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DOI: 10.3791/51158-v
Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.
This manuscript describes a protocol for isolating exosomes from human urine using a modified precipitation technique. The method aims to provide a quick, scalable, and effective alternative for exosome isolation.
이 원고는 변형된 침전 기법을 사용하여 인간의 소변에서 엑소좀을 분리하는 프로토콜을 설명합니다.
이 절차의 전반적인 목표는 소변에서 엑소좀을 분리하기 위한 빠르고 확장 가능하며 효과적인 대안을 제공하는 변형된 엑소좀 침전 방법을 설계하는 것입니다. 이는 먼저 원심분리를 통해 소변 샘플에서 큰 사체와 세포 파편을 제거하고, 요로 엑소좀이 포함된 스내트를 새 튜브로 옮겨 놓음으로써 이루어집니다. 두 번째 단계에서는 TAM 홀스 단백질을 제거하기 위해 DTT를 포함하는 분리 용액에 펠렛을 용해시킵니다.
그런 다음 추가 원심분리 후, TP free 상등액을 엑소 퀵 TC 시약으로 밤새 배양하여 다음날 엑소좀을 침전시킵니다. 엑소마 퀵 TC 시약으로 처리된 시료를 마지막으로 한 번 원심분리하여 엑소좀 펠릿을 얻습니다. 궁극적으로 웨스턴 블롯(Western blot) 및 실시간 QPCR과 같은 다운스트림 프로세스를 엑소좀에서 수행하여 관심 바이오마커를 식별할 수 있습니다.
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