Name: 이소성 보조 쥐 간 이식 급성 간 장애에 포털 정맥 Arterialization를 유량 조절 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2014-09-13T14:00:00.000+00:00
Duration: 16 min 19 s
Description: 학습하세요 이소성 보조 간 이식에서 포털 정맥 동맥화 기법을 이용한 쥐 모델 개발 방법을. 이 기술은 급성 간 부전 치료와 간 재생 연구에 활용될 수 있습니다.

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본 연구는 &quot;도이치 Forschungsgemeinschaft&quot;(DFG)에 의해 투자되었다. K. Schleimer는 노르 트라 인 베스트 팔렌의 리제 마이트 과학 기술부의 친목과 연구에 의해 지원되었다. 우리는 그녀의 뛰어난 편집 지원을 부인 메리 조안 Blümich에게 감사의 말씀을 전합니다. 박사 마리아 Kokozidou이는 Fresenius 2011_A61에서 자금을 조달했다.

1 실험 동물 <ol><li> 동물 보호 FELASA의 지침에 따라 수행 될 모든 실험 지역 윤리위원회의 승인 (K 40, 99분의 17)을 얻습니다. </li><li> (예를 들면, 찰스 강 WIGA GmbH의 Sulzfeld, 독일)의 상업적 개종에서 구매하는 남성 루이스 쥐를 사용할 수 있습니다. 여기에, 224 동물 (112 기증자, 112받는 사람) 112 이식을 수행하는 데 사용되었다. 받는 사람은 수술 후 육주에서 희생되었다. 동작시에, 동물은 250~350그램 무게한다. </li><li> 음식과 물을 무료로 이용할와 기후의 방에있는 동물이 오지 않게하십시오. </li></ol> 2 마취 및 수술 준비 <ol><li> 1 L / 분의 산소 유속, 및 마취를 유도하는 5 % 마취 가스와 함께 기화기 이소 플루오 란 마취 기계에 접속 플렉시 글라스 상자에 래트를 배치했다. 1.5 % 이소 플루오 란 마취를 유지한다. </li><li> 에서 쥐를 놓습니다온난화 접시에 누운 자세. </li><li> 제모 크림과 함께 복부의 털을 제거합니다. </li><li> 다음과 같은 무균 수술 부위 준비 : 벤치 탑을 청소 소독제를 사용합니다. 제 절개 사이트 이용 클로르헥시딘 소독, 알코올 및 제 최종적 스크럽 용액 (예컨대, 클로르헥시딘, 70 % 이소 프로필 알콜)을 참조. 일회용 수술 가운 및 수술 장갑을 착용 할 것. </li><li> 멸균 미세 악기를 사용합니다. </li><li> 12 ~ 20 배의 배율 동작 현미경을 사용합니다. </li></ol> 3 수술 <ol><li> 기부자 작업 준비 <ol><li> 중간 개복술을 수행하고 왼쪽 측면 로브와 히긴스에 의해 설명 된대로 이식의 중간 엽 절제. (14) </li><li> 그런 다음 hepatoduodenal 인대를 준비합니다. 우선 작은 담관의 혼잡과 팽창을 유도하기 위해 담관을 결찰. 그런 다음 결찰 및 gastroduode을 가로로 쪼개다NAL 정맥과 동맥. 그 후, 복강 트렁크 및 간동맥을 격리하며 왼쪽 위 동맥 비장 동맥을 가로로 쪼개다. 혼잡 한 담관을 절개하고, 그것으로 20-G 스텐트를 소개합니다. 스텐트의 위치는 전체 문부 담관 시스템의 배수되도록한다. 스텐트 원위부 담관을 가로로 쪼개다. </li><li> 바로 오른쪽 신장 정맥 위의 caval 정맥의 infrahepatic 세그먼트를 격리합니다. 관류 </li><li> 체강 트렁크 상기 대동맥 결찰 후 간문맥 클램프하고 절개. 포털 정맥 관류 카테터 (14 G)를 소개하고, 히스티딘 트립토판 - 케 토글 루타 레이트 (HTK) -solution의 30 ㎖ (12cm의 H2O, 4 ° C)로 관류를 수행합니다. </li><li> 다이아 프램 및 관류가 유출 할 수 있도록 suprahepatic caval 정맥을 잘라. </li><li> 대동맥 패치와 함께 복강 트렁크를 절제하고 히스티딘 트립토판 - 케 토글 루타 레이트 용액으로 씻어냅니다. 적출 </li><li> 바로 오른쪽 신장 정맥 위의 infrahepatic caval 정맥을 가로로 쪼개다. </li><li> 그리고, 문맥에서 0.3 mm의 직경을 갖는 스텐트를 배치하고 봉합사로 고정한다. 다음 동작 동안, 간문맥는 오른쪽 신장 동맥을 통해 동맥 화된다. 스텐트에 말단 포털 정맥을 가로로 쪼개다. </li><li> suprahepatic caval 정맥 결찰 한 후, 다이아 프램의 커프스와 함께 그것을 가로로 쪼개다. </li><li> 이식 절편과 얼음에 비닐 봉지에 4 ° 섭씨 히스티딘 트립토판 - 케 토글 루타 레이트 (HTK) -solution에 보관합니다. infrahepatic caval 정맥 장소 코너 봉합 (8-0 Ethilon). </li></ol></li><li> 받는 사람 운영 <ol><li> 중간 개복술을 수행하고 infrahepatic caval 정맥을 준비합니다. 그리고, 오른쪽 신장 동맥 및 요관을 분리 요관을 결찰하고 쪼개다. 그 기원에서 오른쪽 신장 동맥 클램프, 다음 오른쪽 신장 정맥 결찰. 그리고 모두의 절개 후 다시NAL 혈관, 신장 절제술을 수행합니다. 이어서, 오른쪽 신장 동맥을 단축 헤파린 식염수 (40 UI 헤파린 / ml의 생리 식염수 용액)로 헹군다. </li><li> infrahepatic caval 정맥 타원형 루멘을 만들 infrahepatic caval 정맥의 근위 및 원위 체결 후 합자에 근위 오른쪽 신장 정맥을 가로로 쪼개다. 헤파린 생리 식염수로 caval 정맥을 씻어. 받는 사람의 복부의 오른쪽 신장 지역에서 이식편을 이식. </li><li> 8-0 Ethilon 실행 봉합 recipient`s caval 정맥에 기증자의 infrahepatic caval 정맥 엔드 - 투 - 사이드 Anastomose. </li><li> 헤파린 / 식염수로 세정 한 후, 오른쪽 신장 동맥 (도 3)로 문맥에 스텐트를 소개한다. 이 바늘 (8-0 Ethilon)와 포털 정맥 및 신장 동맥을 연결합니다. 합자 (꼰 실크 블랙 7-0)로 신장 동맥에 연결 스텐트를 고정합니다. </li><li> 재관류를 허용하려면 먼저 모두 다음, 동맥 클램프를 제거정맥 클램프 (그림 4). </li><li> infrarenal 대동맥을 준비하고 근위 및 원위 microclamp를 배치하고 오른쪽 두 클램프 사이에 대동맥을 절개. 10-0 Ethilon 실행 봉합, 대동맥 패치를 사용하여 대동맥과 기증자의 복강 트렁크 사이의 엔드 - 투 - 측 문합을 수행합니다. </li><li> 십이지장으로 담관을 삽입 : 십이지장 벽에 pursestring 봉합을 적용, 오른쪽 pursestring의 중간에 십이지장 벽에 작은 절개를합니다. 십이지장에 스텐트 담관을 소개하고, pursestring 봉합사를 조입니다. 마지막으로, 단단히 두 개의 바늘 (Ethilon 8-0) (그림 5)와 십이지장과 담도를 개최합니다. </li><li> 그런 다음 기본 간 절제술, 첫째 Emond 등으로 설명을 수행합니다. 급성 간부전을 모방합니다. 7 </li><li> 다시의 측면 복벽에 함께 다이어프램의 팔목, 이식편의 suprahepatic caval 정맥 수정4-0 Vicryl 봉합사와 cipient. 생리 식염수 (그림 6)과 복부를 씻어. </li><li> 근육 층은 4-0 Vicryl 실행 봉합하고 피부에 3-0 Vicryl 실행 봉합을 사용합니다. </li></ol></li></ol> 4 복구 및 수술 후 관리 <ol><li> 동물 적외선 온난화 램프에서 마취에서 회복하자. </li><li> 이일에 대한 0.03-0.05 ㎎ / ㎏ BW SC마다 8 ~ 12 시간의 용량으로 부 프레 놀핀을 주입한다. </li><li> 일반 상태와 질병이나 감염의 징후에 관한 동물을 검사합니다. </li></ol> 초기 기본 간 무게의 5 계산 다음과 같이 초기 원시 간 중량을 계산한다 : 완전한 간 중량로부터 절제 간 로브의 중량을 뺀다 (체중 (+/- 0.49 %의 표준 편차가이 값의 2.66 %가 N과 이전의 실험에서 얻은 = 같은 변형과의 80 동물GE의)). 15

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</ol>

모든 저자는 경쟁 이익을 선언하지 않습니다.

제 이소성 보조 쥐 간 이식가 Lee 등으로 기술되었다., 1966 년 16 헤스 하였다. 그래프트 17 간문맥은 수신자의 간문맥으로 문합 하였다. 이 절차 동안, 네이티브간에 포털 정맥 혈액 공급이 저하된다. 1991 년 홍콩은 혈액의 흐름 조절 대규모 포털 않고.받는 사람의 장골 동맥을 통해 PVA와 13 HALT를 수행 정현파 정체가 발생했습니다. 또한 Aguirrezabalaga 외., PVA와, 그럼에도 동맥 화 문맥에서 혈류 조절에 필요한주의를 기울이지 않고 수행 HALT. 18 0.3 mm의 내부 직경 8 mm의 길이를 갖는 스텐트의 사용은 상부 생리 둥글게 내에 동맥 화 간문맥의 재관류 후에 포털 평균 혈류를 산출전자. 12 </p...

급성 간부전은 60~80%의 사망률. 8 급성 간부전에서 선도 임상 의학에서 심각한 문제가있다, 보조 간 이식은 급성기를 해소 할 수있는 유망한 대체 요법이다. 기본 간은 면역 억제 약물을 중단 할 수 있습니다 재생에 다음 재생성를 유지한다. 결과적으로 이식이 위축 될 것이다. 그러나 보조 간 이식을위한 수술 기법이 여전히 논의된다. 1-3 이러한 맥락에서, 테르 프 스트라가 그래프트 공간의 부족을보고, 포털 혈액 현상 및 정맥 울혈 및 배수의 문제를 훔칠. 9-10 도너의 간문맥 받는 사람의 문맥에 엔드 - 투 - 측 문합 하였다. 이것은 이식하고 원시 간 사이 포털 정맥 혈전증 포털 흐름 경쟁의 결과. 이러한 기술적 문제는 대부분 APOLT-방법의 사용 (orthotop으로 회피 할 수있다IC 보조 세그먼트의 주입). 4 그러나이 방법은 원시 간 이식. 4 1998 년 모두의 광범위한 절제를 필요로, 에어 하드와 그의 팀은 포털 정맥 arterialization (PVA) (그림 1을 이용하여 이소성 보조 간 이식 (HALT)을 개발 ). 폐문하고 원시 간 문맥은이 방법의 사용으로 존경합니다. 즉, 원시 간 회복을 방해 할 수있는 등 포털 정맥 혈전증 및 포털 혈액과 같은 원치 않는 부작용에서받는 사람 훔치는 현상을 여분. 또한, 네이티브 간 이식의 더 광범위한 간 절제술은 (이식) 및 재생 (기본 간)을위한 연계 결과적으로 더 적은 출혈이 더 남아있는 총 간 실질 질량이 방법에 대한 필요하지 않습니다. 이 기술은 초기 임상 결과를 약속 하였다. 5-6 일이 실험의 목적은 간문맥 arterialization에서와 HALT 기술의 개발이었다연구 목적으로 쥐 (도 2). 예비 실험에서 우리는 간 캡슐에서 재관류 및 출혈 후 이식 이식의 혼잡 초래하는 정맥 고려 동맥 화 포털의 혈류 조절을하지 않았다. 11 동맥 화 문맥에서 다음 혈액의 흐름 때문에 0.3 mm의 내부 직경 8 mm의 길이를 가진 스텐트 의해 조절 하였다. 파일럿 실험은 0.3 mm의 스텐트 직경이 상부 생리적 범위 동맥 화 간문맥의 평균 혈류를 얻을 수 있음을 보여 주었다 (1.7 +/- 0.4 ㎖ / 분 / g 간 중량). 혈류 조절없이 12 이상의 결과 혈액의 흐름 조절 대규모 포털 않고받는 사람의 장골 동맥을 통해 PVA와 함께 자신의 실험에서. 13 HALT를 수행 정현파 혼잡이 발생한 홍콩의 결과와 상관 관계. 비디오 우리의 목적은 D이다단계별로 emonstrate 단계 쥐에서이 ne.w 실험적인 수술 기법. 장기적으로 제안 된 기술은 간 재생 및 상호 간 경쟁과 간문맥 arterialization, 간문맥과 환류 및 포털 혈류 조절에 관한 연구에 사용될 수있다.

<table><tbody><tr><td>브레이드 실크 블랙 7-0&nbsp;</td><td>Ethicon 제품</td><td>892100</td><td></td></tr><tr><td>Vicryl 3-0</td><td>Ethicon 제품</td><td>J285G</td><td></td></tr><tr><td>Vicryl 4-0</td><td>Ethicon 제품</td><td>J284G</td><td></td></tr><tr><td>Ethilon 8-0</td><td>Ethicon 제품</td><td>1714G</td><td></td></tr><tr><td>Ethilon 10-0</td><td>Ethicon 제품</td><td>7770G</td><td></td></tr><tr><td>Vasofix 안전 14G</td><td>B Braun</td><td>2758853</td><td></td></tr><tr><td>Vasofix 안전 20G</td><td>B Braun</td><td>2758818</td><td></td></tr><tr><td>2 프랑스어 (0.012 "/ 0.3 mm ID x 0.025"/ 0.6 mm OD) x 24 "/ 60 cm 폴리 우레탄 카테터</td><td>액세스 기술 Norfolk Medical, Inc., 일리노이, 미국</td><td>CNC-2P</td><td></td></tr><tr><td>HTK 솔루션의 사업부, Custodiol</td><td>Dr. Franz K & ouml; hler Chemie GmbH, Alsbach-H&auml; hnlein, 독일</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Isofluorane 5 %</td><td></td><td></td><td>Any genericon</td></tr><tr><td>Heparin</td><td></td><td></td><td>Any genericon</td></tr><tr><td>0.9% Saline</td><td></td><td></td><td>Any genericon</td></tr><tr><td>buprenorphine</td><td></td><td></td><td>Any genericon</td></tr></tbody></table>

이소성 보조 쥐 간 이식 급성 간 장애에 포털 정맥 arterialization를 유량 조절

Heterotopic Auxiliary Rat Liver Transplantation With Flow-regulated Portal Vein Arterialization in Acute Hepatic Failure

급성 간부전 보조 간 이식에 흥미있는 또 다른 방법이다. 목표는 실패 원시 간 재생 될 때까지 임시 지원을 제공하는 것입니다. 1-3 APOLT - 방법, 보조 segments-의 소성을 주입은 기술적 인 문제의 대부분을 피한다. 그러나이 방법은 원시 간 이식. 4 1998 년 모두의 광범위한 절제를 필요로한다, 에어 하드는 포털 정맥 arterialization (PVA) (그림 1)를 이용 이소성 보조 간 이식 (HALT)를 개발했다. 이 기술은 초기 임상 결과를 약속했다. 5-6 우리는 이식의 형태와 기능 (그림 2)에 유량 조절 PVA의 영향을 조사하기 위해 쥐의 흐름을 조절 PVA와 HALT-기술을 개발했다. 원래 크기의 30 %로 감소 간 이식은 heterotopically 오른쪽 신장 적출 후 수신자의 오른쪽 신장 지역에 주입 하였다.60; 이식의 적외선 간 caval 정맥받는 사람의 infrahepatic caval 정맥과 문합 하였다. 기증자의 문맥의 arterialization은 스텐트 기술로받는 사람의 권리 신장 동맥을 통해 실시 하였다. 동맥 화 간문맥의 혈류 조절은 0.3 mm의 내부 직경을 갖는 스텐트를 이용하여 달성되었다. 이식의 복강 트렁크는 엔드 - 투 - 사이드받는 사람의 대동맥과 담관과 문합은 십이지장에 이식 하였다. 원시 간 절제술 급성 간부전을 유도 하였다. 7 이러한 방식으로 112 이식을 시행 하였다. 수술 후 생존율은 90 %이었고, 6 주간의 생존율은 80 %이었다. 6 주 수술 후, 기본 간은 9.8 ± 1g에 2.3 ± 0.8 g 중량의 증가를 보여주는, 재생. 이때, 그래프트의 중량을 2.3 ± 0.8 g에 3.3 ± 0.8 g 감소 하였다. </p&gt; 우리는 그래프트 형태와 기능의 관점에서 유망 장기적인 결과를 얻을 수 있었다. 기본 간은 다시 생성 될 때까지 흐름을 조절 PVA와 HALT 안정적으로 급성 간부전 교량.

이식의 평균 지속 시간은 약 150 분이었다. 냉 허혈 시간은 64 분이었다 +/- 7 따뜻한 허혈 시간은 25 분 미만이었다. 수술 후 생존율은 90 %이었고, 6 주간의 생존율은 80 %이었다. 20 % 손실은 첫번째 수술 후 주 동안 때문에 스텐트 전위 및 담즙 누출 (네 동물)의 복막염에 의한이었고, 다음과 같은 이유로 오주 동안 폐렴, 복강 내 농양 및 장폐색증 (일곱 동물)이다. 살아남은 동물은 훌륭한 전신 상태에 있었다. 간 합성의 파라미터 (퀵 값 : 110 +/- 7.8 %, AT III : 104 +/- 6 %)는 육주 작업 후에 정상 범위였다. 이 시점에서, 기본 간은 9.8 ± 1g (: 0.0065 P) 2.3 ± 0.8 g 중량의 증가를 나타내는, 재생했다. 이식의 무게는 2.3 ± 0.8 g (0.06 P)에 3.3 ± 0.8 g으로 감소. 목모두...

보조 간 이식은 실패 간 재생 될 때까지, 급성 간부전에 임시 지원을 제공합니다. 포털 정맥 arterialization (PVA)와 이소성 보조 간 이식 (HALT)는 충분한 간 기능을 렌더링합니다. 우리는 이식의 형태와 기능에 대한 포털 정맥 arterialization의 영향을 조사하기 위해, 쥐에서 유사한 기술을 개발했다.

이소성 보조 쥐 간 이식 급성 간 장애에 포털 정맥 Arterialization를 유량 조절

In acute hepatic failure auxiliary liver transplantation is an interesting alternative approach. The aim is to provide a temporary support until the ...

급성 간부전은 임상 의학에서 심각한 문제이며, 급성 간부전 환자의 사망률은 60%에서 80%에 이릅니다. 보조 간 이식은 유망한 대체 치료법입니다. 자가 간이 재생된 후에는 면역 억제제 투여를 중단할 수 있으며, 이식된 간을 제거하거나 그대로 두어 위축되게 할 수 있습니다.그러나 보조 간 이식의 수술 기법에 대해서는 논란이 있습니다. 보조 분절을 정위 이식하는 APOL 방법은 발생 가능한 대부분의 기술적 문제를 방지할 수 있습니다. 하지만 이 방법은 자가 간과 이식편 모두의 광범위한 절제를 필요로 합니다.1998년, Erhart와 그의 연구팀은 halt라고 불리는 이소성 보조 간 이식을 시작했습니다. PVA라고 불리는 문맥-동맥 연결을 이용한 이 기술은 초기 임상에서 유망한 결과를 보여주었습니다. 본 연구진은 연구 목적으로 쥐 모델에서 혈류 조절 문맥-동맥 연결을 적용한 halt 기술을 개발했습니다. 본 영상에서는 이러한 새로운 실험적 기술을 상세히 설명합니다. 체중 250에서 350g 사이의 224마리 시젠릭(Syngen) 수컷 Louis 쥐를 대상으로 수술을 진행했습니다.공여자 및 수혜자 수술은 흡입 마취 하에 수행되었습니다. 산소 유량계 속도를 분당 1L로 설정하여 마취기에 연결된 플렉시글라스 박스 내에서 oph fluorine을 사용하여 동물의 전신 마취를 유도하였습니다. 기화기의 fluorine 농도는 5%로 설정하였습니다.마취 상태는 1.5%로 유지되었습니다. 모든 실험에 대해 지역 윤리 위원회의 승인을 받았으며, 동물 보호 지침에 따라 수행되었습니다. 이어지는 수술 과정에서, 우측 신동맥을 통해 문맥을 동맥화합니다.동맥화된門脈(Arterialized portal vein) 내의 혈류는 내경 0.3 mm, 길이 8 mm의 스텐트에 의해 조절됩니다. 예비 실험 결과, 0.3 mm 직경의 스텐트를 사용했을 때 동맥화된 門脈 내의 평균 혈류량이 생리학적 범위의 상한선 내에 유지되는 것으로 나타났습니다.간 미세순환은 반사 분광 기술인 OPS 이미징을 통해 시각화하며, 이를 통해 생체 내 간 미세순환을 실시간으로 관찰할 수 있습니다. 조영제를 사용하지 않고 생리식염수에 침전시킨 상태에서 프로브를 간 우엽 표면에 조심스럽게 배치합니다. 이때 간 실질을 압박하지 않는 것이 중요합니다.공여부 수술 과정이 정중선 개복술 이후에 먼저 시연됩니다. 이식편의 좌측엽 및 중앙엽은 Higgins가 기술한 방식대로 절제합니다. 여기에서는 간십십인대의 준비 과정을 볼 수 있습니다.소담관의 울혈과 확장을 유도하기 위해 먼저 담관을 결찰합니다. 위십이지장 정맥과 동맥을 결찰한 후 절단합니다. 그 다음으로 간동맥총(CIC trunk), 총간동맥, 좌위동맥 및 비동맥을 순차적으로 분리합니다.좌위동맥과 비동맥을 절단합니다. 여기 CIC 간동맥 기시부와 총간동맥이 보입니다. 충혈된 담관을 절개하고 20 gauge 스텐트를 삽입합니다.스텐트의 위치는 담관 시스템 전체의 배액을 보장해야 합니다. 담관은 스텐트의 원위부에서 절단합니다. 간하부 하대정맥 분절은 우신정맥 바로 위쪽에서 격리합니다.준비가 완료되고 복강동맥 상부의 대동맥을 결찰한 후의 모습을 확인하십시오.門脈(portal vein)을 클램프로 고정한 후 절개합니다. 이제 관류 카테터를 삽입하고 30 milliliters의 histidine tryptophan gito glu 용액으로 관류를 수행합니다.횡격막과 간상구정맥을 절개하여 혈액이 흘러나오게 합니다. 대동맥 패치와 함께 CIC 간동맥을 절제하고 히스티딘 트립토판 케토글루타레이트 용액으로 세척합니다. 간하구정맥을 우신정맥 바로 윗부분에서 절단합니다.그 다음, 직경 0.3 mm의 스텐트를 문맥에 배치하고 결찰사로 고정합니다. 스텐트 원위부에서 문맥을 절단합니다. 여기에서 담관, 문맥, 복강동맥 줄기, 간하대정맥을 확인할 수 있습니다.간상대정맥을 결찰한 후, 횡격막의 일부를 포함하여 절단합니다. 이식편을 적출하여 4°C의 histidine tryptophan ketoglutarate 용액이 담긴 플라스틱 백에 넣고 얼음 위에 보관합니다. 간하대정맥에 봉합사를 배치합니다. 다음으로 수혜자 수술 과정을 보여드립니다.개복 및 준비 후, 간하대정맥과 우측 신동맥을 먼저 분리합니다. 그 다음 요관을 결찰하고 절단합니다. 우측 신동맥의 기시부를 클램프로 차단한 후, 우측 신정맥을 결찰합니다.그 다음 양측 신혈관을 절단한 후 신절제술을 수행합니다. 이어 간하정맥의 근위부와 원위부를 클램핑한 후, 우측 신동맥을 단축하고 헤파린 식염수로 세척합니다. 우측 신정맥은 결찰 부위의 근위부에서 절단합니다.이러한 방식으로 간하 대정맥에 타원형의 내강을 형성합니다. 이식편을 원래의 간 아래에 배치합니다. 공여자의 간하 대정맥을 8-0 에틸렌 봉합사를 이용한 연속 봉합법으로 수혜자의 대정맥에 단단문합합니다.헤파린 식염수로 헹군 후, 문맥 내의 스텐트를 우측 신동맥으로 삽입합니다. 문맥과 신동맥을 두 군데 꿰매어 연결합니다. 내경 0.3 mm, 길이 8 mm의 스텐트를 사용하면 유입 속도가 조절되는 표준화된 흐름의 동정맥 문합이 가능합니다.재관류를 위해 연결 스텐트를 결찰사로 신동맥에 고정합니다. 먼저 동맥 클램프를 제거한 다음, 두 정맥 클램프를 제거합니다. 이제 간소엽의 세엽간 혈관에서 시작하여 동양혈관을 따라 이어져 간소엽의 중심정맥에 도달하는 재관류 시점의 미세혈류를 확인할 수 있습니다.이제 재관류된 이식편, 동맥화된 문맥 및 담관을 확인할 수 있습니다. 신하대동맥을 준비한 후 클램프로 고정하고 절개합니다. 대동맥 패치를 사용하여 대동맥과 복강동맥 간의 단단문합술(end-to-side anastomosis)을 10 O 에틸렌 연속 봉합사로 시행합니다.주머니끈 봉합(purse string suture)을 시행한 후, 십이지장 벽에 작은 절개를 가합니다. 그 다음 스텐트가 삽입된 담관을 십이지장 내로 도입하고 주머니끈 봉합사를 조입니다. 마지막으로 십이지장과 담관을 두 바늘의 봉합사로 단단히 함께 고정합니다.여기 급성 간부전을 모사하기 위해 부분 절제술을 시행한 자가 간과 재관류된 이식편을 볼 수 있습니다. 동물들에게는 수술 후 8~12시간마다 2일 동안 부프레노르핀을 피하 주사하였습니다.수술 전후 생존율은 90%였으며, 6주 생존율은 80%였습니다. 수술 후 첫 주 동안, 4마리의 쥐가 스텐트 이탈 및 담즙 누출로 인한 복막염으로 사망했습니다. 또한, 7마리의 쥐가 폐렴, 복강 내 농양 또는 장폐색으로 사망했습니다. 생존한 동물들의 전신 상태는 매우 양호했습니다.수술 6주 후, 간 합성 파라미터는 정상 범위 내에 있었습니다. 여기 보시는 것은 문맥 동맥을 이용한 이소성 보조 쥐 간 이식 6주 후의 모습입니다. 수술 6주 후, 자가 간이 재생되어 무게가 2.3 ± 0.8 g에서 9.8 ± 1 g으로 증가한 것을 확인할 수 있습니다.이 시점에서 GRAT는 위축되었으며, 간 무게는 3.3 ± 0.8 g에서 2.3 ± 0.8 g으로 감소했습니다. 중단 6주 후 hematoxylin and eosin 염색을 통한 조직병리학적 분석에서 두 간의 총 무게는 간 무게 대비 체중의 생리학적 비율 내에 있었습니다. 부종이나 지방 변성 없이 정상적인 간세포가 관찰되었습니다.모든 그래프에서 슬러지 형성으로 인한 담즙, 담관 및 담관염의 약간의 증식이 나타났습니다. 두 개의 그래프에서만 저등급 간세포 괴사 CTU가 관찰되었습니다. 내경 0.3 millimeters, 길이 8 millimeters의 스텐트를 사용하면 동맥화된 문맥의 재관류 후 평균 문맥 혈류량이 상위 생리학적 범위 내에 도달합니다.담즙 배액은 간 이식의 가장 취약한 부분입니다. 쥐 간 이식의 경우, 수혜 동물은 수술 후 초기 며칠 이내에 담즙 누출 및 복막염으로 인해 사망하는 경우가 많습니다. 본 연구에서는 스텐트, 퍼스트링 봉합사(per string suture) 및 누출과 이탈을 방지하기 위한 두 개의 추가 봉합을 이용한 결장 담도 문합술을 수행합니다.이 기법을 통해 담도 합병증은 4%로 감소했습니다. 본 연구에서는 자가 간의 부분 절제술을 시행하였습니다. 급성 간부전을 유도하기 위해 amond가 처음 기술한 이 방법을 사용했습니다. 간독성 약물을 사용하는 것과 달리, 이 방법은 표준화되어 있으며 다른 장기 시스템이나 이식편에 부작용을 일으키지 않습니다.정위 간 이식과 달리, 말기 간 단계가 없습니다. 이소성 간 이식 중에는 시간적 압박 없이 Anas를 수행할 수 있습니다. 또한, 이소성 위치에서는 움직이는 횡격막으로 인한 간섭이 없습니다.또한, 수혜자의 문맥을 클램핑하지 않으므로 소장, 비장, 췌장 및 위장의 정맥 울혈을 방지할 수 있습니다. 이러한 기법을 통해 우리는 혈류가 조절되는 문맥-동맥 이식술을 이용한 이소성 보조 쥐 간 이식에서 이식편의 형태 및 기능 측면에서 유망한 장기적 결과를 얻을 수 있었습니다. 문맥-동맥 이식술은 결함이 적고 배우기 쉬운 혁신적인 기법입니다.이 기술은 간 미세순환 기능 및 형태에 미치는 문맥, 동맥성 간 과관류 및 혈류 조절의 영향을 조사하는 데 적합합니다. 이 모델을 통해 간 간 경쟁 상황에서의 간 재생에 관한 향후 연구가 가능해집니다.

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연구

JoVE Journal

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의학

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