Third Instar 애벌레 뇌의 생세포 이미징

이 프로토콜은 전통적인 포유류 모델에 대한 대안으로 운동 기능 장애의 정량화를 통해 초파리의 신경 독성을 평가하기 위한 고처리량, 비용 효율적인 방법을 제시합니다. 민감하고 재현 가능하며 윤리적으로 유리한 모델을 사용하여 제약 화합물, 환경 제제 또는 유전자 변형의 신경독성 영향을 평가하는 것을 목표로 합니다.

신경독성에 대한 판독으로서의 Drosophila melanogaster 의 운동 기능 장애에 대한 행동 분석

배우세요 Drosophila melanogaster 애벌레의 먹이 행동과 신경 회로의 관계를 행동 분석 및 면역형광 현미경으로 연구하는 방법입니다. 이 기술은 신경 발달과 행동 변화의 상관관계를 밝히는 데 활용됩니다.

의 애벌레 먹이 회로의 기능적 분석 초파리

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