Easy Measurement of Diffusion Coefficients of EGFP-tagged Plasma Membrane Proteins Using k-Space Image Correlation Spectroscopy

Eva C. Arnspang; Jennifer S. Koffman; Saw Marlar; Paul W. Wiseman; Lene N. Nejsum

doi:10.3791/51074

K-공간 이미지의 상관 관계 분광학을 사용하여 EGFP-태그 플라즈마 막 단백질의 확산 계수의 간편한 측정

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Biology

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Easy Measurement of Diffusion Coefficients of EGFP-tagged Plasma Membrane Proteins Using k-Space Image Correlation Spectroscopy

K-공간 이미지의 상관 관계 분광학을 사용하여 EGFP-태그 플라즈마 막 단백질의 확산 계수의 간편한 측정

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11:43 min

May 10, 2014

DOI: 10.3791/51074-v

Eva C. Arnspang¹, Jennifer S. Koffman¹, Saw Marlar¹, Paul W. Wiseman², Lene N. Nejsum¹

¹Institute of Molecular Biology and Genetics and Interdisciplinary Nanoscience Center,Aarhus University, ²Departments of Chemistry and Physics,McGill University

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이 논문은 형광 라이브 포유 동물 세포에서 세포막 단백질을 표지 확산 계수를 측정 변동 분석 기술 K-공간 이미지 상관 분광학 (KICS)에 대한 단계를 안내하여 단계를 제공합니다.

이 절차의 전반적인 목표는 살아있는 세포에서 막 단백질의 확산 계수를 측정하는 것입니다. 이것은 먼저 GFP 태그가 지정된 단백질을 발현하는 세포를 성장시킨 다음 원형질막에 초점을 맞춘 회전 디스크 현미경에서 타임 랩스 이미지 시퀀스를 획득함으로써 수행됩니다. 두 번째 단계는 이미지 스택에서 멤브레인이 평평하고 움직이는 소기관이 없는 자르기를 선택하는 것입니다.

다음으로, 사례 기반 이미지 상관 분광법 소프트웨어를 사용하여 작물을 분석합니다. 마지막 단계는 Excel에서 확산 플롯의 평균을 구하는 것입니다. 궁극적으로, kicks와 결합된 살아있는 세포 현미경은 막 단백질의 확산 계수를 측정하는 데 사용됩니다.

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