열 및 기계를 침해 수용성 모달리티를 사용하여 마우스의 모르핀에 의한 통각 과민과 진통 공차의 평가

다음 실험의 전반적인 목표는 마우스에서 오피오이드 유도 통각과민과 진통제 내성의 발달을 관찰하는 것입니다. 이는 두 번째 단계로 0일차에 시간 경과에 걸쳐 모르핀 투여 후 순진한 마우스의 열적 및 기계적 통각 반응을 측정함으로써 달성됩니다. 통각 역치는 7일째에 모르핀을 투여하기 전에 매일 측정합니다.

모르핀의 진통 효과는 진통제 내성의 발달을 밝히기 위해 다시 한 번 시간 경과에 걸쳐 측정됩니다. 통증 민감도의 증가와 진통제 내성의 발달을 보여주는 결과가 얻어졌습니다. 반복적인 모르핀 투여 후.

이 방법은 다중 마우스에서 통증 과민성 및 진통 내성의 발달에 대한 통찰력을 제공 할 수 있습니다. 만성 아편 치료 후에는 다른 아편제 또는 유전자 변형 마우스에도 적용할 수 있습니다. 시연은 제 연구실의 대학원생이 맡을 것입니다.스트레스로 인한 진통제를 최소화하기 위해 쥐를 매일 5분씩 다루고 자유롭게 구속구에 들어갈 때까지 습관화시킵니다.

익숙해지면 온도 조절기를 섭씨 48도로 설정하여 꼬리 침수 테스트를 시작합니다. 마우스를 고정기에 부드럽게 삽입합니다. 적절하게 제지되면 꼬리의 튀어나온 2/3 끝을 수조에 담그고 크로노미터를 시작합니다.

통각 반응과 통각 반응을 구별하는 것이 이 절차의 핵심 요소입니다. 적절한 중재와 관행은 성공에 매우 중요합니다. 동물의 움직임을 모니터링하고 크로노미터를 멈춥니다.

마우스가 뜨거운 물에서 꼬리를 빼자마자 인출 대기 시간을 기록하십시오. 쥐를 우리로 되돌려 놓고 시리즈가 끝날 때까지 동일한 순서를 유지하면서 다음 동물을 테스트합니다. 통각 반응 측정을 두 번 더 반복합니다.

각 마우스에 대한 통각 반응 잠복시간(초)은 세 번의 연속적인 결정에 대한 평균값으로 결정됩니다. 꼬리 압력 테스트를 위해 먼저 마우스를 구속기에 부드럽게 삽입하고 꼬리를 항문 JMeter의 원뿔 끝 아래에 놓습니다. 제자리에 고정되면 풋 스위치를 눌러 꼬리의 근위 부분에 균일하게 증가하는 압력을 가합니다.

통각 반응의 첫 징후가 나타나면 팁을 빼십시오. 통각 반응에는 몸부림, 삐걱 거리는 소리 또는 꼬리 철회가 포함될 수 있습니다. 통각 반응을 유도하는 현재 힘을 그램 단위로 기록합니다.

32번째 간격으로 동일한 마우스의 꼬리의 중간 및 원위 부분에 대해 이 측정을 반복하고 동물을 집 케이지로 되돌려 모든 마우스가 테스트될 때까지 이 단계를 반복합니다. 먼저, 비교 가능한 평균 통각 수용 값을 가진 두 그룹의 동물을 정의합니다. 다음으로 각 동물의 체중을 측정하고 기록합니다.

식염수와 모르핀기가 확인되면 피하 투여를 위해 생리식염수에 모르핀 용액을 준비합니다. 테일 침수 테스트와 테일 압력 테스트 모두에서 통각 반응 잠복기를 측정하고 이를 각 그룹에 대해 시간 0.0으로 기록합니다. 다음으로, 그룹에 따라 각 동물에게 모르핀 또는 식염수를 주사합니다.

30분 후, 각 동물의 통각 반응을 기록하기 시작합니다. 생쥐는 이 초기 시점에서 유해한 자극에 반응할 가능성이 낮으므로 컷오프 값에 세심한 주의를 기울이십시오. 통각 반응이 없는 경우, 조직 손상을 방지하기 위해 25초 컷오프가 사용되어 동일한 검사 순서를 유지합니다.

만성 모르핀 치료를 위해 주사 후 3.5시간까지 30분마다 통각 수용성 측정을 반복합니다. 앞에서 설명한 바와 같이 TIT 및 TPT에서 동물의 통각 반응을 측정하여 1일차 값을 얻습니다. 새로운 모르핀 용액을 준비합니다.

그룹 할당에 따라 모르핀 또는 식염수 주사를 제공하고 동물이 다음 날까지 휴식을 취할 수 있도록 합니다. 다음 날, 두 번째 주사를 투여하기 전에 TIT 및 TPT에서 통각 반응을 측정합니다. 6일 동안 매일 이 단계를 반복합니다.

7일째에는 모르핀 유도 진통제를 평가합니다. 테일 침수 테스트에서 앞서 입증된 시간 경과 패러다임에 따르면, 모르핀의 최대 진통 효과는 30분 후에 도달했습니다. 그러나 테일 압력 테스트에서는 식염수 주입 대조군에 비해 60분 후에 최대 효과에 도달했습니다.

이러한 결과는 7일간의 치료 기간 동안 매일 모르핀 주사를 투여하면 열적 및 기계적 기초 통각 수치가 유의하고 점진적으로 저하되었음을 보여줍니다. 만성 치료 후, 모르핀 투여된 마우스의 기초 통각(內正) 수용 수치는 식염수 주입 대조군 마우스보다 현저히 낮았다. 급성 모르핀 투여 후, 만성 모르핀 투여군의 통각 반응은 유의하게 증가하였으나, 식염수 주입 대조군의 기초 통각 반응 수치를 약간 초과했을 뿐이다.

TIT와 TPT에서 30분, TIT에서 60분에 측정한 마우스는 식염수 또는 모르핀 주입 후 30분에 측정된 통각 수용 역치를 0일차와 7일차 발달 후 그래프로 표시했습니다. 이 기술은 통증 연구 분야의 연구자가 만성 모르핀 투여로 인한 통증 과민증 및 진통제 내성의 발달에 대한 유전자 개입의 약리학적 효과를 탐구할 수 있는 길을 열었습니다.