쥐과 동 소성 방광 이종 이식의 최소 침습 설립

이 절차의 전반적인 목표는 빠르고 정확하며 최소 침습적 방식으로 정형소 방광암 이종이식편을 만드는 것입니다. 이는 먼저 Matrigel에서 특정 종양 세포주와 종양 세포의 현탁액을 확장함으로써 달성됩니다. 다음으로, 동물을 이미징 플랫폼에 장착하고 방광을 초음파로 시각화합니다.

그런 다음 방광의 점막층과 근육층을 식염수 주사로 분리합니다. 마지막으로, 종양 세포 마트리겔 현탁액이 인공적으로 생성된 이 공간에 주입됩니다. 궁극적으로 초음파 영상과 생물 발광을 통해 종양 성장을 보여주는 결과를 얻을 수 있습니다.

1차 이종이식편 접종을 위한 개복술 사용과 같은 다른 기존 방법에 비해 이 기술의 주요 장점은 이 접근 방식이 빠르고 정확하며 최소 침습적이라는 것입니다. 이러한 기술의 의미는 방광암의 진단 및 치료로 확장되는데, 이는 자동 이종이식편이 새로운 치료법의 전임상 연구를 위한 황금 표준이기 때문입니다. 주입 단계는 배우기가 매우 어렵고 물이 매우 희박하기 때문에 이 방법을 시각적으로 시연하는 것이 중요합니다.

이고르 모스카(Igor Mosca)는 연구 조교로, 볼프강 예거(Wolfgang Yeager)는 박사 후 연구원으로 일하고 있습니다. 둘 다 비뇨기과 전문의입니다 각각의 인간 방광암 세포주의 정체를 확인한 후. DNA 지문 채취를 통한 이 연구를 위해 반딧불이 루시퍼라제 유전자를 운반하는 렌티바이러스 구조체를 사용하여 세포주를 transfection하는 이종 이식 종양의 생물 발광 성장 분석을 수행합니다.

절차를 시작할 준비가 되면 기존 세포주를 확장하기 위해 10%FBS와 함께 DMEM을 해동 및 사용하고 가습된 5%CO2 대기에서 섭씨 37도에서 배양합니다. 해동 후에 주입을 위한 세포 현탁액을 준비하기 위하여는, matrigel, 및 얼음 트립신 눈, 70%confluence 세포에 유지하고 중단하기 위하여 정상적인 성장 매체를 이용하고, 그 후에 세포를 세고 5 분 동안 200 시간 G에 현탁액을 회전시키십시오. 상등액을 제거한 후 동일한 부피의 D-M-E-M-F-B-S 및 MATRIGEL을 적당량 첨가하여 동물당 40마이크로리터의 부피를 주입하기 위한 원하는 세포 농도에 도달합니다.

잘 섞고 모든 종류의 평평하고 단단한 플라스틱 재료에서 기포가 생성되지 않도록 하십시오. 방광 안정 장치를 자르고 스트랩을 주의 깊게 검사하고 마우스에 적용하기 전에 날카로운 모서리를 제거하십시오. 암컷 쥐를 산소에 3% 이소플루란으로 마취하고 발가락 꼬집기를 수행한 후.

적절한 진정을 위해 소동물 이미징 플랫폼의 가열 이미징 테이블에 동물을 장착하고 고무 밴드로 활력 징후를 지속적으로 모니터링합니다. 하지를 고정하고 0.5% 클로르헥시딘 글루코네이트를 사용하여 복부를 소독한 후 멸균 면 팁을 사용하여 피부를 닦습니다. 다음으로, 방광 안정화 스트랩을 사용하여 방광을 고정시켜 벽내 주사 중에 방광이 회피되지 않도록 합니다.

그런 다음 멸균 초음파 젤을 하복부에 바릅니다. 초음파 스캔을 천천히 진행하고 피부로 향하여 초음파 화면에서 방광을 시각화합니다. 방광이 비어 있는 경우 경요도 24 게이지 혈관 카테터에 50마이크로리터의 따뜻한 PBS를 사용하여 방광 벽층을 분리하기 위해 채웁니다.

PBS로 채워진 1.0ml 주사기를 30게이지 3/4인치 바늘에 주사기 클램프에 연결하여 시작합니다. 바늘을 치골 바로 위의 피부를 향해 놓습니다. 30-45도 각도로 초음파 화면에서 바늘을 감지한 후 피부와 복벽 근육을 천천히 천공합니다.

그런 다음 바늘의 경사를 후방을 향하도록 180도 회전하고 점막을 관통하지 않고 바늘 끝을 방광 벽에 삽입합니다. 그런 다음 인공 공간을 만들기 위해 바늘을 빼내기 전에 근육층과 점막 사이에 50마이크로리터의 PBS를 천천히 주입합니다. 방광암 세포를 주입하려면 암세포 마트리겔 현탁액으로 채워진 두 번째 1.0ml 주사기와 30게이지 3/4인치 바늘을 주사기 클램프에 부착합니다.

바늘 끝을 PBS가 채워진 공간으로 안내합니다. 방금 만들어서 40 마이크로 리터의 서스펜션을 공간에 주입합니다. 그런 다음 이미징 플랫폼에서 마우스를 분리한 후 바늘을 빼냅니다.

지속적인 모니터링 하에 따뜻하고 편안한 환경에 보관하십시오. 의식을 되찾고 정상적인 보행을 한 후 동물을 집 우리에 다시 넣으십시오. 3개의 서로 다른 종양 세포주에 대한 교내 주사를 50마리의 동물에서 3일 연속으로 초음파 유도 하에 수행했습니다.

접종은 효율적으로 수행되었으며 중재술 내 또는 중재 후 합병증과 관련이 없었습니다. 종양 성장의 모니터링은 초음파 영상과 생물 발광에 의해 수행되었습니다. 3일째에는 50마리 동물 모두의 방광 전방에서 초음파를 통해 종양을 검출할 수 있었으며, 생쥐의 98%가 UC 접종 후 추적 기간 동안 지속적인 종양 성장을 보였습니다. 3.

루크(Luke) 한 마리는 복강내 종양 파종(intraperitone tumor dissemiation)을 일으켰고, 두 번째 동물에서 7일째 후에 종양이 뒤얽혔다. 이것은 uc 접종 후 이 새로운 기술로 접종된 첫 번째 마우스 그룹이었습니다. 3. 누가복음, 누가복음 하나, 그리고 uc.

13 누가복음. 생쥐는 각각 24일, 28일, 37일에 희생되었습니다. 이종이식 종양을 채취하여 h 및 d 절편을 통해 검사했습니다.

모든 종양은 근육 침습성이었고 일부는 내장 지방으로 침투했으나 인접 장기로의 침습은 관찰되지 않았다.uc의 60%, 13 Luke, 그리고 uc의 20%. 3개의 루크 종양 보유 마우스에서 후복막 림프절 전이가 발생했으며, 이는 h 및 e 염색으로 확인되었습니다.

이 기술은 숙달되면 3분 안에 완료할 수 있습니다. 초음파 영상에 대한 숙지는 이 절차를 수행하기 위한 전제 조건입니다.이러한 방식으로 종양을 접종한 후 초음파를 통해 시간 경과에 따른 종양 성장을 모니터링할 수 있을 뿐만 아니라 미세 기포를 사용한 종양 관류를 볼 수 있습니다. 이를 통해 새로운 실험제로 종양내 주사를 수행할 수도 있습니다.