Name: 만성 EAE와 마우스의 신경 줄기 / 전구 세포의 전신 주입 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2014-04-15T18:45:00.000+00:00
Duration: 9 min 24 s
Description: 배우세요 만성 EAE 마우스 모델에서 신경 줄기/전구 세포를 정맥 주사로 중추신경계에 전신 이식하는 최소침습적 방법을. 이 기술은 다발성경화증 연구에 활용됩니다.

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저자는 비판적으로 원고를 검토하고 증거 편집 재이든 스미스 감사합니다. 이 작품은 국립 다발성 경화증 학회 (NMSS, 부분적인 보조금 RG-4001-A1)에서지지를 받고있는, 이탈리아의 다발성 경화증 협회 (AISM가 2010/R/31을 부여), 이탈리아 보건부 (GR08-7), 생명, 방카 아그리콜라 POPOLARE 디 라 구사 (BAPR), 유럽 연구위원회 (ERC) ERC-2010-엑츄에 부여 계약에 따라 없음 260511-SEM_SEM과 유럽 공동체 (EC) 7 회 프레임 워크 프로그램 (FP7/2007-2013) 날개 보조금 협정 N * 내지 아래; 280772 - IONE.

<ol><li>Ben-Hur, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transplanted+multipotential+neural+precursor+cells+migrate+into+the+inflamed+white+matter+in+response+to+experimental+autoimmune+encephalomyelitis%5BTitle%5D)+AND+%22Glia%22%5BJournal%5D)">Transplanted multipotential neural precursor cells migrate into the inflamed white matter in response to experimental autoimmune encephalomyelitis.</a> Glia. 41, 73-80 (2003).</li>
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<li>Chu, K., Kim, M., Jeong, S. W., Kim, S. U., Yoon, B. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+neural+stem+cells+can+migrate%2C+differentiate%2C+and+integrate+after+intravenous+transplantation+in+adult+rats+with+transient+forebrain+ischemia%5BTitle%5D)+AND+%22Neurosci.+Lett%22%5BJournal%5D)">Human neural stem cells can migrate, differentiate, and integrate after intravenous transplantation in adult rats with transient forebrain ischemia.</a> Neurosci. Lett. 343, 129-133 (2003).</li>
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저자가 공개하는 게 없다.

체세포 줄기 세포 기반 요법은 MS2 11과 같은 만성 염증성 CNS 장애 치료를위한 가장 유망한 전략의 하나로 부상하고있다. 자신의 치료 효과를 유지하는 메커니즘은 아직 완전히 규명 될 필요가 있지만, 신경 퇴행성 질환의 다양한 실험 모델에서 NPC 이식의 큰 영향은 세포가 곧 인간의 연구에 적용 할 수있다 줄기 다소 도발적인 믿음에 상승을 부여하고있다. 그러나, 우리는 몇 가지 주요 문제에 직면하고 (다 능성 대 동종, 만능 대자가) 이식을위한 이상적인 줄기 세포 소스의 식별 및 최적의 경로로 어떤 대답없는 질문, 해결해야 이러한 혁신적인 치료의 잠재적 인 인간의 응용 프로그램을 envisaging 전에 관리. 신경 퇴행성 질환은 약간의 공간적 예 (제한되는, 자신의 pathophysiologies에 차이가 있습니다.에서 척수배심원, 뇌졸중) 다른 하나는 시공간 보급 (예를 들어, MS)을...

강력한 증거 CNS 장애 1-8의 동물 모델에서 체세포 신경 줄기 / 전구 세포 (NPC가)의 이식의 치료 효능을 입증 생체 내 연구에서 생겨났다. 이러한 실험 결과는 임상 응용 프로그램으로 변환하기 전에 그럼에도 불구하고, 호스트에 줄기 세포의 전달과 관련된 문제의 수는 신중한 검토가 필요합니다. 다 초점, 만성 염증성 뇌 질환 (nonhematopoietic) 원기를 회복시키는 줄기 세포 치료의 발전으로 특히 상당한 장애물은 NPC 주입의 최적 경로를 식별합니다. 대상 질병의 병태 생리의 확고한 이해 (초점 또는 다 초점, 기본 염증 또는 기본 퇴행성) 및 전달 기술과 관련된 가능성과 위험 문제의 신중한 분석은 줄기 세포 전달을위한 최적의 프로토콜을 식별합니다. 동안 초점 ( <em&gt; 예. 신경계의 실질에) 줄기 세포 이식 손상의 공간적으로 밀폐 된 공간을 특징으로 중추 신경계 질환의 치료에 대한 논리적 인 접근 방식 (예를 들면 파킨슨 병과 헌팅턴의 질병, 뇌와 척수 외상성 손상, 뇌졸중), 바로 그 방법을 증명할 수 예, 다 초점 만성, 공간적으로 전파 CNS 손상은 시간이 지남에 축적 MS, 같은 조건에서 실질적으로 가능하지합니다. 후자의 경우, 각각의 병변에 초점 세포 주사를 대상으로는 따라서 적게 침략 NPC 이식 타겟팅 CNS의 대안, 더 적절한 방법의 식별을 자극 CNS 실질 내 긴 거리를 통해 마이그레이션하는 이식의 NPC의 제한된 용량에 의해 방해된다 . CNS9 외부 혈관 내 주입했을 때 큰 약속은 생쥐의 NPC가 두개 내 종양 (예를 들면. 신경 교종)을 대상으로 관찰에서 나왔다. 이 정액 다음줄기 세포 pathotrophism 10의 생체 증거, 광범위한 데이터는 실험자가 면역 뇌척수염 (EAE)와 동물 실험의 가능성과의 NPC의 조직 이식의 치료 효과에 관한 축적 된 정맥 중 하나를 통해 염증 CNS 손상의 모델로 (IV) 또는 뇌 실내 (ICV). NPC 주입 1,2,5,6,8 .. 우리는 먼저이 대상을 입력 염증 CNS를, 이후 여러 세포 간 결합에 이식의 NPC의 능력에 의존하는 것으로 나타났습니다 생체 (11)의 특정 미세 환경 내에서 통신 프로그램. 특히 CNS를 대상으로하기 위해,의 NPC는 뇌척수액 (CSF) ICV 주입에 의한 순환, 또는 정맥 주사를 통해 혈류로 직접 전달됩니다. 일단 혈류 또는 CSF 중 하나를 입력, 이식의 NPC가 적극적으로 상호 작용혈액 뇌 (BBB)​​ 또는 혈액 뇌척수액 (BCSFB) 장애 및 중추 신경계의 실질을 입력합니다. NPC 이식하고 BBB (또는 BCSFB) 사이의 상호 작용은 NPC의 표면에 세포 부착 분자 (CAM들)의 특정 설정에 의해 규제 및 활성화 내피 / 뇌실막 세포 12-14에 CAM 카운터 - 리간드의 높은 수준의 발현에 의해 촉진된다. 이러한 캠 예는 히알루 론산에 대한 수용체, CD44, 및 세포 간 접착 분자 (ICAM) -1 리간드 늦게 항원 (VLA) -4 5,15,16 (즉, 백혈구의 활성화 뇌실막과의 상호 작용의 책임을 포함 내피 세포), 그리고 훨씬 낮은 정도의 림프구 기능 관련 항원 (LFA) -1 P-셀렉틴 당 단백질의 리간드 (PSGL) -1. NPC들도 CCR1, CCR2, CCR5, CXCR3 및 CXCR4 등의 케모카인 수용체의 넓은 범위를 표현하는 (그러나 CCR3 및 CCR7을 표명하지 아니합니다) 시험 관내 및 생체 5,16 모두 기능적으로 활성화되어있는. 따라서, systemica베드로 주입의 NPC는 염증 CNS의 수준에 축적, G-단백질 결합 수용체 (GPCR에)와 함께,이 캠 사용합니다. 반대로, NPC의 혈관이나 뇌척수액 공간 루트 2를 통해 CNS를 입력하지 않은 건강한 생쥐에 체계적으로 주입했다. 화학적으로 유도 된 뇌염의 모델로 조직의 사이토 카인 또는 lypopolisaccharide (LPS) 주입 다음 CNS의 염증, 또는 내피 / 뇌실막 세포 활성화는 뇌와 척수 2에 체계적으로 주입의 NPC의 축적을위한 필요가있다. 따라서, 조직 NPC 치료와 CNS의 성공 타겟팅은 뇌와 척수 환경이 축적의 NPC의 내피 마이그레이션에 도움이되는 기회 (우)의 질병 특정 윈도우의 식별에 따라 달라집니다. 이러한 조건은 일반적으로 급성 및 아 급성 염증 (17)의 상황에서 발생한다. 일단 미분화의 NPC를 이식, CNS를 입력 한마우스의 clinico 병리학 기능뿐만 아니라 EAE와 큰, 인간이 아닌 영장류를 개선하는 것으로 나타났다. 이 질문에 답변 최소한의 세포 교체 2 및 비 CNS 염증 영역 (19, 20) (예를 들어, 림프절) 대 혈관 주위 CNS 2,5,6,18 내 면역 조절 및 신경 주변 분비 인자의 놀라운 분비에서 의존하는 기술되었다 염증 세포의 신호는 면역 세포에게 5 침투에 의해 유발. 여기에서 우리는 만성 EAE의 마우스 모델에 체세포의 NPC의 전신 주사의 주요 방법 론적 측면을 설명합니다. 보다 구체적으로, 우리는 확장 및 성인 C57BL / 6 마​​우스의 subventricular 영역 (SVZ)에서 이식 체세포의 NPC를 준비, 우리는 (I)로 설정 한 프로토콜을 도출 정의; (II)는 마우스의 만성 EAE를 유도 그리고 (iii) 치료 효과가 전신 (IV 또는 ICV) NPC 이식을 수행하는 전n을 EAE 마우스.

<table><tbody><tr><td>Cell culture</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>EBSS</td><td>Sigma</td><td>E2888</td><td></td></tr><tr><td>L-Cystein</td><td>Sigma Aldrich</td><td>C7352</td><td></td></tr><tr><td>Papain</td><td>Worthington</td><td>30H11965</td><td></td></tr><tr><td>EDTA</td><td>Fisher Scientific</td><td>D/0700/50</td><td></td></tr><tr><td>Mouse NeuroCult 기초 매체</td><td>줄기 세포 기술</td><td>05700</td><td></td></tr><tr><td>NeuroCult 증식 보충제</td><td>줄기 세포 기술</td><td>05701</td><td></td></tr><tr><td>Heparin</td><td>Sigma</td><td>H3393</td><td></td></tr><tr><td>Basic 섬유 아세포 성장 인자</td><td>Peprotech</td><td>100-18B-1000</td><td></td></tr><tr><td>표피 성장 인자</td><td>Peprotech</td><td>AF-100-15-1000</td><td></td></tr><tr><td>Pen / Strep</td><td>Invitrogen</td><td>1514012</td><td></td></tr><tr><td>Matrigel (코팅 솔루션)</td><td>BD Biosciences</td><td>354230</td><td></td></tr><tr><td>NeuroCult&reg; Differentiation Kit (Mouse)</td><td>Stem Cell Technologies</td><td>05704</td><td></td></tr><tr><td>Accumax</td><td>eBioscience</td><td>00-4666-56</td><td></td></tr><tr><td>Dulbecco's PBS (DPBS) (10x) without Ca and Mg</td><td>PAA Laboratories</td><td>H15-011</td><td></td></tr><tr><td>Myco trace</td><td>PAA Laboratories</td><td>Q052-020</td><td></td></tr><tr><td>Dimethyl sulfoxide (DMSO)</td><td>Sigma</td><td>D2650</td><td></td></tr><tr><td> 면역형광</강한></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>일반 염소 혈청</td><td>PAA Laboratories</td><td>B11-035</td><td></td></tr><tr><td>폴리에틸렌 글리콜 p-(1,1,3,3-테트라메틸부틸)-페닐 에테르</td><td>시그마 알드리치</td><td>T8787</td><td></td></tr><tr><td>마우스 안티 네스틴</td><td>Abcam</td><td>ab11306</td><td></td></tr><tr><td>토끼 안티 GFAP</td><td>DAKO</td><td>203344</td><td></td></tr><tr><td>마우스 안티 히스톤 H3 (포스포 S10)"&nbsp;</td><td>Abcam</td><td>ab14955</td><td></td></tr><tr><td>Rabbit anti MAP-2</td><td>Abcam</td><td>ab32454</td><td></td></tr><tr><td>Rat anti MBP</td><td>AbD SEROTEC MCA409S</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Anti-O4 항체, clone 81 | MAB345</td><td>Millipore</td><td>MAB345</td><td></td></tr><tr><td>DAPI</td><td>Invitrogen</td><td>D1306</td><td></td></tr><tr><td>마운팅 솔루션</td><td>DAKO</td><td>S3023</td><td></td></tr><tr><td>EAE</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Freund's Adjuvant Incomplete</td><td>Sigma Aldrich</td><td>F5506</td><td></td></tr><tr><td>Mycobacterium tuberculosis</td><td>DIFCO</td><td>H37Ra</td><td></td></tr><tr><td>MOG(35&ndash; 55)&nbsp;</td><td>Espikem</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Pertussis 독소</td><td>목록 생물학 실험실</td><td>181</td><td></td></tr><tr><td>Tissue processing</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Iris scissor straight</td><td>Fine Sciences Tools</td><td>14060-09</td><td></td></tr><tr><td>무딘/구부러진 집게</td><td>Fine Sciences Tools</td><td>11080-02</td><td></td></tr><tr><td>Brain slicer</td><td>Zivic Instruments</td><td>BSMAS005-1</td><td></td></tr><tr><td>수술 블레이드</td><td>Swann-Morton</td><td>324</td><td></td></tr><tr><td>P200, P1000 피펫</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>케타민 (Vetalar)</td><td>Boehringer Ingelheim</td><td>01LC0030</td><td></td></tr><tr><td>자일라진 (Rompun)</td><td>Bayer</td><td>32371</td><td></td></tr><tr><td>입체 프레임</td><td>KOPF</td><td>모델 900</td><td></td></tr><tr><td>해밀턴 주사기</td><td>해밀턴</td><td>7762-04</td><td></td></tr><tr><td>파라포름알데히드(PFA)</td><td>시그마</td><td>158127</td><td></td></tr><tr><td>VECTASTAIN Elite ABC Kit</td><td>Vector Laboratories</td><td>PK-6100</td><td></td></tr></tbody></table>

만성 eae와 마우스의 신경 줄기 / 전구 세포의 전신 주입

Systemic Injection of Neural Stem/Progenitor Cells in Mice with Chronic EAE

신경 줄기 / 전구 세포 (NPC들)은 재생 신경과 뇌의 수리 또는 복원을 목표로 이식 방법에 대한 유망한 줄기 세포의 원천입니다. 이 지시문은 뇌 수리가 신경 질환의 여러 전임상 모델에서 초점 또는 전신 NPC 이식 후 달성하는 광범위한 증거에서 생겨났다. 이러한 실험 결과는 긴급 평가를 필요로 뇌 질환에 대한 회복 줄기 세포 치료의 주요 장애물 중 하나로서 세포 전달 경로를 발견했습니다. 뇌실질 내 줄기 세포 이식은 척수 손상과 파킨슨 병으로 격리와 접근 뇌 병변을 특징으로하는 병리에 대한 논리적 인 접근 방식을 나타냅니다. 불행하게도,이 원칙은 다발성 경화증 (MS)를 포함, 다 초점 염증 및 (시간과 공간 모두) 전파 특성에 의해 특징 조건에 제대로 적용 할 수있다. 예, 뇌 SYST에 의해 대상으로EMIC NPC 전달은 뇌 및 중추 신경계 (CNS)의 실험 만성 염증성 손상에 의해 영향을 설치류 및 영장류의 척수 세포를 제공하는 저 침습 치료 효과가 프로토콜이되고있다. 세포 전달이 대안적인 방법은, NPC의 pathotropism에 (ⅰ) 기능성 세포 부착 분자 및 염증성 사이토 카인 및 케모카인 수용체를 통해 환경을 감지하도록 특별히 타고난 용량 의존; (II) 누출 해부학 정맥 주사 후 장벽 (. IV) 또는 뇌 실내 (ICV) 주사를 건너; (III) 염증성 뇌와 척수 손상의 여러 혈관 주위 사이트 (들)의 수준에 축적; 및 (iv) 생체 내에서 다른 호스트 표적 세포 상 현저한 조직 영양 및 면역 조절 효과를 발휘한다. 여기에서 우리는 우리가 IV에 대한 개발 방법을 설명합니다. 및 &lt;EM&gt; ICV의 만성 CNS 염증성 탈수 초화의 모델로 실험자가 면역 뇌척수염 (EAE)와 생쥐의 동계의 NPC의 전달, 그리고 재생 신경의 염증이 뇌의 선택적 타겟팅에 대한 가치있는 기술과 조직의 줄기 세포 전달을 직시하다.

NPC 유도 및 특성 SVZ 해부는 기계 및 효소 분해 (그림 1A)에 의해 6~8주 된 C57BL / 6 마우스의 (N = 5-7 마우스 / 수영장) 풀에서 수행됩니다. CGM에서 배양 몇 일 후, 자유 부동을 neurospheres는 (그림 1A 및 1B)를 형성 시작합니다. 주요 분야는 수집 및 기계적으로 모든 4-5 DIV 계대 있습니다. 계대시, 라이브와 죽은 세포의 수는 확정 누적 세포 수는 성장 곡선 (그림 1C)를 생성하기 위해 꾸몄다. 이는 따라서 NPC 제제의 해외 안정성을 평가하기 위해, 간접 파라미터를 제공하는 전파 속도의 표시를 제공한다. 미분화 신경 세포 (예를 들어, 네 스틴) (그림 2A)을 neurospheres로 확산되면, NPC의 유사 분열 활동의 마커 (5 ㎍ / ㎖의 포스 히스톤 H3, PHH3)을 표현한다. 치...

신경 줄기 / 전구 세포 (NPC가)의 이식은 재생 신경의 큰 약속을 보유하고 있습니다. 의 NPC의 전신 배달은 뇌와 중추 신경계의 실험 만성 염증성 손상에 의해 영향을 설치류 및 영장류의 척수에 줄기 세포를 제공하는 효과적인 침략 낮은 및 치료 매우 효과적인 프로토콜로 설정되어 있습니다.

만성 EAE와 마우스의 신경 줄기 / 전구 세포의 전신 주입

Neural stem/precursor cells (NPCs) are a promising stem cell source for transplantation approaches aiming at brain repair or restoration in regenerative ...

본 프로토콜의 전반적인 목표는 다발성 경화증을 모방한 질환 모델인 실험적 자가면역성 뇌척수염(experimental autoimmune encephalomyelitis)에 걸린 마우스의 정맥 주사를 통해 신경 줄기 전구세포를 중추신경계(CNS)로 전달하는 것입니다. 이를 위해 먼저 성체 마우스의 뇌 하측뇌실 구역(subventricular zone)에서 신경 줄기 전구세포(NPCs)를 유도합니다. 두 번째 단계로는 바이러스 벡터 기술을 사용하여 NPCs에 유전적 표지를 부착함으로써 생체 내(in vivo) 세포 식별 및 추적을 가능하게 합니다.다음으로 증식된 신경구(neurospheres)를 단일 세포 현탁액으로 분리하고, 원하는 밀도로 재현탁하여 질환이 정점에 달한 EAE 마우스의 꼬리 정맥에 주입합니다. 최종적으로, 사후 장기 및 조직 병리 검사와 면역조직화학 염색을 수행하여 주입된 줄기세포의 생존 분포와 통합 양상을 확인하고 특성화합니다. 이 기술의 주요 장점은 염증성 신경계로 줄기세포 및 전구세포를 이식할 수 있는 최소 침습적이고 안전하며 효과적인 방법을 제공한다는 것입니다.이 방법은 신경계 염증성 질환 모델에서 전신 투여된 줄기세포의 안전성과 효능에 관한 세 가지 핵심 질문에 답하는 데 도움을 줍니다. 이 방법의 시각적 시연은 특히 신진 과학자들에게 유용하며, 뇌 줄기세포 분리부터 다발성 경화증 마우스 모델의 전신 투여 준비에 이르기까지의 핵심 실험 단계를 이해하는 데 도움을 줍니다. 첫 번째 단계는 적절한 멸균 기술을 사용하여 해부에 필요한 모든 용액을 준비하는 것입니다.갓 분리한 뇌를 뇌 슬라이서 매트릭스 위에 놓습니다. 면도날 두 개를 사용하여 뇌의 전극에서 2 mm 떨어진 지점부터 시신경로를 제외하고 관상 단면을 제작하며, 이전 절단면에서 후방으로 3 mm 간격으로 절단합니다. 뇌 절편을 깨끗한 페트리 접시에 놓고 해부 현미경 하에서 뇌실하구역 조직을 분리합니다.조직을 잘게 다진 후, 이전에 준비하여 여과한 소화액 30 milliliters에 넣습니다. 가볍게 흔들어 섞어준 다음, 15분마다 한 번씩 흔들어주며 30분 동안 배양합니다. 원심분리 후 상층액을 제거하고 펠렛을 200 microliters의 완전 성장 배지에 재현탁합니다.피펫팅으로 배지 또는 CGM을 첨가합니다. 먼저 P 1000 피펫을 사용하고, 이어서 P 200 피펫을 사용합니다. 단일 세포 현탁액 상태가 되면, CGM을 사용하여

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Research

연구

JoVE Journal

Immunology and Infection

면역학 및 감염학

특정 마우스 변종은 myelin 기본 단백질과 함께 실험적인 면역 encephalomyelitis (EAE)의 유도에 저항 할 수 있습니다. 여기에서 설명한 것은 응답하지 않는 문제를 역으로 여러 전형 EAE 모성 마우스 얼룩에 중풍 질환을 유도하는 간단한 예방 접종 프로토콜입니다.

입양 이전 및 Antigenic 챌린지에 의해 실험적 면역 Encephalomyelitis (EAE) 모성 마우스 변종에 응답하지 않는 문제를 극복

이 동영상은 뇌로 이동하는 자가반응성 T세포를 활성화하기 위해 미엘린 유래 펩타이드에 보조제를 주입하여 실험적 자가면역 뇌척수염(EAE)을 유발하는 방법을 보여줍니다. 백일해 독소는 혈액 뇌 장벽 투과성을 증가시켜 이러한 T 세포와 다른 면역 세포가 뇌로 들어갈 수 있도록 하기 위해 투여됩니다. 이러한 면역 세포는 탈수초화를 일으켜 신경 전달 장애와 EAE 발병을 유발합니다.

마우스 모델에서 실험적 자가면역 뇌척수염의 발생

이 비디오에서는 실험적 자가면역 뇌척수염(EAE)을 사용하여 다발성 경화증의 마우스 모델을 구축합니다. 마우스에 뉴런 펩타이드와 보조제가 포함된 에멀젼을 주입하여 자가반응성 T세포를 활성화하는 면역 반응을 유발합니다. 그 다음에는 백일해 독소(PTX)를 주입하여 혈액뇌장벽 투과성을 높여 자가반응성 T세포가 뇌에 침투할 수 있도록 합니다. 이 침투는 궁극적으로 수초성 손상을 초래하는 신호 폭포를 시작하여 다발성 경화증의 탈수초성 상태를 모방합니다.

마우스 모델에서 실험적 자가면역 뇌척수염 유도

우리는 실험적인 자가면역 뇌척수염을 연구하기 위해 성체 쥐의 노출된 척수에 유리창을 이식하고 유지하는 방법을 설명합니다. 이 창은 이광자 현미경을 사용하여 살아있는 동물의 세포 내 수준에서 세포 역학을 모니터링하기 위해 척수에 대한 만성 광학 접근을 제공합니다.

실험자가 면역 뇌척수염 성인 마우스에 유리 척수 Windows를 이식

실험자가 면역 뇌척수염 (EAE)는 다발성 경화증의 설립 동물 모델입니다. C57BL / 6 마우스는 중추 신경계 자기 반응성 면역 세포에 의해 야기 오름차순 이완성 마비를 초래 미엘린 희소 돌기 아교 세포의 당 단백질 (MOG) 펩티드 35-55 (MOG 35-55)로 면역화된다. 질병 유도 및 모니터링을위한 프로토콜이 논의 될 것이다.

수초 희소 돌기 아교 세포 당 단백질 (MOG<sub&gt; 35-55</sub&gt;) C57BL / 6 쥐에 실험자가 면역 뇌척수염 (EAE) 유도

이 원고는 다양한 질병 단계에서 각각 유세포 분석 및 정량적 PCR을 사용하여 림프절, 비장, 혈액 및 척수의 면역 세포 분포 및 mRNA 사이토카인 수치를 평가하는 방법과 함께 실험적 자가면역 뇌척수염(EAE) 모델의 유도 및 채점 방법을 설명합니다.

다양한 조직에서 면역 세포의 질병에 의존하는 유통의 마우스 및 평가에 실험자가 면역 뇌척수염의 유도

우리는 생체 살아있는 생물 발광 및 근적외선 SJL / J 마우스에서 다발성 경화증에 대한 실험자가 면역 뇌척수염 (EAE) 모델에서 시신경염과 뇌염의 이미징 기술을 보여준다.

마우스의 다발성 경화증의 EAE 모델에서 시신경염 및 뇌 염증의 생물 발광 및 근적외선 영상

여기, 선물이 vivo에서 실험적인 자기 면역 뇌 중 혈관 단위의 장애를 조사 하는 프로토콜. 우리는 특별히 명과 limitans에서 혈액-뇌 장벽 침투성 및 백혈구 마이그레이션에 관련 된 gelatinase 활동을 확인 하는 방법 주소.

Vivo에서 실험적인 자기 면역 뇌 중 Neurovascular 단위의 내 피와 폐해 장벽의 장애 시각화

본 프로토콜은 미엘린 희소돌기아교세포 당단백질을 사용하는 마우스 모델에서 실험적 자가면역 뇌척수염의 유도 및 임상 스코어링 시스템을 사용하여 질환 과정을 모니터링하는 것을 설명한다. 실험적 자가면역 뇌척수염 관련 증상은 마우스 대퇴골 마이크로 컴퓨터 단층 촬영 분석 및 오픈 필드 테스트를 사용하여 분석되어 질병 과정을 종합적으로 평가합니다.

실험적 자가면역 뇌척수염의 유도 및 다양한 평가 지표

현재까지 동일한 마우스에서 모든 주요 중추 신경계 상주 세포 유형을 동시에 분리하기 위한 프로토콜은 충족되지 않은 수요입니다. 이 프로토콜은 신경 염증 중에 복잡한 세포 네트워크를 조사하고 동시에 필요한 마우스 수를 줄이기 위해 순진하고 실험적인 자가면역 뇌척수염 마우스에 적용할 수 있는 절차를 보여줍니다.

성인 자가면역 뇌척수염 마우스에서 주요 중추 신경계 상주 세포 유형의 동시 분리

실험적 자가면역 뇌척수염(EAE)은 다발성 경화증의 동물 모델 역할을 합니다. 이 기사에서는 EAE에서 척수 염증, 탈수초화 및 축삭 손상을 채점하는 접근 방식을 설명합니다. 또한, 생쥐 혈청에서 용해성 신경 필라멘트 광 수준을 정량화하는 방법이 제시되어 살아있는 생쥐의 축삭 손상 평가를 용이하게 합니다.

실험적 자가면역 뇌척수염에서 중추신경계 염증, 탈수초화 및 축삭 손상 채점

배우세요 만성 EAE 마우스 모델에서 신경 줄기/전구 세포를 정맥 주사로 중추신경계에 전신 이식하는 최소침습적 방법을. 이 기술은 다발성경화증 연구에 활용됩니다.

만성 EAE와 마우스의 신경 줄기 / 전구 세포의 전신 주입

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