크고 작은 설치류 모델 바네스 미로 테스트 전략

이 절차의 전반적인 목표는 마른 땅 Barnes Maze에서 작은 설치류와 쥐의 공간 학습 및 기억 능력을 조사하는 것입니다. 이것은 먼저 실험 동물을 실험실과 반스 미로에 습관화함으로써 달성됩니다. 다음 단계는 동물을 미로 중앙에 배치하고 대기 시간 추적을 시작하여 탈출 케이지를 찾기 위해 동물이 탈출 케이지에 들어갈 때 또는 300초 후에 추적이 중지되는 것입니다.

그 결과 공간 학습 및 메모리의 중단이 지연 시간 증가, 오류율 증가, 검색 전략 변경 실패로 나타날 수 있습니다. 물 미로와 같은 기존 방법에 비해 이 기술의 주요 장점은 스트레스가 다소 적고 수행하기 쉬우며 육상 설치류와 생태학적으로 더 관련이 있다는 것입니다. 이 방법은 공간 학습 및 기억 중단의 독성 학적 영향에 대한 통찰력을 제공 할 수 있습니다.

또한 신경 퇴행성 장애, 노화 및 선천적 인지 결함과 같은 다른 분야에도 적용될 수 있습니다. Barnes 미로 디자인은 다양하지만 일반적으로 각 미로에는 12개 또는 20개의 잠재적인 탈출 구멍이 있으며 그 중 하나만 집이나 탈출 케이지로 연결됩니다. 탈출 케이지는 미로 상단의 탈출 구멍 바로 아래에 위치하거나 미로 주변 벽에 내장될 수 있습니다.

신호는 미로 내의 약 16.5cm, 높이 또는 너비에서 미로 외부의 방 벽의 바닥에서 천장까지 배치된 수평선까지 크기가 다양할 수 있습니다. 동물이 미로에서 떨어지는 것을 방지하기 위해 플러그 또는 가짜 바닥으로 탈출할 수 없는 구멍을 덮어야 합니다. 시험실의 크기는 다양할 수 있지만 미로를 위한 충분한 공간이 있어야 합니다.

동물 우리를 위한 장소, 비디오가 설정된 컴퓨터를 위한 방, 실험자가 미로에서 최소 1.4미터 떨어진 곳에 앉을 수 있는 공간. 동물을 균일한 환경 조건에 노출시키고 동물의 성능에 차등적으로 영향을 미칠 수 있는 다양한 소음이나 외부 신호를 최소화하는 것이 중요합니다. 탈출 케이지 위치 지정은 치료 그룹 간에 균형을 이루어야 하며 임상시험 간 성별도 균형을 이루어야 합니다.

미로는 탈출 상자와 마찬가지로 냄새 신호를 제거하기 위해 에탄올로 깨끗이 닦습니다. 이 비디오에는 특정 추적 소프트웨어 작동에 대한 세부 정보가 포함되어 있지 않으므로 소프트웨어에 따라 다를 수 있습니다. 그러나, 이러한 시스템은 일관되게 사용되는 테스트 시간에 바람직하다.

미로 위의 조명을 켜고 배치하여 방을 설정합니다. 첫 번째 시도 30분 전에는 실험실 밖의 표지판에 들어가지 마십시오. 생쥐가 익숙해질 수 있도록 일반 가정용 케이지에 넣어 시험장으로 데려옵니다.

추적 프로그램을 설정합니다. 이제 가정용 케이지에서 첫 번째 마우스를 부드럽게 꺼내 덮개가 있는 긴 플라스틱 상자에 넣습니다. 1분 동안 동물을 탈출 케이지에 적응시킵니다.

튜브를 막고 있는 종이가 해당 탈출 구멍에서 제거되고 다른 모든 구멍이 막혀 있는지 확인합니다. 마우스를 미로 중앙에 놓고 플라스틱 상자로 마우스를 덮습니다. 동물을 미로 중앙에 놓은 후 조용히 컴퓨터 영역으로 이동하여 빠르게 녹음을 시작합니다.

컴퓨터에서 동물의 성능을 모니터링하는 동안 구멍 번호, 시험 번호, 검색 전략 및 오류 수를 기록합니다. 오류는 잘못된 구멍에서 스니핑하는 것으로 정의됩니다. 검색 전략에 대한 평가는 기록된 추적 패턴과 함께 실시간으로 또는 나중에 이루어질 수 있습니다.

직접 전략은 설치류가 3개 이하의 오류로 탈출 케이지로 직접 들어가는 것을 보여줍니다. 연속 패턴은 탈출 케이지가 위치 할 때까지 미로 주변을 따라 이동하는 것을 포함합니다. 마지막으로, 패턴은 무작위일 수 있으며, 이는 다양한 구멍을 확인하기 위해 미로가 중앙을 여러 번 가로지르는 것을 의미합니다.

동물이 탈출 케이지 안에 네 개의 발을 모두 가지고 있으면 추적 프로그램을 중지합니다. 동물이 5분 이내에 미로를 탈출하지 못하면 녹음을 중지합니다. 그런 다음 동물을 탈출구로 부드럽게 밀어 넣습니다.

찔린 동물을 집 우리로 되돌리기 전에 정확히 2분 동안 탈출 케이지에 머물게 합니다. 이제 메이즈 탑에 70% 에탄올을 뿌리고 말리십시오. 그런 다음 동물을 방 밖 공간으로 되돌려 놓고 30분 후에 다시 테스트하십시오.

각 마우스는 하루에 두 번 검사를 받습니다. 미로에서 다음 마우스를 시작하기 전에 이전에 올바른 탈출 구멍을 연결하고 지정된 탈출 구멍에서 구멍을 막고 있는 종이 플러그를 제거하십시오. 다음 주제 객체 설정에는 미로를 머리 위 조명 아래의 중앙에 배치하는 것이 포함되며, 탈출구가 없는 구멍을 막고 동물이 떨어지는 것을 방지하는 가짜 바닥이 미로 안에 안전하게 있고 탈출 케이지가 지정된 위치에 있는지 확인해야 합니다.

첫 번째 주제의 경우, 반스 메이즈 탑은 동물에게 동기를 부여하기에 충분히 혐오감을 주어야 합니다. 탈출 케이지를 찾기 위해, 우리는 미로 꼭대기 바로 위의 강렬하고 밝은 조명이 이러한 목적에 매우 적합하다는 것을 확인했습니다. 또한 컴퓨터와 카메라가 준비되어 있고 스톱워치를 사용할 수 있는지 확인하십시오.

이제 백색 소음을 켜서 배경 소음을 감쇠합니다. 의자는 미로에서 약 1미터 떨어져 있어야 하며 테스트 내내 거기에 머물러야 합니다. 2분을 카운트다운하되 방 밖에서 아무 소리도 나지 않도록 타이머를 준비하십시오.

출입 금지 표지판을 놓습니다. 필기를 위한 테스트 시트도 제공되어야 합니다. 첫 번째 쥐를 테스트하기 30-60분 전에 집에 있는 동물을 실험실로 데려와 습관화할 수 있도록 합니다.

이제 쥐가 5월 센터에서 실험을 시작할 수 있도록 튜브를 튜브에 배치하고, 동물의 ID가 있는 타이틀 카드를 배치하여 비디오를 사용하는 경우 쉽게 식별할 수 있습니다. 동물 ID 시트를 캡처하기 위해 몇 초를 기록합니다. 동물을 집에서 꺼내 머리부터 조심스럽게 탈출 케이지에 넣습니다.

그런 다음 탈출 케이지를 가짜 바닥으로 덮고 2분 타이머를 시작합니다. 2분 후, 탈출 케이지에서 동물을 부드럽게 꺼내 튜브 중앙에 놓습니다. ID 시트를 튜브 상단으로 되돌리고 어셈블리를 부드럽게 들어 올려 쥐를 풀어줍니다.

즉시 스톱워치를 시작하고 테스트 시트의 테스터 의자에 앉으십시오. 평가판의 시간을 기록합니다. 쥐가 탈출 케이지를 찾는 데 최대 5분을 사용하는 동안 시작하고 참을성 있게 기다립니다.

스톱워치 시간을 기록합니다. 쥐가 탈출 케이지를 찾으면 탈출 케이지에서 동물을 꺼내 집 케이지에 다시 넣으십시오. 쥐가 5분 이내에 탈출 케이지를 찾지 못하면 이 점에 유의하고 부드럽게 그곳으로 안내하십시오.

우리에서 15초 후 쥐를 집 우리로 되돌립니다. 쥐가 정신적으로 미로를 떠나면 시간을 기록하고 재빨리 동물을 잡으십시오. 10초 이내에 포획되면 미로 중앙으로 되돌려 시련을 계속하세요.

그렇지 않으면 시험을 중단하고 분석에서 생략합니다. 두 경우 모두 낙상 시간을 기록하거나 시험 후 시험지에 뛰어 오르고, 녹음을 중지하고, 시험 사이에 시험에 대한 의견을 기록하십시오. 미로 꼭대기에서 소변이나 대변을 제거하십시오.

70% 에탄올을 뿌리고 완전히 닦아냅니다. 탈출 케이지도 70% 에탄올로 청소하십시오. 자연 건조시키고 다음 시험을 위해 두 번째 탈출 케이지를 사용하십시오.

항상 탈출 케이지를 번갈아 가며 사용하십시오. 이제 이 과정을 반복하십시오. 다음 동물을 실험합니다.

각 동물을 하루에 한 번만 테스트하십시오. 다음 날에는 한 가지 변경으로 미로를 실행합니다. 쥐를 집 케이지에서 중앙 튜브에 직접 넣고 탈출 케이지 습관화를 생략합니다.

친애하는 생쥐, 일부다처제 종은 식물성 에스트로겐이 없는 식단에서 환경적으로 관련된 BPA에 노출되었거나 양성 대조군 또는 식물성 에스트로겐이 없는 식단과 동일한 식단에서 에스트로겐에 노출되었으며, 쥐는 Barnes 미로를 사용하여 평가되었습니다. 두 번의 가장 높은 BPA 용량은 공간 탐색 능력의 혼란으로 이어졌지만, 테스트된 가장 낮은 BPA 용량은 그렇지 않았으며, 시험 기간 동안 공간 학습에서 동등한 결핍과 직접 검색 전략으로 전환할 수 없는 능력을 보여주었습니다. 친애하는 생쥐, 더 높은 용량의 BPA에 노출된 것은 저용량 BPA 수컷과 음성 대조군 수컷에 비해 장시간 지연을 보였습니다.

에스트로겐 양성 대조군도 마찬가지로 저조한 성능을 보였으며 지연 시간 증가와 함께 오류율도 증가했습니다. 수컷 마우스와 대조적으로, EE 2와 중간 BPA 용량에 노출된 암컷 마우스는 다른 BPA 용량이 아닌 공간 학습 및 기억의 남성화된 패턴을 보였습니다. 이는 직접 검색 전략의 비정상적인 사용에 의해 입증되었으며 논리적으로 이는 대기 시간 감소에 반영되었습니다.

일부다처제 사슴 쥐와 그들의 사촌들과는 대조적으로, 일부일처제 수컷 캘리포니아 쥐도 초기 BPA와 EE 2 노출을 투여하고 미로에서 테스트했습니다. 검색 전략은 영향을 받지 않았습니다. 수컷 캘리포니아 마우스는 이 종의 수컷 사슴 마우스와 같은 직접 검색 전략을 사용하지 않았으며, BPA 및 EE 2는 대조군과 관련된 검색 오류에 영향을 미치지 않았습니다.

대조군 사슴 마우스와 비교했을 때, 대조군 캘리포니아 마우스는 7일 연속 테스트 기간 동안 발생한 오류 수를 줄이지 않았습니다. 대기 시간도 영향을 받지 않았습니다. 사슴 마우스와 캘리포니아 마우스 간에 관찰된 공간 탐색 중단의 차이는 BPA에 대한 발달 노출에 대한 행동 취약성의 종 차이 때문일 수 있습니다.

어쨌든, 발달 투여가 실험 체제 하에서 캘리포니아 쥐의 이러한 행동을 눈에 띄게 바꾸지 않았다는 것은 분명합니다. 이 절차에 따라 동물이 변경된 불안 또는 활동 수준 또는 기타 인지 장애를 보이는지 여부와 같은 추가 질문에 답하기 위해 불안 또는 활동 평가와 같은 다른 방법을 수행할 수 있습니다. 특히, 개발 후 이 기술은 다양한 설치류 및 비설치류 종의 우주 항행을 탐구하기 위한 인지 분야의 연구의 길을 열었습니다.