Name: 인간 답게 된 마우스 모델은 미세 혈관을 대상으로 세균 감염을 연구하는 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2014-04-01T15:45:00.000+00:00
Duration: 11 min 40 s
Description: 학습하세요 Neisseria meningitidis가 인간 혈관에 감염되는 메커니즘을 면역결핍 마우스에 인간 피부를 이식한 휴머나이즈드 마우스 모델을 사용하여 연구하는 방법을. 이 기법은 임상 병리학 관찰에 활용됩니다.

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저자는 원고의 중요한 읽기 Dumenil 연구소의 모든 구성원, 특히 실케 실바에게 감사의 말씀을 전합니다. HOPITAL Europeen에서 조르쥬 퐁피두 (HEGP), 박사 데이비드 Maladry의 수술 부서. 마이클 Hivelin 박사 패트릭 Bruneval, HEGP에서 병리학 교실. 엘리자베스 HUC 이끄는 PARCC의 동물 시설. 이 작품은 다음과 부여 기관에 의해 지원되었다 : 마리 퀴리 IEF 교제 없음. 273223 (KM), INSERM에서 ATIP-Avenir에서 그랜트, CODDIM 장비 보조금 (일 드 프랑스 지역), FRM 장비 부여, 우수 컨소시엄의 IBEID 연구소 (매그 라 공들인 médicale을 부어), ANR 부여 &quot;(직원은 국립 라 공들인을 부어) 버그 인 흐름 &quot;. 출자자는 연구 설계, 데이터 수집 및 분석, 게시 할 수있는 의사 결정, 또는 원고의 준비에 역할을했다.

1. 위험 및 권한 <ol><li> 지역 윤리위원회는 모든 동물 프로토콜을 승인해야합니다.이 프로토콜은 프랑스와 유럽 실험 동물의 관리 및 사용에 대한 규정 (Décrets 87-848, 2001-464, 2001-486과 2001-131에 의해 설립 된 지침에 따라 실시되었다 유럽 ​​지침 2010/63/UE)과 지역 윤리위원회의 프랑스위원회 (CCT) D&#39; ETHIQUE EN MATIERE 디부 실험 ANIMALE, 대학교 파리 데카르트, 파리, 승인. 아니오 : CEEA34.GD.002.11 없습니다. </li><li> 인간의 피부를 위해, 기록 정보를 환자의 동의를 얻었다 모든 절차가 수행 된 프랑스 국립 지침에 따라 로컬 윤리위원회,위원회 (CCT) D&#39; 평가 ETHIQUE 드 난 INSERM IRB 00003888 FWA 00005881, 파리, 프랑스의 의견에 의해 승인 : 11-048 . </li><li> N.의 수막염은 잠재적으로 유해한 인간의 병원체이며, ORGA를 처리 할 때 필요한 모든 예방 조치를 수행해야합니다커니즘. 주의 사항은 예방 접종 및 바이오 안전성 수준이 조건에서 작업이 (가) 있습니다. </li></ol> 2. 피부 이식 <ol><li> 가능한 한 시간을 접목에 가까운 인간의 피부를 수집합니다. 이 작품의 피부의 대부분은 복부 영역을 포함하는 성형 수술 작업에서 비롯됩니다. 유방, 다리, 심지어 얼굴과 같은 다른 소스의 성공과 함께 사용되었다. </li><li> 70 % EtOH로 피부 표면을 청소하고, 바람직하게는 흐름 후드 아래, 잘 청소 표면에 평평하게 거짓말을하여 인간의 피부 샘플을 준비합니다. </li><li> 프리셋 두께 dermatome을 사용 피부 위에서 200-400 μm의 슬라이스 조각. </li><li> 단기 저장을위한 10 %의 혈청 (3-12 시간 즉시 또는 DMEM에서 4 ° C에 접목하면 무결성 피부 조각을 확인하고 2cm X 2cm 사각형으로 그들을 잘라, 다음 (가의 양이온없이) PBS에 배치 ). </li><li> 케타민 (100 ㎎ / ㎏)과 자일 라진 (10 ㎎ / ㎏) 인제 6-8 주 이전 SCID.bg 마우스 (약 20 g)을 마취시키다cted의 IP </li><li> 쥐가 마취되면, 발가락 핀치, 고통의 반사를 설정하기위한 표준 방법을 수행하여 통증 반응을 확인합니다. 각막 건조를 방지하고 이식이 배치됩니다 어깨 뒤에 동물의 좌측 면도 눈에 젤을 적용합니다. 절차 전반에 걸쳐 열 패드에서 마우스를 따뜻하게 유지합니다. </li><li> 수술을 위해 마우스를 준비하고 후, 70 % EtOH로 면도 영역을 청소합니다. </li><li> 이식 사이트 (Tronothane)에 국소 국소 마취제를 적용하고 신중하게 곡선 가위와 마우스의 피부의 표면 층을 제거하여 이식 사이트를 준비하고 있습니다. 기본이되는 혈관을 방해하지 않도록주의하십시오. </li><li> 인간의 피부 조각의 면적보다 약간 작은 면적의 피부를 제거합니다. </li><li> PBS (또는 DMEM)에서 피부 조각을 제거하고 이식 침대에 배치, 표피면이 위를 향 보장한다. 단계 2.8-2.10는 이식 침대가 건조하지 않는 보장, 가능한 한 빨리 수행되어야한다. </li><li> 한 모서리를 맞 춥니 다또는 조직 접착제로 가장자리와 수정. 조심스럽게 가장자리 주위 조직 접착제의 작은 금액을 배치, 이식 침대에 피부 조각의 나머지 부분을 맞습니다. 항상 크기로 인간의 피부 손질보다는 이식 침대가 더 큰합니다. </li><li> 마우스 피부가 매우 유연하기 때문에 이식 침대에 너무 꽉 피부를 잡아 당기지 마십시오. </li><li> 이식 각 모서리에있는 조직 접착제로 고정되어 있는지 확인합니다. </li><li> 요오드 용액으로 영역을 청소합니다. </li><li> 이식에 쿠션 지역에 반창고를 적용합니다. 반창고는 회사 그러나 단단하고 동물의 호흡이 영향을받지되어 있는지 확인합니다. </li><li> 드레싱 테이프 반창고를 수정. </li><li> 동물이 따뜻한 표면에 복구 할 수 있습니다. </li><li> 일단 깨어, 그 케이지에 동물을 반환합니다. 동물은 2 ~ 3 당 케이지를 보관되어 있습니다. </li><li> 통증이나 고통의 징후를 복구하는 동안 정기적으로 쥐를 확인합니다. 10-14일 이식 후 이식을 방해하지 않도록주의하고, 반창고를 제거합니다. 우리의 경험에서 수술 후 통증은 미니입니다말. 그럼에도 불구하고 동물은 수술 후 몇 일에 특히 매일 모니터링해야합니다. 통증이나 고통에 대한 기준은 다음과 같다. <ul><li> 10 % 이상의 체중 감소 </li><li> 외모, 모피, 꼽추 위치, 눈 </li><li> 증가 된 호흡이나 심장 요금 </li><li> 감소 또는 비정상적인 움직임. </li><li> 체온 상승 </li><li> 경우에 고통의 흔적이 발견 paracetamole은 (300 ㎎ / ㎏, 매 4 시간) 경구 투여한다. 동물 애호 엔드 포인트는 엄격하게 통증이 지속되는 경우에 부착되어 있습니다. </li></ul></li><li> 수술이 부드러운 피부를 유지하기 위해 2-3 일마다 베이비 오일을 적용 건조 보인다면. </li><li> 이식은 실험 이십일일 포스트 이식을위한 준비가되어 있습니다. </li></ol> 3. 감염 <ol><li> 감염 전날, 적절한 항생제 GCB의 한천 플레이트에 줄무늬에 의해 균주를 준비합니다. 5 % CO 2에서 37 ° C에서 하룻밤 성장. </li><li> 박테리아 준비 <ol&gt; <li> Reinoculate의 OD 600 0.05 ~ 10 %의 혈청 인간의 내피 세포의 SFM 매체의 5 ㎖의 세균. </li><li> 약 OD 600 0.1 세균의 밀도까지 인큐베이터에서 2 시간 느슨한 뚜껑 (5 % CO 2에서 37 ℃), 진탕 동안 품어. </li><li> 3 분 15,000 RPM의 박테리아를 원심 분리기. </li><li> PBS에 뜨는에 resuspend을 제거한 다음 다시 원심 분리. </li><li> 두 번 세척 단계 (2.2.4-2.2.5)를 반복합니다. </li><li> PBS에서 박테리아 펠렛을 재현 탁. </li><li> OD 600을 측정합니다. </li><li> OD 600 0.1 (10 8 CFU / ㎖), 또는 OD 600 1.0 (10 9 CFU / ㎖) 하나의 문화를합니다. 이 알려진 농도에서 10 7 CFU / ml로 희석. 가능한 분사 시간에 가까운 박테리아를 준비하려고합니다. </li></ol></li><li> 마우스 <ol><li> 마우스의 무게를. </li><li> 케타민 (100 ㎎ / ㎏)과 자일 라진과 쥐를 마취시키다 (10 ㎎ / ㎏)을 주입 IP </li><li> 일단 잠, C도대체 그 고통의 응답은 열 패드 따뜻한 마우스를 유지하고 건조를 방지하기 위해 눈에 연고를두고, 발가락 핀치에 의한 결석. </li><li> 각 마우스에게 식염수 또는 PBS에 인간 트랜스페린의 8 밀리그램을 제공, IP 주입 </li><li> 꼬리에서 혈액의 작은 방울을 타고 혈액 전에 감염에 대한 멸균 확인 한천 플레이트에 확산. </li><li> 정맥 복고풍 궤도 또는 꼬리 정맥을 통해 100 ㎕의 10 7 CFU / ㎖의 세균 배양 (10 6 CFU 총)을 주입한다. 5 분 후 주사를 촬영 CFU의 측정에 관계없이 주사 부위의 일치한다. </li><li> 몇 분 후, 꼬리 끝을 싹둑 즉시 감염 다음과 같은 혈액 CFU을 설정하는 하나의 10 배 희석으로 적절한 항생제로 한천 플레이트에 혈액 샘플을 확산. </li><li> 조직 접착제로 꼬리를 밀봉. </li><li> 주입 후, 세균 접종을 희석 CFU을 설정하는 적절한 항생제로 한천 플레이트에 확산. </li><li> 쥐에게 허용그들은 위로 이동 될 때까지 열 패드에 복구 할 수 </li><li> 6 시간 게시물 감염에서 6 시간에 CFU을 설정하는 희석 플레이트, 꼬리에서 소량의 혈액을 그립니다. </li><li> CO 2 밤새 5 %에서 37 ° C에서 모든 한천 번호판을 품어. </li></ol></li></ol> 4. 희생 <ol><li> 감염의 선택시, 케타민 (100 ㎎ / ㎏)과 자일 라진과 쥐를 마취시키다 (10 ㎎ / ㎏)는 IP를 주입 </li><li> 자고 나면 열 패드로 마우스를 따뜻하게 유지합니다. </li><li> 고통의 반사 (발가락 핀치)를 간 경우, 꼬리의 끝을 싹둑과 혈액을 그립니다. </li><li> 적절한 항생제 한천 플레이트에 혈액을 확산, 5 ㎕를 직접 10 μL 배 희석는 CFU를 설정합니다. </li><li> 경추 탈구하여 마우스를 희생. </li><li> 모든 관련 기관과 윤리적 지침에 따라 마우스를 희생 한 후, 심장 박동의 부족으로 죽음을 확인합니다. 갈비뼈를 잘라 중간 선 절개를 확인하고, 듣고에 절개를t. </li><li> 멸균 튜브에 심장 / 흉강과 장소에서 가능한 한 많은 혈액을 수집합니다. </li><li> 멸균 플레이트에 장기 (예 : 간, 비장, 뇌)를 제거합니다. </li><li> 피부 이식 및 멸균 플레이트에 마우스 피부의 일부를 제거합니다. </li><li> 마우스 본체를 폐기하십시오. </li><li> 수집 된 혈액을 15 분 동안 응고하도록 허용 한 후, 3,000 rpm에서 15 분간 원심 분리 해. </li><li> ELISA 또는 FACS 기반의 방법에 의한 사이토 카인의 검출 예를 들어, 나중에 분석을 위해 -80 ° C에서 혈액과 매장에서 플라즈마를 분리합니다. </li></ol> 5. 기관 CFU 카운트 <ol><li> 각 사전 생검 샘플을 채취로 PBS 500 μl를 포함하는 튜브를 균질화 무게. </li><li> 멸균 생검 펀치를 사용하여 각 조직에서 4mm 생검 샘플을 채취. </li><li> 500 ㎕의 PBS를 포함 preweighed 균질화 튜브에 장소 생검. 다른 장기에 작은 구슬을 사용하여 2 ㎜의 비즈 피부 샘플을 균질화. </li><li> 나머지 t 배치현미경 4 ° C에서 4 % 파라 포름 알데히드 (PFA) 및 저장의 문제는 (아래 참조). </li><li> (CFU / MG 조직의 이상 계산) 생검 무게를 설정하기 위해 조직 검사를 포함하는 튜브를 균질화 무게. </li><li> 샘플을 균질화. <ol><li> 30 초 동안 6,000 rpm으로, 간, 비장, 뇌를 균질화. </li><li> 30 초 동안 6,000 rpm에서 피부 샘플을 균질화하고 필요한 경우 반복합니다. </li></ol></li><li> 한천 플레이트에 각 균질화 튜브에서 희석 확산과 장기 CFU 수를 설정하는 5 % CO 2에서 37 ° C에서 하룻밤 성장. </li></ol> 6. 조직학 / 면역 조직 화학 <ol><li> 정착 <ol><li> 4 ℃에서 하룻밤 4 % PFA의 조직을 수정 고정 단계는 더 이상 할 수 있으며, 장기간 동안 저장이 0.25 % PFA의 조직을 배치합니다. </li><li> PBS에서 조직을 씻어 다음 20 % 자당 용액에 넣고 하룻밤 또는 조직이 솔루션에 침몰 할 때까지 4 ° C로 돌아갑니다. </li><li> (조직 형 또는베이스 보드에 부착 된 하나) 크기의 OCT 솔루션의 장소로 절단, PBS에서 조직을 씻으십시오. </li><li> 빨리 액체 질소에 떠있는 페트리 접시에 조직을 동결. </li><li> 냉동 한 후, 저장을위한 -80 ° C로 전송하기 전에 드라이 아이스에 조직을 넣어. </li></ol></li><li> 슬라이스 <ol><li> -80 ° C에서 조직을 제거하고 저온 ​​유지 장치에 -20 ° C에 평형 수 있습니다. </li><li> 슬라이스 약 10 ~ 15 ㎛의 두께로 조직 및 코팅 현미경 슬라이드에 배치합니다. </li><li> 필요할 때까지 상점은 -20 ° C에서 슬라이드. </li></ol></li><li> 염색 <ol><li> 슬라이드는 실온에 와서 수 있습니다. </li><li> 소수성 펜으로 슬라이드의 조각 주위에 그립니다. 5 ~ 10 분을 기다립니다. </li><li> 5 분 동안 PBS에서 / 세척 슬라이스를 재수, 두 번 반복합니다. </li><li> 10 분 동안 PBS에서 0.1 % 트리톤의 투과 조각. </li><li> 5 분 동안 PBS 2 배에 씻으십시오. </li><li> PBS의 차단10-60 분 사이에 사용되는 항체 또는 얼룩에 따라서는 0.1 % 트리톤 1 % BSA. </li><li> 버퍼를 차단 제거하고 블록 버퍼에 필요한 희석 일차 항체를 추가합니다. 정해진 시간 동안 배양한다. (종종 실온에서 1 시간 또는 4 ° C에서 하룻밤). </li><li> 5 분 동안 PBS 2 배에 씻으십시오. </li><li> 복 버퍼에 적절한 희석 차 항체를 적용, DAPI는 일반적으로이 단계에 포함되어 있습니다. 어둠 속에서, 정해진 시간에, 종종 1 ~ 2 시간 실내 온도에 품어. </li><li> 5 분 동안 PBS 2 배에 씻으십시오. </li><li> 커버 유리로 설치 미디어를 보호 페이드 마운트 및 손톱 광택과 도장. </li><li> 이미지 스테인드 즉시 슬라이드 또는 4 ℃에서 보관 </li><li> 사용 된 형광 물질에 적합한 필터 / 레이저로 설정 공 초점 형광 현미경 이미징을 수행합니다. </li></ol></li><li> 조직학 <ol><li> 조직학은 실온에 와서하는 슬라이드를 사용할 수 있도록 허용합니다. </li><li> 로 사용하여 얼룩 슬라이드tandard의 헤 마톡 실린 / 에오신 염색 프로토콜입니다. <ol><li> 슬라이드 랙에 슬라이드를 놓습니다. </li><li> 다음과 같은 순서로 솔루션 사이의 슬라이드와 랙을 이동 : </li><li> 흐르는 수돗물에 2 초. </li><li> 필터링 헤 마톡 실린 용액에서 3 분. </li><li> 흐르는 물에 10 초. </li><li> 증류수 10 초. </li><li> 에탄올 100 %로 10 초. </li><li> 필터링 에오신에 2 초. </li><li> 흐르는 물에 10 초. </li><li> 에탄올 100 %로 10 초 </li><li> 2 분 자일 렌 × 3에 (목욕 I, II, III). </li><li> 즉시 전송하고, 상단에 각 슬라이드, 장소 커버 슬립에 고정 접착제 몇 방울을 추가 기포를 제거, 몇 시간 동안 건조시켜주십시오. </li><li> 이미지는 표준 백색광 현미경 슬라이드. </li></ol></li></ol></li></ol>

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저자는 더 경쟁 재정적 이익을 선언하지 않습니다.

동물 모델은 세균성 병인 연구에 매우 중요하다. 그것은 완전히 세포 배양에서 생체 내 환경을 모방하는 것은 불가능하며 기주 - 많은 동적 요인에 좌우되고 있다는 것이 명백 해지고있다. 같은 N. 일부 임상 적으로 중요한 병원체의 인간의 특이성 수막염은, HIV, HCV, 열대열 원충 (Plasmodium falciparum), 리스테리아 균, 살모넬라 균이 감염에 대한 생체 내 모델의 사용을 제한하고있다. 우리는 전염성 단계 특이성에 관여하는 이해하기 시작 그러나, 인간 답게 모델이 개발되고있다. 여기에 설명 된 프로토콜은 N.과 생체 내 감염의 광범위한 허용, 생쥐로 인간의 미세 혈관의 도입이의 데모입니다 수막염은 혈관 손상과 가끔 부르르 발진의 개발의 결과로. 이 모델을 사용하여,우리는 총요소 생산성의 접착 성이 세균의 돌연변이 체를 사용하여 혈관 손상이 접착 (18)의 부재에서 감소된다 의해 생체 내에서 혈관 식민지에 참여하는 것으로 정의 할 수 있었다. 이전에는 순환 세균 제품이 손상 연루되어있다 그러나 우리의 결과는 지역의 접착 및 혈관 식민지에 대한 결정적인 역할을하는 것이 좋습니다. 이 새로운 치료 표적 개발을위한 새로운 가능성을 엽니 다. 병원성 세균의 부착은 약학 적으로 차단 될 수 있다면 그것은 아마도 피부 병변의 발생을 예방하고 조직 괴사, 괴사 조직 제거 및 사지 ​​절단의 측면에서 수막 구균 생존자를위한 더 나은 결과로 이어질 수 있습니다. 작업은 또한 감염의 복잡성과 면역 반응과 응고 캐스케이드의 참여를 보여 주었다. 우리는 현재 인간의 내피 (18)의 상대적으로 작은 양에도 불구하고 감염된 생쥐의 혈청에서 인간의 사이토 카인 신호를 확인했다.이 영역에 마우스 면역 세포 집단의 침윤과 함께 중요한 시토 킨 반응을 나타냈다. 동물 모델은 물론 완벽하게 인간의 질병을 복제 할 수 없다 모든 결과를 염두에두고 고려되어야 그들로부터 얻고. 예를 들어,이 모델의 혈액 순환 세포를 마우스의 원산지이며, 우리는 그들이 인간의 세포에 다르게 동작 할 수 있음을 할인 할 수 없습니다. 이것의 장점은 그러나, 우리의 최근 간행물 (18)에서와 같이, 순환 마우스 세포와는 인간 내피로부터 발신 신호를 구별 할 수있는 능력이다. 이 모델에서 사용 된 마우스의 면역 배경 또한 상기 &#39;인간화&#39;양태를 추가, 인간 면역 세포 집단의 동종 전송을 허용한다. 쥐의 면역 배경 그러나 모든 부족하거나이 모델에서 결함이 NK, T 또는 B 세포의 역할을 마스크 할 수 있습니다. 상대적으로 짧이 모델에 사용되는 t의 기간 (24 시간)을 중심으로 타고난 반응을 우려하지만, 장기 감염과 면역 다른 옵션의 발전을 위해 탐구 할 필요가 있습니다. 피부는 N.을위한 중요한 감염 사이트입니다 수막염하지만 인간의 혈관은 비교적 적은 양을 갖는 또한 수많은 기관을 포함한 전신 감염에 데이터를 외삽하는 것은 어렵다는 것을 의미한다. 이 모델은 피부 병변 개발의 연구를 위해 수 있지만, 이러한 상피 및 뇌 혈관 횡단 등의 수막 구균 감염의 중요한 단계는 포함되어 있지 않습니다. 이러한 인간화 모델의 발전은 감염의 다른 측면을 해결하기 위해 필요하다. 그럼에도 불구하고이 모델은 수많은 사람의 특정 병원균, 혈관을 대상으로 특히 큰 잠재력을 제공합니다.

수막 구균 패혈증은 ​​세균 병원체 나이 세리아 수막염 기인 자주 심각한 혈액 태어난 감염이다. 수막 구균 패혈증 환자들은 이전에 순환 세균과 박테리아 제품 1에 의한 혈관 파괴와 관련되어 자신의 피부에 점상 또는 부르르 발진이 존재. 임상 환자의 피부 생검은 종종 선박 2를 작성, 미세 혈관과 관련된 박테리아를 보여줍니다. 떨어져 박테리아, 광범위한 혈전증, 혈액 응고, 혼잡과 혈관 누출로부터는 부르르 지역 3-5에서 볼 수있다. 이 혈관 손상은 수막 구균 생존자 변연 절제술, 심지어 절단의 결과로, 피부와 주위 조직의 광범위한 괴사로 이어질 수 있습니다. 감염이 혈관 손상을 일으키는 방법을 이해하면 예방 및 치료 전략을 최적화하는 것이 중요합니다. 수막 구균 패혈증에 대한 연구의 대부분은 체외에서 수행되었다N. 인간의 특이성에 의한 인간 세포주 수막염. 감염의 여러 측면 세균의 부착, 숙주 세포 반응뿐만 아니라 사이토 카인 반응 6-9 포함한 체외에서 연구되어왔다. 유형 IV의 필리 (TFP)은 N.의 주요 접착 세포 기관으로 연루되어있다 수막염은 상피 및 내피 세포 (10)에 모두. 또한 N.의 접착력을 보였다 세포를 호스트 수막염은 전단 응력에 따라 달라지며, 따라서 미세 혈관 (11) 내의 혈액 흐름 속도에 관련된 것으로 생각된다. 이 박테리아가 생체 내에서 직면하는 역동적 인 스트레스가 발병에 매우 중요합니다 제안합니다. 이는 시험관 내에서의 작은 혈관의 미세 환경을 모델링하지만 매우 어렵다. 나이 세리아 TFP 대한 밀착성 수용체는 아직 알 수 있고, 따라서 동물 모델에서 세균의 부착을 달성하기 위해 노크의 전략은이 시점에서 예상 할 수없는. CD46는 총요소 생산성 수용체 유전자 변형 동물 모델 마우스의 역할을하도록 제작 된 것으로 제안했다. 그러나 이러한 동물에 감염 광범위한 감염으로 이어질하지 않거나 개발 (12, 13)를 발진 할 수 있습니다. 나이 세리아 감염 균혈증 측면에 대해 기술 된 다른 동물 모델의 계정에 철 소스 (14, 15) 인간 트랜스페린의 세균 환경을. 인간 트랜스페린을 보완 또는 연장 기간 동안 혈류의 증가 세균 부하 트랜스 결과로부터 발현하지만,이 모델은 세균의 부착이나 습진 개발 16,17 보여주지 않는다 어느. 이 프로토콜에서는, 우리는 피부의 미세 혈관을 포함하여 인간의 피부, 면역 마우스 (18, 19)에 이식 된 인간 답게 된 마우스 모델에 대해 설명합니다. 이것은 마우스 순환 관류 기능적 인간 혈관 초래한다. 인간 트랜스페린의 보완과 결합,이 MODEL N.은 인간의 특정 측면의 적어도 두 개의 차지 수막염은 생체 내 환경에서, 인간의 내피 세포와 인간 트랜스페린 즉. N. 수막염은 혈관 손상과 부르르 발진 개발 (18)을 포함하여 임상 환자에서보고되는 것과 유사한 병리를 생산, 인간의 내피 세포에 특이 적으로 부착이 모델에 정맥 소개했다.

<table><tbody><tr><td>DMEM</td><td>Gibco Invitrogen</td><td>31885-023</td><td></td></tr><tr><td>인산염 완충 식염수</td><td>Gibco Invitrogen</td><td>10010-056</td><td></td></tr><tr><td>케타민 500</td><td>Virbac France</td><td></td><td>로트 번호 VAL4243</td></tr><tr><td>Xylazine</td><td>Bayer Healthcare</td><td>AMM N&deg; FR/8146715 2/1980</td><td>로트 번호 </td></tr><tr><td>KPO809S 옵티젤&nbsp; &nbsp; &nbsp;</td><td>유로프타</td><td></td><td></td></tr><tr><td>라크리겔&nbsp;</td><td>의약품 Autoris&eacute;</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Tronothane</td><td>Lisa Pharma</td><td></td><td></td></tr><tr><td>GC 한천 염기</td><td>Conda</td><td>1106</td><td></td></tr><tr><td>인간 내피 SFM 매체</td><td>Gibco Invitrogen</td><td>11111</td><td></td></tr><tr><td>태아 소 혈청</td><td>P A A</td><td>A15-101</td><td></td></tr><tr><td>인간 트랜스페린</td><td>시그마 - Aldrich</td><td>T3309</td><td></td></tr><tr><td>UEA 렉틴 - 로다 민</td><td>Vector Labs</td><td>RL-1062</td><td></td></tr><tr><td>Hematoxylin</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>H9627</td><td></td></tr><tr><td>Eosin</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>E4009</td><td></td></tr><tr><td>Xylene</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>534056</td><td></td></tr><tr><td>Sober Hand Dermatome</td><td>Humeca BV, Holland</td><td>4.SB01</td><td></td></tr><tr><td>Animal housing</td><td>Innovive</td><td>M-BTM-C8</td><td></td></tr><tr><td>생검 펀치 (4 mm)</td><td>Dominic Dutscher</td><td>30737</td><td></td></tr><tr><td>고속 준비 용해 매트릭스 M 튜브</td><td>MP Bio</td><td>116923050</td><td></td></tr><tr><td>MagNA Lyzer Green Beads</td><td>Roche</td><td>3358941001</td><td></td></tr><tr><td>MagNA Lyzer</td><td>Roche</td><td>3358976001</td><td></td></tr><tr><td>VECTASHIELD 마운팅 미디어</td><td>Vector Labs</td><td>H-1000</td><td></td></tr><tr><td>Vetbond</td><td>3M</td><td>1469SB</td><td>티슈 접착제</td></tr><tr><td>OCT 티슈 tek</td><td>사쿠라</td><td>4583</td><td></td></tr></tbody></table>

인간 답게 된 마우스 모델은 미세 혈관을 대상으로 세균 감염을 연구하는

Humanized Mouse Model to Study Bacterial Infections Targeting the Microvasculature

그것은 인간의 혈액 스트림을 입력 할 때 나이 세리아 수막염은 심각한, 자주 치명적인 패혈증의 원인이됩니다. 감염이 혈관 누수, 부르르 발진 최종 조직 괴사의 발전의 결과로 혈관의 광범위한 손상에 이르게한다. 이 감염의 발병 기전을 연구하는 것은 이전에 생체 내 모델에서 어렵게 박테리아의 인간의 특이성에 의해 제한되었다. 이 프로토콜에서는, 우리는 인간의 피부, 피부의 미세 혈관을 포함하는이, 면역 쥐에 이식되는이 감염에 대한 인간화 모델을 설명합니다. 그 인간의 특성을 유지하면서 이러한 혈관 마우스 순환 anastomose. 일단이 모델 N.에 도입 수막염은 광범위한 혈관 손상, 염증과 부르르 발진의 경우에 개발의 결과로, 인간의 혈관에 독점적 준수합니다. 이 프로토콜은 콩트에서이 모델의 접목, 감염 및 평가 단계에 대해 설명합니다N.의 XT 수막염 감염. 기술은 혈류 감염 수많은 인간의 특정 병원균에 적용될 수있다.

CFU 카운트 N. 이러한 대표적인 결과에 사용 수막염 변형은 N입니다 , OPC는 - - PilC1 + / PilC2 + 20 수막염 8013 클론 (12), 혈청군 C 임상 분리, 나는 SB의 pilin, 오파 클래스를 표현. 변형 염색체 삽입 (18)로부터 녹색 형광 단백질 (GFP)을 표현하기 위해 설계되었다. 세균 콜로니 형성 단위 카운트는 한천 플레이트에 콜로니의 수를 계산하고 혈액의 CFU / ㎖ 또는 도금 알려진 볼륨에서 조직의 CFU / MG 하나를 계산하여 설정됩니다. 혈액 수는 5 분 10 6 CFU의 세균의 정맥 주사 후 혈액 순환 1.5 × 10 5 CFU / ㎖의 평균 (그림 1A) 있다는 것을 보여 주었다. 6 시간 후에 수는 4.8 × 104 CFU / ml의 평균. 24 시간으로 평균 수는 4 CFU / ㎖ × 10 2.4했지만 10 생쥐의이 그룹에서 5했다이 탐지 다른 5가 상대적으로 높은 카운트 (그림 1A)를 가지고있는 동안 박테리아를 순환. 피부 샘플에서 가져온 CFU 수는 마우스가 2.1 × 104 CFU 6 시간에서 조직 / MG와 24 시간에서 조직의 4.4 × 10 2 CFU / MG (그림 1B)를 평균, 인간의 피부에 상당한 수를 갖는 대부분을 보여 . 반대측 마우스의 피부 샘플 N.에 대한 강한 선호를 보여, 24 시간 및 6 시간에 만 매우 낮은 수에서 더 박테리아 수 없었다 이식 피부 (그림 1B)에서 인간의 혈관 수막염. 일반적으로 세균의 수는 2 동물들이 높은 세균 수 (그림 1C)를 순환과 상관으로, 혈액에서 오염에 기인 할 수있다 쇼 수를 했더라도 샘플링 다른 장기에 nondetectable 매우 ​​낮았다. 모델은 타입 IV 파이에게 예를 들어, 생체 내에서 독성 인자의 역할을 결정하기 위하여 사용될 수있다리. 정의 TFP 결여 균주 결과 pilD 유전자 21의 돌연변이뿐만 아니라 제안 된 TFP &#39;히젼&#39;을 결여 pilC1 유전자 08 가진 균주가 모델에 도입 하였다. 이러한 돌연변이는 총요소 생산성은 생체 내 (그림 1D)에 접착에서 재생하는 중요한 역할을 확인하고, 인간의 피부 이식에없는 세균의 부착 결과. 면역 조직 화학 / 조직학 이 실험에서 우리는 N.을 사용 차 염색을위한 필요없이 형광 검출을 가능하게하는 녹색 형광 단백질 (GFP)을 표현 수막염의 변종. 인간의 혈관, 인간의 내피 세포에 대한 마커를 사용하여 하나 CD31 (PECAM-1) 또는 렉틴 Ulex의 europaeus의 응집소 (UEA) 18, 22를 염색 하였다. UEA는 한 단계 염색법 (도 2A-C) 허용 로다 민에 접합시켰다. 세포 핵을 염색 할 수있다DAPI와 ED는 조직 구조 (그림 2A-B)를 식별하는 데 도움이. 조직학은 표준 헤 마톡 실린 / 에오신 염색을 사용하여 실시 하였다. 피부의 표피 / 피부 경계가 명확하게 식별했다. 염증, 혈전증과 혈관 누출은 감염 (그림 2D) 후이 국경을 24 시간에 가까운 선박에 집중했다. 혈전증은 종종 혼잡과 염증을 동반 여러 개의 작은 피부 혈관에서 볼 수 있었다. 조직으로 축소 적혈구의 누출은 혈관 손상의 광범위한 레벨을 나타내는 볼 수 있었다. 비감염 생쥐에 이식 피부의 조직 병리학없이 구별 염증 (18)와 정상 나타났다. 감염의 약 30 %가 피부에있는 박테리아 부착은 육안 검출 자반병 (도 2E 및 2F)의 개발에 이르게한다. <img alt="그림 1" fo:content-width=<html> SRC = &quot;/ files/ftp_upload/51134/51134fig1highres.jpg&quot;SRC = &quot;/ files/ftp_upload/51134/51134fig1.jpg&quot;/&gt; : FO &quot;5 인치&quot; 그림 1. CFU 카운트. (A) 5 분, 6 시간 및 24 시간 후 감염의 혈액 밀리리터 당 세균 CFU 카운트. (B) 박테리아 CFU은 6 시간과 24 시간 후 감염 모두에서 인간의 피부 (HS)와 마우스의 피부 (MS)를 비교하는 피부 샘플에서 계산합니다. (C) 세균 CFU는 다른 기관이 24 시간 후 감염을 촬영부터 계산합니다. 야생형 N.에 감염된 마우스에서 24 시간 후 감염에 찍은 인간과 쥐의 피부 샘플에서 박테리아 CFU 수를 비교 (D) 수막염 2C43 얼룩 (WT), pilD 유전자 (pilD) 또는 pilC1 유전자 (pilC1)의 돌연변이 균주의 돌연변이로 변형. 모든 그래프는 중간 원시 데이터로 표시됩니다. 그림은 Melican 등. 18에서 수정&quot;_blank&quot;&gt; 큰 이미지를 보려면 여기를 클릭하십시오. <img alt="그림 2" fo:content-width="5in" fo:src="/files/ftp_upload/51134/51134fig2highres.jpg" src="/files/ftp_upload/51134/51134fig2.jpg" /> 그림 2. 피부 (D) 표피 (E) 국경에 가까운 UEA 렉틴 (빨강)로 염색 인간의 미세 혈관을 보여주는 공 초점 스택의 현미경. (A) 투사. 용기 N. 감염된 수막염 (녹색) 2 시간 게시물 감염. (B) 광학 슬라이스와 N. 보여주는 슬라이스 돌기 (C) 수막염의 microcolonies (녹색) 감염 인간의 용기 (UEA - 빨간색) 피부 이식 2 시간 게시물 감염 내. 인간의 피부 이식의 (D) 헤 마톡 / 에오신 염색은 N. 24 시간 동안 감염 수막염. 표피 (E)는, 피부 (D) 경계는 명확하게 볼 수 광범위한 혈전증 및 microvess의 정체입니다ELS (화살표)는 진피에서 볼 수있다. 염증과 일부 혈관 누출 (화살촉)도 식별 될 수있다. (E) 전에 감염에 대한 인간의 피부 이식. (F) N.와 (E) 24 시간 후 감염과 동일한 피부 이식 부르르 지역 (화살표)를 표시하는 수막염은. 2B는, 2D, 2E, 그리고 2 층이 Melican 등. 18에서 수정은 그림 <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/51134/51134fig2highres.jpg" target="_blank">큰 이미지를 보려면 여기를 클릭하십시오</a> .

나이 세리아 수막염은 혈관을 감염시키는 인간의 특정 병원체이다. 이 프로토콜에서 인간의 미세 혈관은 면역 억제 쥐에 인간의 피부를 이식하여 마우스에 도입된다. 박테리아는 일반적으로 인간의 경우에 관찰 부르르 발진, 혈관 손상과 발전에 선도적 인, 인간의 혈관에 광범위하게 준수합니다.

Neisseria meningitidis causes a severe, frequently fatal sepsis when it enters the human blood stream. Infection leads to extensive damage of the blood ...

본 절차의 전반적인 목적은 수막구균(neisseria meningitis)이 생체 내에서 인간 혈관을 감염시키는 기전을 연구하는 것입니다. 이를 위해 먼저 면역 결핍 마우스에 인간 피부를 이식하여 인간 진피 혈관을 도입합니다. 그 다음 단계로, 이렇게 인간화된 마우스에 세균을 감염시킵니다.그 후 미리 정해진 시간 동안 감염이 진행되도록 둡니다. 마지막 단계에서는 감염 결과를 평가하기 위해 혈액 및 조직 샘플을 채취합니다. 최종적으로 조직학, 면역형광법, 그리고 혈액 및 조직 분석을 결합하여 인간 혈관 내 감염의 진행 과정을 연구합니다.세포 배양 모델이나 동물 모델과 같은 기존 기술과 비교했을 때 이 기술의 주요 장점은, 이러한 감염 과정에서 발생하는 전형적인 임상 병리학적 특성을 최초로 관찰할 수 있다는 점입니다. 수집 직후 가능한 한 빨리 70% ethanol로 인간 피부 표면을 세척한 다음, 가급적 flow hood 아래의 깨끗한 표면에 평평하게 놓습니다. 다음으로, 두께가 미리 설정된 dermatome을 사용하여 피부 상단에서 200 to 400 micrometer 두께의 절편을 절단합니다.절편의 무결성을 확인한 후, 2x2 cm 크기의 정사각형 모양으로 더 작게 다듬습니다. 절편들을 PBS에 넣고, 수술 준비가 된 마취 상태의 6~8주령 중증 복합 면역 결핍(severe combined immunodeficient) beige 마우스의 제모된 부위를 70% ethanol로 세척합니다. 이식 부위에 국소 마취제를 도포한 후, 곡선 가위를 사용하여 이식 조각보다 약간 작은 면적의 마우스 피부 표층을 조심스럽게 제거하며, 이때 하부 혈관 조직이 손상되지 않도록 주의합니다.이식편이 건조되는 것을 방지하기 위해 신속하게 움직여, 표피 쪽이 위를 향하도록 하여 인간 피부 절편 하나를 이식 부위에 놓습니다. 조직의 가장자리를 맞춘 다음 조직 접착제로 고정합니다. 그런 다음 나머지 인간 피부를 이식 부위에 조심스럽게 맞추고, 각 가장자리에 소량의 조직 접착제를 도포합니다.이식 부위를 넓히기보다 항상 사람 피부를 크기에 맞게 다듬으십시오. 각 모서리가 고정되었음을 확인한 후, 요오드 용액으로 해당 부위를 세척하고 쿠션 면이 이식 부위에 닿도록 대역밴드를 단단하지만 너무 조이지 않게 부착하되, 동물의 호흡에 영향을 주지 않도록 주의하십시오. 그 다음 드레싱 테이프로 밴드를 고정하고 동물이 따뜻한 표면에서 회복하도록 합니다. 동물이 깨어나면 세균 주입 전까지 케이지로 돌려보내고, 밤새 배양한 평판 배양물을 액체 배양물에 다시 접종하십시오.감염 당일 아침, 박테리아가 원하는 농도에 도달하면 세포를 1 × 10⁷ CFU/mL로 희석합니다. 그 후 마취를 실시하고, 이식된 마우스의 발가락 꼬집기 반응을 통해 진정 상태를 확인한 뒤 가열 패드 위에 놓습니다.동물의 눈에 안연고를 도포한 후, 생리식염수에 희석한 8 mg의 human transfer를 각 마우스의 복강 내(ip)로 주입합니다. 그 다음, 감염 전 혈액의 무균 상태를 확인하기 위해 각 동물의 꼬리 끝을 절단하고, 꼬리에서 나온 소량의 혈액 한 방울을 한천 배지(agar plate)에 도말합니다.그 다음, 100 µL의 세균 배양액을 후안정맥 주사(retroorbital injection)를 통해 정맥 주사합니다. 몇 분 후, 꼬리 끝을 다시 절단하고 이 혈액 샘플을 새로운 한천 배지에 도말합니다. 감염 직후의 혈중 집락 형성 단위(colony forming units)를 측정하기 위해, 꼬리를 조직 접착제로 봉합한 후 세균 접종액을 희석하여 적절한 항생제가 포함된 한천 배지에 도말합니다.감염 6시간 후의 접종균 집락 형성 단위를 측정하기 위해, 각 마우스의 꼬리에서 소량의 혈액을 추가로 채취한 다음, 앞서 시연한 것과 동일하게 혈액 방울을 희석하고 도말하여 6시간 시점의 집락 형성 단위를 확인합니다. 그 후, 모든 플레이트를 37 °C, 5% carbon dioxide 조건에서 하룻밤 동안 배양하여 감염된 동물의 장기 집락 형성 단위를 측정합니다.안락사시킨 각 마우스의 정중선에 절개를 가하는 것으로 시작합니다. 그다음 각 동물에 대해 갈비뼈를 절단하고 심장을 절개합니다. 멸균 주사기를 사용하여 심장과 흉강에서 가능한 한 많은 양의 혈액을 채취하고, 각 샘플별로 개별 멸균 튜브에 분주합니다.다음으로, 관심 장기를 적출한 후 피부 이식편과 그에 부수되는 마우스 피부 절편을 동물당 하나의 멸균 플레이트에 옮깁니다. 채취한 혈액을 15분 동안 응고시킨 후, 원심 분리합니다. 그다음 혈액에서 혈장을 분리하여 추후 분석을 위해 -80 °C에서 보관합니다.다음으로, PBS 500 µL가 각각 들어 있는 균질화 튜브의 무게를 잽니다. 그 후 멸균 생검 펀치를 사용하여 절제된 각 조직에서 4 mm 생검 샘플을 채취합니다. 생검 샘플을 균질화 튜브에 각각 넣으며, 피부 샘플이 들어 있는 튜브에는 2 mm 비드를 하나씩 넣습니다.남은 조직은 현미경 관찰을 위해 4% para formaldehyde에 넣어 4°C에서 보관하고, 생검 무게를 측정하기 위해 균질화 튜브의 무게를 잽니다. 그 후 샘플을 6,000 RPM에서 30초 동안 균질화하며, 균질액이 탁해질 때까지 피부 균질화 과정을 반복합니다. 마지막으로 각 튜브의 세포 현탁액을 새 한천 배지에 도말하고 5% carbon dioxide 조건의 37°C에서 하룻밤 동안 배양합니다.이 대표 결과들에서 장기 집락 형성 단위 수를 설정하기 위해, GFP 양성 N meningitis Serogroup C 균주를 사용하였습니다.혈구 수 측정 결과, 1×10⁶ CFU의 세균을 정맥 주사한 지 5분 후에 혈액 내 평균 1.5×10⁵ CFU/mL가 순환하고 있는 것으로 나타났습니다. 6시간 후에는 평균 수치가 4.8×10⁴ CFU/mL였으며, 24시간 후에는 평균 수치가 2.4×10⁴ CFU/mL였습니다.그러나 이 10마리의 마우스 그룹 중 5마리는 혈중 박테리아가 검출되지 않은 반면, 나머지 5마리는 상대적으로 높은 수치를 보였습니다. 이 그래프의 막대들은 피부에서 채취한 각 그룹의 CFU 수치 중앙값을 나타냅니다. 샘플 분석 결과, 대부분의 마우스가 사람 피부에서 상당한 수치를 보였으며, 6시간째에는 조직 mg당 평균 2.1 × 10⁴ CFU, 24시간째에는 조직 mg당 4.4 × 10² CFU를 기록했습니다.대조측 마우스 피부 샘플에서는 24시간 후에 세균이 검출되지 않았으며, 6시간 후에는 매우 적은 수만 검출되어, 이식된 조직 내의 인간 혈관에 대한 end meningitis의 강한 선호도를 입증하였습니다. 일반적으로 샘플링한 다른 장기들에서 세균 수는 매우 낮거나 검출되지 않았으나, 두 마리의 동물에서는 세균이 검출되었으며 이는 높은 혈중 세균 수와 상관관계가 있을 수 있습니다. 이 모델은 또한 in vivo에서 독성 인자의 역할을 결정하는 데 사용될 수 있습니다.예를 들어, 본 실험에서는 기능적인 4형 필리(type four pili)가 결여된 세균 균주를 사용하였습니다. 이러한 돌연변이 균주에 감염된 마우스는 인간 피부 이식편에서 세균 부착이 나타나지 않았으며, 이는 생체 내(in vivo) 부착에서 4형 필리가 수행하는 결정적인 역할을 확인시켜 줍니다. 감염 2시간 후의 피부 이식편 공초점 이미지에서, 로다민이 결합된 렉틴 UEA로 염색된 인간 혈관을 관찰할 수 있습니다. 피부의 표피-진피 경계가 명확하게 식별되며, 감염된 GFP 양성 수막구균이 혈관 전체에서 뚜렷하게 관찰됩니다.H&amp;E 염색된 이 인간 피부 이식편은 염증과 혈관 누출뿐만 아니라 표피-진피 경계 근처의 혈관에 집중된 혈전증을 보여줍니다. 감염 후 24시간이 지나면 감염 사례의 약 30%에서 피부 내 세균 부착으로 인해 육안으로 확인 가능한 자반증이 발생했습니다. 따라서 이 기술의 개발은 숙주-병원체 상호작용 연구에 참여하는 연구자들이 인간 혈관의 맥락에서 질병 기전을 연구할 수 있는 길을 열어줍니다.

humanized-mouse-model-to-study-bacterial-infections-targeting

Research

연구

JoVE Journal

Immunology and Infection

면역학 및 감염학

여기서 우리는 인간의 코드 혈액 유래 내피 식민지 - 형성 세포 (ECFCs) 및 골수 - 유래 subcutaneously immunodeficient 마우스로 콜라겐 / fibronectin 겔에 포함된 mesenchymal 줄기 세포 (MSCS)를,.을 제공하는 방법을 설명 이 셀 / 젤 조합은 마우스 vasculature와 연결하는 인간의 혈관 네트워크를 생성합니다.

Immunodeficient 마우스의 생체 공학 인간 Microvascular 네트워크

출처: Valentine, M. E. 외, Pseudomonas aeruginosa 에서 인프레임 유전자 결실 돌연변이 생성과 감염 단순 마우스 모델에서의 병원성 감감 검사. J. Vis. Exp. (2020)이 영상은 생체 쥐 모델에서 박테리아 감염을 모니터링하기 위해 생물발광 기반 영상 기법을 시연합니다. 순차적 생물발광 및 X선 영상은 숙주 전역에 퍼진 감염을 실시간으로 시각화하고 해부학적 위치를 파악할 수 있게 합니다.

생물발광을 이용한 쥐 모델에서 박테리아 감염의 실시간 영상

Source: Claes, J., et al, In Vitro and In Vivo Model to Study Bacterial Adhesion to the Vessel Wall Under Flow Conditions. J. Vis. Exp. (2015).This video demonstrates an in vivo method for analyzing shear-dependent bacterial adhesion in a live mouse model. Following surgical preparation and catheterization, the mesenteric vasculature is exposed for real-time imaging under a fluorescence microscope. Perfusion with an ionophore and fluorescently labeled bacteria reveals how shear stress triggers...

An In Vivo Model to Study Shear-Dependent Bacterial Adhesion

이 비디오는 GFP 발현 호중구를 가진 면역 저하 형질전환 마우스의 감염 부위에서 호중구 모집 역학을 연구하기 위한 생체 내 이미징을 보여줍니다. 발광 박테리아를 주입하여 감염을 일으키는 것과 관련이 있습니다. 이는 감염 부위에 호중구가 동원되도록 유도하며, 이미징을 통해 추적이 이루어집니다.

Murine 모델에서 감염 부위의 호중구 모집 역학 및 박테리아 부담 모니터링

이 비디오는 피부 상처 감염의 쥐 모델을 생성하는 기술을 보여줍니다. 호중구에서 형광 단백질을 발현하도록 조작된 쥐를 유전자 변형 생물 발광 황색포도상구균(Staphylococcus aureus)에 감염시키면 병원성 박테리아가 발생합니다. 감염 부위의 박테리아 부담과 호중구 동원 역학은 전체 동물 이미징을 사용하여 연구할 수 있습니다.

박테리아 병원체에 대한 면역 반응을 연구하기 위한 쥐 피부 상처 감염 모델

여기 혈관 염증 및 라이브 쥐 혈전 형성되는 동안 활성화 내피에 heterotypic 혈소판 호중구 상호 작용을 시각화하는 형광 intravital 현미경의 실험 기술을보고합니다. 이 현미경 기술은 혈관 질환의 분자 메커니즘을 연구 할 수 있고 pathophysiological 조건에 따라 pharmacologic 요원을 테스트 할 가치가 있습니다.

라이브 마우스의 혈관 염증과 혈전 형성하는 동안 활성화 내피에 Heterotypic 혈소판 - 호중구 상호 작용의 실시간 영상

동물 모델은 만성 염증의 발달에 기여하는 호스트와 병원체의 특정 메커니즘을 규정하는 매우 중요한 도구로 입증되었다. 여기서 우리는 로컬 및 전신성 염증 부위에서의 진행을 평가하기 위해 인간 병원체 Porphyromonas 진지 발리 및 세부 방법론 경구 감염 마우스 모델을 설명한다.

로컬 및 전신 사이트에서 병원체에 의한 만성 염증을위한 마우스 모델

전단 응력을 받는 혈관과 박테리아의 상호 작용을 연구하기 위해 혈관 접착에 기여하는 박테리아 및 숙주 요인을 해부할 수 있는 유동 챔버 및 생체 내 장간막 생체 내 현미경 모델이 설명됩니다.

생체 외 및 생체 내 모델에서 혈관 벽에서 흐름 조건에 세균 부착을 연구하기 위해

숙주-병원체 상호 작용에 대한 체외 연구는 특정 면역 반응의 특성을 규명할 수 있지만 복잡한 반응의 영향을 관찰하려면 생체 내 모델이 필요합니다. 칸디다 알비칸스(Candida albicans) 노출 후 녹농균(Pseudomonas aeruginosa) 매개 폐 감염을 사용하여 인공호흡기 관련 폐렴 병원성과 관련된 미생물 상호 작용에 대한 쥐 모델을 확립했습니다.

미생물 커뮤니티를 공부<em&gt; 생체</em&gt; 사이에 호스트 매개 상호 작용의 모델<em&gt; 칸디다 알비 칸스</em&gt; 및<em&gt; 녹농균</em&gt; 항공에

피부 부상에 타고 난 면역 반응의 실시간 탐지 및 쥐의 포도 상 구 균 감염에 대 한 접근 방식을 설명 합니다. 비교 LysM EGFP 여 쥐 (형광 neutrophils 보유) LysM EGFP와 잡종 immunodeficient 마우스 스트레인, 우리가 미리 감염에 대 한 우리의 이해 및 감염을 방지 하는 방법의 개발.

마우스 모델을 평가 타고 난 면역 반응 포도 상 구 균 감염

학습하세요 Neisseria meningitidis가 인간 혈관에 감염되는 메커니즘을 면역결핍 마우스에 인간 피부를 이식한 휴머나이즈드 마우스 모델을 사용하여 연구하는 방법을. 이 기법은 임상 병리학 관찰에 활용됩니다.

인간 답게 된 마우스 모델은 미세 혈관을 대상으로 세균 감염을 연구하는

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