Name: 수정 된 침전 법은 요도 엑소 좀을 분리 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2015-01-16T13:00:00.000+00:00
Duration: 5 min 5 s
Description: 배우세요 인간 소변에서 엑소좀을 분리하는 수정된 침전법을 통해 신속하고 확장 가능한 분리 프로토콜을 익히세요. 이 방법은 생물학적 마커 연구에 활용됩니다.

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이 연구를 지원해 준 Roney Family Foundation에 감사드립니다. 우리는 이 작업에 설명된 실험의 계획 및 실행에 대한 M. Lucrecia Alvarez 박사의 기여를 인정합니다.

주 :. 변성 침전 법을 이용하여 엑소 좀 뇨의 분리에 관련된 단계는도 1에 도시되는 초기 단계 원심 분리에 의해 큰 사균의 제거 및 세포 파편을 포함한다. 각각의 후속 단계에서 수집 된 상층 액에서 얻은 최종 펠렛은 단백질, RNA 및 DNA의 분리를위한 추가의 추출 용액에 용해되는 엑소 좀에 대응한다. 소변 1. 컬렉션 <ol><li> 소변 수집하기 전에, 제조업체의 지시에 따라 단백질 분해 효소 억제제 칵테일을 준비하고 빈 멸균 용기에이 칵테일의 3.125를 가하여. 프로테아제 저해제 칵테일을 포함하는 튜브이어서 소변 수집 지원자에게 분배 될 수있다. 주 : 프로테아제 억제제를 첨가하는 이유는 소변에서 단백질 분해를 최소화하는 것이다. 우리는 특별히에서 프로테아제 억제제 칵테일을 사용하지만시그마, 다른 시판 프로테아제 억제제가 치환 될 수있다. </li><li> 처음 무효 소변의 약 10 ml의를 수집합니다. 즉시 수집 후 저장 또는 냉동하지 않고 소변을 처리합니다. 수정 된 침전 법을 사용하여 중복에 소변 엑소 좀을 분리; 다른 비뇨기 엑소 입자의 정량화 동안 중복 중 하나는, DNA, RNA 및 총 단백질 추출을위한 것이다. 참고 : 24 시간 소변 시료를 4 ℃에서 저장하여 엑소의 격리를 위해 수집 할 수 있습니다. </li></ol> 세포 파편과 탬-Horsfall 단백질 2. 제거 (THP) <ol><li> 15 ml의 원심 분리기 튜브에 소변 샘플을 전송합니다. 원심 분리기 37 ° C에서 10 분 동안 17,000 XG에 소변 10ml의 세포 및 세포 찌꺼기 (도 1)를 제거한다. </li><li> 피펫을 사용하여, 추가 처리를 위해 새로운 튜브에 뜨는을 전송합니다. 차단 용액 500 μL의 펠렛을 재현 탁 (250 mM의 크로즈, 10 밀리미터 하시 느니라최종 농도 200 ㎎ / ㎖)에서 37 ° C : DL-디티 오 트레이 톨 (DTT 10 분 인큐베이션 anolamine, pH를 7.6). 참고 : DTT는 수확량 감소로 이어지는, 엑소 좀 트랩 THP를 저하 추가됩니다. 뜨는 전송하는 동안 방해받지 펠렛을 떠날주의, 상층 액은 펠릿이 없는지 확인합니다. </li><li> 소용돌이 펠렛 시료 펠릿까지 매 2 분을 완전히 용해시킨다. 그런 다음 용해 펠릿에 격리 솔루션의 500 μl를 추가합니다. </li><li> 즉시 37 ℃에서 10 분 동안 17,000 XG에 분리 펠릿 용액, 원심 첨가 한 후. 피펫은 뜨는 및 이전 버전 수집 된 상층 액과 결합. </li><li> SDS-PAGE 분석을위한 격리 솔루션의 50 μL에 펠렛을 재현 탁. 주 : TBS 또는 PBS 펠릿을 재현 탁 대신 분리가 사용될 수도있다. </li></ol> 엑소 펠렛 3. 분리 <ol><li> 수집 된 supern 11 히드로atant, ExoQuick-TC 시약 3.3 ml에 추가하고 적어도 12 시간 동안 4 ° C에서 배양한다. 주 : TC-ExoQuick 시약을 상층 액 부피의 비는 증가 또는 exosomal 수율을 감소하도록 조정될 수있다. 우리는 추가 시약의 낮은 볼륨 엑소 좀 작은 수율을 생산하는 것을 관찰했다. </li><li> 부화 후, 원심 분리기 25 ° C에서 30 분 동안 10,000 XG에 샘플 / ExoQuick-TC 믹스. </li><li> SDS-PAGE 분석을위한 새로운 튜브에 뜨는을 전송합니다. </li><li> 엑소 좀 펠렛은 DNA, RNA 및 단백질 추출 및 CD9 11 ELISA를 이용한 엑소 입자의 정량화 -80 ° C에서 저장 될 수있다. 참고 : 엑소 펠릿이 제한 동결 융해와 1 년 동안 -80 ° C에 저장할 수 있습니다. </li></ol> 4. 바이오 마커 검출 및 엑소 펠렛의 분석 <ol><li> 하류 분석에서, DNA / RNA / 단백질 단리 키트 및 RNA 분리 KI를 사용하여 엑소 좀 펠렛으로부터 DNA, RNA 및 단백질을 추출제조업체의 지침에 따라 t. 샘플 2 μL의 260 nm와 280 nm에서의 흡광도를 측정함으로써 Nanodrop 분광 광도계를 이용하여 농도를 결정한다. </li><li> 정량 실시간 RT-PCR (qPCR에)의 TaqMan 마이크로 RNA 분석을 사용하여이 또는 miRNA에 특이 적 프라이머 (우리의 경우, 우리는 인간은 miR-192과의 miR-1207-5p 별 분석을 사용) 수행합니다. </li><li> SDS-PAGE 분석을 위해 일차원 전기 영동을 4 내지 12 % 비스 -Tris 겔 분리 단백질 시료를 사용한다. 제조업체의 지시에 따라 실버 염색 키트를 사용하여 젤을 가시화. </li><li> 제조업체의 지시 사항에 따라 PVDF 멤브레인을 사용하여 웨스턴 블롯 분석을 수행합니다. 웨스턴 블롯 검출 종양 감수성 유전자 (101) 단백질 또는 TSG101에 세포 사멸 연결된 유전자-2 상호 작용하는 단백질 X 또는 ALIX와 마우스 단일 클론 항체에 토끼 폴리 클로 날 항체를 사용합니다. 오픈 액세스 NIH ImageJ에 소프트웨어에 의해 밴드의 밀도를 정량화 (http://rsbweb.nih.gov/ij/) 또는유사한 프로그램. </li><li> 제조업체의 지시에 따라, CD9 ELISA 키트를 사용하여 얻어진 뇨 엑소 입자의 수​​를 정량화. </li></ol>

<ol><li>Miranda, K. C., Bond, D. T., McKee, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nucleic+acids+within+urinary+exosomes%2Fmicrovesicles+are+potential+biomarkers+for+renal+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Kidney+Int%22%5BJournal%5D)">Nucleic acids within urinary exosomes/microvesicles are potential biomarkers for renal disease.</a> Kidney Int. 78, 191-199 (2010).</li>
<li>Pisitkun, T., Shen, R. F., Knepper, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Identification+and+proteomic+profiling+of+exosomes+in+human+urine%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+USA%22%5BJournal%5D)">Identification and proteomic profiling of exosomes in human urine.</a> Proc Natl Acad Sci USA. 101, 13368-13373 (2004).</li>
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<li>Rood, I. M., Deegens, J. K., Merchant, M. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparison+of+three+methods+for+isolation+of+urinary+microvesicles+to+identify+biomarkers+of+nephrotic+syndrome%5BTitle%5D)+AND+%22Kidney+Int%22%5BJournal%5D)">Comparison of three methods for isolation of urinary microvesicles to identify biomarkers of nephrotic syndrome.</a> Kidney Int. 78, 810-816 (2010).</li>
<li>Alvarez, M. L., Khosroheidari, M., Kanchi Ravi, R., DiStefano, J. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparison+of+protein%2C+microRNA%2C+and+mRNA+yields+using+different+methods+of+urinary+exosome+isolation+for+the+discovery+of+kidney+disease+biomarkers%5BTitle%5D)+AND+%22Kidney+Int.+Nov%22%5BJournal%5D)">Comparison of protein, microRNA, and mRNA yields using different methods of urinary exosome isolation for the discovery of kidney disease biomarkers.</a> Kidney Int. Nov. 82 (9), 1024-1032 (2012).</li>
<li>Kang, S. W., Kim, Y. W., Kim, Y. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Study+of+the+association+of+-667+aquaporin-2+%28AQP-2%29+A%2FG+promoter+polymorphism+with+the+incidence+and+clinical+course+of+chronic+kidney+disease+in+Korea%5BTitle%5D)+AND+%22Renal+Fail%22%5BJournal%5D)">Study of the association of -667 aquaporin-2 (AQP-2) A/G promoter polymorphism with the incidence and clinical course of chronic kidney disease in Korea.</a> Renal Fail. 29, 693-698 (2007).</li>
</ol>

이 기사에 대한 출판 비용은 SBI 생명 과학에 의해 지불했다.

소변에서 엑소 좀 침전을 포함하는 대부분의 방법은 탬-Horsfall 단백질 (THP)에 의해 형성되는 고분자 네트워크의 제거를 해결하지 않습니다. 이 단백질은 추정되는 트랩 초기 저속 원심 엑소 좀 동안 소변에 다량으로 존재한다. 수정 된 방법에서 우리는 엑소 침전하기 전에 DTT를 사용하여 THP를 감소시켰다. 도 2에 도시 된 바와 같이, THP 더 많은 양이 단백질의 제거를 나타내는, 최종 상등액과 펠렛 엑소 아니 THP로, 미처리 펠릿 뇨에서 관찰되었다. 펠릿의 단백질의 정량은 여섯 배 높은 수율을 표시하고, 펠릿 CD9 ELISA 정량에, 그것은 (결과는도 11에 도시 생략) 소변 1 ㎖ 당 엑소의 수율 변성 침전 법 5 배 높았다 관찰되었다. 바이오 마커 알릭스 6 TSG101 8 엑소 펠릿 검출되었다; 우리는이 단백질이 집중 사용 하 감지 할 수변성 침전 법의 샘플. 우리는 또한 수정 된 침전 법 (11)를</sup...

소변 엑소 좀은 miRNA가 1 농축 한 것으로 나타났습니다 소변 배수 시스템을 긋고 사구체 족 세포, 신장 세뇨관 세포와 세포를 포함 비뇨기 공간에서 정상 및 병적 인 상태에서 모든 종류의 세포에서 파생 된 multivesicular 기관 (MVB)의 100 나노 미터의 작은 내부 소포 있습니다 -2. 많은 연구자들은 건강한 사람의 소변뿐만 아니라 신장 및 / 또는 체계적인 질병에 3-5 가진 사람에서 분리 된 엑소 좀에 별개의 단백질을 발견했다. 엑소 좀은 8-9 초 원심 분리 또는 침전에 10-11 nanomembrane 필터를 조합, 예컨대 수크로오스 또는 6-7없이 두 단계 차동 초 원심 분리 등의 다양한 방법을 이용하여 분리 할 수있다. 우리는 최근에 소변 엑소 좀을 격리하며 miRNA의 단백질 바이오 마커 (11)를 검출하는, 간단하고, 빠르고, 확장 가능하고 효과적인 방법을 개발했다. 바이오 마커는 다양한 생물학적 다양한 유체에서 발견 될 수 있지만, UR오프라인은 비교적 비 침습적 방식으로 다량으로 얻을 수 있기 때문에 신장 및 요로 질환 환자를위한 가장 편리한 선택이다. 소변 엑소 좀을 6-11을 분리하는 방법은 여러 가지가 있지만, 가장 일반적으로 사용되는 절차는 30 % 자당 쿠션 차동 초 원심 분리에 따라 달라집니다. 이 방법은 효율적이며,이 절차와 절연 얻어진 엑소 좀의 품질이 높은 반면, 기술 자체는 숙련 된 사람이 필요하고 시간이 많이 소요되는 여러 단계를 초 원심 분리에 필요하다. 여과 및 침전 등의 다른 방법은, 독점적 인 침전 시약을 사용하는 것을 포함하여, 엑소 좀의 분리를 위해 개발 된 (즉, ExoQuick-TC : 시스템 생명 과학, 마운틴 뷰, CA). 이 시약을 사용하여 침전 빠르고 비교적 쉽지만, 절연 엑소 좀의 순도는 초 원심 메트 비해 낮다OD. 최근 우리는 우리 실험실에서 개발 ExoQuick 11-TC를 사용하여 침전 법의 변형을 포함 비뇨기 엑소 좀의 분리를위한 여섯 방법을 비교 하였다. 우리는이 수정 침전 법은 단백질, miRNA의, mRNA를 자체 빠르고 초 원심보다 쉽게​​ 구현했다 절차의 높은 수량을 산출 한 것으로 나타났습니다. 여기, 우리는 단계적으로 수정 된 침전 법의 실험 프로토콜을 설명하고 엑소 분리하는 다른 방법에 비해이 기술의 장점과 단점에 대한 논의를 포함한다. 변성 침전 법은 exosomal 단백질과 상관하고, 소변 엑소 수율을 감소하는 것으로 알려져 탬-Horsfall 단백질 제거하여 엑소 입자의 초기 침전을 포함한다. 우리는 이러한 수정은 소변에서 exosomal 준비의 수율과 순도를 증가 것을 발견했다.

<table><tbody><tr><td>Corning 15ml 원심분리기 튜브</td><td>Corning(Sigma Aldrich)</td><td>CLS430791</td><td></td></tr><tr><td>프로테아제 억제제 칵테일</td><td>Sigma Aldrich</td><td>P8340</td><td></td></tr><tr><td>원심분리기</td><td>Sorvall</td><td></td><td></td></tr><tr><td>DL-dithiothreitol</td><td>Sigma Aldrich</td><td>D9779</td><td>최종 농도 200mg/ml</td></tr><tr><td>Novex NuPAGE SDS-PAGE 시스템(4-12% Bis-Tris Gel 1.0mm, 10웰</td><td>)Invitrogen</td><td>NP0321BOX</td><td>SDS-PAGE 분석용</td></tr><tr><td>ECL Advance 웨스턴 블로팅 검출 키트</td><td>GE Healthcare Life Sciences</td><td>RPN2135</td><td>바이오마커</td></tr><tr><td>Exoquick-TC 시약</td><td>시스템 Biosciences (SBI)</td><td>EXOTC50A-1</td><td>엑소좀 분리용</td></tr><tr><td>엑소좀 CD9 ELISA Complete Kit</td><td>System Biosciences (SBI)</td><td>EXOEL-CD9-A-1</td><td>엑소좀 정량화용</td></tr><tr><td>AllPrep DNA/RNA/단백질 미니 키트</td><td>Qiagen</td><td>80004</td><td>DNA, RNA, 단백질 분리용</td></tr><tr><td>Rneasy MinElute Cleanup kit</td><td>Qiagen</td><td>74204</td><td></td></tr><tr><td>NanoDrop 2000 UV-Vis 분광 광도계</td><td>단백질 정량화를 위한</td><td>Thermo Scientific</td><td></td></tr><tr><td>ProteoSilver Sliver Stain Kit</td><td>Sigma Aldrich</td><td>PROTSIL1-1KT</td><td>SDS-PAGE 젤</td></tr> <tr><td>염색용Xcell SureLock Mini-Cell 전기영동 시스템</td><td>Life Technologies</td><td></td><td>SDS-PAGE 겔 실행용</td></tr><tr><td>TaqMan microRNA 분석</td><td>Life Technologies</td><td></td><td>RT-PCR 분석용</td></tr><tr><td>qBasePlus v1.5 소프트웨어</td><td>Biogazelle NV</td><td></td><td>RT-PCR 분석 데이터 분석용</td></tr><tr>ALIX <td>Millipore</td><td></td><td>에 대한 토끼 다클론 항체</td><td>바이오마커의 웨스턴 블롯 검출용</td></tr><tr><td>TSG101</td><td>Abcam</td><td></td>에 대한 마우스 단클론 항체: <td>바이오마커의 웨스턴 블롯 검출</td></tr></tbody></table>

수정 된 침전 법은 요도 엑소 좀을 분리

A Modified Precipitation Method to Isolate Urinary Exosomes

소변 및 혈장에서 신장 질환을 조기에 발견할 수 있는 바이오마커의 식별은 수년 동안 활발한 관심 분야였습니다. 40-100nm 크기의 소변 엑소좀 소포는 모든 네프론 분절의 세포에 의해 정상적인 조건에서 소변으로 방출되며 세포 유형을 대표하는 단백질, mRNA 및 microRNA를 포함할 수 있습니다. 신장 기능 장애 또는 손상 상태에서 엑소좀은 이러한 성분의 비율이 변화된 것을 포함할 수 있으며, 이는 질병의 바이오마커로 작용할 수 있습니다. 현재 요로 엑소좀을 분리하는 데 사용할 수 있는 방법은 여러 가지가 있으며, 이전에 초원심분리를 기반으로 한 3가지 방법, 나노멤브레인 한외여과 농축기를 사용하는 방법, 상업용 침전 시약을 사용하는 방법, 실험실에서 개발한 ExoQuick 시약을 사용한 침전 기법을 변형하는 방법 등 각 접근 방식에 대한 실험적 비교를 수행한 바 있습니다. 그 결과, 변형된 침전법(modified precipitation method)이 엑소좀 입자, miRNA 및 mRNA의 수율을 가장 높게 생성했으며, 이를 통해 후속 RNA 프로파일링을 위한 엑소좀 분리에 적합하다는 것을 발견했습니다. 우리는 변형된 엑소좀 침전법이 소변에서 엑소좀을 분리하기 위한 빠르고 확장 가능하며 효과적인 대안을 제공한다는 결론을 내렸습니다. 이 보고서에서는 사람의 소변에서 엑소좀을 분리하기 위해 ExoQuick 시약을 사용하여 수정된 침전 기법을 설명합니다.

소변 엑소 좀은 신장 상피 세포에서 분비되는 단백질의 miRNA와 mRNA의 바이오 마커를 수행한다. 이러한 엑소 좀의 분리 및 검출은 당뇨병 성 신증으로 신장 질환의 조기 발견을위한 유용한 진단 도구를 제공 할 수있다. 인간을 대상으로 수집 된 소변 샘플에서 엑소 좀의 분리를위한 몇 가지 방법이 있습니다. 우리는 이전에 소변 엑소 분리의 여섯 방법을 비교하여 단백질의 mRNA와 miRNA의 수준 (11) 결과 조사 하였다. 여기에 우리의 목표는 구체적으로 우리가 소변 엑소 좀을 효율적으로 분리를 위해 개발 한 수정 침전 법을 설명했다. <img alt="그림 1" src="/files/ftp_upload/51158/51158fig1highres.jpg" /> 도 1은 변형 된 침전 법을 이용하여 엑소 좀 뇨의 분리에 관련된 여러 단계의 개략적 인 대표 흐름도를 설명...

이 원고는 변형된 침전 기법을 사용하여 인간의 소변에서 엑소좀을 분리하는 프로토콜을 설명합니다.

Identification of biomarkers that allow early detection of kidney diseases in urine and plasma has been an area of active interest for several years. ...

이 실험 절차의 전반적인 목적은 소변에서 엑소좀을 분리하기 위한 빠르고 확장 가능하며 효율적인 대안이 되는 수정된 엑소좀 침전법을 설계하는 것입니다. 이는 먼저 원심분리를 통해 소변 샘플에서 크기가 큰 사멸 세포와 세포 파편을 제거하고, 소변 엑소좀이 포함된 상층액을 새 튜브로 옮김으로써 수행됩니다. 두 번째 단계에서는 DTT가 포함된 분리 용액에 펠렛을 녹여 TAM horse fall 단백질을 제거합니다.그 후 추가 원심분리를 거쳐, TP가 제거된 상층액을 exo quick TC 시약과 함께 하룻밤 동안 배양하여 다음 날 엑소좀을 침전시킵니다. exo quick TC 시약으로 처리한 샘플을 마지막으로 한 번 더 원심분리하여 엑소좀 펠렛을 얻습니다. 최종적으로, Western blot 및 realtime QPCR과 같은 하위 공정을 엑소좀에 수행하여 관심 있는 바이오마커를 식별할 수 있습니다.초원심분리 여과 및 침전과 같은 기존 방법과 비교했을 때 이 기술의 주요 장점은 초원심분리 단계가 필요 없고 수행하기 쉬우며 상대적으로 빠르게 진행되면서도, 후속 분자 분석을 위해 순도가 높고 수율이 좋은 엑소좀을 얻을 수 있다는 점입니다. 소변 채취 전, 멸균된 빈 용기에 갓 조제한 프로테아제 억제제 칵테일을 3.125 milliliters 넣은 후, 해당 용기에 첫 소변 약 10 milliliters를 채취합니다. 채취한 샘플을 15 milliliter 원추형 튜브로 옮깁니다.참고로, 4°C에서 보관한 24시간 소변 수집 샘플 또한 엑소좀 분리에 사용할 수 있습니다. 17,000 g, 37°C에서 10분 동안 튜브를 원심 분리하여 소변 엑소좀으로부터 세포 잔해를 제거하거나 분리합니다. 그다음, 펠렛이 흐트러지지 않도록 주의하며 상층액을 새 튜브로 옮기고, 펠렛을 500 µL의 분리 용액에 재현탁합니다.펠렛을 최종 농도 200 mg/mL의 DTT와 함께 37 °C에서 10분 동안 배양합니다. 2분마다 샘플을 볼텍싱합니다. 그 후 펠렛이 완전히 용해되면, 샘플에 분리 용액 500 µL를 첨가하고 즉시 결과 현탁액을 원심 분리합니다.상층액을 이전에 수집한 상층액과 합친 후, 새로운 펠릿을 50 µL의 분리 용액으로 재부유시킵니다. 엑소좀을 분리하여 SDS page 분석을 수행하려면, 먼저 합친 상층액 11 mL와 exo quick TC 시약 3.3 mL를 4 °C에서 최소 12시간 동안 배양합니다. 배양 후 샘플을 원심분리하고, 상층액은 SDS page 분석을 위해 새 튜브로 옮기며, 요중 엑소좀이 포함된 펠릿은 DNA, RNA 또는 단백질을 추출하거나 -80 °C에서 보관하는 데 사용합니다.NanoDrop 분광광도계를 사용하여 2 µL의 샘플로 260 및 280 nm에서 흡광도를 측정함으로써 각 추출물의 DNA 및 RNA 농도를 결정합니다. SDS-PAGE 분석 및 Western blot 분석을 이용한 바이오마커 검출의 수정된 재현 결과가 제시되었으며, 처리되지 않은 소변 레인과 첫 번째 소변 펠렛 레인에서 90~100 kDa에 해당하는 단백질 밴드가 관찰되어 최종 상층액과 엑소좀 펠렛 레인에서 각각 TAM horse fall 단백질의 존재와 제거를 나타냅니다. TAM horse fall 단백질 밴드가 관찰되지 않은 것은 이전 단계에서 TAM horse fall 단백질이 제거되었음을 나타내며, 결과적으로 엑소좀 펠렛 수율이 증가하였습니다.본 실험에서는 적은 양의 샘플을 사용했음에도 불구하고 바이오마커인 Alex와 TSG 1 0 1이 검출되었으며, 이는 바이오마커 분석을 위한 엑소좀 펠렛의 순도가 매우 높고, TAM horse fall protein을 포함한 다량의 수용성 단백질이 존재하지 않음을 나타냅니다. 이 기술은 만성 신장 질환 분야의 연구자들이 당뇨병성 신증의 조기 발견 및 진단을 위해 소변에서 분리한 엑소좀을 사용할 수 있는 길을 열어주었습니다.

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Research

연구

JoVE Journal

Medicine

의학

혈장 분리 엑소좀은 조기 발견 및 질병 진행을 위한 바이오마커의 검출 및 추적 관찰을 위한 비침습적이고 반복 가능한 방법으로 사용할 수 있습니다. 이 동영상은 비소세포폐암 환자의 혈장 샘플에서 엑소좀을 분리하는 프로토콜에 대해 설명하며, 이는 DNA 및 단백질 추출에 사용될 수 있습니다.

엑소좀 분리: 비소세포폐암 환자의 혈장에서 엑소좀을 분리하는 기법

이 동영상은 중수소산화물에서 제조된 25%(w/w) 자당 쿠션을 사용하여 인간 배아 신장 세포 배양에서 수확한 컨디셔닝 배지에서 엑소좀을 분리하는 밀도 기반 초원심분리 기술을 설명합니다. 분리된 엑소좀은 다운스트림 응용에 사용할 수 있습니다.

엑소좀 분리: 배양된 세포의 컨디셔닝된 배지에서 엑소좀을 분리하기 위해 설탕 쿠션을 사용하는 밀도 기반 초원심분리 기법

이 기사에서는 전혈에서 엑소좀을 분리하고 반자동 기기를 사용한 나노 입자 추적에 의한 추가 분석 방법을 제시합니다. 제시된 기술은 액체 현탁액의 입자를 시각화하고 분석하기 위한 매우 민감한 방법을 제공합니다.

엑소 정량화 및 크기 측정을위한 혁신적인 방법

담즙액은 잠재적으로 중요한 바이오마커를 포함하는 세포 외 소포체/엑소좀의 귀중한 공급원입니다. 이 프로토콜은 miRNA 프로파일링을 포함한 추가 분석을 위해 인간 담즙에서 엑소좀을 분리하는 강력한 방법을 나타냅니다.

격리 및 프로파일 링 마이크로 RNA-포함하는 인간의 담즙에서 엑소 좀을

여기, 선물이 exosomes 플라즈마와 비 exosomal 혈액 단백질의 감소 공동 정화와 혈 청에서 순화 하는 프로토콜. 최적화 된 프로토콜 적용, 효소 치료, 및 크기 배타 착 색 인쇄기를 포함 한다. Exosomes 혜택 다운스트림 분석, 소포 및 proteomic 특성의 더 정확한 정량화를 포함 하 여 향상 된 정화.

단백질 소화, 한, 및 크기 배제 크로마토그래피 인간의 혈장 및 혈 청에서 Exosomes의 절연을 최적화 하

여기, 두 세포 외 기 격리 프로토콜, 한 원심 분리 및 밀도 그라데이션 원심 분리, extracellular 소포 murine bronchoalveolar 게 액체 샘플에서 분리 된 ultracentrifugation 설명 합니다. 두 방법으로 murine bronchoalveolar 게 액체에서 파생 된 세포 외 소포는 계량 하 고 특징.

Extracellular 소포 Murine Bronchoalveolar 게 유체는 한 원심 분리 기법을 사용 하 여에서 격리

여기, 선물이 정도 정상 조직적 조상 세포에서 파생 된 exosomes를 이식 하 여 듀 켄 씨 근이 영양 증 쥐에 심장 기능을 개선 하는 프로토콜.

정화와 조직적 조상 세포의 이식 파생 듀 켄 씨 근 Dystrophic 쥐에서 심장 기능을 개선 하기 위해 Exosomes

이 프로토콜은 1) 성체 마우스 비복근에서 일차 섬유아세포를 분리하고 배양하는 방법과 2) 자당 밀도 구배와 웨스턴 블롯 분석을 결합한 차등 초원심분리 방법을 사용하여 엑소좀을 정제하고 특성화하는 방법을 보여줍니다.

골격근 섬유아세포(Skeletal Muscle Fibroblast)에서 엑소좀의 분리 및 특성 분석(Isolation and Characterization of Exosomes from Skeletal Muscle Fibroblasts)

본 프로토콜은 기능성 자성 비드를 이용한 요로 세포외 소포체의 효율적인 분리를 위한 상세한 설명을 제공한다. 또한 웨스턴 블로팅(western blotting), 단백질체학(proteomics) 및 포스포프로테오믹스(phosphoproteomics)를 포함한 후속 분석도 포함됩니다.

단백질체학 및 인산염체학 분석을 위한 생체 유체에서 세포외 소포체의 화학적 친화성 기반 분리

세포외 소포체는 생물의학 응용 분야에 엄청난 가능성을 가지고 있지만, 현재의 분리 방법은 시간이 많이 걸리고 임상적으로 사용하기에는 비실용적입니다. 이 연구에서는 최소한의 단계로 연속적으로 많은 양의 생체 유체에서 세포외 소포체를 직접 분리할 수 있는 미세유체 장치를 제시합니다.

분기된 A4F 미세유체 장치를 사용한 대용량 시료에서 세포외 소포의 단일 단계 분리

배우세요 인간 소변에서 엑소좀을 분리하는 수정된 침전법을 통해 신속하고 확장 가능한 분리 프로토콜을 익히세요. 이 방법은 생물학적 마커 연구에 활용됩니다.

수정 된 침전 법은 요도 엑소 좀을 분리

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