드로소필라의 온도 선호도 행동과 Circadian 리듬의 설계 및 분석

이 절차의 전반적인 목표는 초파리의 온도 선호도를 결정하는 것입니다. 이것은 먼저 파리와 온도 제어 알루미늄 베이스 주위에 조립된 장치를 준비함으로써 수행됩니다. 장치에서 온도가 설정되면 파리 무리가 로드되고 30분 후에 온도 선호도가 점수가 매겨집니다.

궁극적으로 이 분석은 매우 다양한 실험 조건에서 사용할 수 있습니다. 예를 들어, 온도 선호도의 일주기 리듬. 이 방법은 목표 리듬 필드의 핵심 질문에 답하는 데 도움이 될 수 있습니다.

온도 선호도의 이 목표 리듬은 기관차 활동의 메커니즘과 다른 메커니즘에 의해 제어되기 때문에 이 행동 분석은 기관차 활동 접근 방식을 사용하여 이전에 확인되지 않은 새로운 분자 및 세포 메커니즘의 식별로 이어질 것입니다. 이 방법은 또한 온도 및 통증 감각과 같은 감각 신경 과학 분야의 주요 질문에 답하는 데 도움이 될 수 있습니다. 이 온도 거동 분석은 매우 강력하기 때문에 이 분석을 통해 온도 감지에서 처리에 이르기까지 신경 회로를 매핑할 수 있으며, 이를 통해 감각 통합에 대한 더 많은 통찰력을 얻을 수 있습니다.

1212 light dark cycle로 가습 된 인큐베이터에서 파리를 들어 올립니다. 이 프로토콜에는 서로 반대 일정으로 설정된 두 개의 인큐베이터가 필요합니다. 야간 인큐베이터는 정상 근무 시간 동안 어두워야 합니다.

야간 주기에 인큐베이터에 접근할 때는 빨간색 조명을 사용하여 인큐베이터를 비춥니다. 20-30마리의 새로 부화한 파리 코호트를 암수 및 비율에 관계없이 수집하고, 분석에서 실행하기 전에 2-3일 동안 인큐베이터에 보관합니다. 테스트된 각 조건에 대해 최소 5개의 코호트가 필요합니다.

온도 선호 테스트 챔버를 구축하려면 플렉시 유리 커버를 플레이트 아래의 알루미늄 플레이트에 맞도록 설계해야 합니다. 4개의 펠티에 장치를 배치합니다. 각 펠티에 장치는 펠터가 과열되는 것을 방지하기 위해 차갑거나 뜨거운 온도를 생성할 수 있는 온도 컨트롤러에 연결해야 합니다.

컴퓨터 냉각 시스템은 수관, 공기 냉각 팬 및 전원 공급 장치에 연결되어 알루미늄 판의 온도를 모니터링합니다. 온도 프로브는 알루미늄 플레이트의 가장자리에 내장되어 온도 컨트롤러에 연결됩니다. 덮개에서 플레이트의 차가운 면과 뜨거운 면을 각각 섭씨 12도와 36도로 설정합니다.

레인 중 하나의 다양한 위치에 6개의 온도 프로브를 부착합니다. 장치를 섭씨 25도, 상대 습도 65%에서 75% 사이인 환경적으로 통제되는 방에 놓으십시오. 이러한 조건을 모니터링해야 합니다.

실내는 순환 공기가 온도를 불안정하게 만드는 것을 방지하기 위해 조명 제어 장치와 공기 순환이 좋아야 합니다. 그라디언트는 샤워 커튼으로 테스트 영역을 보호합니다. 광도가 온도 선호도에 영향을 줄 수 있으므로 장치에 균일한 조명을 사용해야 합니다.

기기를 최소 30분 동안 켜십시오. 플레이트 표면에 안정적인 온도 구배를 설정하기 위해. 행동 기구의 덮개를 발수제로 코팅하여 파리가 덮개의 벽이나 천장을 기어오르는 것을 방지합니다.

여분의 발수제를 닦아내고 필요한 경우 25-30분 동안 덮개를 그대로 두어 25-30분 동안 운전할 수 있으며 30분 후에 양면 테이프 테이프를 사용할 수 있습니다. 알루미늄 판의 응결을 닦아냅니다. 그런 다음 플렉시 유리 덮개를 알루미늄 판에 놓고 6개의 C 클램프로 고정합니다.

덮개를 밀봉하는 것이 매우 중요합니다. 플레이트와 커버 사이의 공기 온도를 잘 모니터링하십시오. 프로브가 알루미늄 판이나 플렉시 유리 덮개에 닿지 않도록 하십시오.

덮개가 접시에서 최소 15분 동안 평형을 이루도록 합니다. 결국 알루미늄 판과 덮개 사이의 기온 구배는 섭씨 18도에서 32도 사이가 될 것입니다.주간 행동 실험의 경우 주간 인큐베이터에서 플라이 바이알을 꺼내 야간 행동 실험 직전에 빛 아래에서 행동 분석을 테스트합니다. 야간 인큐베이터에서 플라이 바이알을 꺼냅니다.

호일로 싸서 빨간 램프 아래 어두운 방의 상자에 넣으십시오. 어두운 기간의 실험의 경우, 행동 실험이 완료될 때까지 실내 조명을 항상 꺼 두어야 합니다. 그러나 적색 램프는 흡인을 사용하여 조명에 사용할 수 있습니다.

알루미늄 판 사이의 공간으로 20-25 파리를 적재하십시오. 그런 다음 파리가 탈출하지 못하도록 덮개 슬립으로 구멍을 덮습니다. 파리가 30분 동안 움직이도록 합니다.

실험이 완료되면 조명 실험을 위해 사진을 두 장 이상 찍습니다. 어두운 실험에는 플래시를 사용해야 합니다. 기기의 온도를 확인하십시오.

실내 온도와 습도를 기록하여 장치 상단의 구멍 근처에 있는 이산화탄소 튜브에 연결된 파리를 제거하여 파리를 마취하고 파리를 버리십시오. 다시 테스트해서는 안 됩니다. 그런 다음 플레이트에서 결로나 습기를 닦아냅니다.

플레이트의 덮개를 교체하고 cl로 조입니다.amps 준비 다음 실험을 위해 다음과 같이 온도 구배를 계산합니다. 먼저, 프로브 위치와 기록된 온도를 기반으로 자를 사용하여 온도 프로브가 배치된 위치를 결정합니다. 파리의 최종 위치 사진의 적절한 위치에 각 온도 정도를 나타내는 직선을 그립니다.

다음으로 각 섭씨 1도 간격 사이의 파리 수를 계산합니다. 덮개의 벽이나 천장에 있는 파리를 제외하십시오. 각 레인의 각 온도 범위에서 파리의 백분율을 계산한 다음 각 조건에 대한 평균 선호 온도를 계산합니다.

최소 5건의 임상시험에서 데이터를 수집합니다. 그런 다음 각 시행의 평균값을 사용하여 오차가 있는 평균 선호 온도를 결정합니다. 섭씨 25도에서 자란 일반 파리는 저녁보다 아침에 낮은 온도를 선호합니다.

낮에는 1도에서 1.5도의 온도 선호도 증가와 섭씨 1.5도에서 2도의 온도 상승이 측정되었습니다. 낮에서 밤으로 넘어갈 때 감소가 나타났습니다. 이 분석은 돌연변이 파리를 테스트하는 데에도 사용할 수 있습니다.

예를 들어, 여행에서 결함 있는 돌연변이를 가진 파리의 온도 선호도, 즉 1이온 채널이 대조군의 온도 선호도보다 높은 것으로 밝혀졌습니다. 이 비디오를 시청한 후에는 온도 선호 거동 분석을 수행하는 방법을 잘 이해하게 될 것입니다. 이 방법을 통해 분자 메커니즘과 신경 회로, ofa 및 clocks, 그리고 뇌가 다양한 환경 신호와 생물학적 시계를 통합하는 방법을 조사