의 캡슐 혈청 형

이 절차의 전반적인 목적은 퀜칭 반응(quelling reaction)을 이용하여 streptococcus pneumoniae 또는 폐렴구균의 협막 혈청형 분석을 수행하는 것입니다. 이는 먼저 심장 주입 배지(heart infusion broth)에 폐렴구균의 신선한 하룻밤 배양 순수 배양물을 접종함으로써 이루어집니다. 두 번째 단계에서는 접종액 한 방울을 유리 현미경 슬라이드로 옮깁니다.

다음으로 동일한 부피의 항혈청을 슬라이드 위에 추가합니다. 마지막 단계로, 두 방울을 혼합하고 현탁액 위에 커버 슬립을 덮습니다. 최종적으로, 위상차 현미경으로 현탁액을 관찰하여 퀠 룽(Quell lung) 반응의 양성 또는 음성 여부를 확인합니다.

본 방법은 폐렴구균 syp의 표준 방법을 보여줍니다. 이 방법은 간단하고 수행하기 쉬우며 결과 해석이 용이합니다. 이 기술을 처음 접하는 연구자는 qualm 테스트를 수행하기에 적절한 세포 밀도를 인식하는 데 어려움을 겪을 수 있으므로, 본 방법에 대한 시각적 시연이 중요합니다.

먼저 멸균된 일회용 1 µL 루프를 사용하여 고체 비선택성 말 혈액 한천 배지 플레이트에서 배양한 신선한 폐렴구균(pneumococci) overnight 순수 배양액을 소량 도말하여 채취한 후, 100 µL의 심장 주입 배지(heart infusion broth)에 접종합니다. 현탁액은 육안으로 약간 혼탁해 보여야 하며, 튜브를 부드럽게 흔들어 세포 용액을 유화시킵니다. 새로운 1 µL 루프를 사용하여 접종액 한 방울을 유리 현미경 슬라이드로 옮깁니다.

다음으로 슬라이드 위에 현탁액을 올리고 작은 원형 커버 글라스를 덮은 후, 400배 배율의 위상차 현미경으로 현탁액의 밀도를 확인합니다. 접종균의 밀도가 너무 높으면 배지를 더 추가하여 세포 현탁액을 희석하고 세포를 다시 부드럽게 혼합합니다. 반대로 접종균의 밀도가 너무 낮아 예를 들어 보이는 세포가 50개 미만인 경우, 세포 현탁액에 박테리아를 더 추가하고 다시 부드럽게 혼합합니다.

경험이 쌓이면, 세포 현탁액을 흔들어 빛에 비추어 보았을 때 막 눈에 보일 정도의 탁도가 나타나면 세포 현탁액의 밀도가 적절하다고 판단할 수 있습니다. 현미경으로 관찰했을 때 세포 용액의 밀도는 이 정도 수준이어야 합니다.

최적의 박테리아 세포 희석이 완료되면, 접종액 약 1 µL를 유리 현미경 슬라이드 위에 옮깁니다. 그 다음, 새 루프를 사용하여 실온 상태의 동일한 부피를 추가합니다.

슬라이드 위에 항혈청을 떨어뜨리고 두 방울을 잘 섞습니다. 루프를 사용하여 즉시 현탁액 위에 작은 커버글라스를 덮되, 핀셋이 방울에 닿지 않도록 주의합니다. 그런 다음 앞서 시연한 것과 같이 위상차 현미경으로 현탁액을 관찰합니다.

폐렴구균 세포의 팽창이 거의 또는 전혀 관찰되지 않을 때 음성 Quell 반응으로 간주합니다. 이는 항혈청을 첨가하지 않은 폐렴구균 세포 현탁액인 음성 대조군과 유사합니다. 양성 Quell 반응은 유형 특이적 항체가 폐렴구균의 협막에 결합하여 굴절률의 변화를 일으킬 때 나타납니다.

위상차 현미경으로 관찰하면 박테리아가 부풀어 오른 것처럼 보이며 더 뚜렷하게 나타납니다. 이 실험 절차를 수행할 때 실제로 살아있는 미생물을 다루고 있다는 점을 잊지 마십시오. 따라서 우수한 실험실 실습 지침을 준수하고, 보호복과 적절한 실험 장비를 착용하며, 과정이 끝난 후 모든 장비와 시약을 안전하게 폐기하는 등 주의가 필요합니다.

이 기술을 숙달하면 적절하게 수행했을 때 약 10분 안에 완료할 수 있습니다. 본 절차를 시청한 후에는 콰-룽(qua lung) 반응을 이용하여 폐렴구균의 혈청형을 결정하는 방법에 대해 충분히 이해하게 될 것입니다. 이 기술은 비인두 내 보균 및 침습성 질환 모두에서 폐렴구균의 역학을 이해하는 데 중요합니다.