Name: 의 해부는 Xenopus laevis의 신경 크레스트 시험관 이식편 문화 또는 생체 이식 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2014-03-04T17:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 7 s
Description: 배우세요 Xenopus laevis 신경 크레스트 해부 및 시험관 내 배양 또는 생체 이식 기법을 통해 세포 이동과 분화 메커니즘을 연구하는 방법을. 이 프로토콜은 발달생물학 연구에 필수적인 도구를 제공합니다.

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저자는 도움이 토론과 문화원 퀴리의 동물 시설에 대한 피브로넥틴, 에릭 Theveneau에 이식편의 사진을 Adeline 돌리 감사합니다. CM은 지역 일 드 프랑스 (도멘 드 Interet 죄르 장대 줄기), 대학교 파리 수드 (아타 Temporaire 디부 Enseignement 엣 드 공들인), 그리고 직원은 국립 드 라 공들인의 박사 후 동료입니다. 이 작품은 대학교 파리 수드 (Attractivite 2011), 센터 내셔널 드 라 공들인 Scientifique (액션 Thematique 등 Incitative 쉬르 프로그램), 협회 부어 라 공들인 contre 르 암 그랜트 SFI20101201882, 리그 contre 르 암과 직원은 국립 드 라에 의해 투자되었다 공들인 (직원은 국립 드 라 공들인 프로그램 블랑).

실험은 과학적 목적 및 교체, 감소 및 정제 국제적으로 확립 된 원칙에 사용되는 동물의 보호에 관한 국가와 유럽 규정을 준수합니다. 1. 피브로넥틴 코팅 요리 (14)의 준비 <ol><li> 표준 플라스틱 페트리 접시 (Ø 40 X 11mm)로 1X 인산염 완충 생리 식염수 (PBS)에 희석하여 10 ㎎ / ㎖ 문화 등급 피브로넥틴의 피펫 500 ㎖. 1 시간 동안 37 ℃에서 배양한다. 참고 : 다음 영상에 유리 그릇 또는 유리 커버 슬립을 사용하는 경우, 100 ㎎ / ㎖의 fibronectin 솔루션을 사용합니다. </li><li> 1X PBS로 3 회 씻어. </li><li> 1X PBS/0.1 %의 소 혈청 알부민 (BSA)의 500 ㎖의 PBS를 교체합니다. 30 분 동안 37 ° C에서 알을 품다. </li><li> 1X PBS로 3 회 씻어. </li><li> 1X PBS와 함께 입력하고 (보통 24-48 시간 동안) 사용할 때까지 4 ° C에 보관하십시오. </li></ol> 2. NC 외식 해부 &lt;올&gt; <li> 준비 3 / 4 일반 양서류 중간 (NAM) (110 mM의 NaCl을 2 ㎜의 KCl, 1 ㎜ 중 Ca (NO 3) 2, 1 ㎜ 망초, 0.1 mM의 EDTA, 1 mM의 탄산 수소 나트륨, 0.2 배 PBS, 50 ㎎ / ㎖ ) 10,15을 겐타 마이신. 4 ℃에서 해부, 저장소에 대해 1 주일 이상 보관하지 마십시오 이전 NAM은 아가 로스 코팅 해부 접시 (아래)의 제조에 사용 할 수 있습니다. </li><li> 3 / 4 NAM 2 % 아가로 오스 10 ㎖로 코팅 해부 용 60mm 페트리 접시를 준비합니다. </li><li> 해부 도구를 수집 플라스틱 파스퇴르 피펫, 최고의 곤충 핀은 핀 홀더 (참고 자료 표 참조), (유리 파스퇴르 피펫 (16)의 끝 부분에 파라핀 눈썹 머리로 만든) &quot;눈썹 칼&quot;, 두 개의 미세에 장착 해부 집게, P1000 피펫 팁, 50 배율 8-40X와 양안 입체경, 광학 섬유 가이드 밝은 조명. 모든 해부 도구를 청결하게 유지해야한다, 각 실험 후, 증류수로 2 회 위스콘신 헹구어100 % 에탄올을 토륨 건조 할 수 있습니다. 멀리 먼지 저장합니다. </li><li> 거의 정상에 신선한 NAM과 해부 접시에 기입하십시오. </li><li> X를 얻 표준 절차 (10) 그들이 (Nieuwkoop와 페이버 발달 테이블 (17)에 따라) neurula 스테이지 (16)에 도달 할 때까지를 나이에 따라 배아를 laevis의. </li><li> 16 배아 플라스틱 파스퇴르 피펫을 사용하여 해부 접시에 무대를 놓습니다. </li><li> 양안 범위에서 이후의 모든 단계를 수행합니다. 포셉 두 쌍의 난황 막 제거합니다. 배아의 등 부분이 손상되지 않도록주의하십시오. </li><li> 태아가 해부를 시작하는 단계 17에 도달 할 때까지 기다립니다. 신경 문장이 명확하게 초기 단계는 대조적으로, 신경관 따로 설정되어 있기 때문에 스테이지 (17)가 적절하다. 단 17 일 후, 노스 캐롤라이나 마이그레이션 및 주변 중간 엽과 섞여서 시작합니다. </li><li> 유지하기 위해 배아에 대한 틈새 시장을 집게와 아가로 오스의 작은 구멍을 파해부 동안 그들. 하나의 배아 등의면을 위로 놓습니다. 참고 : 모델링 점토 대신 아가로 구멍을 파고 배아를 유지하는데 사용될 수있다. </li><li> 눈썹 칼과 곤충 핀 앞쪽에 신경 배의 측면 부분에 절개를합니다. 깊은 배아로도 이동하지 않도록주의 : 2 ~ 3 세포층 (! archenteron만큼 깊이에 도달하지 않음)을 극복하는 것을 목표로하고 있습니다. 전체적인 박리 과정에서 해부 조직이 X.시기 공기 - 액체 계면에 접촉 입력 할 수 없다 laevis의 배아 조직은 표면 장력에 의해 용해된다. </li><li> 신경의 추가 지느러미 부분의 제 2 평행 절개 동일한 장비를 사용하여 접어 만든다. </li><li> 필요한 경우, 90 °의 주위에 요리를 켭니다. 처음 두 절개의 후방 측에, 눈썹 칼과 곤충 핀 세 번째 수직 절개를합니다. NC는 측면, 외배엽의 색소 외부 층 아래 세포의 두꺼운 질량신경 튜브에. </li><li> 세 번째 절개의 가장자리에서 시작하여 기본 NC에서 색소 외배엽 층을 분리 눈썹 칼의 끝 부분을 사용합니다. </li><li> 세 번째 절개로 시작하는 NC 조직을 분리 눈썹 칼의면을 사용합니다. 기본 두부 중배엽 흰 동안 NC 조직이 아니라 회색이다. 조심스럽게 중배엽에서 NC를 구분합니다. </li><li> 광학 소포에서 전방으로 NC 조직을 분리하고, 이식편을 무료로이 수준에서 잘라. 현장 하이브리드 화에 의해 일부 외식에 snail2 식 (정식 NC 마커)를 검사하는 첫 번째 실험에 대한 제어로 추천합니다. </li></ol> 3. 피브로넥틴에 도금의 Explants <ol><li> 강제로 피브로넥틴 코팅 접시 수정 Danilchick 중간 (MDM, 염화나트륨 53 밀리미터, Na2CO 5 mm의 K 글루 콘 산염 4.5 mm의 나 글루 콘 산염 32 밀리미터, 망초 1 ㎜, 염화칼슘 1 ㎜, BSA 0.1 %로, 산도를 조정 1 M Bicine 8.3에 <sup&gt; 18). </li><li> P1000 피펫을 사용하여 피브로넥틴 - 코팅 접시에 외식을 전송합니다. 외식 공기 - 액체 인터페이스를 터치 할 수 있도록하지 마십시오. 먼저, 다음 몇 가지 액체를 다시 외식 후, 끝으로 몇 가지 액체를 피펫. 피브로넥틴 - 코팅 접시에 외식을 전송하는 동안 끝으로 모든 공기를 허용하지 않습니다. 끝이 피브로넥틴 코팅 접시의 액체 내부되면, 외식 천천히 중력에 의해 아래로 가자, 또는 매우 조심스럽게 밀어 넣습니다. 너무 빨리 외식를 배출하지 마십시오. </li><li> 눈썹 칼을 사용하여 접시에 10-30 외식을 놓습니다. 다음 영상에 적합하지 않은 접시의 측면을, 피. </li><li> 외식이 (대략 15 ~ 30 분 소요) 피브로넥틴에 부착 할 때까지 요리를 움직이지 않도록하십시오. 필요한 경우, 아주 조심스럽게 접시를 이동합니다. </li><li> (온도 차트는 17 참조 15 ~ 20 ° C의 사이) 냉장 인큐베이터에서 접시를 놓습니다. 15 ° C에 배치하면, 세포가 아칸소전자 일반적으로 효율적으로 마이그레이션 및 배양 6 시간 후에 산란 (이 타이밍 실험 사이에 차이가있을 수 있습니다). </li></ol> 4. 호스트 태아로의 Explants를 접목 <ol><li> 거친 집게를 사용하여 매우 작은 조각으로 미세 유리 커버 슬립을 잘라. 조각의 크기는 약 1.5 mm 2 있어야합니다. 집게를 사용하여 3 / 4 NAM 또는 PBS를 함유하는 페트리 접시로 매 담금. </li><li> 호스트 배아의 제조 : 난황 막 제거하고 NC 해부 동안 호스트 배아를 손상시키지 않도록 특별히주의) 3의 설명에 따라 3 / 4 NAM에 호스트 NC를 해부. 도너 배아 해부 동안 호스트 배아 부분적으로 치유하자 : 티슈 장력 절제의 크기를 증가시키는 경향이있다. </li><li> 프로토콜 3에 설명 된대로 다른 아가 로스 코팅 접시 또는 동일한 접시의 다른 부분에서 도너 배아로부터 NC 이식편을 해부. 의 설명에 따라주의하여 호스트를 포함하는 접시에 NC 이식을 전송프로토콜 3. </li><li> 즉시 집게를 사용하여 호스트 절제 영역에 NC 이식편을 배치합니다. 이식편 부분적으로 연결해야합니다. 장소에 이식을 유지하기 위해 이식 배아에 유리 커버 슬립의 조각을 넣어. 그것은 손상을 방지하기 위해 배아보다 큰 유리 조각을 선택합니다. 배아는 평평 조금있을 것입니다. </li><li> 적어도 15 ~ 20 분 동안 기다린 후 부드럽게 커버 슬립을 제거합니다. 배아가 다른 10 분 동안 복구 할 수 조심스럽게 플라스틱 파스퇴르 피펫을 사용하여, 3 / 4 NAM 가득 깨끗한 접시에 피펫. </li></ol>

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<li>Kerney, R., Gross, J. B., Hanken, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Runx2+is+essential+for+larval+hyobranchial+cartilage+formation+in+Xenopus+laevis%5BTitle%5D)+AND+%22Dev.+Dyn%22%5BJournal%5D)">Runx2 is essential for larval hyobranchial cartilage formation in Xenopus laevis.</a> Dev. Dyn. 236 (6), 1650-1662 (2007).</li>
<li>Yan, C. Y. I., Skourides, P., Chang, C., Samba Brivanlou, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((a+Xenopus+hnRNP+expressed+in+neural+and+neural+crest+tissues%5BTitle%5D)+AND+%22Dev.+Dyn%22%5BJournal%5D)">a Xenopus hnRNP expressed in neural and neural crest tissues.</a> Dev. Dyn. 238 (1), 204-209 (2009).</li>
<li>Acloque, H., Adams, M. S., Fishwick, K., Bronner-Fraser, M., Nieto, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Epithelial-mesenchymal+transitions%3A+the+importance+of+changing+cell+state+in+development+and+disease%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Clin.+Invest%22%5BJournal%5D)">Epithelial-mesenchymal transitions: the importance of changing cell state in development and disease.</a> J. Clin. Invest. 119 (6), 1438-1449 (2009).</li>
</ol>

저자가 공개하는 게 없다.

이 프로토콜은 X를 laevis의 태아에 premigratory 두개골 NC를 이식편하는 쉬운 방법을 설명합니다. 이러한 실험에 사용 된 배아는 견고하고 잘 치료해야합니다. 건강에 해로운 배아의 배치를 폐기하십시오. 또한, 그리고 나중에 17에 신경 능선을 절제하기 위해, (12 18 ~ 20 ° C)에서 다양한 온도에서 배아를 성장. 단 17 일 후, 신경 문장은 두개의 중배엽과 혼합 될 수 있으며 완전히 제거 할 수 없습니다. Xenopus의 조직이 빠르게 치유하고 다른 조직에 자신의 접착력을 풀어. 그것은 빠른 속도로 일을하고 즉시이 기증자로부터 적출 될 때 호스트에 신경 능선 외식을 배치하는 것이 중요합니다. 생체 외 실험에 관하여, 피브로넥틴 배양 접시는 며칠 후 세균이나 곰팡이에 오염받을 수 있습니다. 가능한 한 자주로 항생제를 청소 또는 살균 물질 및 솔루션을 사용합니다. <p class="jove_conte...

신경 능선 (NC)는 척추 동물의 배아에서 neurulation의 끝 부분에 신경 튜브에서 나온다 과도 배아 세포 집단이다. NC 사양을 제어하는​​ 신호 유전 이벤트는 초기 낭 배기로 시작합니다. NC는 주변 등의 조직으로부터의 신호에 의해 신경과 비 신경 외배엽의 경계에 지정됩니다. neurulation의 끝에서, NC 세포는 상피 - 투 - 중간 엽 전이 (EMT)를 거쳐 안내 신호를 주변에 응답하여 틀에 박힌 경로 다음 배아에서 광범위하게 마이그레이션 할 수 있습니다. 그들의 최종 목적지에 도달하면, 그들은 파생 상품, 예를 들면 신경 세포, 아교, 뼈, 연골, 그리고 색소 세포 1-5의 광대 한 배열로 분화. 때문에 많은 종류의 세포와 배아 조직, NC 세포 개발의 모든 단계에서의 결함, 유도에서 최종 분화에 기여으로, neurocristopathies 6이라는 선천성 증후군의 원인이 될 수 있습니다. E사양, EMT, 이주 및 분화 - - 다른 단계에서 개발하고 NC의 xperimental 조작 neurocristopathies에 대한 우리의 이해를 개선하고 잠재적 인 치료 전략의 디자인을 허용합니다. 는 Xenopus laevis의 배아는 NC의 개발을 연구하는 선택의 모델입니다. 배아의 큰 숫자는 쉽게 구할 수 있고, 외부 수정 개발의 첫 번째 단계에 액세스 할 수 있습니다. 많은 도구를 실험적으로 X를 조작 할 수 있습니다 배아 발달을 laevis의. 이득의 기능과 최저 유전자는 초기 blastulas의 개별 세포를 미세 주입에 의해 수행하기 쉽다. 배아 조직을 체외 재 연결 7-11 또는 백 접목 분석 (12, 13)에 절단 할 수 있습니다. 이 프로토콜에서는, 우리는 X에서 premigratory 두개골 NC를 해부하는 방법에 대해 설명합니다 이주 전에 후반 neurulas을 laevis의. 이러한 외식은 피브로넥틴 도금 파이프에 배양 할 수있다의 이동과 분화를 연구하는 D 판은 체외 실험 조건에서 제어. NC 외식은 생체 내에서 자신의 이동과 분화를 연구하는 정상 또는 조작 호스트 배아에 이식 할 수 있습니다.

<table><tbody><tr><td>소 플라즈마에서 추출한 Fibronectin</td><td>Sigma</td><td>F4759-1MG</td><td></td></tr><tr><td>소 혈청 알부민, Fraction V</td><td>Euromedex</td><td>04-100-811-C</td><td>저품질 등급이 이 용도에 적합할 수 있습니다</td></tr>. <tr><td>스테인리스 스틸 곤충 핀, 크기 000</td><td>FST</td><td>26001</td><td></td></tr><tr><td>Dumont #5 펜치 0.05 mm x 0.02 mm</td><td>FST</td><td>11252-20</td><td></td></tr></tbody></table>

의 해부<em&gt;는 xenopus laevis의</em&gt; 신경 크레스트<em&gt; 시험관</em&gt; 이식편 문화 또는<em&gt; 생체</em&gt; 이식

Dissection of Xenopus laevis Neural Crest for in vitro Explant Culture or in vivo Transplantation

신경 능선 (NC)이 neurulation의 끝에서 상피 - 투 - 중간 엽 전이 (EMT)를 거쳐 임시 지느러미 신경 튜브의 세포 집단이다, 다양한 기관으로 광범위하게 마이그레이션 및 파생 상품의 많은 종류의 (신경 교세포로 분화 연골과 뼈, 색소 및 내분비 세포). 이 프로토콜에서는, 우리는 생체 내 및 시험 관내에서 NC의 개발을 연구하기 위하여는 Xenopus laevis의 태아에서 premigratory 두개골 NC를 해부하는 방법에 대해 설명합니다. 개구리 모델은 초기 개발을 연구하는 많은 장점을 제공하고, 풍부한 일괄 배아 생체 이득과 기능 전략의 손실 전에 기증자 및 / 또는 호스트 배아에서 NC의 해부 유전자 발현의 조작을 허용, 신속하게 개발, 사용할 수 있습니다. NC 이식편은 피브로넥틴에 도금 및 시험 관내 연구를 위해 사용될 수있다. 이들은 무 혈청 한정 배지에서 몇 일 동안 배양 될 수있다. 우리는 또한 NC 외식을 다시 이식하는 방법에 대해 설명합니다생체 내에서 NC의 이동과 분화를 연구하는 호스트 배아에.

피브로넥틴에 도금 할 때, 신경 능선 외식 신속하게 (15 ~ 30 분)을 첨부하여 이식편은 2 시간 (그림 1A)에서 플랫 퍼집니다. 3-6 시간의 세포가 흩어 시작하면. 15 ° C에서 24 시간, 많은 세포가 떨어져 이식편 (그림 1B 및 1C)에서 이주하기 시작했다. 노른자는 위상차 (그림 1B)에서 세포가 매우 밝은 있습니다. 세포 돌기 (filopodes 및 lamellipodes)은 액틴 세포 골격 (그림 1C)의 염색을 Phalloidin의 후 명확하게 볼 수 있습니다. 동소 이식 실험의 경우, 기증자의 배아는 레이블이없는 호스트 배아에 이식 세포를 수행하기 위해 GFP mRNA를 주사했다. 두개골 NC는 호스트의 한면에 절제되었다; 30 ~ 60 분 수술 후 이식은 절제된 호스트 두개골 NC (그...

이 프로토콜은는 Xenopus laevis의의 neurulas에서 premigratory 두개골 신경 능선 (NC)를 해부하는 방법에 대해 설명합니다. 이러한 외식은 피브로넥틴 및 체외 배양에 도금, 또는 다시 호스트 배아에 이식 할 수 있습니다. 이 기술은 NC 상피 - 투 - 중간 엽 이행, 이주 및 분화의 메커니즘을 연구 할 수 있습니다.

의 해부<em&gt;는 Xenopus laevis의</em&gt; 신경 크레스트<em&gt; 시험관</em&gt; 이식편 문화 또는<em&gt; 생체</em&gt; 이식

The neural crest (NC) is a transient dorsal neural tube cell population that undergoes an epithelium-to-mesenchyme transition (EMT) at the end of ...

다음 절차의 전반적인 목표는 opus Lavis 신경능 세포의 이동을 추적하는 것입니다. 이는 먼저 신경 단계의 배아에서 신경능을 박리함으로써 수행됩니다. 두 번째 단계에서는 in vitro 세포 이동을 연구하기 위해 박리물을 피브로넥틴이 코팅된 배양 접시에 도말합니다.또는 호스트 배아에서 신경능(neural crest)을 제거한 후, 이식편을 다시 이식하여 체내(in vivo)에서의 이동을 추적할 수 있습니다. 궁극적으로 opus lavis 발달 과정에서 배아 신경능 세포 이동의 기여도를 조사할 수 있습니다. 일반적으로 초기 배아는 매우 취약하기 때문에 이 방법에 익숙하지 않은 연구자들은 어려움을 겪을 수 있습니다.신경능(neural crest)은 상당히 적은 수의 세포 집단이므로, 직접 해부 도구를 제작해야 합니다. 이 프로토콜의 시각적 시연은 매우 중요합니다. 신경능을 깨끗하게 제거하기 위해 해부 과정의 각 요소를 최적화하였습니다.실험 당일에 약 10 mL의 2% agar로 코팅된 60 mm 해부 접시를 준비하고, 정상 양서류 배지(normal amphibian medium) 또는 NAM을 접시 상단 부근까지 3/4 정도 채웁니다. 그 후 플라스틱 파스퇴르 피펫을 사용하여 16단계의 Xenopus laevis 배아를 접시로 옮기고, 두 개의 핀셋을 사용하여 접시를 실체 현미경 아래에 배치합니다. 배아의 배측 부위가 손상되지 않도록 주의하며 배아에서 백색막(vitelline membrane)을 제거합니다.그 다음, 배아가 적절한 발달 단계인 17단계에 도달할 때까지 실온에서 배양합니다. 해부 과정 중 배아를 고정할 수 있도록 디쉬 바닥의 아가로스에 작은 구멍을 파고, 배아의 등쪽이 위로 향하게 하여 구멍 안에 넣습니다. 이어서 눈썹 칼과 곤충 핀을 사용하여 신경배주(neural fold)의 가측 부위에서 2~3개 세포층을 관통하도록 절개합니다.그다음 신경절(neural fold)의 더 등쪽 부분에 두 번째 내측 평행 절개를 가합니다. 필요한 경우 접시를 90도 회전시킨 후, 처음 두 절개 부위의 후측에 세 번째 수직 절개를 가합니다. 신경능(neural crest)은 신경관의 외측이자 흰색의 두부 중배엽(cephalic mesoderm) 상부에 위치하며, 외배엽의 색소층 아래에 있는 두꺼운 회색 세포 덩어리입니다.신경능(neural crest)을 확인한 후, 눈썹 칼 끝을 사용하여 세 번째 절개 가장자리부터

dissection-xenopus-laevis-neural-crest-for-vitro-explant-culture-or

Research

연구

JoVE Journal

Biology

생물학

에서 신경 Explant의 문화<em&gt; Xenopus laevis</em

두개골 mesenchyme 가능성이 신경 주름 상승을위한 원동력을 제공 극적인 morphogenic의 움직임을...

두개골 Mesenchyme의 셀룰러 행동을 평가하기위한 Explant 분석

Xenopus laevis는 세포의 운명 사양 및 기본 세포 배양의 개별 망막 세포의 생리 기능을 연구하기위한 이상적인 모델 시스템을 제공합니다. 여기 망막 조직을 해부하고 칼슘 활동 이미징 및 현장 하이브리드 화에 의해 분석 기본 셀 문화를 생성하는 기법을 제시한다.

의 해부, 문화, 및 분석<em&gt; Xenopus laevis</em&gt; 배아 망막 조직

여기에서 우리는 필요한 도구를...

생체 마우스 Neuroepithelium에서 단일 세포 분열의 라이브 영상

이 비디오는 병아리 배아의 중뇌 영역에서 두개골 신경 주름을 분리하는 기술을 보여줍니다. 신경 주름의 상세한 해부 과정, 그 위치 및 피브로넥틴으로 코팅된 커버슬립에 부착된 후 신경 주름에서 신경능선 세포의 이동을 관찰합니다.

신경 능선 세포 배양을 위해 병아리 배아에서 두개골 신경 주름 분리

이 프로토콜은 관련 개선 explant 절차를...

예 자궁 Electroporation 및 전체 반구의 Explants : 초기 두피 개발 연구 간단한 실험 방법

Xenopus의 사이에 얼굴 조직을 "극단적 인 전방 도메인"이식에 대한 기술은 배아가 개발 한 laevis의. 조직은 두개 안면 개발 및 얼굴 영역 사이의 상호 작용을 신호에 대한 지역의 요구 사항의 연구를 허용, 또 다른 한개로 1 유전자 발현 배경에서 이동할 수 있습니다.

의 얼굴 이식<em&gt;는 Xenopus laevis의</em&gt; 태아

제노푸스 배아에서 배반구의 지붕에 있는 세포는 만능이며 다양한 조직을 생성하도록 프로그래밍할 수 있습니다. 여기에서는 양서류 배반구 지붕 외식을 분석 시스템으로 사용하여 초기 신경 발달의 주요 생체 내 및 체외 기능을 조사하는 프로토콜에 대해 설명합니다.

줄기 세포처럼<em&gt; Xenopus의</em&gt; 배아의 Explants는 초기 신경 발달의 특징을 연구하는<em&gt; 체외</em&gt; 및<em&gt; 생체</em

상피에서 중간엽으로의 전이(EMT)는 암이 침습적이 될 수 있도록 합니다. EMT를 조사하기 위해 혈청과 효소가 없는 신경줄기세포(NSC) 기반 체외 모델을 설명합니다. 이 표준화된 시스템을 통해 세포 이동, 유전자 및 단백질 발현에 대한 정량적 및 정성적 평가를 수행할 수 있습니다. 이 모델은 신약 개발에 적합합니다.

약 발견에 적합 EMT 조사를위한 효소 - 및 혈청이없는 신경 줄기 세포 배양 모델

이 프로토콜은 주로 세포 이동 연구를 위해 마우스 모델에서 두개골 신경 문장 세포의 해부 및 배양을 설명합니다. 우리는 사용된 살아있는 화상 진찰 기술 및 속도 및 세포 모양 변경의 분석을 기술합니다.

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우리는 형광 칼슘 화상 진찰을 계면 혼성화에서 결합하는 2개의 부분 프로토콜을 제시합니다, 실험자가 단하나 세포 수준에 유전자 발현 단면도와 칼슘 활동의 패턴을 상호 연관시키는 것을 허용하.

제노푸스 라에비스의 신경 전구체 특성화를 위한 형광 칼슘 이미징 및 후속 시토 혼성화

배우세요 Xenopus laevis 신경 크레스트 해부 및 시험관 내 배양 또는 생체 이식 기법을 통해 세포 이동과 분화 메커니즘을 연구하는 방법을. 이 프로토콜은 발달생물학 연구에 필수적인 도구를 제공합니다.

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