Name: 유전자 독성 스트레스 후 신경 줄기 및 마우스 두뇌 개발의 전구 세포의 사정 세포주기의 진행 상황 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2014-05-07T13:45:00.000+00:00
Duration: 9 min 51 s
Description: 배우세요 EdU와 BrdU를 이용한 마우스 태아 뇌 신경 줄기세포의 세포주기 진행 분석법. 이 방법은 이온화 방사선과 같은 유전자 독성 스트레스가 뇌 발달에 미치는 영향을 평가하는 데 활용됩니다.

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상테 - 환경 회사 - 이러한 결과로 이어지는 연구는 프랑스 전력 (EDF)에서 그리고 난 직원은 국립 드 라 공들인보기에서, 323,267을 부여 계약에 따라 유럽 연합의 제 7 차 프레임 워크 프로그램 (FP7/2007-2013)로부터 자금을받은 N °있다 등 상테 - 진통 (ANR-SEST, Neurorad).

1. 동물 절차 이 프로토콜은 11 월 24 일의 유럽 공동체위원회 지침, 1986 (86/609/EEC)에 따른 설계되어 동물 복지 (CETEA-CEA DSV IDF)에 대한 우리의 기관위원회에 의해 승인되었습니다. <ol><li> 에듀 / BrdU의 및 E14.5 임신 한 생쥐의 조사 (그림 2A)로 주입. <ol><li> PBS에서 5 ㎎ / ㎖에서 ML과 BrdU의 1 ㎎ /에 EDU의 솔루션을 준비합니다. 임신 한 생쥐에 25 G 바늘을 사용하여 에듀 용액 100 μL의 복강 내 주사 (IP)을 수행합니다. 1.5 시간 후, 0 Gy를 2 Gy의 (0.6 Gy를 / 분)에서 마우스 (전신 방사선 조사)를 조사. 직후, 임신 한 생쥐에 25 G 바늘을 사용하여 BrdU의 솔루션 (IP) 200 μl를 주입. </li></ol></li><li> 배아 뇌의 관상 조각의 준비. <ol><li> 조사 후 1 시간 또는 4 시간에서 이산화탄소에 의해 임신 한 쥐를 안락사. </li><li> 복부 CAVI를 엽니 다가위를 사용 삼cm에 타이. 뿔의 양극을 구획하여 자궁의 나머지 부분에서 두 개의 자궁 뿔을 분리합니다. PBS 0.6 %의 포도당이 포함 된 배양 접시에 자궁 뿔을 전송합니다. 배아를 분리하기 위해 집게로 자궁 뿔을 엽니 다. 집게를 사용하여 각 태아의 양막을 제거합니다. </li><li> 집게와 배아의 머리를 해부하고 4 ℃에서 4 % 파라 포름 알데히드 (PFA, 산도 = 7.4) O / N에 침지하여이를 수정 </li><li> 4 ℃에서 적어도 하룻밤 PBS에서 배아의 머리를 씻어 헤드는 며칠 동안 PBS에 보관 될 수있다. </li><li> 표 1에 나타낸 바와 같이 진공 침윤 프로세서를 사용하여 파라핀에 포함 헤드. 매립 헤즈 또한 에탄올과 xylen 욕탕 화학 후드 하에서 수행 한 후 파라핀 욕탕 65 ° C의 오븐에서 할 수있다. </li><li> 마이크로톰으로 5 μm의 두께 코로나 섹션을 준비합니다. </li><li> 폴리 라이신 코팅 현미경 슬라이드에 장착합니다. &lt;/ 리&gt; <li> 슬라이드 수개월 동안 실온 (RT)에서 유지 될 수있다. </li></ol></li></ol> 2. 에듀 / BrdU의 얼룩 <ol><li> 탈 파라핀과 항원 마스크 해제 <ol><li> 5 분 동안 톨루엔 3 화장실에 슬라이드 침지하여 파라핀 뇌 부분을 Deparaffinize. </li><li> 에탄올 100 %, 에탄올 95 %, 에탄올 70 %, 5 분 H 2 O에서 : 다음과 같은 에탄올의 농도가 감소하는 각 솔루션의 2 화장실에서 3 분 동안 재수 슬라이드는 몇 시간 동안 탈 이온수에 보관하실 수 있습니다. </li><li> 구연산 용액 (10 mM의, 산도 6)에서 10 분 동안 조각을 삶아 한 다음 5 분 동안 탈 이온수에 품어. </li></ol></li><li> 에듀 염색 <ol><li> 제조 업체의 프로토콜에 따라 에듀 감지를 수행합니다. 10 분간 PBS에서 0.5 % 트리톤 X-100 세포를 투과. </li><li> 탈 이온수의 10 배 솔루션을 희석하여 1X 에듀 버퍼 첨가제를 준비합니다. 이 솔루션은 갓과 같은 다 사용해야합니다예. </li><li> 에듀 알렉사 플 루어 488 아 지드를 포함, 에듀 반응 칵테일을 준비합니다. 이것은, 그렇지 않으면 반응이 최적으로 진행되지 않으며, 표 2에 나열된 순서로 다음의 성분을 추가하는 것이 중요하다. 준비 15 분 이내에 에듀 반응 칵테일을 사용합니다. </li><li> permeabilization 버퍼 (단계 2.1.1)를 제거하고 PBS로 두 번 세척한다. </li><li> 에듀 반응 칵테일의 150 μl를 추가, 커버 슬립을 넣어 실온에서 어둠 속에서 30 분 동안 배양한다. </li><li> 에듀 반응 칵테일을 제거한 다음 PBS로 한번 세척한다. </li></ol></li><li> BrdU의 염색 <ol><li> 7.5 % 염소 혈청과 PBS에 7.5 % 소 태아 혈청 포화 버퍼를 준비합니다. , 뇌 조각에 포화 버퍼 150 μl를 추가 coverslip에 넣어 구속력이 특정 항체를 차단하기 위해 실온에서 1 시간 동안 배양한다. </li><li> 커버 슬립을 제거합니다. 포화 버퍼 1 /는 300 희석 마우스 방지 BrdU의 차 항체 150 μl를 추가, / 커버 슬립을 넣고 O를 품다4 ℃에서 N </li><li> 커버 슬립을 제거한 다음 PBS로 3 회 세척한다. </li><li> 포화 버퍼에 1 / 400으로 희석 한 염소 항 - 마우스 Alexa594 차 항체 150 μl를 추가, 커버 슬립을 넣어 실온에서 1 시간 동안 배양한다. </li><li> 커버 슬립을 제거한 다음 PBS에 한 번 씻는다. </li><li> 핵 염색 : 4의 150 μL &#39;PBS에 1 ㎍ / ml로 -1,6 - diamidino -2 - 페닐 인돌 (DAPI)를 추가, 커버 슬립을 넣고 실온에서 2 분 동안 품어. </li><li> 매체를 장착에 슬라이드를 장착합니다. </li></ol></li></ol> 3. 분석 <ol><li> 20X 목적 또는 공 초점 현미경과 형광 현미경으로 뇌의 부분을 검사하고 파일을 분리 등 세 개의 채널 (488 nm의, 594 nm의 UV)에서 이미지를 수집. </li><li> 포토샵 소프트웨어를 사용하여 이미지를 스택. </li><li> dorsomedial 대뇌 벽의 표준 분야에서 뇌 부분을 분석합니다. 이 분야는 중간 자적 차원에서 100 μM과 10 μ의 18 쓰레기통 (또는 그 이상)으로 나누어 져 있습니다로 이미지를 중첩 그리드 (그림 1)를 사용하여 반경 차원에서 m 높이 이전에 31을 설명했다. <ol><li> 상기 제 1 빈으로 그리드 정렬은 심실 국경의 긴 축과 평행, 심실 표면에 있습니다. 그런 다음 각 bin에 표시된 에듀, BrdU의 및 / 또는 pyknotic 핵 (세포 사멸 핵에 대응)의 번호. 핵이 두 개의 쓰레기통에서 동일한 영역을 점유 할 때 그것의 큰 부분, 또는 하단 용지함에를 포함 함 두 쓰레기통의 경계에 위치한 핵을 수. </li></ol></li><li> 통계 분석. </li></ol> 배아 당 최소 두 개의 대뇌 피질의 조각을 분석합니다. 다른 새끼에서 최소 3 배아에 대한 실험을 반복합니다. 결과는 평균 (SEM)의 평균 ± 표준 오차로 제공해야한다. 통계 분석은 양방향 ANOVA와 Bonferroni 다중 비교 posthoc 테스트를 사용을 Graphpad 프리즘으로 실시하고 있습니다.

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</ol>

저자는 이익에 대한 갈등이 없습니다.

에듀 1.5 시간의 정관에 따라 여기에 설명 된 실험 설계하기 전에 조사가 허용 된 후 즉시 조사 및 BrdU의 정관 NSPCs이 후 S 및 G2 / M의 체크 포인트를 활성화 할 수 있지만, 1 차 시간 동안 G1 / S 체크 포인트 수 없습니다 시위 태아 쥐의 뇌에서 유전자 독성 스트레스. 우리는 우리가 구체적으로 S 상 항목의 비율을 감상 할 수 있도록, 에듀 단지 1 시간 마우스를 희생하기 전에, 조사 및 BrdU의 후 다른 시간에 주입 된 다른 실험을 수행 하였다. 이러한 실험 NSPC 생체 (22, 23)의 유전자 독성 스트레스 후 G1 / S의 체포를 활성화하지 않는 것이 증명하고있다. 따라서, DNA 수리 및 세포 사멸 사이의 선택이 세포에 유전체의 안정성을 guarantying 메커니즘의 특성에 문제를 제기 G1 / S 체크 포인트에서 발생하지 않습니다. <p class="jove_...

배아 두뇌 개발하는 동안 대뇌 피질의 투사 신경 세포는 신경 줄기 및 전구 세포 (NSPC)의 다른 유형으로 구성 pseudostratified 상피는 라인 측면 심실, 심실 영역에 생성됩니다. NSPC 중, 신경 줄기 세포의 역할을 방사 아교 세포 (RGC)가,, (INM) interkinetic 핵 마이그레이션을 받아야 : 그들은 심실 영역의 기저 한계에서 뇌실과 S 상의 표면에 유사 분열을 수행 (VZ) 1,2,3. 그들은 나눌 수 있습니다 대칭으로 두 RGC를 생성하거나 불균형 한 RGC 하나의 신경 세포 또는 중간 전구 세포 (IPC) 4, 5를 생성합니다. IPC는 마지막으로 대칭 분할 후 그들은 두 개의 미성숙 투사 뉴런 6-8을 생성 subventricular 영역라는 상부의 확산 층 (SVZ)로 이동한다. RGC는 달리, IPC (9 검토) INM를 받아야하지 않습니다. 새로 생성 된 신경 세포는 백분율대뇌 피질의 플레이트 (CP) 10, 8 최종 목적지에 도달하기 위해 중간 영역 (IZ)를 통해 방사 섬유를 따라 방사형으로 먹었다. 모든 이벤트의 완벽한 타이밍은 정확한 대뇌 피질의 발달에 필수적이다. 예를 들어 신경 전구 인구의 분화 증식에서 스위치는 G1 단계 지속 기간 (11), (12)에 의해 제어된다. G1 단계의 연장은 세포 분화에 따라서 상관 관계. 등 (13에서 검토) 이온화 방사선, 심각하게 손상 뇌의 발달로 유전자 독성 스트레스. 우리와 다른 NSPC 방사선에 의한 세포 사멸 14, 15, 16에 대한 높은 경향이있는 것으로 나타났습니다. 전리 방사선은 세포 증식에​​ 가장 심각하게 손상되어 DNA 이중 가닥의 휴식을 유도한다. 자전거 세포의 DNA 손상 반응 (DDR)의 하나의 필수 구성 요소는 G1 / S 또는 G2 / M 전환이나 S시 세포주기 체크 포인트의 활성화입니다상 (내 S 체크 포인트) 17-21. 이들은 DNA 손상 보수 또는 너무 손상 세포의 제거를위한 시간을 제공하는 세포주기 진행을 차단. 따라서, 세포 사멸뿐만 아니라 지연 세포주기 진행은 방사선 노출 22-24 이온화에 응답 뇌 발달을 변경할 수있다. 이것은 조사 된 마우스 태아 뇌 NSPC에서 세포주기 체크 포인트의 활성화를 평가하는 방법을 개발하는 것이 흥미 있었다. 세포주기의 진행을 일상적 티미 딘 유사체, 5 - 브로 모-2&#39;-데 옥시 우리 딘 (BrdU의)의 혼입을 사용하여 이어진다. BrdU의은 DNA가 복제되어 세포주기의 S 단계에서 통합된다. BrdU의에 대한 항체의 사용은 BrdU의 펄스 동안의 S 단계에서 세포의되었습니다 이후 검출을 허용한다. 신규 티미 딘 유사체, 5 -에 티닐-2&#39;-데 옥시 우리 딘 (EDU)는 형광 지드에 의해 검출된다. 듀와 B를 검출하는 다른 방법<html> RDU는 세포주기 진행의 연구에 유용 모두 티미 딘 아날로그의 동시 검출을 가능하게 25을 교차 반응하지 않는다. 보통 세포는 처음 EDU와 펄스와 다음 모두 포함 과정 사이의 시간이 시간 (25, 26)의 커플을 지속 BrdU의와 펄스된다. 에듀을 포함하는 배지에서 BrdU의 첨가 EDU의 배제와 DNA에 BrdU의의를 우선적으로 편입 결과, 동안 만 BrdU의 내장 27 미디어 결과에 몰 또는 반 몰의 BrdU와 EDU (25)의 동시뿐만 아니라. 이것은 일반적으로 이전의 두 번째 레이블의 첨가 배양 배지에서 첫 번째 레이블을 제거하는 데 필요한 세척 단계를 제거하여 이중 라벨 프로토콜을 단순화합니다. 이것은 또한 S 상 항목 또는 세포 인구의 출구의 정확한 타이밍을 결정하는 세척 단계는 할 수 없습니다 생체 내 연구에 대한 특별한 관심입니다. t &quot;&gt; 최근, 에듀와 BrdU의 23, 24 및 22을 사용하여 배아 마우스 뇌의 듀얼 펄스 표시하는 방법은 자궁 조사에 후 세포주기의 진행과 NSPC의 INM을 분석하기 위해 개발되었습니다. 또한이 입증되었습니다 동안, 그 S 단계는, 마우스 세포는 먼저 euchromatin 영역 다음 근심 이질 염색질 28,29,30를 복제합니다. 흥미롭게도, interphasic 핵으로 클러스터 된 다른 염색체의 근심 이질 염색질도 chromocenters로 알려진 밝은 초점으로 DAPI 염색에 의해 쉽게 감지 염색질 초점을 형성한다. 따라서, euchromatin과 chromocenters의 차이 에듀와 BrdU의 염색에보다 정확하게 NSPC의 S 단계의 진행을 분석하는 것을 도왔다. 이 메서드는이 체크 포인트는 게놈의 안정성을 위해 중요한 것으로되어 있기 때문에 매우 놀라운 일이다 NSCP 22-24에서 G1 / S 체크 포인트의 명백한 부족의 데모를 허용했다. 여러 특급듀 및 BrdU의 펄스의 다양한 조합에 기초 erimental 디자인은 복부와 등쪽 telencephalon에서 세포주기의 진행을 분석하기 위해 사용되어왔다. 여기, 우리는 E14.5 마우스 배아의 자궁 조사에서 다음과 같은 제 4 시간 내 NSPC의 급성 DNA 손상의 연구를 허용하는 프로토콜의 예를 제공합니다.

<table><tbody><tr><td>EdU</td><td>Life Technologies</td><td>A10044</td><td>1 mg/ml</td></tr><tr><td>BrdU</td><td>Life Technologies</td><td>B5002</td><td>5 mg/ml</td></tr><tr><td>IBL 637</td><td>CIS BIO International</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Tissu Tek VIP</td><td>Leica</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Microtome</td><td>Leica</td><td>RM 2125 RT</td><td></td></tr><tr><td>Triton X-100</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>93443</td><td></td></tr><tr><td>Click-iT EdU Alexa 488 이미징 키트</td><td>Life Technologies</td><td>C10083</td><td></td></tr><tr><td>Anti-BrdU</td><td>GE Healthcare</td><td>RPN202</td><td>1/300</td></tr><tr><td>염소 안티 마우스 -Alex594</td><td>Life Technologies</td><td>A11001</td><td>1/400</td></tr><tr><td>Fluoromount</td><td>SouthernBiotech</td><td>0100-01</td><td></td></tr><tr><td>폴리신 슬라이드</td><td>Thermo scientific</td><td>J2800AMNZ</td><td></td></tr><tr><td>Paraformaldehyde</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P6148</td><td></td></tr><tr><td>PBS</td><td>Life Technologies</td><td>20012-068</td><td></td></tr><tr><td>DAPI</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>D9542</td><td></td></tr><tr><td>현미경 BX51</td><td>올림푸스</td><td></td><td></td></tr><tr><td>컨포칼 현미경 SPE</td><td>Leica</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Prism 소프트웨어</td><td>Graphpad</td><td></td><td>버전 5.0c</td></tr><tr><td>Photoshop 소프트웨어</td><td>Adobe</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

유전자 독성 스트레스 후 신경 줄기 및 마우스 두뇌 개발의 전구 세포의 사정 세포주기의 진행 상황

Assessing Cell Cycle Progression of Neural Stem and Progenitor Cells in the Mouse Developing Brain after Genotoxic Stress

대뇌 피질의 신경 세포는 배아 뇌의 좌우 심실을 안감 pseudostratified 상피 세포를 형성하는 신경 줄기 및 전구 세포의 다른 유형 (NSPC)에서 뇌를 개발하는 동안 생성됩니다. 같은 이온화 방사선으로 유전 독성 스트레스는 NSPC의 높은 감도와 관련된 뇌의 발달에 매우 해로운 영향이있다. 관련된 세포 및 분자 메커니즘의 해명은 손상된 조직에서 세포주기를 통해 NSPC 진행 상황을 확인하는 정확한 방법을 필요로 세포의 이러한 특정 유형의 DNA 손상 반응의 특성에 의존한다. 여기에 임신 한 쥐와 태아 뇌의 관상 섹션이 두 티미 딘 유사체의 추가 검출 에듀와 BrdU의 연속 복강 내 주사에 근거하는 방법을 보여줍니다. 에듀와 BrdU의 양쪽 S 단계에서 복제 세포의 DNA에 통합되어 두 개의 서로 다른 기술 (아 지드 또는에 의해 감지자신의 동시 검출을 용이하게 특정 항체, 각각). 에듀와 BrdU의 염색은 다음 지느러미 telencephalon의 표준 영역에서 심실 마진으로부터의 거리의 함수의 각 NSPC 핵에 대해 결정된다. 따라서이 이중 라벨 기술은 DNA 손상에 반응하여 세포주기 정지로 이어지는 세포주기 체크 포인트를 활성화 한 것과에서 세포주기의 진행을 통해 세포를 구별 할 수 있습니다. 실험의 예는 듀가 직후 조사 및 BrdU의 전에 주입 및 사출 다음 4 시간 이내에 실시하는 분석에서 제시된다. 이 프로토콜들이 조사되었다하는 세포주기의 위상의 함수 NSPC의 급성 DNA 손상 반응의 정확한 분석을 제공한다. 이 방법은 생체 조직의 세포주기 진행에 대한 특정 치료의 효과를 결정하기 위해 쉽게 transposable 많은 다른 시스템이다.

도 2에 설명 된 실험에서, EDU 단지 조사 후의 조사 및 BrdU의 1.5 시간 전에 투여 하였다. 세포의 네 가지 유형은 다음 에듀 또는 BrdU의 모두 또는 없음 중 하나의 결합에 따라 1 또는 4 시간의 사후 조사에서 준비 대뇌 피질의 조각 구별되었다 (그림 2A와 2B). 중요한 사실은, 듀 이용 BrdU의 내장 둘다 방사선 유도 아폽토시스 (데이터 미도시)의 레벨을 변화. 또한, 염색 방법은 EDU 및 BrdU의 만 검출이 S 상에있는 DNA 복제시 포함하지만도 조사 후 수리와 관련된 DNA 합성을 검출하는 감도가없는 수 있습니다. 사실, 나는) 에듀도 BrdU의 염색도는 G0 단계에서 postmitotic 뉴런 있으며 II) 에듀 (+) 및 / 또는 BrdU의 (의 수 +있는 대뇌 피질 판의 세포에서 1 시간 후 조사 (PI)에서 관찰되었다 ) unirr에 비해 조사에서 증가하지 않았다두뇌를 adiated. <p class="jove_conten...

티미 딘의 두 개의 아날로그의 행정, 에듀와 BrdU의는 임신 한 생쥐의 배아 마우스의 뇌에있는 신경 및 전구 세포의 세포주기 진행의 분석을 할 수 있습니다. 이 방법은 두뇌 개발 중에 전리 방사선 등의 유전 독성 스트레스의 효과를 확인하는 데 유용합니다.

Neurons of the cerebral cortex are generated during brain development from different types of neural stem and progenitor cells (NSPC), which form a ...

assessing-cell-cycle-progression-neural-stem-progenitor-cells-mouse

Research

연구

JoVE Journal

Neuroscience

신경과학

이 비디오 프로토콜 유동세포계측법 기술을 사용하여 물리적 (크기 및 내부 단위) 및 형광 특성을 바탕으로 신경 줄기 세포의 재생 소스 (NSCs)에서의 연결 전구 세포의 생성과 이후의 정화를위한 소설 방법을 보여줍니다.

Neuroblast 분석 : 유동세포계측법을 사용하여 차별화 신경 줄기 세포에서 자손의 연결 전구 세포의 생성과 강화에 대한 분석

우리는 성체 쥐 뇌의 뇌실하부(SVZ)에서 신경줄기세포(NSC)와 그 자손을 분리하기 위한 FACS(Fluorescent Activated Cell Sorting) 기반 방법을 보고합니다. FUCCI(Fluorescence Ubiquitination Cell Cycle Indicator) 형질전환 마우스에 적용되어 라이브 이미징을 통한 세포 주기 진행을 연구할 수 있습니다.

셀 성인 마우스 뇌실 영역에서 신경 줄기 및 전구 세포의 정렬과 세포주기 역학의 라이브 이미징

여기에서는 신경 줄기세포에 대한 세포 자율 및 비자율적, 틈새 의존적 효과를 별도로 분석할 수 있는 성인 심실-심실하 신경인성 틈새에서 신경 줄기 세포 및/또는 인접한 뇌실막 세포의 장기 유전자 변형을 위한 렌티바이러스 입자의 사용을 기반으로 하는 절차를 설명합니다.

신경의 분석을위한 성인 마우스 V-SVZ에서 세포의 안정적이고 효율적인 유전자 변형 줄기 세포 자율 및 비 자치 효과

뒤에 소프트웨어 기반 후 처리 시간 경과 비디오 현미경에 의해 신경 인구를 모니터링 하는 강력한 프로토콜 설명 되어 있습니다. 이 메서드는 선택 된 인구 라이브 이미징 실험 동안에 생물 학적 이벤트를 식별 하는 강력한 도구를 나타냅니다.

영상 모니터 세포 생물학과 여러 신경 인구의 계보 진행을 추적 하는 단일 셀 다음 라이브

Neurodevelopmental 처리와 같은 확산, 마이그레이션, neurite 결과 종종 정신병 질환에 불안정 합니다. 따라서, 우리가 현재의 빠르게 그리고 reproducibly 인간의 iPSC 파생 된 NPCs에서 이러한 neurodevelopmental 프로세스를 평가 하는 프로토콜. 이러한 프로토콜은 또한 NPC 개발에 관련 된 성장 인자와 치료의 효과의 평가 허용 한다.

인간의 신경 선구자 세포 (Npc)에서 Neurodevelopmental 고기의 신속한 감지

여기, 예비 중앙 운하 틈새 주택 내 인 성 신경 줄기 세포 (NSCs) 성인 마우스에서 최소한의 척수 상해 모델의 성능을 보여 줍니다. 우리는 활성화 및 마이그레이션 고 원시적인 NSCs 부상 다음의 척도를 neurosphere 분석 실험을 사용 하는 방법을 보여줍니다.

최소한의 척수 상해의 마우스 모델에서 내 인 성 신경 줄기 세포 활성화 평가 Neurosphere 분석 결과

이 프로토콜의 목표는 특정 국소 신경 회로의 화학 유전적 조작에 응하여 성인 신경 줄기/전구 세포의 행동을 분석하기 위한 접근법을 설명하는 것입니다.

성인 해마 신경 전구세포의 회로 특정 조절 을 시술

제시된 방법은 DNA 이중 가닥 나누기 (DSBs), 세포 주기 분포 및 세포 자멸의 정량 분석을 결합하여 DSB 유도 및 수리의 세포 주기 별 평가뿐만 아니라 수리 실패의 결과를 가능하게합니다.

유세포측정에 의한 유독성 응력 후 γH2AX 및 세포자멸의 세포 주기별 측정

우리는 매달려 드롭 방법을 사용하여 신경 세포로 마우스 배아 줄기 세포의 체외 분화에 대한 절차를 설명합니다. 또한 RT-qPCR, 면역형광, RNA-seq 및 유동 세포종을 통해 포괄적인 현상 분석을 수행합니다.

마우스 배아 줄기 세포에서 신경 전조및 뉴런의 분화 및 특성화

5-에티닐-2'-데옥시리딘(EdU) 및 인산히스톤 H3(pH3) 라벨링을 함유한 세포 주기 분석은 광범위한 최적화를 요구할 수 있는 다단계 절차이다. 여기서는 상이한 세포 주기 단계에서 세포를 구별하기 위해 이미지 분석 및 정량화를 포함한 이 절차에 대한 모든 단계를 설명하는 상세한 프로토콜을 제시합니다.

Drosophila 신경 줄기 세포에서 세포 주기 진행 분석을 위한 5-에티닐-2'-Deoxyuridine/인성-히스톤 H3 이중 라벨링 프로토콜

유도성 트랜스제닉 계보 추적 마우스 라인을 사용하여 줄기 세포 및 그의 자손을 형광단으로 영구적으로 표시하는 능력은 생체내에서 활성화, 증식, 이동 및/또는 분화의 공간적 및 시간적 분석을 가능하게 한다. 계보 추적은 혈통 헌신, 개입에 대한 반응 및 다능성에 대한 새로운 정보를 나타낼 수 있습니다.

성인 마우스 뇌에서 유도성 형광 표지 줄기 세포의 계보 추적

배우세요 EdU와 BrdU를 이용한 마우스 태아 뇌 신경 줄기세포의 세포주기 진행 분석법. 이 방법은 이온화 방사선과 같은 유전자 독성 스트레스가 뇌 발달에 미치는 영향을 평가하는 데 활용됩니다.

유전자 독성 스트레스 후 신경 줄기 및 마우스 두뇌 개발의 전구 세포의 사정 세포주기의 진행 상황

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