2014년 3월 20일
다음 실험에서 우리는 쥐의 추적 공포 조건화위한 프로토콜을 설명합니다. 연상 메모리의이 유형은 중립 자극과 무조건 자극을 분리 트레이스 기간을 포함한다.
다음 실험의 전반적인 목표는 미량 구 조건화를 사용하여 마우스의 해마 의존 학습 및 기억을 평가하는 것입니다. 이것은 먼저 동물이 청각적 어조를 혐오적 자극과 연관시키도록 훈련시킴으로써 달성됩니다. 다음 날, 동물을 새로운 맥락에 놓고 소리에 대한 반응으로 얼어붙는 행동을 기록합니다.
셋째 날에는 동물을 원래 상황으로 되돌리고 동결 행동을 기록합니다. 결과는 쇼크 톤 페어링으로 훈련된 마우스가 쇼크를 받지 않은 마우스보다 더 많은 동결 행동을 보인다는 것을 보여줍니다. 이 방법은 해마 의존 학습과 기억 및 생쥐에 대한 통찰력을 제공하는 데 사용할 수 있으며 형질전환 및 녹아웃 동물 연구에 사용할 때 특히 유용합니다.
다음 절차는 더 큰 소리 감쇠실 내부에 있는 공포 조절 챔버에서 수행됩니다. 챔버의 도어를 닫은 상태에서 조명이 원하는 조명 수준에 도달하도록 배치하고 올바르게 배치하면 조명 수준 표시등이 꺼져야 합니다. 사운드 미터를 사용하여 각 챔버 내부의 배경 소음이 일정한 수준인지 확인합니다.
다음으로, 훈련 중에 사용되는 톤을 보정합니다. 외부 보정 장치를 사용하여 충격 수준을 보정합니다. 막대에 하나의 리드를 놓고 다른 3개 또는 4개의 막대를 놓습니다.
충격 발생기를 사용하여 충격을 관리하고 올바른 수준에 도달할 때까지 보정합니다. 각 공포 조절 챔버에 대해 이 단계를 반복합니다. 장치가 준비되면 과도한 취급을 줄이기 위해 피험자를 시험실과 분리된 대기실로 옮깁니다.
테스트하기 전에 테스트 최소 30분 전 또는 전날에 꼬리에 라벨을 붙입니다. 시작할 준비가 되면 테스트 마우스를 공포 조절 챔버로 운반하기 위해 레이블이 부착된 깨끗한 케이지로 옮깁니다. 마우스를 챔버에 놓고 도어를 닫고 소프트웨어 프로그램을 시작합니다.
훈련 첫날, 생쥐는 3분 동안 챔버를 탐험할 수 있습니다. 그런 다음 소프트웨어는 22번째 톤을 표시한 다음 가벼운 발 충격으로 끝나는 22번째 트레이스 간격을 표시합니다. 피험자가 혐오적 자극을 받았는지 확인하기 위해 피험자를 관찰합니다.
202번째 Inter Trial 간격은 5개의 조건화 시험을 구분합니다. 시험이 끝나면 동물을 꺼내기 전에 1분 동안 실험실에 머물게 한 다음 동물을 이송 케이지에 다시 넣고 수용실로 돌아갑니다. 가정용 케이지에서 개별적으로 테스트할 추가 마우스가 있는 경우 모든 마우스가 테스트를 완료할 때까지 마우스를 수용합니다.
다음 동물을 위해 30% 이소프로판올로 테스트 챔버를 청소합니다. 모든 마우스가 훈련될 때까지 이 단계를 반복합니다. 모든 생쥐를 서식지로 되돌립니다.
코호트의 마지막 마우스가 다음 날 테스트된 후 동물을 테스트합니다. 흔적, 공포, 기억을 위해. 이 날에는 이송 케이지의 침구를 파쇄된 종이로 교체하여 컨텍스트를 변경합니다.
챔버의 컨텍스트도 변경됩니다. 바닥의 투명한 아크릴 인서트 아래에 폼 시트를 놓아 질감과 모양을 변경합니다. 테스트 영역 내부에 아크릴 칸막이를 놓습니다.
바닥 아래 유청 보트에 바닐라 추출물을 넣어 냄새를 바꾸십시오. 이 날에 삽입하면 각 마우스 사이에 70% 이소프로판올 대신 30% 에탄올로 챔버를 청소하십시오. 준비가 되면 마우스를 테스트 챔버에 놓고 프로그램을 시작합니다.
세션은 2분의 기준선 시간으로 시작하여 3개의 22번째 톤 프레젠테이션이 이어집니다. 각 톤 프레젠테이션 사이에는 222번째 재판 간 간격이 있습니다. 세션이 끝나면 쥐를 집 우리로 되돌리고 다음 날 테스트를 준비하기 위해 모든 동물이 테스트를 마칠 때까지 계속합니다.
첫째 날에 사용된 것과 동일한 컨텍스트를 복원합니다. 30% 이소프로판올로 챔버를 청소합니다. 상황별 조건화는 3일차에 수행됩니다.
첫날과 동일한 이송 케이지를 사용하여 대기실에서 테스트 마우스를 회수합니다. 마우스를 테스트 챔버에 놓고 상황별 메모리를 테스트하기 위한 프로그램을 시작합니다. 프로그램을 실행하여 8분 동안 동결 동작을 기록합니다.
이 시간이 지나면 마우스를 가정용 케이지로 되돌리고 앞에서 보여준 것처럼 테스트를 계속하면 대표적인 결과는 훈련 세션 동안 쇼크 톤 페어링을 받은 동물의 동결 행동이 증가했음을 보여줍니다. 새로운 맥락에서, 혐오적 쇼크 자극을 받은 마우스는 기준선 톤 추적 및 트라이얼 간격 동안 충격을 받지 않은 마우스에 비해 더 많이 얼어붙었습니다. 원래의 맥락으로 되돌아갔을 때, 혐오적 쇼크 자극을 받은 동물들은 8분 동안 일관되게 더 높은 동결 행동을 보였다.
이 비디오를 시청한 후에는 해마 의존 학습 및 기억 및 생쥐를 이해하기 위해 추적 공포 조건화를 사용하는 방법을 잘 이해하게 될 것입니다.
전체 스크립트를 보고 수천 개의 과학 동영상에 액세스하세요
이 실험은 마우스의 해마 의존성 학습과 기억을 평가하는 추적 공포 조건화 프로토콜을 설명합니다. 이 프로토콜은 청각 자극과 혐오 자극을 연관시키고 다른 맥락에서 마우스의 동결 행동을 측정합니다.
Trace fear conditioning in mice provides a robust platform for evaluating hippocampal-dependent learning and memory, supporting early-stage target validation in neuropsychiatric and cognitive disorder research. The protocol's sensitivity to subtle deficits or enhancements enables predictive confidence in preclinical model selection and mechanistic de-risking for CNS drug discovery portfolios.
Trace fear conditioning is positioned at the intersection of early discovery and preclinical validation, bridging mechanistic studies and translational research in CNS drug development.