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수정 된 침전 법은 요도 엑소 좀을 분리
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JoVE Journal Medicine
A Modified Precipitation Method to Isolate Urinary Exosomes

수정 된 침전 법은 요도 엑소 좀을 분리

Full Text
18,103 Views
05:05 min
January 16, 2015

DOI: 10.3791/51158-v

Rupesh Kanchi Ravi1, Mahdieh Khosroheidari1, Johanna K. DiStefano1

1Diabetes, Cardiovascular and Metabolic Diseases Division,Translational Genomics Research Institute (TGen)

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Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.

Overview

This manuscript describes a protocol for isolating exosomes from human urine using a modified precipitation technique. The method aims to provide a quick, scalable, and effective alternative for exosome isolation.

Key Study Components

Area of Science

  • Neuroscience
  • Biology
  • Exosome Research

Background

  • Exosomes are small extracellular vesicles involved in intercellular communication.
  • Isolating exosomes from urine can provide insights into various biological processes.
  • Current methods may be time-consuming and less efficient.
  • A modified precipitation technique could enhance exosome recovery.

Purpose of Study

  • To develop a rapid method for exosome isolation from urine.
  • To improve scalability and effectiveness of exosome extraction.
  • To facilitate downstream applications such as biomarker identification.

Methods Used

  • Centrifugation to remove large cells and debris from urine samples.
  • Dissolving the pellet in isolation solution containing DTT.
  • Incubating the supernatant with exo quick TC reagent overnight.
  • Final centrifugation to obtain the exosome pellet.

Main Results

  • The modified method successfully isolates exosomes from urine.
  • Exosomes can be used for downstream analyses like Western blot and qPCR.
  • Efficient removal of contaminants enhances the purity of isolated exosomes.
  • The protocol is scalable for larger sample sizes.

Conclusions

  • The modified precipitation technique is a viable method for exosome isolation.
  • This approach can streamline exosome research in various biological studies.
  • Future studies may explore additional applications of isolated exosomes.

Frequently Asked Questions

What are exosomes?
Exosomes are small vesicles released by cells that play a role in cell communication and can carry proteins, lipids, and RNA.
Why is urine used for exosome isolation?
Urine is a non-invasive source of exosomes and can provide valuable biological information.
What is the significance of isolating exosomes?
Isolating exosomes can help identify biomarkers for diseases and understand cellular communication mechanisms.
How does the modified precipitation technique work?
The technique involves centrifugation to remove debris, followed by incubation with a reagent that precipitates exosomes for collection.
What downstream applications can be performed on isolated exosomes?
Isolated exosomes can be analyzed using techniques like Western blotting and real-time PCR to study their content and function.

이 원고는 변형된 침전 기법을 사용하여 인간의 소변에서 엑소좀을 분리하는 프로토콜을 설명합니다.

이 절차의 전반적인 목표는 소변에서 엑소좀을 분리하기 위한 빠르고 확장 가능하며 효과적인 대안을 제공하는 변형된 엑소좀 침전 방법을 설계하는 것입니다. 이는 먼저 원심분리를 통해 소변 샘플에서 큰 사체와 세포 파편을 제거하고, 요로 엑소좀이 포함된 스내트를 새 튜브로 옮겨 놓음으로써 이루어집니다. 두 번째 단계에서는 TAM 홀스 단백질을 제거하기 위해 DTT를 포함하는 분리 용액에 펠렛을 용해시킵니다.

그런 다음 추가 원심분리 후, TP free 상등액을 엑소 퀵 TC 시약으로 밤새 배양하여 다음날 엑소좀을 침전시킵니다. 엑소마 퀵 TC 시약으로 처리된 시료를 마지막으로 한 번 원심분리하여 엑소좀 펠릿을 얻습니다. 궁극적으로 웨스턴 블롯(Western blot) 및 실시간 QPCR과 같은 다운스트림 프로세스를 엑소좀에서 수행하여 관심 바이오마커를 식별할 수 있습니다.

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