2013년 12월 19일
Electronic von Frey 측정은 염증 사건 전후에 지속적으로 가해지는 압력 자극에 대한 설치류의 기계적 인출 임계값의 변화를 빠르고 정확하게 측정할 수 있기 때문에 고전적인 von Frey 필라멘트에 대한 효과적이고 개선된 대안입니다.
이 절차의 전반적인 목표는 생쥐의 뒷발에서 기계적 압력에 대한 민감성 반응을 측정하지 않는 것입니다. 이것은 먼저 동물을 철망 바닥에 놓고 준비가 되었을 때 습관화하도록 함으로써 수행됩니다. 뒷발 아래쪽에 폴리프로필렌 팁을 바르고 압력을 점차 높입니다.
적절한 행동 반응이 주목되면 자극이 철회됩니다. 기준선 값이 수집되면 동물은 추가 테스트 전에 실험적 개입을 받습니다. 궁극적으로, 뒷발 철수 역치의 변화를 치료군 간에 비교하여 압력에 대한 촉각 민감도의 변화에 대한 특정 치료의 효과를 결정합니다.
통증은 염증의 주요 구성 요소입니다. 다양한 상황에서 통증을 측정하고 특성화하는 것이 중요합니다. 이 비교적 간단한 통증 평가 방법은 다양한 염증 모델에 적용할 수 있습니다.
제 연구실의 연구 기술자인 티아나 오브(Tiana ov), 학부생 시절 이 작업에 참여했던 매디슨 맥(Madison Mack), 아킬라 사익스(Akila Sykes)가 시연을 맡을 예정입니다. 현재 제 연구실의 학부생입니다. 뒷발에 쉽게 접근할 수 있도록 테스트 장치를 설정하는 것으로 시작하십시오.
메쉬 바닥 위에 개별 챔버를 놓습니다. 메쉬 바닥은 편안한 높이와 견고한 표면에 있어야 합니다. 그런 다음 전자 Von Frey 장치를 벤치탑에 놓습니다.
프로브와 케이블이 디스플레이 장치에 적절하게 연결되어 있는지 확인하고 설정 모드에서 기기를 켭니다. 판독값을 0으로 설정하고 제공된 테스트 분동을 Von Frey 프로브의 원뿔에 부드럽게 놓습니다. 판독값을 기록하고 테스트가 끝날 때 이 절차를 다시 반복하면 두 값 사이에 불일치가 있는 경우 장치를 다시 보정해야 할 수 있습니다.
테스트할 조직에 적합한 크기의 폴리프로필렌 팁을 선택합니다. 단단한 팁은 덜 민감하고 단단한 뒷발 조직에 잘 작동합니다. 팁을 프로브의 원뿔에 부드럽게 장착합니다.
그런 다음 설정 모드에서 작동 모드로 전환합니다. 프로브가 후퇴할 때 적용된 최대 압력이 표시됩니다. 뒷발 철수 임계값을 측정하기 위해 두 명의 조사관이 필요합니다.
하나는 장치를 작동하고 측정을 수행하는 것이고, 다른 하나는 편향을 줄이기 위해 이러한 측정을 기록하는 것입니다. 마취제 TER을 운영하는 연구자는 치료와 기록된 금단 임계값에 대해 맹검해야 합니다. 또한 측정 간의 일관성을 보장하기 위해 동일한 개인이 모든 기준선 및 인출 임계값을 기록해야 합니다.
치료 48시간 전에 첫 번째 기준선 측정 세트가 기록됩니다. 스탠드 아래에 흡수성 물질을 놓아 배설된 폐기물을 수거합니다. 팁을 장착하고 프로브를 영점 조정한 후 측정값을 기록하는 실험자는 마우스를 개별 챔버에 배치해야 합니다.
구멍이 뚫린 뚜껑으로 챔버를 덮고 그 위에 무거운 물체를 올려 놓습니다. 마우스가 탈출하는 것을 방지하려면 진행하기 전에 마우스가 챔버에 15분 동안 적응하도록 합니다. 일반적으로 이 기술을 처음 접하는 개인은 증가된 압력을 점진적으로 적용하는 데 어려움을 겪을 것이며 자신의 측정과 내부 일관성을 확립하는 데 어려움을 겪을 것이므로 재현 가능한 결과를 생성하기 위해서는 연습이 필수적입니다.
준비가 되면 두 손을 사용하여 프로브를 천천히 들어 올리고 왼쪽 또는 오른쪽 뒷발의 발판을 자극합니다. 통각 행동이 관찰될 때까지 압력을 점차적으로 높입니다. 이들은 뒷발 후퇴, 뒷발 핥기 또는 발 점프로 식별됩니다.
다른 조사자에게 관찰된 행동을 유발한 압력을 기록하도록 지시합니다. 측정하는 동안 챔버 바로 바깥에 음식 구개를 놓거나 측정하기 전에 가볍게 두드리는 것과 같은 약간의 소리를 내어 마우스가 가만히 있도록 하는 것이 유용합니다. 각 마우스가 한 번씩 테스트될 때까지 다음 마우스로 계속 진행하고 이 절차를 네 번 더 반복합니다.
5개의 기준선 값을 수집한 후 각 마우스의 평균을 구합니다. 24시간 후에 기준선 측정을 반복하고 이 값을 사용하여 다른 평균을 계산합니다. 모든 마우스가 일관된 기준선 반응을 보이도록 하려면 평균 기준선 인출 임계값이 3.5g 미만이거나 기준선 임계값이 2g 이상 다른 동물을 제외합니다.
마지막으로, 각 그룹의 평균 금단 기준선이 가능한 한 유사하도록 마우스를 별도의 치료 그룹에 할당합니다.여기에서 금단 역치는 뒷발, 독 투여, ROS raca 후에 측정되었습니다. 식염수 처리 대조군. 생쥐는 항상 기준선에 비해 거의 변화를 보이지 않았습니다.
처리된 마우스에서 테스트된 통각 반응은 최대 6시간까지 명확하게 유지되었습니다. 또한, 염증의 특징인 조직 부종은 독에서 분명했지만 식염수 처리된 뒷발에서는 나타나지 않았습니다. 독에 의한 촉각 민감도의 변화는 거의 1000배의 호중구 유입을 동반했습니다.
식염수 처리된 뒷발과 비교했을 때, 뒷발 조직의 발바닥 비만 세포는 대체로 온전하거나 경미한 탈과립을 보였다. 대조적으로, 교배된 암사슴에서는 15-20%의 비만 세포의 중등도 및 광범위한 탈과립화를 보였습니다. 이 기술은 뒷발 이외의 다양한 조직에서 기계적 또는 촉각 민감도를 평가하도록 조정할 수 있습니다.
따라서 이 기술은 염증과 통증의 다양한 설치류 모델에 통합될 수 있습니다.
이 기사는 전자식 von Frey 측정을 사용하여 생쥐의 뒷발에 기계적 압력에 대한 통각 반응을 측정하는 방법을 제시합니다. 이 기술을 통해 염증 개입 전후의 기계적 철수 역치 변화를 빠르고 정확하게 평가할 수 있습니다.
Assessing tactile sensitivity changes in rodent models provides critical early-phase data for analgesic target validation and mechanistic de-risking in pain therapeutics development. The electronic von Frey method enables rapid, quantitative measurement of mechanical withdrawal thresholds, supporting reproducible preclinical evaluation of inflammatory and neuropathic pain models. This approach enhances predictive confidence in target engagement and treatment efficacy before advancing compounds into later-stage studies.
The electronic von Frey method fits within the discovery continuum from target validation through lead identification to preclinical efficacy testing, particularly for pain-modulating compounds.