Preparation of Segmented Microtubules to Study Motions Driven by the Disassembling Microtubule Ends

Vladimir A. Volkov; Anatoly V. Zaytsev; Ekaterina L. Grishchuk

doi:10.3791/51150

분해 미세 소관 엔드에 힘 입어 모션을 연구하기 위해 분단 미세 소관의 준비

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Biology

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Preparation of Segmented Microtubules to Study Motions Driven by the Disassembling Microtubule Ends

분해 미세 소관 엔드에 힘 입어 모션을 연구하기 위해 분단 미세 소관의 준비

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12:20 min

March 15, 2014

DOI: 10.3791/51150-v

Vladimir A. Volkov^1,2, Anatoly V. Zaytsev³, Ekaterina L. Grishchuk³

¹Center for Theoretical Problems of Physicochemical Pharmacology,Russian Academy of Sciences, ²Federal Research Center of Pediatric Hematology, Oncology and Immunology, Moscow, Russia, ³Physiology Department, Perelman School of Medicine,University of Pennsylvania

Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.

미세 소관은 본질적으로 불안정 폴리머, 그리고 성장과 단축 사이에 자신의 전환 확률 통제하기가 어렵습니다. 여기에서 우리는 photoablatable 안정 캡으로 분할 미세 소관을 사용하여 프로토콜을 설명합니다. 분할 된 미세 소관 해중합함으로써 분해 미세 소관의 끝 동작의 분석을 지원, 높은 공간적 해상도로 트리거 될 수 있습니다.

다음 실험의 전반적인 목표는 탈중합 미세소관의 말단과 함께 단백질 분자와 단백질로 코팅된 비드의 움직임을 연구하는 것입니다. 이는 재사용 가능한 플로우 챔버를 깨끗한 크기의 커버 슬립으로 조립하여 달성됩니다. 다음으로 미세소관 씨앗을 커버 슬립에 부착하여 준비하고 미세소관을 핵 생성하는 데 사용한 다음 광파괴 가능한 캡으로 임시로 안정화합니다.

그런 다음 GFP 표지된 단백질 또는 단백질 코팅 비드가 유동 챔버에 도입되어 분절된 미세소관에 결합합니다. 그런 다음 마이크로 튜브 해중합은 광 절제에 의해 캡을 제거하여 트리거됩니다. 이미지는 CH로 분석하여 표지된 단백질이 탈중합 미세소관의 말단과 함께 이동하는 팁 추적 동작을 나타내는지 여부를 결정합니다.

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