Name: 골육종 세포의 광 역학 치료의 세포 독성 효능 체외 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2014-03-18T14:30:00.000+00:00
Duration: 8 min 4 s
Description: 배우세요 광역학 치료법을 이용하여 골육종 세포에서 M-T-H-P-C 광감작제의 세포 내 흡수와 세포독성을 평가하는 방법을. WST-1 분석과 직접 세포 계수를 통해 치료 효능을 검증합니다.

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저자는 친절하게 자신의 도움말 및 기술 전문 지식에 대한 수산나 Gräfe과 아르노 WIEHE 특별 감사와 함께, 리포좀 mTHPC 제형으로 우리를 제공 biolitec 연구 GmbH의 (예나, 독일) 감사의 말씀을 전합니다. 우리는 또한 결과의 많은 부분을 생성 및 출판 (11)에 대해 coresponsible했다 케르 스틴 Reidy을, 감사의 말씀을 전합니다. 이 작품은 Schweizerischer Verein에 Balgrist, 취리히 대학, Krebsliga 취리히뿐만 아니라 월터 L.와 요한 울프 재단, 취리히, 스위스에서 부여 및 EuroNanoMed ERA-NET / SNF 스위스에서 부여로에서 교부금에 의해 지원되었다 국립 과학 재단 (National Science Foundation) 31NM30-1분의 131,004. 이 작품은 또한 HSM Kanton 취리히의 근골격계 종양학 (고도로 전문화 된 의학) 프로그램에 의해 지원되었다.

1. 각각의 로우 mTHPC의 통풍과 높은 전이성 HOS와 143B OS 세포주의 비교 <ol><li> DMEM, 햄 F12 및 비율 4.5:4.5:1에서 열 불 활성화 된 태아 혈청을 포함하는 세포 배양 매체를 준비합니다. 주 : PS mTHPC의 리포솜 제형은 1.5 ㎎ / ㎖ mTHPC의 최종 농도로 물에 용해시켰다. </li><li> 플레이트 0.2 × 10 6 HOS와 143B 세포 / 잘 6 - 웰 플레이트 (각 조건에서 삼중)과 세포가 하룻밤을 준수 할 수 있습니다. 참고 번호가 개별 세포주로 조정되어야한다. 80~90%의 포화 상태는 실험시에 최적이다. </li><li> 다음 날에, 다른 기간 (시간 의존적 흡수)에 대한 mTHPC의 고정 농도로 세포를 배양, 또는 고정 된 시간주기 (농도 의존적​​ 흡수) 중에 mTHPC의 농도 증가. </li><li> 특정 시간 P에 mTHPC와 세포를 품어oints 또는 mTHPC의 농도. 주 : 본 연구에서는 HOS와 143B 세포주 모두가 0.6 ㎍ / ㎖의 mTHPC와 함께 배양 0, 2.5, 5 또는 10 시간, 5 시간 동안 0, 0.6, 2.5, 10 ㎍ / ㎖의 mTHPC와. 적용 기간 및 투여 량은 사용되는 세포주에 따라 다를 수 있습니다. </li><li> 항상 세포의 직사광선 노출을 방지하기 위해 어둠 속에서 또는 흐리게 조명 조건에서 작동해야합니다. </li><li> 지정된 조건에서 세포를 배양 한 후, 배지를 흡인하고, PBS로 세포를 세 번 씻는다. 이어서, 0.5 ml의 트립신 / EDTA로 세포를 분리하고 세포를 센다. </li><li> 박리 한 후, 5 분 동안 400 XG에서 세포를 원심 분리하여 배지를 흡인하고 200,000 세포 / ml의 최종 농도로 PBS에 세포를 재현 탁. </li><li> 얻어진 세포 현탁액 피펫 100 μL를 96 웰 플레이트 및 형광 분광 광도계에서 이러한 세포의 형광을 측정한다 (즉, 20,000 세포). 설정mTHPC 형광 측정의는 다음과 같습니다 방출의 여기 및 652 nm의 417 nm의. </li><li> 셀당 내면화 mTHPC의 양을 계산은 다음과 같이 세포 수와 세포 부피에 대한 상대적 형광 단위 (RFU)를 정상화하기 위해 : </li><li> 0-4 ㎍ / ㎖ (사용 세중의 측정)에서 PBS에 mTHPC의 서로 다른 농도를 사용하여 표준 곡선을 준비합니다. 96 - 웰 플레이트에 각 희석 100 μl를 피펫 단계 1.6에 설명 된 설정을 사용하여 우물의 형광을 측정합니다. </li><li> 우물에서 (㎍ / ml 중) mTHPC의 농도를 제공 mTHPC의 선형 표준 곡선의 기울기가 (20,000 세포 얻은) RFU를 나눈다. </li><li> (세포 현탁액 100 μl를 나타내는 μg에서) 하나의 잘 mTHPC의 총량을하고 20,000 세포의 양이 값을 나누는 10이 mTHPC 농도를 나눈다. </li><li> X (4 / 3 개의 x π) 구에 대한 공식으로 볼륨을 계산R 3. 현미경 하에서 20 트립신 세포의 직경을 측정하고, (2)에 의해이 값을 나눔으로써 반경 (r)을 구하는. </li><li> 마지막으로, 10 배양 (농도 의존적​​ 흡수)의 시간 또는 100 %로 설정 한 10 ㎍ / ㎖의 mTHPC (시간 의존 흡수), 치료 후 HOS 세포를 얻은 것과 모든 값을 정상화. </li></ol> 2. PS 체외의 광독성 측정 <ol><li> 96 - 웰 플레이트 (mTHPC의 각 농도에 대한 삼중 사용)에 3,000 세포 / 웰 씨와 그 하룻밤을 준수 할 수 있습니다. 마찬가지로 추가로 96 - 웰 플레이트를 준비하고 아래에 설명 된대로 세포를 치료하지만 위상 콘트라스트 이미지 따로 넣어. 주 : 숫자는 각각의 세포주에 따라 조정되어야한다. 실험시의 50 ~ 60 %의 컨 플루가 이상적이다. <ol><li> mTHPC 농도의 각 셀의 해당 어두운 독성 컨트롤을 추가하기 위해 염두에 두십시오.SE는 mTHPC의 선택 농도의 부재 또는 존재 배양 할 세포하지만 조명되지 않습니다. </li></ol></li><li> 다음 날, 세포주에 따라 mTHPC (0, 0.0001, 0.001, 0.01, 0.03, 0.075, 0.15, 0.3, 0.6, 1.25, 2.5, 5 및 10 ㎍ / ㎖)을 다양한 농도로 세포를 배양하고 5 시간 동안 어둠에 보관하십시오. <ol><li> 1.3.2 절을 참조하십시오 주 : 배양 시간을 조명 세포주에 사용 된 PS에 따라 달라집니다 전에, 따라서 별도의 실험에서 서로 다른 농도와 서로 다른 시간의 포인트를 테스트하는 것이 좋습니다. </li></ol></li><li> 지정된 시간 동안 배양 한 다음, PBS로 두 번 세포를 씻어 mTHPC없이 새로운 신선한 매체를 추가 할 수 있습니다. </li><li> mTHPC 흡수 스펙트럼에 대한 구체적인 652 nm의 다이오드 레이저 (도 1 참조)와 함께 세포를 밝히는. <ol><li> 13.5 cm의 dista의 높이에 21.88 ㎿가 / cm 2 전원에 레이저를 설정5 J / cm 2의 에너지 량을 얻기 위하여 세포 NCE. 230 초 동안 세포를 조명. (함께하고 mTHPC없이) 어두운 독성 제어 세포를 조명하지 마십시오. 참고 : 항상 PS의 여기에 사용되는 레이저 빛으로부터 눈을 보호하는 안경을 착용. </li></ol></li><li> 조명 한 후, 24 시간 동안 37 º C에서 어둠 속에서 세포를 유지. 그 후, 수용성 테트라 졸 (WST-1) 시약 (매체의 10 μl/100 μL)를 추가합니다. </li><li> 세 시간 WST-1 시약을 첨가 후, 415 nm에서 96 - 웰 플레이트의 각각의 웰의 흡광도를 측정한다. </li><li> 생존 세포의 비율을 계산하기 위해서, (즉 mTHPC없이 mTHPC와 nonilluminated없이 조명) 100 %의 각 조건에 대해 mTHPC 비 처리 된 세포에 대해 얻어진 값의 평균치를 설정한다. </li></ol> 3. 셀 계산하여 세포 수의 추정 <ol><li> 종자 20,000 세포 / 우리24 웰 플레이트에 LL하고 하룻밤을 준수 할 수 있습니다. </li><li> mTHPC과 5 시간 (0.001, 0.003, 0.15, 0.6, 1.25 ㎍ / ml)에 대한 세포를 품어 전술 한 바와 같이 그들을 조명. </li><li> 매체를 수집, 5 분 400 XG에서 원심 분리하여 PBS로 한 번 세포를 씻어 그들을를 Trypsinize 그들을 수집합니다. </li><li> 원심 분리 후, 배지를 흡인하고, 신선한 배지 200 μL에 세포를 재현 탁. </li><li> 네우 바우 실에서 세포를 계산합니다. </li></ol>

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저자는 더 경쟁 재정적 이익 또는 이해 관계의 충돌 선언하지 않습니다.

PDT에 응답하여 최적의 세포 독성을 달성하기 위해, 오른쪽 레이저 광 설정과 배양 시간을 선택하는 것이 중요하다. 여기에 설명 된 절차는 PS의 이해를 확인하고 체외에서 PDT 유도 된 세포 독성을 정량화하기 위해 일관되고 효율적입니다. PS mTHPC의 특정 흡수 파장을 사용하여, 셀룰러 PS 흡수는 직접적으로 측정 될 수 있고, PS는 세포 독성 활성 산소 종을 생성하기 위해 활성화 될 수있다. 이 시험 관내 셋업을 사용하여, 예컨대 PS 농도, 약물 등 간격과 레이저 광 강도 다양한 파라미터 간단 PS의 특성으로 조절 될 수 있고, 세포주가 사용. 세포 수를 함께 WST-1 분석 (신진 대사 활동을 모니터링)으로 세포의 생존에 대한 좋은 평가를주는, 살아 부착 된 세포 밖으로 직접 읽기를 제공합니다. 그러나, 제시된 방법은 세포 독성, 즉 &quot;제 히트&quot;를 모델링 할 수있다즉시 PS의 활성화 이후의 반응 산...

골육종 (OS)의 예술 치료의 오늘의 상태는 기본 뼈 종양, 신 보조 항암 화학 요법 및 수술의 조합을 포함한다. 이 치료 요법은 화학 요법의 사용 전에 약 20 % 내지 국소 질환 환자의 생존율 증가를 밝혀, 현재까지 04 세 사이 60~70%. 그러나 지난 수십 년 동안, 현지 질환 OS 환자의 전체 생존 기간은 5 4 plateaued했다. 또한, 이러한 환자 30 ~ 40 %의 진단 후 3 년 이내에 재발 및 전이성 질환을 가진 환자는 20 ~ 30 % 4의 생존율, 6, 7을 계속합니다. 이들 환자의 결과를 개선하기 위해, 새로운 치료 전략을 개발해야한다. 광 역학 요법 (PDT), 오히려 신규 항암 치료는 photosensi의 여기를 위해 특정 파장의 광을 사용혈류로의 주입 후 종양 세포에 축적 tizer (PS). PS의 레이저 광을 여기에는 종양 세포 및 세포 죽음에서 세포 독성 반응을 유도하는 산소의 존재 하에서 산소 라디칼을 생성한다. PDT는 종양 경색으로 이어지는, 혈관 수축 및 종양 미세 혈관의 혈전 형성을 일으키는 원인이되고, 종양 내부 결과적으로 지역의 저산소증과 산소 결핍이 기본 메커니즘 외에 두 개의 추가 PDT는 생물 학적 과정이 감소 된 종양의 성장에 기여 유발. 마지막으로, PDT 부상 죽어가는 종양 세포는 로컬 면역 반응, PDT의 다소 독특한 기능을 트리거합니다. 이것은 보체 시스템 및 수지상 세포 8 항원 제시의 활성화를 수반한다. 따라서, 조건은 종양 특정 면역에 이르는, 림프 세포의 후속 활성화와 종양 항원의 프레 젠 테이션을위한 생성됩니다. 지금까지, PDT 연조직 종양 및 hyperpl 여러 종류의 치료를 위해 사용되었다아시아의, 같은 광선 각화증, 바렛 식도, 기관지 종양, 방광 암, 기저 세포 암, 머리와 목 암 2의 완화 치료로. 치료는 단지 적은 부작용과 로컬 대규모 괴사를 유도하는 것으로 알려져, 따라서 선택적으로 종양 조직을 근절 할 수있는 잠재력을 가지고있다. 이러한 장점에도 불구하고, PDT의 응용 프로그램은 화학 요법 약물의 투여보다 기술적으로 더 까다로운 남아있다. 최대 효능, PS 농도, 노광 시간 및 전체 광 에너지 전달을 달성하기 위해 최적화 될 필요가있다. 이는 생체 내 실험에서 수행 될 수 있지만, 인해 최적화 될 필요가 파라미터의 상대적 다수, 그것은 초기 시험 관내에서 최적 조건을 결정하는 것이 더 효율적이다. 후술하는 실험에서는, PS 5,10,15,20 - 테트라 키스 (메타 - 하이드 록시 페닐) CHL를 사용하여 PDT의 효능을 시험 관내 시험오린은 mTHPC (그림 1A)를 단축. mTHPC는 현재 두 경부암의 완화 치료를위한 병원에서 사용되는 의약품 Foscan있는 활성 물질이다. 그것은 낮은 농도에서 이미 대규모 세포의 손상을 유도하는 가장 유력한 PS 중 하나이며, 이는 조직 침투 (9, 10)의 측면에서 다른 PS 우수한 것으로 입증되었다. 의 광 흡수 스펙트럼 (그림 1B)는 각각 PS를 축적 조직 현지화 및 PDT 유도에 사용되는 두 개의 눈에 띄는 봉우리, 417 nm에서 한 652 nm에서 두 번째를 보여줍니다. 현재 mTHPC의 리포솜 제형은 개발 중입니다. 여기서, 우리는이 리포솜 제형의 흡수를 정량화하고,이 OS 인간 세포주에서 PDT를 수행하는 절차를 설명; 낮은 전이성 HOS 및 높은 전이성 143B 세포. 여기에 제시된 데이터 중 일부는 11 이전에보고 된 바있다. 일여기에 설명 된 전자의 방법은 PDT의 효과에 전이성 표현형의 효과를 공부하기 위해 수 있습니다. orthotopically 면역 결핍 SCID 마우스의 뒷다리에 주입 143B 세포는 intratibial을 전이 차 종양, 밀접하게 인간을 전이 질환을 흉내 낸 모델을 일으킬 수 있습니다. 따라서, 제안 된 시험 관내 실험은 최적 PDT 설정하기 생체 내 실험에 사용되는 평가할에게도 적합하다.

<table><tbody><tr><td>DMEM</td><td>PAA GmbH, 프라이부르크, 독일</td><td>E15-883</td><td></td></tr><tr><td>HAM F12</td><td>PAA GmbH, 프라이부르크, 독일</td><td>E15-817</td><td></td></tr><tr><td>열 비활성화 태아 송아지 혈청</td><td>GIBCO, Basel, Switzerland</td><td>10500-064</td><td></td></tr><tr><td>mTHPC</td><td>biolitec Research GmbH, 예나, 독일</td><td></td><td>이 리포솜 제형은 R&에서 유래했습니다. D 현재 카탈로그 번호는 없습니다. 스톡: 1.5 mg/ml; 디팔미토일포스파티딜콜린(DPPC)과 디팔미토일포스파티딜글리세롤(DPPG, >99% 순도)의 9:1 혼합물로 제공됨</td></tr><tr><td>Spectramax Gemini XS 플레이트 리더</td><td>Molecular Devices, Sunnyvale, CA</td><td>ID# 861</td><td></td></tr><tr><td>Microscope Zeiss Observer.Z1</td><td>Axio Observer, Axio Vision Release 4.6.3 SP1, Jena Germany</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Ceralas PDT 652 nm Laser</td><td>biolitec AG, Jena, Germany</td><td>LD652nm2W400u</td><td></td></tr><tr><td>수용성 테트라졸륨(WST) 시약</td><td>Roche Diagnostics AG, Rotkreuz, 스위스</td><td>1644807</td><td></td></tr></tbody></table>

골육종 세포의 광 역학 치료의 세포 독성 효능<em&gt; 체외</em

Cytotoxic Efficacy of Photodynamic Therapy in Osteosarcoma Cells In Vitro

최근, 적은 전신 부작용과 암에 대한보다 효과적인 치료법을 찾는데 어려움이있어왔다. 따라서 광 역학 치료보다 종양 선택적 치료에 대한 새로운 접근 방식입니다. 산소의 존재 하에서 특정 파장의 빛을 활성화시에, 세포 독성 반응을 유도 한 산소 라디칼을 생성하고, 비 독성 감광제 (PS)을 이용한다 광 역학 치료 (PDT). FDA에 의해 거의 20 년 전 승인에도 불구하고, PDT가 요즘에만 암 종류 (피부, 방광) 및 nononcological 질환 (건선, 광선 각화증) 2 제한된 수를 치료하는 데 사용됩니다. PDT의 사용의 중요한 이점은 전신적인 부작용을 방지 지방 치료를 수행 할 수있는 능력이다. 또한, (신경 또는 혈관 주위 예) 민감한 부위에서의 종양의 치료를 허용한다. 여기서, intraoperatPDT의 필자의 응용 프로그램은 골육종 (OS)에서 기본 종양 위성을 대상으로 뼈의 종양이 외과 종양 절제술 후 조직을 둘러싼 종양에 남아 간주됩니다. 치료 재발의 수를 감소시 및 (수술후) 전이에 대한 위험을 감소시키는 것을 목표로한다. 본 연구에서 우리는 잘 확립 intratibial OS 마우스 모델에서 인간의 질병을 재현하기 위해 사용되는 널리 사용되는 OS 세포주의 효과적인 치료를위한 최적의 PDT 설정을 확립하는 체외 PDT 절차에서 제시한다. PS mTHPC의 흡수 분광 광도계 및 광독성는 WST-1 분석으로 살아남은 세포의 계산에 의해 평가 된 세포의 죽음을 유도하기 위해 652 nm에서 mTHPC의 레이저 광 자극으로 유발 된으로 조사 하였다. 기존 기술은 동물 모델에서 미래 연구를위한 최적의 PDT 설정을 정의 할 수있게. 그들은 PDT의 효과의 평가를위한 쉽고 빠른 도구입니다 <em&gt; 체외에서 생체 내에서 응용 프로그램 전.

여기에보고 된 기술로, 우리는 인간의 OS 세포에서 mTHPC 기반 PDT를 조사 하였다. 먼저, mTHPC의 시간 및 농도 의존적​​ 흡수는 낮은 전이성 HOS 및 고도로 전이성 143B OS 세포주에서 조사 하였다. mTHPC 흡수는 형광 분광 광도계 mTHPC의 형광 (Reidy 등. (11)로부터 허가를 재현 그림 2) 측정에 의해 평가 될 수있다. 그림 2A는 시간 의존적으로 mTHPC의 이해를 보여줍니다. 세포 현탁액의 형광 강도가.도 2B는 5 시간 배양 한 후 HOS 및 143B 세포에서 농도 의존적 mTHPC 흡수를 나타낸다 mTHPC의 세포 내 농도를 나타낸다. 전이성이 높은 세포주 143B에서 흡수가 낮은 전이성 부모 HOS 세포주에서보다 높은 경향. 어둡고 143B 세포에서의 광독성 mTHPC는 셀 metaboli을 결정함으로써 ...

여기에보고 된 프로토콜은 수 광역 세포주의 치료 (PDT) 및 동물 모델에서 치료를 적용하기 전에 PDT 설정의 최적화의 효과의 평가.

In recent years, there has been the difficulty in finding more effective therapies against cancer with less systemic side effects. Therefore Photodynamic ...

다음 실험의 전반적인 목표는 골육종 세포에서 광역학 요법의 세포독성 효능을 보여주는 것입니다. 이는 먼저 골육종 세포에 의한 광감작제 M-T-H-P-C의 세포 내 흡수를 측정함으로써 달성됩니다. 두 번째 단계에서는 레이저 광을 세포에 적용하여 M-T-H-P-C를 활성화하고 세포독성 산소 라디칼을 생성합니다.마지막으로, 세포 대사 및 세포 수는 수용성 테트라 발연황 1 또는 WST 1 분석법으로 측정됩니다. 궁극적으로, WST one assay와 직접 세포 계수는 골육종 세포에 대한 광역학 요법의 세포 독성을 측정하는 데 사용할 수 있습니다. 이 기술의 의미는 시험관 내에서 광역학 치료 효능을 측정할 수 있고 현재 환자에게 사용되는 기술과 유사하기 때문에 골육종 치료로 확장됩니다.골육종 세포주 간의 M-T-H-P-C 흡수를 비교하기 위해 먼저 웰당 6번째 Hoss 및 143개의 B 세포에 0.2배 10을 도금합니다. 6개의 우물 판에서 3 배로 세포가 80에서 90%co 유창성에 밤새 고착하게 하고, 그 후에 그 다음날에, 세포에 의하여 광감작제의 시간 의존하는 흡수를 평가하기 위하여 암흑 속에서 다른 기간 동안 M-T-H-P-C의 조정 농도로 세포를 배양하십시오. 배양 후 배지를 흡인하고 PBS로 세포를 세 번 세척한 다음 0.5ml의 트립신 EDTA로 세포를 분리하고 계수합니다.다음으로, 400배 G와 실온에서 5분 동안 셀을 스핀다운합니다. 배지를 흡입하고 PBS에서 펠릿을 밀리리터당 5번째 셀의 2배 10의 최종 밀도로 재현탁합니다. 세포 현탁액의 100 마이크로 리터를 96의 각 웰에 피펫으로 넣는다.웰 플레이트를 만들고 417 나노미터 여기 및 652 나노미터 방출로 설정된 형광 분광 광도계에서 세포의 형광을 측정합니다. 그런 다음 100 마이크로 리터의 0에서 4 밀리리터 농도의 M-T-H-P-C를 3 배로 도금하여 표준 곡선을 준비합니다. 96 웰 플레이트에서 이전에 측정된 플레이트에서 웰을 포함하는 각 셀의 상대 형광 단위를 계산하기 위한 표준 곡선을 생성하기 위해 방금 설명한 바와 같이 형광을 측정합니다.각 PHOTOSENSITIZER 농도에 대한 어두운 독성 제어 셀을 포함하여 96 웰 플레이트에서 각 M-T-H-P-C 농도당 3000 세포의 광독성을 측정하기 위해 웰 당 3000 세포. 세포가 하룻밤 사이에 접착되도록 다음 날 50-60% Co 유창성을 유지합니다. 배양 후 5시간 동안 어둠 속에서 다양한 M-T-H-P-C 농도의 세포를 배양합니다.배지를 흡인하고 PBS로 세포를 두 번 세척하고 M-T-H-P-C 없이 새로운 배지를 추가한 다음 M-T-H-P-C 흡수 스펙트럼에 특이적인 배지를 추가하고 적절한 눈 보호구를 착용합니다. 652나노미터 다이오드 레이저를 13.5cm 높이에서 제곱센티미터당 21.88밀리와트 출력으로 설정합니다. 평방 센티미터당 5줄의 에너지 복용량을 얻기 위한 세포로부터의 거리.그런 다음 조명 후 230초 동안 어두운 독성 제어 셀을 제외한 셀을 조명합니다. 세포를 섭씨 37도의 어두운 곳에 24시간 동안 보관하십시오. 그 후, 10 마이크로 리터의 wst를 첨가하고, 1 개의 시약을 첨가 한 후 3 시간 후에 매체의 100 마이크로 리터 당 하나의 시약을 첨가하고, 415 나노 미터에서 개별 웰의 흡광도를 측정한다.마지막으로, WST one 분석 외에 남아 있는 세포의 수를 계산합니다. 세포의 직접 계수는 세포 독성을 측정하는 두 번째 방법입니다. 생존 가능한 세포의 비율을 계산하려면 2 24 웰 플레이트에 웰당 10에서 4번째 셀을 두 번 파종하고 밤새 접착시킵니다.다음날, M-T-H-P-C로 어둠 속에서 5시간 동안 세포를 배양하고 방금 시연한 것처럼 조명을 비춥니다. 24 시간 후에 어두운 통제 세포를 어두운 곳에 두고, 상등액을 모으고, PBS로 세포를 한 번 세척하고 트립신은 마지막으로 세포를 아래로 회전시키고 세기를 위한 신선한 매체의 200 마이크로리터에 있는 펠릿을 refuset 눈으로 본다. 이 그래프에 표시된 결과는 상단 패널에서 M-T-H-P-C의 세포 내 수준을 나타내는 세포 현탁액의 형광 강도와 함께 시간 의존적 방식으로 M-T-H-P-C의 흡수를 보여줍니다.아래쪽 패널에서. 선량에 따른 M-T-H-P-C 흡수는 형광 분광 광도계로 M-T-H-P-C의 형광을 측정하여 평가할 수 있습니다. 이 그래프는 M-T-H-P-C의 세포 내 수준을 나타내는 세포 현탁액의 형광 강도와 함께 시간 의존적 방식으로 M-T-H-P-C의 고정 농도의 흡수를 보여줍니다.이 그래프에서는 5시간 배양 후 Haass 및 143 B 세포의 용량 의존적 M-T-H-P-C 흡수가 입증되었습니다. 높은 전이성 세포주 143 B에서의 흡수는 낮은 전이성 부모 숙주 세포주보다 유의하게 높았다. 골육종 세포의 용량 의존적 암흑 독성이 입증되었습니다.143 B 세포를 상이한 M-T-H-P-C 용량으로 처리하고, 처리되지 않은 세포와 비교하고, WST 1 분석법으로 측정한 대사 활성 및 세포 수의 용량 의존적 감소를 관찰하였다. 세포 생존율 감소는 밀리리터당 2.5마이크로그램 이상의 M-T-H-P-C 농도에서 확인되었습니다. 아래 그래프에는 M-T-H-P-C의 용량 의존적 독성이 표시되어 있습니다.세포는 상이한 M-T-H-P-C 투여량과 이어서 제곱센티미터당 5줄로 조명으로 처리되었습니다. 세포 대사 활동의 결과적 감소와 세포 수의 감소가 관찰되었습니다. 이 기술의 개발은 암 생물학 분야의 연구자들이 이 방법을 골육종의 생체 내 모델 및 기타 전임상 조사에 적용할 수 있는 길을 열었습니다.

cytotoxic-efficacy-photodynamic-therapy-osteosarcoma-cells

Research

연구

JoVE Journal

Medicine

의학

광역학 요법(PDT)은 폐암 치료를 위한 비침습적 비수술적 방법입니다. 광감작제는 종양 조직에 선택적으로 축적되어 산소와 적절한 파장의 빛이 있는 상태에서 종양 세포를 사멸시킵니다. 이 프로토콜 비디오에서는 PDT 기반 방법을 사용하여 폐암 세포에서 잠재적인 광감작제의 광독성 가능성을 평가합니다.

체외 광독성 분석법: 폐암 세포에서 광감작제의 광독성 가능성을 평가하기 위한 PDT 기반 방법

광역학 요법(PDT)은 폐암 치료를 위한 비침습적 비수술적 방법입니다. 광감작제는 종양 조직에 선택적으로 축적되어 산소와 적절한 파장의 빛이 있는 상태에서 종양 세포를 사멸시킵니다. 이 비디오는 종양이 있는 마우스에서 나노입자를 함유한 광감작제를 사용하여 광감작제의 광독성 가능성을 측정하기 위한 생체 내 항종양 효능 분석에 대해 설명합니다.

PDT의 생체 내 항종양 효능 분석: 종양 보유 마우스에서 광감작제의 광독성 가능성을 측정하는 기술

여기에서는 전이의 in vivo chicken embryo chorio-allantoic membrane(CAM) 모델과 결합된 종양 세포 대사의 실시간 모니터링을 사용하여 종양 세포를 DNA를 손상시키는 화학 요법에 감작하는 능력에 대해 새로운 항암 표적/제제를 평가하는 데 사용됩니다.

암 약물 과민 반응의 효과를 평가<em&gt; 체외</em&gt; 및<em&gt; 생체</em

광역학 요법(PDT)은 폐암 치료를 위한 대안입니다. PDT의 치료 효과를 높이기 위해 화학요법과 결합된 폐암 표적 나노입자를 개발했습니다. 제조된 나노입자를 사용한 PDT의 시험관 내 및 생체 내 항암 효능을 모두 평가했습니다.

폐암 표적 나노 입자와 광 역학 치료의 항암 효능

골 종양 진행; 지원의 프로그래밍 이끌어 낸다 암 파생 extracellular 소포 (EVs)의 직접 분사 그러나, 셀 중재이 효과가 명확 하지 않습니다. 여기, 우리 EV 교육 MSCs 전이에 대 한 중요 한 역할을 드러내는 EV 중재 종양 mesenchymal 줄기 세포 (MSC) 상호 작용에서 vivo에서, 조사 하는 단계별 프로토콜을 설명 합니다.

종양 및 중간 엽 줄기 세포 사이의 세포 외 기 중재 통신을 정의 하는 다리의 전 임상 마우스 모델

Photodynamic 치료 (PDT)는 것 적용된 photosensitizer (PS) 뒤에 보이는 빛 photoactivation apoptosis 유도 보육 관련 의료 절차입니다. 우리는 생체 외에서 PDT 프로토콜 PS 인큐베이션 및 가벼운 치료 매개 변수는 차이 연구 하는 데 사용할 수 있습니다 태평양 표준시를 시뮬레이션 하도록 설계 되었습니다 제시.

Photodynamic 치료 체 외에서 접근

본 프로토콜은 동위원소 골육종 및 폐 전이 병변을 지닌 마우스 모델을 생성하기 위해 경막내 골육종 세포 주사를 기술한다.

경골 내 골육종 세포 주사 동위원소 골육종 및 폐 전이 마우스 모델 생성

여기에서는 2차원 HeLa 세포 배양 및 베르테포르핀을 감광제로 사용하여 체외 광역학 치료(PDT) 분석을 성공적으로 수행할 수 있는 새롭고 간단하며 저렴한 장치에 대해 설명합니다.

2D 세포 배양 모델에서 Verteporfin 세포 독성을 향상시키기 위한 자체 제작 및 발광 다이오드 기반 광역학 치료 장치

이 프로토콜은 이러한 화합물의 전임상 스크리닝에 사용할 수 있는 광전환 가능한 항암 펩타이드의 평가를 위해 채택된 일련의 실험을 제시합니다. 여기에는 2D 및 3D 세포 배양에서의 세포 독성 평가, 생체 외 (모델 조직) 광이성질화 효율 평가 및 생체 내 효능이 포함됩니다.

광제어 생물학적 활성 화합물의 시험관 내 및 생체 내 평가 - 암 광약리학을 위한 잠재적 약물 후보

본 프로토콜은 인간 골육종 조직을 이용하여 환자 유래 이종이식(PDX) 마우스 모델을 확립하는 방법을 설명한다.

인간 골육종 조직을 이용한 환자 유래 이종이식 마우스 모델 구축

배우세요 광역학 치료법을 이용하여 골육종 세포에서 M-T-H-P-C 광감작제의 세포 내 흡수와 세포독성을 평가하는 방법을. WST-1 분석과 직접 세포 계수를 통해 치료 효능을 검증합니다.

골육종 세포의 광 역학 치료의 세포 독성 효능

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