Name: 크고 작은 설치류 모델 바네스 미로 테스트 전략 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2014-02-26T22:45:00.000+00:00
Duration: 12 min 59 s
Description: 학습하세요 설치류 공간 학습 및 기억 평가를 위한 건식 바네스 미로 테스트 방법을. 이 기법은 수중 미로보다 스트레스가 적고 생태학적으로 적합하여 쥐와 륫의 인지 기능 연구에 활용됩니다.

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저자는 씨의 Eldin Jašarević, 스콧 윌리엄스 씨 로저 W. 마이센, 사라 존슨 박사 R. 마이클 로버츠 박사 마크 R. Ellersieck, 그리고 대학에서 박사 데이비드 C. 기어 리를 인정 미주리, 씨 C. 델 버트 법률 및 독성에 관한 연구 / FDA를위한 국립 센터에서 동물 관리 직원. 이 작품은 CSR (RC1 ES018195), (CSR 및 DCG)에 미주리의 혜택을 부여, 수의학 교수 수상의 미주리 대학의 대학 (CSR)에 부여하는 NIH 도전 교부금에 의해 지원, 국립 센터에서 프로토콜 E7318했다 독성에 관한 연구 / FDA하십시오.

1. 작은 설치류에 대한 반스 미로 절차 <ol><li> 미로와 장소 위의 천장의 조명을 켜 실험실 문 외부에 표시 &quot;를 입력하지 마십시오.&quot; </li><li> 약 30 분 전에 습관을 허용하는 최초의 재판을 시작으로 테스트 룸에 정상적인 가정 케이지에 마우스를 가져옵니다. 실내가 조용한 경우에, 그렇지 않으면 이러한 예방 조치가 고려 될 수 있으며, 화이트 노이즈를 포함 할 필요가 없다. </li><li> 추적 프로그램을 설정합니다. </li><li> 조심스럽게 자신의 홈 케이지에서 첫 번째 마우스를 제거하고 키 커버 플라스틱 상자에 넣습니다. 지정된 탈출 구멍에서의 탈출 (깨끗한 집) 폴리 프로필렌 케이지 (29 센티미터 X 19cm X 13cm)를 놓습니다. <ol><li> 그 탈출 구멍에서 제거되고 다른 모든 구멍이 연결되어 관을 차단 용지를 확인합니다. </li><li> 미로 주위에 커튼을 그립니다. </li></ol></li><li> 미로의 중심에 내부 마우스로 플라스틱 상자를 놓고 약 8 초 후, 가볍게 따새장 밖으로 동물을 애과 미로에 배치합니다. <ol><li> 미로의 중심에 동물을 배치 한 후, 조용히 컴퓨터 영역 (미로에서 ~ 150cm)로 이동합니다. </li><li> 이미 프로그램 성능을 문서화하기 시작할 때까지 동물을 미로​​ 상에 배치 된 시점부터 경과 (몇 초 이내) 최소한의 시간을 보장하기 위해 개방되어야 적절한 추적 소프트웨어 프로그램을 시작합니다. </li></ol></li><li> 컴퓨터 모니터 및 기록 구멍 수, 시험 번호, 검색 전략, 만든 오류 수에서 동물의 성능을 관찰합니다. 오류가 잘못된 구멍으로 냄새로 정의된다. 검색 전략의 평가는 추적 패턴에 기초하여 라이브 또는 저장 될 수있다. <ol><li> 검색 전략을 직접으로 분류 (3 개 이하의 오류 탈출 케이지에 직접가는) </li><li> 직렬 (탈출 케이지 찾을 때까지 미로 주변을 따라 여행), 또는 </li><li> 랜덤 &lt;/ strong&gt;을 (여러 구멍을 확인하기 위해 미로 센터를 여러 번 건너). </li></ol></li><li> 동물이 탈출 케이지 안에 네 개의 발을 가지고 할 때 추적 프로그램을 중지합니다. </li><li> 마우스가 5 분 이내에 탈출 케이지를 입력하는 데 실패하면, 부드럽게 올바른 위치와 탈출 케이지로 안내합니다. 마우스가 2 분 동안 탈출 케이지에 남아 보자. </li><li> 탈출 케이지에서 마우스를 제거하고 홈 케이지에 배치합니다. </li><li> 미로 상단을 스프레이하고 70 % 에탄올로 케이지를 탈출 닦아 건조. 두 번째 시험을 실행하기 전에 30 분 동안 옆 첫 번째 케이지 / 마우스를 설정합니다. </li><li> 다음 마우스를 시작하기 전에 이전에 올바른 탈출 구멍을 연결하고 그 다음 주제에 대해 지정된 탈출 구멍에서 구멍을 차단 용지 플러그를 제거합니다. </li><li> 각 마우스는 약 30 분 간 시험 간격 / 2 일 시험에 대한 검사를한다. </li><li> 모든 마우스는 일곱 일 연속 시험이되기 전까지 가능성을 높일 수있는,이 단계를 반복F 개선 된 성능 및 / 또는 데이터만을 사일에 대하여 치료 그룹 간의 차이를 관찰. </li></ol> 2. 쥐 바네스 미로 테스트 추적 프로그램은 사용할 수없는 경우 <ol><li> 미로 (직접 조명 아래를 중심으로) 올바른 위치에 있는지 확인, nonescape 구멍을 차단하고 빠지지 동물을 방지 거짓 바닥은 미로에 안전하게, 그리고 탈출 케이지는 첫 번째 주제에 대해 지정된 위치에 있습니다. 미로 위의 오버 헤드 표시등이 켜져 있어야합니다. </li><li> 확인 컴퓨터와 카메라를 준비하고 스톱워치를 사용할 수 있습니다. </li><li> 주변의 다른 위치에서 어떤 소리를 감쇠하는 화이트 노이즈를 켭니다. 테스터의 의자 미로 상단의 가장 가까운 가장자리에서 약 12​​2cm이며, 시험 전반에 걸쳐 동일한 위치에 남아 있습니다. </li><li> (2 분으로 설정) 타이머 (만 테스트 1 일에 필요) 사용할 수 있습니다. 타이머 &quot;발신음&quot;또는 다른 소음이 안된다. R를 테스트하는 문 (들)움이 외부에 서명 &quot;을 입력하지 않음&quot;이 있어야합니다. </li><li> 피사체에 대한 테스트 오더 시트는 대기와 대상마다 일의 시간뿐 아니라 대 면적을 기록 피사체 테스트, 세션 번호, 각 피사체에 대한 탈출 케이지 정공 번호 위치와 영역의 순서를 나열한다 필요 사항 (그림 6). </li><li> 첫 번째 쥐가 테스트 될 전에 30 ~ 60 분에서 습관화를 허용하는 시험 방에 자신의 홈 케이지에 동물을 가져옵니다. </li><li> 쥐가 재판의 시작 부분에 배치 된 중심 튜브는 미로의 중앙에 설정되어 있습니다. 상단의 첫 번째 동물 ID를 표시하는 골판지 시트를 설정합니다. 이것은 비디오 녹화 비디오의 처음 몇 초를 관찰하여 각 제목의 용이 한 식별을 위해 동물의 ID를 캡처 할 수있다. </li></ol> 초기 테스트를 1 일 : <ol><li> 컴퓨터의 비디오 녹화를 시작합니다 (사용하는 경우) 및 피사체에 대한 동물 ID 시트와 재판의 약 5 초를 포함요법 식별. 파일 이름 (또는 생성 날짜) 테스트 일 / 시간을 식별합니다. </li><li> (여러 동물 케이지에있는 경우 신원 확인) 부드럽게 탈출 케이지에 처음으로 머리를두고 자신의 홈 케이지에서 첫 번째 동물을 제거합니다. 추가 임시 바닥으로 탈출 케이지를 덮고 2 분 타이머를 시작합니다. 이 동물이 탈출 케이지에 길들 수 있습니다. </li><li> 2 분 타이머가 종료 한 후, 부드럽게, (물론 거짓 하단 덮개를 분리하고 멀리 미로 집합)에서 탈출 케이지에서 동물을 제거 리프트 ID 시트, 즉시 센터 관 내부의 쥐를 놓습니다. 골판지 ID 시트와 센터 튜브의 상단을 커버. </li><li> 부드럽게 천천히 종이 커버를 중심 관을 들어 올려 옆으로 설정합니다. 중심 관이 동물 위에 들어 올려로 스톱워치를 시작합니다. 테스터의 의자에 앉아 이동합니다. </li><li> 동물과 스톱워치를 모두보고, 의자에 조용히 앉아있다. 각 동물은 탈출 케이지를 찾을 수있는 5 분 최대 있습니다. </li><li> 쥐에서 탈출 함을 발견 한 경우보다5 분, 테스트 오더 시트에 스톱워치 기록 대기 시간과 하루의 시간을 중지합니다. 탈출 케이지에서 동물을 제거하고 집으로 돌아 케이지에 배치합니다. </li><li> 쥐가 5 분 이내에 탈출 케이지를 찾을 수없는 경우, 부드럽게 탈출 케이지에 동물을 안내하고 15 초를 제거하고 홈 케이지에 동물을 반환하기 전에 통과 할 수 있습니다. <ol><li> 이것은 15 초 지속 기간은 시험 방 벽에 초침 클럭을 사용하여 초과 할 수있다. </li><li> 쥐가 탈출 케이지를 찾을 수 없습니다 테스트 오더 시트 및 기록에 하루의 기록 시간. </li></ol></li><li> 쥐가 떨어지면 / 시간을 스톱워치의 테스터가해야 눈, 미로를 이동합니다. 테스터는 신속하게 동물을 검색하려고 시도한다. <ol><li> 이것은 10 초 이내에 수행 할 수있는 경우에, 미로의 중앙에 동물을 대체하고 테스트 용지 (테스터가 전도 나 점프를 구별 할 수있는 경우,이 표시되어야한다)에 낙하 / 점프 시간을 기록한다. 재판을 계속합니다. </li><li> 애니를 검색하는 경우말, 10 초 이상 소요 스톱워치를 중지하고 다시 홈 케이지에 동물을 넣어. 가을 / 점프의 기록 시간 (테스터이주의, 가을 또는 점프를 구별 할 수있는 경우). </li><li> 동물 / 하락 뛰어 10 초 내에 검색 할 수 없습니다하는 임상 시험 데이터는 통계 분석에서 생략됩니다. </li></ol></li><li> 컴퓨터에서 비디오 녹화를 중지합니다. 재판에 대한 의견을 기록합니다. </li><li> 미로 위에서 어떤 소변이나 대변을 제거 70 % 에탄올로 살포하고, 완전히 건조 닦아냅니다. 탈출 케이지를 제거하고 70 % 에탄올로 청소하십시오. </li><li> 다음 주제에 대해 지정된 위치에서 깨끗한 탈출 케이지를 놓습니다. 하나 이상의 탈출 케이지를 갖는 것은 자연 건조 각각 에탄올 냄새를 줄일 수 있습니다. (하나의 구멍 만, 모두가 거짓 바닥을 가지고 있으며, 그 하나의 구멍이 탈출 케이지 포함되도록) 이전 구멍에서 깨끗한 거짓 바닥을 넣습니다. </li><li> 미로의 중심에있는 다음 주제에 대한 ID 시트를 중심 튜브를 설정합니다. 컴퓨터에서 비디오 녹화를 시작합니다. </리&gt; <li> (일 / 세션 1면), 그리고 2 분 타이머를 시작, 테스트 할 다음 동물을 제거 탈출 케이지에 배치 (전용 일 / 세션 1의 경우). 위의 2 단계에서 계속합니다. 각 주제는 1 시험 / 일을받습니다. </li><li> 모든 동물을 테스트 한 후, 미로를 청소하고 새장을 탈출, 머리 위의 조명 및 백색 잡음의 전원을 끄십시오. 문 (들)에서 기호 (들) &quot;를 입력하지 마십시오&quot;제거합니다. </li></ol> 일 7 테스트를 통해 <ol><li> 테스트 룸을 설치하고 위의 설명 된대로 테스트를 위해 미로. </li><li> 상단에 ID 시트와 미로의 중앙에 중심 관을 설정합니다. 비디오 녹화를 시작합니다. 홈 케이지에서 첫 번째 동물을 제거하고 중앙 튜브에 배치합니다. </li><li> 이 단계는 1 일부터 일 2-7 차별화, 특히, 일 2-7, 주제는 할 수 없습니다 홈 케이지에서 제거하고 탈출 케이지 내부의 2 분의 습관화 기간 후에 중심 관에 직접 배치됩니다. </li><li> 위의 4 단계에서 시작하는 반복 과정. </li></ol> 3. 통계 분석반스 미로 엔드 포인트 <ol><li> 데이터 분석은 몇 가지 통계 테스트를 필요로 할 수있다. 이러한 지연 및 에러 레이트와 같은 연속 변수는, 시간과 공간 (52)에서 분할 플롯으로 분석 될 수있다. </li><li> 몇몇 동물은 최대 할당 된 시간 내에 탈출 또는 홈 케이지를 찾지 않는 경우, 지연 데이터는 최대로 할당하고 SAS 버전 9.2 소프트웨어 분석에 ProcLife 테스트를 사용하여 분석 할 수있다. <ol><li> 이 통계 방법은 상한 차단이되는 행동 데이터에 유용합니다. </li></ol></li><li> 검색 전략 데이터 PROC GLIMMIX 및 SAS 버전 9.2 소프트웨어 분석을 반복 측정 디자인을 이용하여 분석 될 수있다. <ol><li> 첫 번째 분석은 누적을 기록 링크와 세 검색 전략 (임의의 시리얼 및 직접)이 분석에 포함되도록 다항 분포를 사용한다. </li><li> 동물이보다 효율적으로 검색 전략 (직접), SECON을 사용하는 학습하고 있는지 확인하려면이 덜 효율적인 전략 (랜덤 및 직렬)가 결합하고보다 효율적인 다이렉트 검색 전략에 대해 비교되어있는 검색 전략에 D 분석이 수행 될 수있다. </li><li> 후자의 방법은 이항 분포 결과 또한 PROC GLIMMIX을 사용합니다. </li></ol></li></ol>

이 문서는 미국 식품의 약국 (FDA) 정책에 따라 검토 및 게시를 위해 승인되었습니다. 승인 내용은 반드시 FDA의 위치 또는 의견을 반영하거나 상호 또는 상업적 제품에 대한 언급은 사용 승인 또는 추천을 구성 않는다는 의미하지 않습니다. 이 보고서의 연구 결과 및 결론은 저자의 것이며, 반드시 FDA의 견해를 대변하지 않습니다. 저자는 더 경쟁 이익과 공개하는 게 없다.

반스 미로 테스트 절차에서 중요한 단계는 다음과 같습니다 : 1), 이스케이프 케이지를 찾습니다 동물 동기를 부여하기 위해 적절한 약간 혐오 자극을 제공 2) 직원, 외부 소음 제어 테스트, (일정한 조건이 동물 실험을 통해 유지된다 예를 들어, 테스트 시간을 보장 및 성능에 영향을 미칠 수있는 다른 자극), 3) 실험 영상 최적화하고 보장 적절한 비디오 녹화 및 백업 파일을 기록하고, 4) 70 % 에탄올로 미로의 세정 실험 사이 후각 큐들을 제거되는 경우. 탈출 케이지를 찾습니다 주제 동기를 부여하는 가장 좋은 자극을 확인하는 것은 약간의 수정 및 / 또는 문제 해결을 요구할 수 있습니다. 일반적인 자극은 밝은 조명 오버 헤드입니다. 그러나,이 종 (种)에 대한 충분하지 않을 수 있습니다. 단지 우리가 일화를 언급하지만, 광범위하게 행동으로 평가 (따라서, 광범위하게 처리) 된 쥐 표준 B에서 덜 동기 것서로 다른 장치 및 / 또는 환경에 더 유순하고 길들...

공간 학습과 실험실 설치류에서 메모리는 첫 번째 음식 강화제 1을 찾을 골목길의 미로를 탐색 음식 박탈 쥐로 평가되었다. 몇 년 후, 공간 참조 메모리 시스템 2를 제안했다. 테스트 세션 내에서 또는 시험 메모리를 참조 작업 메모리 달리, 참조 메모리 테스트 세션이나 실험에 걸쳐 메모리를 참조하여 더 자세히 장기 메모리에 관한 것이다. 미로의 몇 가지 유형이 해마에 의존하는 공간 학습과 기억 크고 작은 설치류 (예를 들어, 물 미로, 여러 T-미로, 레이디 얼 미로와 마른 땅 미로) 3-6의 비 침습적 평가로 개발되고있다. 여기에서, 우리는 먼저 박사 캐롤 반즈 (7)에 의해 1979 년에 설명 된 원형 플랫폼이나 반즈 미로에 초점을 맞추고있다. 이 미로 래트 수 (Ra 비롯한 설치류 모델의 광범위한 탐색 공간 학습 및 기억을 시험하는 데 사용되어왔다ttus의 norvegicus), 마우스 (뮤스 musculus)는, 마우스 (Peromyscus maniculatus bairdii를) 사슴 캘리포니아 마우스 (Peromyscus 포니), 및 hystricomorph 설치류 (예 degus [Octodon의 degus]) 8-13. 바네스 미로를 사용하여 평가 다른 종은 미국의 바퀴벌레 (Periplaneta 아메리) 14, 옥수수 뱀 (뱀 가죽 guttata guttata) (15)를 포함 &#160; squamate 파충류 (예 측 얼룩이 생깁니다 도마뱀 [우타 stansburiana]) 16, 그리고 인간이 아닌 영장류 (예를 들어, 마우스 여우 원숭이 [Microcebus의 murinus]) 17. 실험실에서, 반스 미로 성능이 발달 비스페놀 A (BPA) 또는에 티닐 에스트라 디올 (EE2) 노출 9-1113 후 신경 독성의 지표로 사용되어왔다. 또한 일반적으로 알츠하이머 병 관련 데프에게 다양한 마우스 종자 18 ~ 21, 노화 효과 7,22-28의 평가의 행동 표현형을 위해 사용되는동물 모델 3,29-33뿐만 아니라, 운동,식이 요법, 환경, 신진 대사 변경 34-42의 효과에 icits. 반스 미로 사용의 주요 장점은 모두 마우스 (44) 플라즈마 코르티 코스 테론 농도의 심각한 증가를 유도 할 수 있지만이 같은 모리스 물 미로 (43) 등의 물 미로를 기준으로 한 ​​주제에 덜 스트레스를 유도하는 것입니다. 마른 땅 미로 같이, 반스 미로 지상파 설치류 (45)에 대한 더 많은 ethologically 관련 될 수있다. 물 미로 성능이 쥐 3,46,47의 유전자 변화에 더 민감하게 반응하는 것으로되어 있지만, 반스 미로 성능 기타 특정 변경 48, 49에 더 민감하다. 물 미로 사용이 불가능 설치류 모델에서, 반스 미로는 공간 기억 보존 (31)의 미세 조정 평가를 제공 할 수 있습니다. 일반적으로 반스 미로 (즉, 밝은 빛)에 사용되는 약간 혐오 자극,그러나, 탈출 케이지 (45)의 위치를 쥐에 대한 충분한 동기를 부여하지 않을 수 있습니다. 또한, 설치류 동물들이 탈출 케이지를 입력하지 않은 경우에는 처벌이 발생하지 배울 수 있습니다. 따라서, 대신에 적극적으로 탈출 케이지를 검색, 일부 설치류 적극적으로 각 시험의 오랜 기간의 미로를 탐험. 켄 나드 우드 러프 - 팩 (24)에 의해 리뷰,이 증가 된 탐사 탈출 케이지, 경로 길이를 찾기 위해 대기 시간을 연장하고, 오류의 수를 증가시킬 것이다. 따라서, 대기 시간, 에러율, 정확하고 잘못된 사분면, 속도에 소요되는 시간, 시간, 이동 시간, 휴식 및 검색 전략 등 다양한 매개 변수의 측정은, 집합 적으로 각 과목의 공간 탐색 학습과 기억 능력 8의 더 나은 지표를 제공 할 수있다 -10. 또한, 성능이 먼저 탈출 케이지 (차 측정) 또는 이스케이프 케이지 (총 측정)를 입력 할 수있는 대기 시간을 찾기 위해 대기 시간으로 측정 할 수 있습니다. 일부는이 인자가성능의 기본 조치가 전체 측정 (50)보다 공간 학습을보다 정확하게 반영 것을 에드. 여기에 설명 된 예제를 포함하여 대부분의 연구는 오류 속도 및 검색 전략을 결정하기 위해 탈출 케이지를 입력 대기 시간을 사용합니다. 또한, 일부 추적 소프트웨어 시스템은 올바른 대 잘못 구멍 스니핑의 주파수를 측정 할 수있는 세 가지 점 품 검출 시스템이있다. 마지막으로, 미로 철저하게 단서를 제공하거나 이후 동물에 혼란 증명할 수있는 후각 신호를 제거하는 실험 사이의 에탄올로 세척해야합니다. 반스 미로 디자인은 다양하지만, 일반적으로 각 가정이나 탈출 케이지로 연결 중 하나만, 12 또는 20 잠재적 탈출 구멍이 있습니다. 탈출 케이지 (벽이없는 미로에) 직접 미로 상단의 탈출 구멍 아래 어느 자리 나 미로의 주변 벽에 내장 할 수있다. 단서는 m 내에서 약 16.5 cm 높이 또는 폭 (크기의 다양한아제) 수평선에 바닥에서 미로 외부 방 벽의 천장에 배치 폭 21.6 cm가. Peromyscus 종에 대한 반스 미로 디자인의 1-5 예를 보여줍니다 (그림 1)과 쥐 (그림 2-5)를 도시한다. 플러그 또는 false 바닥은 미로에서 떨어지는에서 동물을 방지하기 위해 nonescape 구멍을 커버해야한다. 테스트 룸의 크기는 다양 할 수 있습니다 (1 ~ 20 평방 미터)하지만, 방에 동물을 익숙하게 비디오 셋업 (사용 된 경우)가 탑재 된 컴퓨터를 수용하고, 장소, 미로에 대한 충분한 공간을 제공 할만큼 충분히 커야합니다 실험은 그들의 존재가 동물의 성능을 방해하지 않도록 미로 장치로부터 거리 (최소 ~ 122cm)에 앉아하는 데 필요한 권한입니다. 탈출 케이지의 위치 할당 치료 그룹과 성 사이에 균형을해야합니다. 여기에 설명 된 특정 절차 인트라 미로 악취 큐, 일부 연구의 사용을 억제하기위한 실험간에 미로 회전이 포함되지 않지만이 절차 (50)를 통합 할 수 있습니다. 우리의 절차에서, 미로는 냄새의 신호를 제거하기 위해 시험과 에탄올로 닦아된다. 1) 무작위, 운영 체제는 정의 미로의 중앙을 가로 지르는 경로로 구분 구멍의 지역화 검색, 2) 직렬로 정의 : 탈출 케이지의 위치에서 검색 전략의 세 가지 유형 (반즈 7로 원래 되나 &quot;패턴&quot;) 정의 된 체계적인 시계 방향 또는 반 시계 방향으로 연속 구멍의 검색, 3) 직접 또는 공간, 두 번 이상 세 이하의 오류 미로 센터를 횡단하지 않고 올바른 사분면에 직접 탐색으로 정의. 일반적으로, 반복 테스트를, 설치류는 일반적으로 (임의의 시리얼 및 직접) 51 나열된 순서대로 검색 전략을 통해 진행. 이스케이프 케이지없이 프로브 시험은 또한 메모리 (50)의 또 다른 척도로서 사용될 수있다. 프로토콜 및 대표여기 결과는 설치류의 두 가지 유형 (Peromyscus 종 - 그렇지 않으면라고 작은 설치류)과 쥐를 위해 개발되었다. 이러한 일반적인 절차는 또한 타고난 및 / 또는 비근 교계 마우스 (뮤스 musculus)에 보유 할 수 있지만, 다른 연구는 이러한 후자의 종 18 ~ 21에 대한 잠재적 인 방법론의 차이에 참고해야한다.

<table><tbody><tr><td>참고: 작은 설치류 전용인 항목은 굵게 표시됩니다. 큰 설치류 전용의 항목은 이탤릭체로 표시되어 있습니다. 굵게 표시되거나 기울임꼴로 표시되지 않은 항목은 모두에 해당됩니다.</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>30°C마다 12개 또는 20개의 탈출 구멍이 있는 Barnes Maze 플랫폼. 쥐의 경우 각 구멍은 직경이 10.5cm이고 미로 상단 가장자리에서 4cm입니다. 자동 추적 프로그램과 함께 사용하려면 흰색 설치류의 경우 검은색 상의가 필요하고 착색된 설치류의 경우 흰색 상의가 필요합니다. 생쥐와 쥐의 경우 이 원형 상단은 각각 직경이 95cm와 122cm입니다.</td><td>US Plastics Corp, Lima, OH</td><td>42625</td><td>이것은 Barnes Maze의 꼭대기와 설치류가 놓인 표면입니다. 다양한 재료(예: 플렉시글라스)로 구성할 수 있지만 내분비 교란 물질의 경우 폴리프로필렌 BPA가 없는 재료가 최적입니다. 구멍 중 하나는 탈출 케이지로 연결됩니다. 다른 모든 구멍은 블라인드 엔드 또는 거짓 바닥입니다. 쥐 미로의 경우 미로 플랫폼 아래쪽에 있는 작은 슬라이드를 통해 탈출 케이지와 가짜 바닥이 미끄러져 들어갈 수 있습니다.</td></tr><tr><td>2 인치 폴리프로필렌 파이프 플러그 (24) 2 인치 90°; 검은색 폴리프로필렌 팔꿈치 (12) 2 인치 x 6 인치 폴리프로필렌 파이프 니플 (1)</td><td>US Plastics Corp, Lima, OH</td><td>30724 32086 30712</td><td>이것들은 작은 설치류 (예: 마우스) Barnes Maze에만 필요합니다. 이러한 적응은 블라인드 엔드 튜브/엘보우 또는 튜브 중 하나가 파이프 니플에 연결되어 탈출 케이지로 연결됩니다.</strong</td></tr><tr><td>>쥐용 거짓 바닥</td><td></td><td></td><td>이것들은 ABS 플라스틱으로 맞춤 제작되었으며 쥐 미로 장치를 위해 진공 성형되었습니다.</td></tr><tr><td>원형 알루미늄 벽/장벽(높이 50cm)</td><td>Ace Hardware, Columbia, MO</td><td></td><td>작은 설치류(예: , 생쥐)의 경우, 이 장벽은 그들이 미로에서 떨어지는 것을 방지합니다. 쥐 장치는 일반적으로 이것을 필요로 하지 않습니다. 벽은 상대적으로 길들여지고< 강하고> 실험실 쥐에게는 필요하지 않을 수 있습니다.</td></tr><tr><td>미로 플랫폼 상단 지원 스탠드</td><td>US Plastics Corp, Lima, OH</td><td>42625</td><td>스탠드는 설치류가 탈출 케이지를 찾도록 동기를 부여하기 위해 바닥 위로 올라가도록(일반적으로 70-100cm) 미로 플랫폼 상단을 지지합니다. 스탠드는 모든 재료로 구성할 수 있습니다.</td></tr><tr><td>백색 소음</td><td>SleepMate 사운드 컨디셔너, Marpac, Rocky Point, NC</td><td>980A</td><td>배경 소음은 시험 및 동물 전반에 걸친 Barnes Maze 테스트를 혼란스럽게 할 수있는 주변 음향 신호를 차단하는 데 사용할 수 있습니다</td></tr>.<tr><td> 예를 들어, Utilitech 500W 할로겐 휴대용 작업등.</td><td>Ace Hardware 또는 Lowes</td><td></td><td>Bright 조명은 설치류가 탈출 케이지를 찾도록 동기를 부여하는 약간 혐오스러운 자극을 제공합니다. 조명은 일반적으로 미로 꼭대기 위 ~150cm 위에 매달려 있습니다.</td></tr><tr><td>탈출 케이지. 작은 설치류의 경우 폴리 프로필렌 케이지 (27.8cm x 7.5cm x 13cm) 일 수 있습니다.</td><td>Ancare, Bellmore, NY</td><td>N40 PP</td><td>이곳의 쥐 탈출 케이지는 맞춤형으로 제작되었으며 탈출 케이지로 이어지는 경사로가 있습니다.</td></tr><tr><td>불투명 튜브(쥐만 해당)(지름 27cm, 높이 23cm)와 두꺼운 판지 조각으로 상단을 덮습니다.</td><td></td><td></td><td>튜브는 미로 중앙에 놓이고 쥐는 판지로 덮인 상단에서 튜브 안으로 들어갑니다. 튜브 외부에 있는 손잡이를 사용하면 튜브를 더 쉽게 들어 올릴 수 있으며 시험이 시작됩니다. 튜브는 모든 재료로 구성될 수 있지만 불투명해야 합니다.</td></tr><tr><td>고해상도 비디오 카메라(예: , Panasonic 디지털 비디오 카메라)</td><td>Panasonic, Secaucus, NJ</td><td>ICV19458</td><td>비디오 카메라는 머리 위에 위치하며 향후 분석을 위해 시험을 기록합니다.</td></tr><tr>스테이플 <td></td> 과 <td>같은 사무용품점</td><td>의 고품질 판지 건설 종이로 만든 미로 외 또는 미로 내 기하학적 단서</td><td>이러한 시각적 단서는 탈출 케이지의 공간적 위치에 대한 단서를 제공하여 미로 환경 내에서 동물의 방향을 잡습니다. 쥐의 경우 벽의 미로 외 단서가 잘 작동하는 반면, 미로 주위에 벽이 필요한 작은 설치류에서는 미로 내 신호를 사용해야 합니다.</td></tr><tr><td> 미로를 둘러싼 검은 커튼 (작은 설치류 만 해당) </td><td>Jo-Ann Fabrics와 같은 모든 직물 및 공예품 상점<</td><td></td><td>strong>검은 색 커튼은 <작은 설치류 (특히 야생 종, 예 : >< Peromyscus>)에 사용됩니다.</td></tr><tr><td>70% 에탄올</td><td>Fisher Scientific</td><td>BP2818-4</td><td>각 실험이 끝나면 메이즈 탑과 탈출 케이지를 청소하여 연속적으로 테스트된 설치류에 대한 잠재적인 냄새 신호를 제거합니다.</td></tr><tr><td>Ethovision과 같은 추적 소프트웨어 프로그램 및 적절한 비디오 카드와 상당한(1TB 이상) 하드 드라이브 공간이 있는 컴퓨터. 또는 Win TV(Hauppauge Computer Works, Inc.)와 같은 프로그램을 사용하여 나중에 분석할 수 있도록 비디오를 컴퓨터에 직접 녹화할 수 있습니다.</td><td>Noldus(버지니아주 리스버그)</td><td></td><td>추적 소프트웨어는 탈출 케이지를 찾기 위한 대기 시간, 속도, 이동 거리, 휴식 시간, 이동 시간, 올바른 사분면과 잘못된 사분면에서 보낸 시간, 탈출 구멍 주변에서 보낸 시간, 잘못된 구멍에 대한 오류 또는 진입 횟수, 탈출 케이지를 찾는 데 사용된 전반적인 검색 전략에 대한 시도를 분석하는 데 필요합니다.</td></tr><tr><td>최소 1-2TB의 메모리가 있는 Seagate 또는 WD와 같은 외장 하드 드라이브</td><td>Staples와 같은 모든 사무용품점.</td><td></td><td>비디오 녹화는 적어도 하나의 별도 위치에 백업해야 합니다.</td></tr><tr><td>비디오 녹화 프로그램, e.g. WinTV 프로그램</td><td>Hauppauge Computer Works, Inc., Hauppauge, NY</td><td></td><td>테스트 당시 추적 소프트웨어를 사용할 수 없는 경우, 시험은 향후 분석을 위해 비디오 녹화되어야 합니다.</td></tr></tbody></table>

크고 작은 설치류 모델 바네스 미로 테스트 전략

Barnes Maze Testing Strategies with Small and Large Rodent Models

공간 학습과 실험실 설치류의 메모리는 종종 물과 마른 땅 (반스) 미로입니다 가장 인기있는 미로에서 탐색 기능을 통해 평가된다. 세션이나 실험을 통해 성능 향상은 탈출 케이지 / 플랫폼 위치의 학습과 기억을 반영하는 것으로 생각된다. 물 미로보다 스트레스를 고려, 반스 미로 똑같이 둘레 가장자리의 간격으로 여러 구멍이있는 원형의 플랫폼 상단의 비교적 심플한 디자인입니다. 하나가 탈출 케이지에 이르게하는 동안 구멍 중 하나를 제외하고 모두는 거짓 바닥 또는 블라인드 끝입니다. 약간 혐오 자극 (예를 들어, 밝은 머리 위의 조명은) 탈출 케이지의 위치를 동기 부여를 제공한다. 이스케이프 케이지를 찾는 지연 세션 동안 측정 될 수 있지만, 추가적인 엔드 포인트는 전형적으로 비디오 녹화를 요구한다. 그 비디오 녹화에서 자동 추적 소프트웨어의 사용은 물 미로에서 생산하는 (예를 들어 유사하다 엔드 포인트의 다양한 생성 할 수 있습니다 &lt;/ EM&gt; 주행 거리, 속도 / 속도, 올바른 사분면에 소요되는 시간, 시간), 휴식 및 대기 시간 확인 / 이동 보냈다. (즉, 임의의 직렬 또는 직접) 검색 전략의 종류도 분류 될 수있다. 반스 미로 건설 및 테스트 방법론은 쥐와 같은 마우스와 같은 작은 설치류, 큰 설치류 다를 수 있습니다. 추가 - 미로 큐가 쥐에 대한 효과가 예를 들어, 작은 야생 설치류는 미로 주위에 시각적 인 장벽 내 미로 단서가 필요할 수 있습니다. 적절한 자극은 탈출 케이지를 찾습니다 쥐에게 동기를 부여하는 식별되어야합니다. Barnes와 물 미로 두 시간 4-7 시험 시험은 일반적으로 개선 된 학습과 기억의 성능 (예를 들어, 짧은 대기 시간이나 경로가 탈출 플랫폼이나 케이지를 찾을 길이) 및 / 또는 실험 그룹 사이의 차이를 감지하는 데 필요한로 소요될 수 있습니다. 그럼에도 불구하고, 반스 미로는 공간 탐색 능력을 측정하는 널리 사용되는 행동 평가하고유전 적, 신경 행동 조작, 또는 약물 / 독성 물질 노출에 의한 잠재적 중단.

성적으로 성숙한 남성 사슴 마우스는 널리 환경을 통해 전파되는 잠재적 인 번식 파트너를 찾을 수있는 강화 된 공간 탐색 능력에 따라 달라집니다. 태아기 테스토스테론에 성인 노출은 모두이 나중에 성인 남성의 행동 (53)를 구성하고 활성화에 필수적이다. 따라서, 그것은 내분비 교란 화합물에 초기 노출이 남성이 나중에 특성을 방해 할 수있는 것으로 추정되었다. 이 가설을 테스트하기 위해, 남성과 여성의 사슴 마우스는 발달 피토 에스트로겐없는 다이어트, 피토 에스트로겐없는 다이어트에 긍정적 인 에스트로겐 제어 (에 티닐 에스트라 디올 [EE2), 또는베이스에있는 BPA의 여러 환경 관련 복용에 산모의 다이어트를 통해 노출 된 피토 에스트로겐없는 세련된 다이어트를 제어하고, 성인과 반스 미로 성능을 평가 하였다. 1이 종에 대한 반스 미로 장치를 보여줍니다. 두 높은, 그러나 가장에 노출 된 남성은, BPA의 투여 량을 보여줍니다공간 학습...

마른 땅 반스 미로 널리 응답 약간 혐오 자극에 공간 탐색 능력을 측정하는 데 사용됩니다. 연속 일 동안 대조군의 성능 (탈출 케이지를 찾습니다 예를 들어 지연 시간) 일반 학습과 기억을 나타내는 향상. 쥐와 생쥐의 차이는 여기에 자세히 설명되어 있습니다 장치 및 방법의 변경을 필요로.

Spatial learning and memory of laboratory rodents is often assessed via navigational ability in mazes, most popular of which are the water and dry-land ...

이 절차의 전반적인 목표는 마른 땅 Barnes Maze에서 작은 설치류와 쥐의 공간 학습 및 기억 능력을 조사하는 것입니다. 이것은 먼저 실험 동물을 실험실과 반스 미로에 습관화함으로써 달성됩니다. 다음 단계는 동물을 미로 중앙에 배치하고 대기 시간 추적을 시작하여 탈출 케이지를 찾기 위해 동물이 탈출 케이지에 들어갈 때 또는 300초 후에 추적이 중지되는 것입니다.그 결과 공간 학습 및 메모리의 중단이 지연 시간 증가, 오류율 증가, 검색 전략 변경 실패로 나타날 수 있습니다. 물 미로와 같은 기존 방법에 비해 이 기술의 주요 장점은 스트레스가 다소 적고 수행하기 쉬우며 육상 설치류와 생태학적으로 더 관련이 있다는 것입니다. 이 방법은 공간 학습 및 기억 중단의 독성 학적 영향에 대한 통찰력을 제공 할 수 있습니다.또한 신경 퇴행성 장애, 노화 및 선천적 인지 결함과 같은 다른 분야에도 적용될 수 있습니다. Barnes 미로 디자인은 다양하지만 일반적으로 각 미로에는 12개 또는 20개의 잠재적인 탈출 구멍이 있으며 그 중 하나만 집이나 탈출 케이지로 연결됩니다. 탈출 케이지는 미로 상단의 탈출 구멍 바로 아래에 위치하거나 미로 주변 벽에 내장될 수 있습니다.신호는 미로 내의 약 16.5cm, 높이 또는 너비에서 미로 외부의 방 벽의 바닥에서 천장까지 배치된 수평선까지 크기가 다양할 수 있습니다. 동물이 미로에서 떨어지는 것을 방지하기 위해 플러그 또는 가짜 바닥으로 탈출할 수 없는 구멍을 덮어야 합니다. 시험실의 크기는 다양할 수 있지만 미로를 위한 충분한 공간이 있어야 합니다.동물 우리를 위한 장소, 비디오가 설정된 컴퓨터를 위한 방, 실험자가 미로에서 최소 1.4미터 떨어진 곳에 앉을 수 있는 공간. 동물을 균일한 환경 조건에 노출시키고 동물의 성능에 차등적으로 영향을 미칠 수 있는 다양한 소음이나 외부 신호를 최소화하는 것이 중요합니다. 탈출 케이지 위치 지정은 치료 그룹 간에 균형을 이루어야 하며 임상시험 간 성별도 균형을 이루어야 합니다.미로는 탈출 상자와 마찬가지로 냄새 신호를 제거하기 위해 에탄올로 깨끗이 닦습니다. 이 비디오에는 특정 추적 소프트웨어 작동에 대한 세부 정보가 포함되어 있지 않으므로 소프트웨어에 따라 다를 수 있습니다. 그러나, 이러한 시스템은 일관되게 사용되는 테스트 시간에 바람직하다.미로 위의 조명을 켜고 배치하여 방을 설정합니다. 첫 번째 시도 30분 전에는 실험실 밖의 표지판에 들어가지 마십시오. 생쥐가 익숙해질 수 있도록 일반 가정용 케이지에 넣어 시험장으로 데려옵니다.추적 프로그램을 설정합니다. 이제 가정용 케이지에서 첫 번째 마우스를 부드럽게 꺼내 덮개가 있는 긴 플라스틱 상자에 넣습니다. 1분 동안 동물을 탈출 케이지에 적응시킵니다.튜브를 막고 있는 종이가 해당 탈출 구멍에서 제거되고 다른 모든 구멍이 막혀 있는지 확인합니다. 마우스를 미로 중앙에 놓고 플라스틱 상자로 마우스를 덮습니다. 동물을 미로 중앙에 놓은 후 조용히 컴퓨터 영역으로 이동하여 빠르게 녹음을 시작합니다.컴퓨터에서 동물의 성능을 모니터링하는 동안 구멍 번호, 시험 번호, 검색 전략 및 오류 수를 기록합니다. 오류는 잘못된 구멍에서 스니핑하는 것으로 정의됩니다. 검색 전략에 대한 평가는 기록된 추적 패턴과 함께 실시간으로 또는 나중에 이루어질 수 있습니다.직접 전략은 설치류가 3개 이하의 오류로 탈출 케이지로 직접 들어가는 것을 보여줍니다. 연속 패턴은 탈출 케이지가 위치 할 때까지 미로 주변을 따라 이동하는 것을 포함합니다. 마지막으로, 패턴은 무작위일 수 있으며, 이는 다양한 구멍을 확인하기 위해 미로가 중앙을 여러 번 가로지르는 것을 의미합니다.동물이 탈출 케이지 안에 네 개의 발을 모두 가지고 있으면 추적 프로그램을 중지합니다. 동물이 5분 이내에 미로를 탈출하지 못하면 녹음을 중지합니다. 그런 다음 동물을 탈출구로 부드럽게 밀어 넣습니다.찔린 동물을 집 우리로 되돌리기 전에 정확히 2분 동안 탈출 케이지에 머물게 합니다. 이제 메이즈 탑에 70% 에탄올을 뿌리고 말리십시오. 그런 다음 동물을 방 밖 공간으로 되돌려 놓고 30분 후에 다시 테스트하십시오.각 마우스는 하루에 두 번 검사를 받습니다. 미로에서 다음 마우스를 시작하기 전에 이전에 올바른 탈출 구멍을 연결하고 지정된 탈출 구멍에서 구멍을 막고 있는 종이 플러그를 제거하십시오. 다음 주제 객체 설정에는 미로를 머리 위 조명 아래의 중앙에 배치하는 것이 포함되며, 탈출구가 없는 구멍을 막고 동물이 떨어지는 것을 방지하는 가짜 바닥이 미로 안에 안전하게 있고 탈출 케이지가 지정된 위치에 있는지 확인해야 합니다.첫 번째 주제의 경우, 반스 메이즈 탑은 동물에게 동기를 부여하기에 충분히 혐오감을 주어야 합니다. 탈출 케이지를 찾기 위해, 우리는 미로 꼭대기 바로 위의 강렬하고 밝은 조명이 이러한 목적에 매우 적합하다는 것을 확인했습니다. 또한 컴퓨터와 카메라가 준비되어 있고 스톱워치를 사용할 수 있는지 확인하십시오.이제 백색 소음을 켜서 배경 소음을 감쇠합니다. 의자는 미로에서 약 1미터 떨어져 있어야 하며 테스트 내내 거기에 머물러야 합니다. 2분을 카운트다운하되 방 밖에서 아무 소리도 나지 않도록 타이머를 준비하십시오.출입 금지 표지판을 놓습니다. 필기를 위한 테스트 시트도 제공되어야 합니다. 첫 번째 쥐를 테스트하기 30-60분 전에 집에 있는 동물을 실험실로 데려와 습관화할 수 있도록 합니다.이제 쥐가 5월 센터에서 실험을 시작할 수 있도록 튜브를 튜브에 배치하고, 동물의 ID가 있는 타이틀 카드를 배치하여 비디오를 사용하는 경우 쉽게 식별할 수 있습니다. 동물 ID 시트를 캡처하기 위해 몇 초를 기록합니다. 동물을 집에서 꺼내 머리부터 조심스럽게 탈출 케이지에 넣습니다.그런 다음 탈출 케이지를 가짜 바닥으로 덮고 2분 타이머를 시작합니다. 2분 후, 탈출 케이지에서 동물을 부드럽게 꺼내 튜브 중앙에 놓습니다. ID 시트를 튜브 상단으로 되돌리고 어셈블리를 부드럽게 들어 올려 쥐를 풀어줍니다.즉시 스톱워치를 시작하고 테스트 시트의 테스터 의자에 앉으십시오. 평가판의 시간을 기록합니다. 쥐가 탈출 케이지를 찾는 데 최대 5분을 사용하는 동안 시작하고 참을성 있게 기다립니다.스톱워치 시간을 기록합니다. 쥐가 탈출 케이지를 찾으면 탈출 케이지에서 동물을 꺼내 집 케이지에 다시 넣으십시오. 쥐가 5분 이내에 탈출 케이지를 찾지 못하면 이 점에 유의하고 부드럽게 그곳으로 안내하십시오.우리에서 15초 후 쥐를 집 우리로 되돌립니다. 쥐가 정신적으로 미로를 떠나면 시간을 기록하고 재빨리 동물을 잡으십시오. 10초 이내에 포획되면 미로 중앙으로 되돌려 시련을 계속하세요.그렇지 않으면 시험을 중단하고 분석에서 생략합니다. 두 경우 모두 낙상 시간을 기록하거나 시험 후 시험지에 뛰어 오르고, 녹음을 중지하고, 시험 사이에 시험에 대한 의견을 기록하십시오. 미로 꼭대기에서 소변이나 대변을 제거하십시오.70% 에탄올을 뿌리고 완전히 닦아냅니다. 탈출 케이지도 70% 에탄올로 청소하십시오. 자연 건조시키고 다음 시험을 위해 두 번째 탈출 케이지를 사용하십시오.항상 탈출 케이지를 번갈아 가며 사용하십시오. 이제 이 과정을 반복하십시오. 다음 동물을 실험합니다.각 동물을 하루에 한 번만 테스트하십시오. 다음 날에는 한 가지 변경으로 미로를 실행합니다. 쥐를 집 케이지에서 중앙 튜브에 직접 넣고 탈출 케이지 습관화를 생략합니다.친애하는 생쥐, 일부다처제 종은 식물성 에스트로겐이 없는 식단에서 환경적으로 관련된 BPA에 노출되었거나 양성 대조군 또는 식물성 에스트로겐이 없는 식단과 동일한 식단에서 에스트로겐에 노출되었으며, 쥐는 Barnes 미로를 사용하여 평가되었습니다. 두 번의 가장 높은 BPA 용량은 공간 탐색 능력의 혼란으로 이어졌지만, 테스트된 가장 낮은 BPA 용량은 그렇지 않았으며, 시험 기간 동안 공간 학습에서 동등한 결핍과 직접 검색 전략으로 전환할 수 없는 능력을 보여주었습니다. 친애하는 생쥐, 더 높은 용량의 BPA에 노출된 것은 저용량 BPA 수컷과 음성 대조군 수컷에 비해 장시간 지연을 보였습니다.에스트로겐 양성 대조군도 마찬가지로 저조한 성능을 보였으며 지연 시간 증가와 함께 오류율도 증가했습니다. 수컷 마우스와 대조적으로, EE 2와 중간 BPA 용량에 노출된 암컷 마우스는 다른 BPA 용량이 아닌 공간 학습 및 기억의 남성화된 패턴을 보였습니다. 이는 직접 검색 전략의 비정상적인 사용에 의해 입증되었으며 논리적으로 이는 대기 시간 감소에 반영되었습니다.일부다처제 사슴 쥐와 그들의 사촌들과는 대조적으로, 일부일처제 수컷 캘리포니아 쥐도 초기 BPA와 EE 2 노출을 투여하고 미로에서 테스트했습니다. 검색 전략은 영향을 받지 않았습니다. 수컷 캘리포니아 마우스는 이 종의 수컷 사슴 마우스와 같은 직접 검색 전략을 사용하지 않았으며, BPA 및 EE 2는 대조군과 관련된 검색 오류에 영향을 미치지 않았습니다.대조군 사슴 마우스와 비교했을 때, 대조군 캘리포니아 마우스는 7일 연속 테스트 기간 동안 발생한 오류 수를 줄이지 않았습니다. 대기 시간도 영향을 받지 않았습니다. 사슴 마우스와 캘리포니아 마우스 간에 관찰된 공간 탐색 중단의 차이는 BPA에 대한 발달 노출에 대한 행동 취약성의 종 차이 때문일 수 있습니다.어쨌든, 발달 투여가 실험 체제 하에서 캘리포니아 쥐의 이러한 행동을 눈에 띄게 바꾸지 않았다는 것은 분명합니다. 이 절차에 따라 동물이 변경된 불안 또는 활동 수준 또는 기타 인지 장애를 보이는지 여부와 같은 추가 질문에 답하기 위해 불안 또는 활동 평가와 같은 다른 방법을 수행할 수 있습니다. 특히, 개발 후 이 기술은 다양한 설치류 및 비설치류 종의 우주 항행을 탐구하기 위한 인지 분야의 연구의 길을 열었습니다.

barnes-maze-testing-strategies-with-small-and-large-rodent-models

Research

연구

JoVE Journal

Behavior

행동

이 비디오는 마우스로 Barnes Maze를 사용하는 방법을 보여줍니다. Barnes Maze 테스트 절차는 연구자들이 반복적인 실험을 통해 실험실 동물의 공간 학습 및 기억을 평가하는 데 사용합니다.

Barnes Maze : 실험실 동물의 공간 학습 및 기억을 평가하는 방법

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