Name: 감소 이트라코나졸의 농도와 지속 시간은 치료의 성공 Batrachochytrium의 dendrobatidis 수륙 양용 비행기에 감염 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2014-03-14T18:45:00.000+00:00
Duration: 6 min 49 s
Description: 배우세요 Batrachochytrium dendrobatidis에 감염된 양서류를 치료하는 수정된 이트라코나졸 요법을. 0.0025% 농도로 6일간 5분씩 목욕시키면 감염을 효과적으로 제거하고 부작용을 최소화합니다. QPCR 분석으로 치료 효과를 확인합니다.

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나는에 도움을 실험 설계를 개념화 및 재료 지원, 치료 요법 및 부검을 확립 도움 A. Pessier 분석, MWH 채트, MJ Robak, K. 테스 커 및 D. Lenger 도움을 CL 리차드 - Zawacki에게 감사의 말씀을 전합니다 실험실과 촬영 기간 동안 자신의 공간의 사용에 대한 지원 및 타 롱가 동물원에서 M. 맥파든과 P. 할로. 이 프로젝트는 부분적으로 LA Brannelly에게 수여 루이지애나 환경 교육위원회의 승인을 통해 생활 기술에 의해 야생 동물과 수산의 루이지애나 부에 의해 투자되었다.

윤리 승인 :이 연구와 그 방법은 툴레 인 대학의 동물 사용 및 관리위원회 (. 프로토콜없이 0407)에 의해 승인되었다. 1. BD 감염에 대한 테스트 <ol><li> BD에 대한 보라고 <ol><li> 멸균 면봉 면봉 동물 ventrum에 다섯 번, 각 허벅 다리, 양쪽, 45 스트로크의 총 각 다리에 다섯 번. 보라고는 양서류의 피부에 BD에 대한 샘플링의 비 침습적 인 방법입니다. </li><li> 부드럽게 DNA의 가장 큰 금액을 면봉에 수집하기 위해 스트로크시 사이에 면봉을 회전. </li><li> -20 ℃에서 1.5 ml의 마이크로 튜브에 보관 면봉 </li></ol></li><li> DNA 추출 및 qPCR의 분석 <ol><li> 동물 조직에 대한 지침에 따라, 시판되는 DNA 분리 키트를 이용하여 면봉으로부터 게놈 DNA를 추출한다. </li><li> 보일 다음 정량 실시간 PCR (qPCR에)를 사용하여 추출 된 DNA를 분석 <eM&gt; 등 17, 다음과 같이 수정과. : </li><li> 이중 탈 이온수로 DNA 추출 샘플보기 1:10 희석. </li><li> PCR 억제를 방지하기 위하여 소 혈청 알부민 (BSA)의 0.7 μl를 추가. </li><li> PCR 억제가 결과에 영향을 미치는되지 보장하기 위해 각 샘플의 내부 양성 대조군을 포함합니다. </li><li> 긍정적이고 부정적인 제어 및 유주자 (감염) 부하를 추정하기 위해 희석 기준의 일련의 실행 샘플. </li></ol></li></ol> 2. 접종 <ol><li> 문화 BD <ol><li> (40 분 동안 121 ° C) 멸균 및 냉각, 1 L의 역삼 투 또는 탈 이온수에 10g의 트립 톤을 추가하여 트립 톤 국물을 준비한다. 일단 23 ° C로 냉각, 1 ㎖ 페니실린 - 스트렙토 마이신을 추가합니다. </li><li> 23 ° C에서 이레 동안 트립 톤 국물에 (Phyllomedusa 여우 원숭이에서 Guabal, 파나마에서 격리 J. Longcore에서 JEL411) BD 변형 성장 </li></ol></li><li> B로 이동로스는 문화 트립 톤 한천 플레이트합니다. <ol><li> 판을 만들려면 1 L 역삼 투 또는 탈 이온수와 오토 클레이브 (40 분 동안 121 ° C)에 10g의 트립 톤과 10g의 한천을 추가합니다. </li><li> 멸균 혼합물을 터치 할 정도로 멋지다하지만 응결 전에, 층류 후드, 페트리 접시에 가득 1/4-1/3을 부어 한 번. </li><li> 한천이 완전히 응고 및 냉각되면, 각각의 판에 0.5 ㎖ BD 국물을 추가하고 접시 주위에 균일하게 확산. 건조하도록 허용합니다. </li><li> 플레이트는 BD의 zoospores, 파라 필름과 인감 플레이트에 접종하면. </li><li> 판 5-7 일 동안 23 ° C에서 배양 할 수 있습니다. 접종 전에 생존을 보장하기 위해 운동을 유주자 확인합니다. </li></ol></li><li> 유주자 접종 솔루션에 대한 홍수 판 <ol><li> BD 배양과 성장의 5~7일 후, 세 수돗물 5 ㎖의 각 판 홍수와 zoospores 10 분 동안 미디어를 입력 할 수 있습니다. </li><li> 유주자의 suspe을 붓고휴대용 용기에 nsion. </li><li> 혈구와 유주자 농도를 추정한다. </li><li> 세 수돗물로 1 × 10 6 3 당 ML의 농도로 혼합물을 희석. </li></ol></li><li> 동물을 접종 <ol><li> 각각 50 ㎖ 용기에, 그 ventrum에 3 ㎖ 접종 혼합물을 부어 각각의 동물에 접종. 추가 접종은 접종 용기의 바닥에 떨어지는 것을 허용한다. </li><li> 각 동물은 감염을 확인하기 위해 24 시간 동안 접종 용기에 남아있을 것입니다. </li><li> 접종 24 시간 후, 개별 소독 terraria에 동물을 반환합니다. </li><li> 감염 2 주에 구축 할 수 있습니다. 면봉과의 qPCR 결과 감염을 확인하고 치료를 시작합니다. </li><li> BD-음성 대조군의 경우, 5 ㎖와 홍수 BD없는 한천 플레이트는 상기와 같은 방법을 사용하여 수돗물 및 모의 접종 동물을 세. </li></ol></li></ol> 3. 치료식이 요법 <ol><li> Prepa처리 욕 재 <ol><li> 1 L 양서류 링거액 (- 가장 효과적인 치료 농도 0.0025 %의 이트라코나졸)에 2.50 ML에게 수성 이트라코나졸 (1 % Sporanox 구강 솔루션)를 추가합니다. <ol><li> 양서류 링거액 제조법 : 1 L 역삼 투 또는 탈 이온수, 6.6 g의 소듐 클로라이드, 0.15 g의 염화 칼륨, 0.15 g의 염화 칼슘, 및 0.2 g의 중탄산 나트륨. 오토 클레이브 솔루션 (40 분, 121 ℃) 및 실내 온도까지 냉각 할 수 있습니다. </li><li> 0.01 % 이트라코나졸 치료 농도의 경우, 1 L 양서류 링거액에 10.00 ml의 수성 이트라코나졸 (1 % Sporanox 구강 솔루션)를 추가 </li><li> 0.005 % 이트라코나졸 치료 농도의 경우, 1 L 양서류 링거 용액에 5.00 ML에게 수성 이트라코나졸 (1 % Sporanox 구강 솔루션)를 추가합니다. </li></ol></li><li> BD-양성 및 BD-음성 대조군의 경우, 이트라코나졸과 양서류 링거액 동물 목욕. </li></ol></li><li> 치료 &lt;올&gt; <li> 처리 액 35 mL를 소독 50 ㎖ 용기에 개별 양서류를 놓습니다. </li><li> 확인 동물은 완전히 부드럽게 용기를 소용돌이로 5 분 동안 적용됩니다. </li><li> 소독 terraria에 동물을 반환합니다. 6 일 동안 반복합니다. </li></ol></li><li> 치료의 성공을 보장합니다 <ol><li> 일 처리에 BD 감염에 대한 시험 동물은 시작됩니다. </li><li> 감염을 보장하기 위해 4 주 동안 일주일에 해제 한 BD 감염에 대한 실험 동물 일주 처리가 완료되면, 한 번. </li></ol></li></ol> 생물 등 4. BD <ol><li> 개인 terraria 매주 소독. <ol><li> 10 % 표백제 해결책 목욕 terraria 및 치료 컨테이너 목욕. </li><li> 흐르는 물에 두 번 표백 용기를 내십시오. </li><li> 용기는 다시 사용하기 전에 24 시간 동안 건조 할 수 있습니다. </li></ol></li><li> 교차 오염을 방지하기 위해 동물을 처리 할 때 깨끗한 니트릴 장갑을 착용BD의 병원체. 각각의 동물을 처리하는 사이에 장갑을 변경합니다. </li><li> 10 % 표백제에 솔루션을 가져 와서 폐기 전에 모든 액체 폐기물을 소독. </li><li> 잠재적으로 폐기 전에 BD에 노출되는 모든 고체 폐기물을 압력솥. </li></ol>

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</ol>

저자는 더 경쟁 재정적 이익을 선언하지 않습니다.

이 프로토콜을 이용하여, 우리는 안전하고 효과적으로 양서류 BD에 대한 이트라코나졸의 치료 치료 복용량 및 시간을 절감 할 수 있었다. 가장 낮은 처리 용량과 시간 (6 일 동안 0.0025 %)이 subclinically 감염 I.에 대한 성공적인 치료했다 nebulifer. 낮은 투여 량 및 처리 시간 모두의 효과는 양서류 모든 종 및 나이 클래스에 사용될 제공된 안전하고 효과적인 치료법은 없기 때문에, BD 감염 치료를위한 임상 치료 실험의 필요성을 설명한다. 이트라코나졸 치료로 인한 사망의 원인은이 점 (11)에서 알 수 없습니다. 부검 및 조직 병리학은 Brannelly 등. 15 연구에서 치료 기간 중 또는 직후 사망 한 사람의 작은 하위 집합에 실시되었다. 그것은 어떤 동물이 죽지 않았다 분명하지만 이러한 분석의 결과는 죽음의 원인에 대한 결정적...

수륙 양용 비행기는 현재 모든 척추 동물 분류군 1의 생물 다양성에 가장 큰 감소를 경험하고 있습니다. . Chytridiomycosis, chytrid 곰팡이 병원균 Batrachochytrium의 dendrobatidis (BD)에 의한 피부 질환, BD는 생물 다양성 손실의 원인에 대한 기록에 최악의 병원균이 극적으로 감소 2의 주요 원인 중 하나입니다 그것은 양서류 600 종 이상 감염되어있다 많은 200 종의 멸종 위기 또는 2,3 멸종있는 300 종의 감소를 일으키는 원인이되었다. 양서류 chytrid 균은 특정 호스트되지 않고 심각한 질병을 일으키는 진행하는 BD 감염을 허용하는 호스트의 어떤 자질 불분명하다. Chytridiomycosis 전해질 손실 및 심장 마비 4의 결과로, 피부에 이온 채널을 방해하여 죽음의 원인이됩니다. 또한, (된 BD zoospores을 포함하지 않는) BD 상층 액은 올챙이의 면역 반응 5 의원 원인G 연구원은 BD 부산물 6 독성을 생산하고 생각합니다. 많은 종은 빠르게 감소하고 있기 때문에, 포로 보증 식민지 사육 프로그램은 중요한 보존 조치하고, 어떤 종의 유일한 생명선이 될 수 있습니다. 구축 및 무병 식민지를 유지하는 것은 양서류 관리 시설에 대한 도전입니다. BD 감염을 치료하기위한 현재의 화학 요법의 방법은 효과적이지만, 치료되는 동물에 유해 할 수 있으며, 단일 치료법은 종 및 양서류 7의 연령 등급에 걸쳐 성공적인 없었다. BD 감염에 대한 치료의 몇 가지 임상 시험은 7을 수행하고 있습니다. 치료의 가장 일반적으로 사용되는 세 가지 방법은 열 치료, 클로람페니콜 및 이트라코나졸이다. 열 치료는 몇 가지 부작용, 여러 삶의 단계에서 사용할 수있을 것으로 보인다 nonchemotherapeutic 치료 옵션이며, gener입니다동맹 효과적이다. 치료 연구에서 채트와 리차드 - Zawacki 8은 처리 된 동물의 96 %가 10 일 동안 30 ° C에서 보관 후 감염을 취소 한 것으로 나타났습니다. 이 시험은 100 % 성공하지 않지만, 다른 사람들이 자신의 종족에 대한 열 치료를 평가하기위한 기준을 제공합니다. 열 치료는 많은 종에 효과적이지만, 장시간 고온으로 유지 할 수 많은 고산 종 비실용적이다. 클로람페니콜, 항균, 많은 종의 BD 치료에 성공적으로 사용하고, 체외에서 곰팡이 성장을 억제하고있다. 항균 같이, 클로람페니콜 구체적 균류 공격하지 않지만 진핵 세포 9에서 아폽토시스를 일으키는 것으로 알려져있다. 그것은 행동의 정확한 메커니즘은 알 수 있지만, 클로람페니콜 치료, 세포 내 포자낭을 죽이고, 피부의 세포 사멸을 일으키는 것으로 추측하고있다. 임상 시험 때문에 실시하지 않고,되어 있지만용량과 처리 시간, 평가되지 않은 현재의 치료 프로토콜은 일반적으로 지상파 양서류이 치료가 실용적이지, 2~4주 10, 11에 침수가 필요합니다. 인체 노출은 재생 불량성 빈혈 (12)의 드문 형태와 관련되어 있기 때문에 클로람페니콜은 동물 사용에 대한 일부 국가에서 제한되어 있습니다. 이트라코나졸, 아 졸계 항진균제, 가장 널리 포로 양서류 BD 감염의 치료에 사용된다. 가장 널리 사용되는 프로토콜 5 분 11 일 연속 하루 동안 0.01 % 이트라코나졸 솔루션 목욕 동물입니다. 이 프로토콜은 양서류에 효과적이지만, 양서류는 11, 13의 임상 시험을 기반으로하지 않는, 포유 동물의 관리에 사용되는 표준에서 파생되었다. 이 프로토콜은 특히 속라나와 올챙이 최근 metamorphs (11), 특정 종에 부작용을 일으킬 수 있습니다.올챙이 처리 이트라코나졸의 훨씬 더 낮은 농도 (0.0005 %)을 이용하여 성공을 거두었지만 탈색 (14)와 관련되었다. 이 같은 농도는 최근 metamorphs에 상용화에 박차를 가하고 감염 (15) 치료에 실패한 것으로 밝혀졌다. 이트라코나졸 치료와 부작용의 위험이 있기 때문에, 일부 실무자는 11 일 연속 절반 보통 농도 (0.005 %)를 사용하고이 BD 감염 16을 ​​치료에 성공을 발견했다. 본 연구는 BD 감염 (15)을 치료하는 이트라코나졸을 사용하여 임상 치료 시험을 요약 한 것입니다. 이 프로토콜은 이트라코나졸과 BD 감염된 동물의 치료에 안전하고 효과적인 모두 가장 낮은 용량과 처리 시간을 찾기 위해 시도에 대해 설명합니다. 본 연구에서 사용 된 동물은 걸프 코스트 두꺼비의 최근 metamorphs, Incilius nebulifer했다.

<table><tbody><tr><td>0.1% 수성 이트라코나졸, Sporonox</td><td>Janssen Pharmaceutica Inc.</td><td></td><td></td></tr><tr><td>NaCl</td><td>Fisher Scientific</td><td>S640-500</td><td></td></tr><tr><td>KCl</td><td>Fisher Scientific</td><td>BP366-1</td><td></td></tr><tr><td>CaCl2</td><td>Fisher Scientific</td><td>BP510-100</td><td></td></tr><tr><td>NaHCO3</td><td>Fisher Scientific</td><td>BP328-500</td><td></td></tr><tr><td>멸균 면봉</td><td>의료 및 와이어 장비</td><td>MW113</td><td></td></tr><tr><td>1.5ml 마이크로튜브</td><td>Sarstedt</td><td>73.703.217</td><td></td></tr><tr><td>Qiagen DNEasy 혈액 및 조직 키트</td><td>Qiagen</td><td>69581</td><td></td></tr><tr><td>7500 Real-time PCR</td><td>Applied Biosystems</td><td>4351104</td><td></td></tr><tr><td>VIC IPC</td><td>Applied Biosystems</td><td>4308323</td><td></td></tr><tr><td>BSA</td><td>Applied Biosystems</td><td>AM2618</td><td></td></tr><tr><td>Agar</td><td>Invitrogen</td><td>30391023</td><td></td></tr><tr><td>트립톤</td><td>인비트로겐</td><td>Q10029</td><td></td></tr><tr><td>페니실린-스트렙토마이신</td><td>인비트로겐</td><td>15070-063</td><td></td></tr><tr><td>페트리 디쉬</td><td>시그마 알드리치</td><td>CLS430589</td><td></td></tr></tbody></table>

감소 이트라코나졸의 농도와 지속 시간은 치료의 성공<em&gt; batrachochytrium의 dendrobatidis</em&gt; 수륙 양용 비행기에 감염

Reduced Itraconazole Concentration and Durations Are Successful in Treating Batrachochytrium dendrobatidis Infection in Amphibians

수륙 양용 비행기는 척추 클래스의 가장 큰 감소를 경험하고 이러한 감소의 주요 원인은 질병 chytridiomycosis을 일으키는 곰팡이 병원균, Batrachochytrium의 dendrobatidis (BD)입니다. 포로 보증 식민지 멸종 위기 종의 양서류 세계적 중요하고 멸종의 중요한 위협이있는 사람들을위한 유일한 생명선이 될 수 있습니다. 무병 식민지를 유지하는 것이 포로 관리자의 우선 순위, 모든 종과 삶의 단계에서 아직 안전하고 효과적인 치료법이 발견되지 않았습니다. 일반적으로 사용되는 투여 량은 일부 개인과 종에 해가 될 수 있지만 가장 널리 사용되는 화학 요법 치료, 이트라코나졸입니다. 우리는 이트라코나졸의 낮은 및 안전하지만 유효 선량은 BD 감염을 치료하기 위해 찾을 수 있는지 여부를 평가하기 위해 임상 치료 실험을 수행 하였다. 우리는 발견 0.01-0.0025 %에서 치료 농도를 감소시키고 (11)로부터 치료 기간을 감소시킴으로써5 분 화장실 -6 일, 개구리 적은 부작용 적은 치료 관련 사망률과 BD 감염으로 치료 될 수 있습니다.

모든 동물 사주 종료 치료 후 BD-음성 인 경우 이트라코나졸 치료가 성공한 것으로 간주되었다. 치료를 시작하기 전에 치료가 끝난 사주 후, BD-양성 대조군 동물 16,765.12의 평균 유주자 부하가 있었을 때 2 주 접종 후, 모든 BD-접종 동물 ((17.34 ±) 1,121.7의 평균 유주자 부하, 감염 ) 14643.08를 ±. Incilius nebulifer의 치료 (N = 15) 6 일 동안 다섯 분 동안 0.0025 % 이트라코나졸 농도 화장실을 사용하여 하루에 성공했다. (그림 1B)의 많은 : BD-양성 대조군 (χ 2,1 = 2.17, 특급 (B) = 20,500, p = 0.339 콕스 회귀)에 비해 이트라코나졸 치료이 낮은 농도로 투여는 사망률에 유의 한 차이가 없었다 누구는 BD 감염 재판이 끝날 때까지...

양서류 Batrachochytrium의 dendrobatidis 감염은 감소 된 농도 (0.0025 %) 및 일반적으로 사용되는 것보다 이트라코나졸의 짧은 기간 (6 일 동안 오분 화장실)을 사용하여 제거 할 수있다. 이하 사망률과 적은 부작용이 변경됨 치료 프로토콜을 사용하여 관찰 하였다.

감소 이트라코나졸의 농도와 지속 시간은 치료의 성공<em&gt; Batrachochytrium의 dendrobatidis</em&gt; 수륙 양용 비행기에 감염

Amphibians are experiencing the greatest decline of any vertebrate class and a leading cause of these declines is a fungal pathogen, Batrachochytrium ...

이 절차의 전반적인 목표는 항진균 화학요법제인 triazole을 사용하여 양서류 키트 곰팡이인 Bera key tridium, dendro, he 또는 BD에 감염된 양서류를 치료하는 것입니다. 이는 먼저 BD 배양물을 성장시키고 동물에 곰팡이 병원균을 접종함으로써 수행됩니다. 두 번째 단계는 피부 스왑에 대해 DNA 추출 및 QPCR을 실시하여 동물의 BD 감염 여부를 확인하는 것입니다.다음으로, 감염된 동물들을 0.0025% econazole 용액에 하루 5분씩 6일 동안 침지시켜 치료합니다. 마지막 단계는 치료 완료 후 최소 4주 동안 피부 스왑에 대해 QPCR 분석을 수행하여 치료된 동물의 감염 상태를 모니터링함으로써 치료가 성공적으로 이루어졌는지 확인하는 것입니다. 이 절차는 항진균제 itraconazole의 농도를 낮추고 치료 기간을 단축해도 bd 감염 동물 치료에 효율적임을 보여줍니다. 11일 동안 0.01% itraconazole 용액을 사용하는 권장 치료 용량보다 이 치료 요법을 사용했을 때의 주요 장점은, 권장 용량의 4분의 1로 낮춘 농도와 6일로 단축된 치료 기간만으로도 BD 감염을 효과적으로 치료할 수 있을 뿐만 아니라, 권장 치료 용량 사용 시 발생하는 부정적인 부작용을 최소화할 수 있다는 점입니다.본문 프로토콜에 기술된 대로 tritone 배지에서 BD를 배양하고 Zo 포자의 움직임을 확인한 후, 각 플레이트에 노후 수돗물 5 mL를 가득 채우고 Zo 포자가 배지로 들어갈 수 있도록 10분 동안 기다립니다. 다음으로, Zo 포자 현탁액을 휴대용 용기에 붓습니다. 혈구계수기(hemocytometer)를 사용하여 Zo 포자 농도를 추정한 후, 노후 수돗물로 혼합액을 3 mL당 1×10⁶개의 농도로 희석하여 여기 보이는 Latoria vei Alpina와 같은 동물에 접종합니다.50 mL 용기 위에 잡고 접종 혼합물 3 mL를 복부 위에 붓습니다. 그런 다음 접종액이 흘러내린 용기 안에 동물을 넣습니다. 용기에 뚜껑을 덮고 감염이 확실히 이루어지도록 접종 용기 안에 동물을 24시간 동안 둡니다.BD 병원체에 의한 오염을 방지하기 위해, 사용한 장갑을 벗어 폐기 전 오토클레이브 멸균 처리합니다. 새 장갑을 착용한 후, 다음 동물에게 접종을 진행합니다.접종 24시간 후, 동물들을 각각 소독된 사육장으로 옮겨 2주 동안 유지합니다. 2주 후 용액을 10% bleach 농도로 만들어 모든 액체 폐기물을 폐기 전 반드시 소독해야 함을 유의하십시오. 멸균 면봉으로 동물을 스와빙하여 BD 감염 성공 여부를 테스트합니다.면봉을 긋는 동안과 긋는 사이사이에 부드럽게 회전시킵니다. 복부 양측, 각 허벅지, 그리고 4개의 사지 각각을 5회씩 닦아 총 45회 스와빙을 수행합니다. 면봉은 1.5 milliliter 마이크로 튜브에 담아 -20 °C에서 보관합니다.시판되는 DNA 분리 키트를 사용하여 면봉에서 게놈 DNA를 추출하고, 텍스트 프로토콜에 설명된 대로 QPCR을 수행합니다. 텍스트 프로토콜에 기술된 대로 itraconazole의 세 가지 투여량 각각에 해당하는 세 개의 처리 수조를 준비합니다. 다음으로, 소독된 수조에 양서류를 개별적으로 넣습니다.35 mL의 처리 용액이 담긴 50 mL 캔 용기를 준비합니다. 동물 개체 사이에 장갑을 교체하는 것을 잊지 말고, 용기를 가끔씩 부드럽게 흔들어 동물이 5분 동안 완전히 잠겨 있도록 합니다. 5분 후, 동물을 소독된 구역으로 되돌려 놓습니다.5분간의 처리를 5일 더 매일 반복합니다. 처리가 끝난 일주일 후와 이후 4주 동안 매주 한 번씩 동물들을 다시 검사하여 감염이 완전히 제거되었는지 확인합니다. 처리가 완료된 후에도 해당 동물들은 여전히 오염 위험이 있는 것으로 간주하여 취급해야 함에 유의하십시오.감염 후 최소 한 달 동안은 동물들을 별도의 구역에 격리하여 보관해야 합니다. 치료가 성공적이지 않은 경우, 치료를 반복해야 합니다. 종과 생애 단계에 따라 감염 및 치료 요법에 대한 반응이 서로 다르므로, 광범위하게 시행하기 전에 치료법에 대한 시험을 거쳐야 합니다.BD는 생물학적 위험 물질이므로, 매주 테라리움과 처리 용기를 10% 표백액 용액에 담가 개별 테라리움을 소독하십시오. 최소 30초 동안 담근 후, 물로 두 번 헹구어 표백액을 씻어내고 용기를 24시간 동안 건조시킨 후 개구리를 다시 투입하십시오. 여기에서는 BD 처리 11일 후 또는 BD 처리 6일 후의 모습이 제시되어 있습니다.검은색 화살표는 치료 마지막 날을 나타냅니다. 실선은 대조군의 생존율을 나타냅니다. 검은색 실선은 BD 양성이었으나 BD 치료를 받지 않은 동물을 나타냅니다.그리고 실선 회색선은 BD 음성이며 BD 치료를 받지 않은 동물들을 나타냅니다. 점선은 표시된 농도의 econazole을 투여받은 치료군의 생존율을 보여줍니다. 6일 동안 0.0025% 농도로 네뷸라이저 치료를 받은 모든 동물은 치료 종료 4주 후 BD 음성으로 판명되었으며, 따라서 이 치료는 성공적인 것으로 간주되었습니다.또한, 이 용량의 econazole 처리군은 BD 양성 대조군과 비교했을 때 사망률에서 유의미한 차이를 보이지 않았습니다. 0.01% 및 0.005% econazole로 11일 동안 처리했을 때는 BD 양성 대조군에 비해 사망률이 유의미하게 증가했다는 점에 유의하십시오. 진균 병원체인 BD는 생물학적 위험 물질이므로 장갑 착용 및 교체, 모든 고체 폐기물의 오토클레이브 멸균 및 소독과 같은 생물안전 주의사항을 반드시 준수하시기 바랍니다.본 절차를 수행할 때 모든 액체 폐기물 처리를 실시해야 합니다.

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Research

연구

JoVE Journal

Immunology and Infection

면역학 및 감염학

이 연구는 항생제에 의해 피부와 장내 마이크로 바이 옴의 사회 구성의 변경 다음 모델 물고기 호스트에 효과를 나타 내기 위해 방법을 포함한다.

호스트 표현형의 시험에<em&gt; Gambusia의 affinis입니다</em&gt; 다음은 항생제 치료

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인간 인플루엔자 바이러스 감염의 Zebrafish의 모델을 사용하여 항 바이러스 약품을 화면 및 호스트 면역 세포 반응의 특성을

이 프로토콜에는 기름 통 면봉의 사용 및 Aeromonas hydrophila, 진 균 종, 및 와 같은 병원 체를 검출 하기 위하여 센 티 넬의 단독 사용에 비해 증가 탐지에 이르게 zebrafish 시스템의 슬러지 분석 설명 합니다. Pseudocapillaria tomentosa. 검역에 P. tomentosa 계란을 모니터링 하는 시스템도 제안 했다.

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사용 하 여 터미널 전이 효소 중재 dUTP 닉 끝-라벨 (TUNEL) 및 Caspase 3/7 Chytridiomycosis와 개구리에 측정 상피 세포 죽음을 분석 실험

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Zebrafish 배아를 이용한 화학 화합물의 독성에 대한 신속한 평가

C. tropicalis에 의해 형성된 생물막에 대한 항체의 효과를 연구하기 위해 2,3-비스(2-메톡시-4-니트로-5-설포페닐)-5-카르복사닐리드-2H-테트라졸륨(XTT) 환원 분석을 사용하는 96웰 마이크로타이터 플레이트 기반 프로토콜이 본원에 설명되어 있습니다. 이 시험관 내 프로토콜은 생물막에서 칸디다 종 세포의 대사 활성에 대한 잠재적 인 새로운 항진균 화합물의 효과를 확인하는 데 사용할 수 있습니다.

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이것은 유럽 과다도롱뇽(Speleomantes 속)의 피부 미생물총(microbiota)에서 배양 가능한 박테리아를 샘플링하고 분리하는 방법입니다. 여기에서는 면봉으로 도롱뇽 피부를 샘플링하고 배양 가능한 접근 방식을 사용하여 처리하는 프로토콜을 제시합니다. 우리는 박테리아 균주 특성화를 통해 axenic 배양의 샘플링, 분리 및 확립에 대해 설명합니다.

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