로컬 또는 전신 약물 개입 후 마우스의 휘발성 전신 마취 감도의 변화를 평가

이 절차의 전반적인 목표는 약물 개입 후 마취 민감도의 변화를 평가하는 것입니다. 이는 먼저 균일한 가스 흐름과 온도를 보장하기 위해 노출 챔버를 주의 깊게 검사함으로써 수행됩니다. 두 번째 단계는 동물을 방에 습관화하는 것입니다.

다음으로, 관심있는 약리학적 중재가 수행됩니다. 마지막 단계는 마취제 노출에 대한 동물의 쓰기 반사를 평가하여 마취 민감도의 변화를 평가하는 것입니다. 궁극적으로, 반사 분석을 작성하는 것은 장기 또는 단기 작용 약리학적 중재로 인한 마취 민감도의 차이를 보여주는 데 사용됩니다.

이 시스템은 마우스의 마취 민감도 변화에 대한 통찰력을 제공할 수 있지만 흡입 치료제의 효과를 연구하기 위해 다양한 종에서 사용할 수도 있습니다. 테스트 장치는 길이 10cm, 직경 5cm의 투명 아크릴 원통형 챔버 24개로 구성됩니다. 이 크기는 일반적인 25g 성인 마우스에 적합합니다.

모든 챔버에는 가스 입구와 출구를 위한 각 끝에 포트가 있습니다. 출구 끝은 고무 개스킷으로 밀봉되어 있어 쉽게 제거할 수 있습니다. 동물을 삽입하려면 수조 내부에 있는 랙에 각 챔버를 장착하십시오.

챔버의 아래쪽 부분만 잠기도록 랙을 놓습니다. 챔버의 뒤쪽 끝에 있는 지지대는 안정성을 제공하고 챔버를 수평으로 유지하여 각 챔버와 수조의 균일한 접촉을 보장합니다. 폴리에틸렌 튜브가 있는 기화기 및 유량계에 산소 탱크를 연결한 후 튜브를 동일한 길이의 25개의 작은 직경 저항기로 분할합니다.

이렇게 하면 연결 시 각 챔버에 동일한 흐름이 전달됩니다. 다음으로, 각 챔버에서 나오는 진공 라인을 가스 주입구의 반대쪽 끝에서 연결합니다. 진공 라인은 매니폴드에서 결합되어 사내 흡입 라인에 연결됩니다.

메인 진공 라인을 따라 있는 팝오프 밸브는 각 챔버 내의 대기압 조건을 보장합니다. 모든 것이 연결되면 각 챔버의 바닥에 완전히 닿을 만큼 충분한 물을 욕조에 채웁니다. 펌프를 켜서 물을 순환시키고 섭씨 37도의 일정한 온도를 유지하십시오.

테스트를 진행하기 전에 챔버의 누출 여부와 적절한 공기 흐름이 있는지 검사합니다. 먼저 산소를 분당 5리터의 비율로 설정합니다. 각 챔버를 물 속에 담그고 거품이나 물이 유입되는지 확인하는데, 둘 다 누출을 나타냅니다.

실험을 시작하기 전에 누출되는 챔버를 교체하십시오. 각 챔버에 대해 챔버 앞에 일렬로 500밀리리터 유량계를 연결하여 각 라인에서 흐름이 균형을 이루는지 확인합니다. 예상된 흐름을 받지 못하는 챔버는 튜브에 장애물이 있는지 확인해야 합니다.

마지막으로, 습관화 1주일 전에 100% 산소가 흐를 때 0.0%의 불소 판독값을 보장하도록 제제 분석기를 보정합니다. 테스트 중 체온을 추적하기 위해 트랜스폰더가 이식됩니다. 적절한 마취 깊이를 달성한 후 Betadine으로 등 쪽 목 부위를 소독합니다.

그런 다음 멸균 바늘을 사용하여 견갑골 사이에 체온 트랜스폰더를 피하로 주입합니다. 트랜스폰더의 감염 및 이동에 대해 매일 주사 부위를 모니터링하십시오. 첫 번째 평가 4일 전, 모든 실험 동물은 새로운 환경으로 인한 스트레스의 영향을 줄이기 위해 챔버에 익숙해집니다.

이렇게 하려면 2시간 동안 100% 산소가 흐르는 각 방에 동물을 넣으십시오. 테스트할 때까지 이 노출을 매일 반복하십시오. 4일간의 거주 테스트 후 관심 약물 개입에 노출되는 것으로 하루가 시작됩니다.

이 중재는 특정 뇌 영역으로의 정위 주사, 정맥 주사 또는 복강 내 주사 약리학적 중재일 수 있습니다. 작용 시간이 길면 마취 민감도의 단계적 측정이 수행됩니다. 모든 동물이 제자리에 놓이면 100% 산소가 흐르는 개별 챔버에 각 동물을 배치하여 테스트를 시작합니다.

불소 농도를 0.4분 동안 15%로 설정합니다. 이 시간의 마지막 2분 동안 쥐가 등을 대고 눕힐 때까지 챔버를 부드럽게 굴려 각 동물의 쓰기 반사를 평가합니다. 쓰기 반사는 마우스가 모든 발을 챔버 바닥으로 되돌릴 수 있는 경우 손상되지 않은 것으로 간주됩니다.

2분 이내에 각 마우스의 쓰기 반사 상태를 기록하고 각 마우스의 온도 데이터를 스캔합니다. 다음으로, 15분 동안 불소 농도를 약 0.05% 증가시키고 앞서 설명한 대로 쓰기 반사를 평가합니다. 모든 동물이 쓰기 반사를 잃을 때까지 마취 농도를 계속 높입니다.

선택적으로, 마취제 출현은 마취제 농도가 하향 적정됨에 따라 단계적 쓰기 반사 평가를 반복하여 측정할 수 있습니다. 실험을 끝내려면 불소를 끄고 전체 시스템을 100% 산소로 15분 동안 세척하여 더 짧은 기간의 중재를 수행합니다. 출현까지의 시간 테스트가 수행됩니다.

산소가 100% 흐르는 개별 챔버에 각 동물을 넣은 후 불소 농도를 1.2%로 설정합니다.몇 분 동안 마취제에 노출된 후 각 마우스가 등을 대고 있을 때까지 각 챔버를 부드럽게 굴립니다. 쓰기 반사의 상실을 확인하면 급성 중재의 예상 작용 기간에 따라 30분에서 1시간 동안 불소 농도를 1.2%로 유지합니다. 불소를 끈 후 100% 산소를 흐르게 하고 각 동물이 네 발을 모두 바닥에 놓을 때까지의 시간을 측정합니다.

쓰기 반사는 동물이 네 발을 모두 세 번 연속으로 바닥에 놓을 수 있을 때 온전한 것으로 간주됩니다. 여기서, 쓰기 반사는 식물산을 복부 외측 수술 전 핵에 주입한 지 일주일 후에 테스트되었습니다. 이 뇌 부위에 병변이 생기면 마취 민감도가 감소하는 것으로 예측되었다.

그러나 단계적 마취 민감도에는 유도 또는 출현에 대해 유의한 차이는 발견되지 않았다. 이 예에서 출현까지의 시간 테스트는 양측 I 식물산 미세주입 직후에 수행되었습니다. VLPO에 주입되었을 때, 근처의 내측 중격과 차량이 대조군을 주입했기 때문에 주입에 비해 현저하게 긴 최면이 있었습니다.

이 비디오를 시청한 후에는 모든 동물이 동일한 가스 흐름과 온도에 노출되도록 하면서 단계적 유도 테스트 또는 출현 시간 테스트를 사용하여 마취 민감도를 평가하는 방법을 잘 이해하게 될 것입니다.