Name: 에 대한 내피 세포의 관 형성의 분석 체외 혈관 신생 연구 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2014-09-01T13:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 12 s
Description: 학습하세요 내피 세포의 관 형성 분석을 통해 혈관 신생 연구를 수행하는 방법을. 이 기법은 유전자 및 경로를 신속하게 정량화하여 시각화할 수 있는 효과적인 체외 분석 도구입니다.

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이 연구는 국립 보건원의 국립 암 연구소의 교내 연구 프로그램에 의해 부분적으로 지원하고, NCI에 의해 UA5CA152907을 부여했다.

에어컨 미디어의 1 컬렉션은 혈관 신생 가능성을 테스트 <ol><li> 기본 또는 저 혈청 배지에서 혈관 신생 또는 항 혈관 가능성을 테스트 할 기본 또는 불후의 세포 성장 및 조절 미디어를 수집합니다. <ol><li> 또한, 사용 즉시 미디어를 조절하거나 분주하고 몇 달 동안 -80 ° C에 저장됩니다. 음성 대조군으로 nonconditioned 네이티브 또는 낮은 혈청 미디어를 사용하고, 양성 대조군으로 비 조절 완전한 성장 배지 (10 % FBS, 또는 적절한 농도)를 사용합니다. 또한, 혈관 신생의 잠재적 인 자극을 테스트하기 위해, 관심의 특정 단백질의 알려진 농도의 성장 인자가없는 보충 숯 제거 매체는 혼자 성장 인자 언론의 자유에 비교합니다. </li></ol></li></ol> 분석에 앞서 내피 세포의 2 준비 <ol><li> 분석하기 이틀 전에, 새로운 T-75 플라스크에 통과 3B-11 세포. 세포의 통로 수는 중요하다. 세포는 두 번째와 여섯 번째 통로 사이 경우이 분석은 가장 적합한. 분석은 내피 세포는 초 전이나 열째 통과 한 후에 사용하는 경우에 잘 작동하지 않습니다. </li><li> DMEM에서 24 시간 동안 세포 성장은 10 % FBS, 2 mM의의 L-글루타민, 1 mM 피루브산 나트륨, 100 U / ㎖ 페니실린, 100 μg / ml의 스트렙토 마이신이 보충. </li><li> 다음과 같이 하나 일 이전에 분석에, 혈청 3B-11 세포를 굶어 : <ol><li> 3B-11 세포에서 대기음 미디어. </li><li> DMEM의 추가 감소 된 혈청 매체는 0.2 % FBS, 2 mM의 L-글루타민을, 1mM의 피루브산 나트륨, 100 U / ㎖ 페니실린, 100 μg / ml의 스트렙토 마이신이 보충. </li><li> 추가로 24 시간 동안 세포를 성장. </li></ol></li></ol> 분석에 앞서 시약의 3 준비 참고 : BME 농도가 많은에 따라 매우 다양하다. 농도가 ㎖ / 따라서 BME 제조업체 보장하기 위해 제품을 구매하기 전에 문의해야 미만 10 mg의 경우 BME는 잘 작동하지 않습니다적절하게 집중을 많이 취득. <ol><li> 해동은 냉장고에 성장 인자 BME를 감소시켰다. 때 따뜻한 BME는 굳은, 그래서 그것을 사용하기 전에 차가운 유지해야합니다. BME는 몇 주 동안 냉장, 저장, 분주 및 -80 ° C에서 동결 할 수 있습니다. </li><li> 감소 된 성장 인자 BME 전통 BME를 통해 바람직하다. BME에 혈관 신생 인자의 부족은 쉽게 조절 매체 관 형성에 미치는 인자들로부터 효과를 관찰 할 것이다. </li><li> 해동 미디어 테스트 할 수 있습니다. </li></ol> 분석 직전에 내피 세포의 4 준비 <ol><li> 워시 3B-11 DPBS 세포. <ol><li> 또는 형광 공 촛점 현미경으로 시각화가 요구되는 경우,도 3b-11 세포를 세척하기 전에, 2 μg / ML의 최종 농도로 매질에서 내피 세포의 칼 세인 AM을 추가한다. 분석을 시작하기 전에 37 ° C와 5 % CO 2의 어둠 속에서 칼 세인 표지 세포를 놓습니다. 스톡 칼 세인을 녹여칼 세인 DMSO에 한 번 오전 0.1 %를 초과하지 않아야 DMSO의 미디어 최종 농도로 희석한다. 세포에서 30 ~ 45 분 세척 칼 세인의 AM 후 (위의 4.1 단계) 및 실험은 다음 계속합니다. </li></ol></li><li> T-75 플라스크에 1 ml의 트립신-EDTA를 첨가하여 세포를 Trypsinize. </li><li> 트립신 처리가 완료된 후, 100 μg이 / ㎖ 스트렙토 마이신을 최종 DMEM에서 10ML의 부피, 10 % FBS, 2 mM의의 L-글루타민, 1mM의 피루브산 나트륨, 100 U / ㎖의 페니실린으로 세포를 재현 탁하여 트립신을 중화하고. </li><li> 100 μm의 셀 스트레이너를 통해 필터 세포 덩어리를 제거합니다. </li><li> 7.5 × 106 DMEM에서 세포 / ㎖, 10 % FBS, 2 mM의의 L-글루타민, 1 mM 피루브산 나트륨, 100 U / ㎖ 페니실린의 최종 농도로 세포에 resuspend 셀 카운트 및 100 μg / ml의 스트렙토 마이신. </li></ol> 5 관 형성의 분석 <ol><li> 이전 BME는 프렘하지 않도록 접시를로드에 20 ~ 30 분 동안 냉장고에 또는 얼음에 24 웰 플레이트와 1 ㎖의 팁을 놓고aturely 강화. </li><li> 피펫 24 웰 플레이트의 각 웰에 감소 된 성장 인자 BME 250 μL. 분배하는 동안 최종 정지 피펫을 우울하지 않음으로써 거품을 만들지 마십시오. 충분한 BME가 잘의 중심 메 니스 커스 형태로 유지주의; 매트릭스가 너무 얇 으면, 셀은 단지 단일 층을 형성 할 것이다. </li><li> CO BME을 강화하기 위해이 30 분 37 ° C에서 24 웰 플레이트를 품어 5 %. </li><li> BME가 설정되면, 재현 탁 3B-11 세포 (약 75,000 세포)의 10 μL로 에어컨 미디어의 약 300 μl를 섞는다. <ol><li> 에어컨 미디어와 사용 내피 세포 유형에 따라 도금 셀의 수의 양을 조절하고, 활성을 보여주기 위해 조절 매체의 계열 희석을 테스트. 비교 세포가 서로 다른 조건 하에서 성장 된 경우, 매체를 컨디셔닝하는데 사용 된 세포의 수를 조절 매체 볼륨을 정상화. </li></ol></li><li> 튜브 줘야리터는 2-4 시간 내에 형성하기 시작한다. 조절 된 배지에서 혈관 신생 인자의 농도에 따라 피크 관 형성은 시간 및 타이밍 분석의 3 내지 12을 최적화 할 필요가 발생할 수있다. 대신 불후의 세포의 기본 내피 세포로 작업하는 경우, 초기 관 형성은 몇 시간에 의해 지연 될 수 있습니다. <ol><li> 튜브는 종종 세포 사멸을 받게 될 것이다 18 시간 및 내피 세포 내에서 악화하기 시작합니다. </li></ol></li><li> 피크 관 형성 당시부터 잘 신중 흡 매체 BME에 튜브 네트워크를 방해하지 않도록한다. <ol><li> 1 ML의 DPBS 후 흡인 잘 각을 씻으십시오. <ol><li> 직접적인 시각화를 들어, 세포는 4.1.1로의 칼 세인 AM으로 염색 한 경우, 디지털 카메라, 또는 형광 / 공 초점 현미경에 부착 된 도립 현미경을 사용하여 각 웰 화상 튜브 네트워크에 1 ml의 신선한보기 DPBS를 추가한다. </li><li> 나중에 시각화를위한 관 네트워크를 해결하고, 각 4 % 파라 포름 알데히드를 추가하려면잘 흡입하고, 실온에서 15 분 동안 배양한다. <ol><li> , 파라 포름 알데히드를 제거 DPBS로 두 번 세척 후, 각 웰에 1 ㎖에게 신선한 DPBS를 추가합니다. </li><li> 몇 튜브이 절차를 수행하는 동안 파손될 우려가 전에 고정에 현미경 이미지. </li></ol></li></ol></li></ol></li></ol> 튜브 네트워크의 6 정량화 <ol><li> 조사자의 선호도에 따라 여러 가지 방법으로 튜브 네트워크를 정량화하고, 여러 컴퓨터 프로그램은 다음의 파라미터를 측정하는 능력을 가지고 튜브의 수; 루프 / 메쉬의 수; 분기 사이트 / 노드의 수; 튜브의 길이. </li><li> 이러한 튜브 네트워크의 정량 혈관 분석기 플러그인 16 이미지 J로 대표 컴퓨터 프로그램을 사용합니다. </li></ol>

<ol><li>Carmeliet, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Angiogenesis+in+life%2C+disease+and+medicine%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Angiogenesis in life, disease and medicine.</a> Nature. 438, 932-936 (1038).</li>
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<li>Carpentier, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((ImageJ+contribution%3A+Angiogenesis+Analyzer%5BTitle%5D)+AND+%22ImageJ+News%22%5BJournal%5D)">ImageJ contribution: Angiogenesis Analyzer.</a> ImageJ News. , (2012).</li>
</ol>

저자가 공개하는 게 없다.

혈관 신생은 생리 학적 및 병리학 적 과정에 모두 참여하고있다. 혈관 신생에 관여하는 메커니즘을 공부하는 것은 혈관 신생의 주요 단계를 요점을 되풀이 분석의 사용이 필요합니다. 내피 세포의 관 형성 어 세이 다른 분석법에 비해 여러 장점을 제공한다. 그것은, 설치하기 쉽고 상대적으로 저렴하고, 시간 내에 세관을 생산하고 정량화 할 수있다. 또한, 24 또는 96 웰 플레이트에 완료 할 수있어, 자극 요소를 식별하거나 혈관 신생을 억제하기 위해 고 처리량 스크리닝에 사용될 수있다. 우리가 실험 3B-11 마우스 내피 세포를 사용하지만, 분석은 HUVEC 및 SVEC 비롯한 인간 또는 뮤린 내피 라인의 다양한 수행 될 수있다. 내피 세포의 관 형성 어 세이를 수행하기 위해, 내피 세포는 혈관 형성 또는 친 요소를 포함하고 감소 된 성장 인자 기저막 매트릭스 위에 도금 조건화 매체와 혼합된다. Endotheli알 세포는 시간과 루멘 함유 세관은 2 시간 내에 표시하기 시작 한 내 ...

혈관 신생, 기존의 혈관으로부터 새로운 혈관의 발달은 1-3 치유 장기의 성장, 배아 발생 및 상처 등의 다양한 공정에 매우 중요하다. 새로 조직으로 내피 세포, 공급 산소와 영양분 줄 지어 혈관을 개발, 조혈 세포에 의한 면역 감시를 촉진하고 노폐물 2,4를 제거합니다. 혈관 신생은 배아와 태아의 개발 과정에서 핵심 중요하다. 그러나,이 과정은 상처 치유, 골격 성장, 임신의 시간 동안을 제외하고 또는 월경주기 1 ~ 3시 성인 휴면 남아있다. 지난 20 년 동안, 혈관 신생을 조절하는 핵심 분자 메커니즘이 등장하기 시작했다. 혈관 신생은 인테그린, 케모카인, 앤지 오포 이에 틴, 산소 감지 에이전트, 접합부 분자와 내인성 억제제 (5)을 포함하여 프로와 항 혈관 신생 신호로 균형 엄격하게 규제 된 이벤트입니다. proang 번이러한 염기성 섬유 아세포 성장 인자 (bFGF), 혈관 내피 성장 인자 (VEGF), 혈소판 유래 성장 인자 (PDGF), 및 표피 성장 인자 (EGF)와 같은 iogenic 신호는 내피 세포가 혈관 내피 세포가 기저막을 분해하는 프로테아제를 방출 수용체 활성화. 내피 세포는 하루 당 6.7 밀리미터의 속도로 콩나물을 형성, 증식 및 이주. 혈관 신생은 암, 건선, 당뇨병 성 망막 병증, 관절염, 천식,자가 면역 질환, 감염성 질환, 및 죽상 동맥 경화증을 포함한 다양한 8-10 병적 상태와 관련된다. 인해 다양한 질병에서 혈관 신생의 중요성이 프로세스는 더 나은 치료제의 설계에 중요한 조절 유전자 및 경로를 이해한다. 관 형성 어 세이는 혈관 신생에 관여하는 유전자 또는 경로를 결정하기위한 신속하고 정량적 인 방법이다. 우선 1988에서 설명한이 분석의 기초 원리는 내피 세포가 혈관 신생 나누고 11-13 신호에 응답하여 급속하게 이주 할 수있는 능력을 유지하는 것이있다. 또한, 내피 세포는 분화 및 기저막 추출물 (BME)의 매트릭스에서 배양 관 형상 구조를 형성하도록 유도된다. 이 튜브는 접합부 단지를 통해 서로 연결 내피 세포에 둘러싸인 내강이 포함되어 있습니다. 관 형성은 대부분의 튜브 수량 및 혈관 신생 자극의 유형에 따라 2-6 시간 동안이 형성 분석에서 신속하게 발생한다. 내피 세포는 여러 종류의 일차 전지 및 불멸화 세포주 14,15 모두 포함이 분석을 위해 사용될 수있다. 본 문서에 사용되는 세포주는 마우스 3B-11 이었지만, 동일한 방법론은 이러한 HUVEC (인간)와 같은 세포 SVEC4-10 (마우스)와 같은 다른 내피 세포주 또는 일차 내피 세포에 적용 할 수있다. 에 따라 세포주가 사용된다 내피 CE 여부LLS가 변형 또는 비 변형되어, 최적화는 적절한 관 형성에 필요한 이상적인 시간을 식별하기 위해 수행 될 필요가있을 것이다.

<table><tbody><tr><td>Costar 24-well tissue culture-treated plate</td><td>Corning</td><td>3524</td><td></td></tr><tr><td>BD Matrigel 기저막 매트릭스, 성장 인자 감소</td><td>BD Biosciences</td><td>354230</td><td></td></tr><tr><td>Gibco 0.05% 트립신-EDTA</td><td>Life Technologies</td><td>25300-054</td><td></td></tr><tr><td>Gibco L-글루타민 200 mM (100x)</td><td>Life Technologies</td><td>25030-081</td><td></td></tr><tr><td>Gibco 펜 연쇄상구균</td><td>Life 기술</td><td>15140-122</td><td></td></tr><tr><td>Gibco DMEM (1x)</td><td>Life Technologies</td><td>11965-092</td><td></td></tr><tr><td>Gibco DPBS (1x)</td><td>Life Technologies</td><td>14190-144</td><td></td></tr><tr><td>Fetal Bovine Serum</td><td>Atlas Biologicals</td><td>F-0500-A</td><td></td></tr><tr><td>Calcein AM</td><td>Life Technologies</td><td>C3100MP</td><td></td></tr><tr><td>DMSO</td><td>ATCC</td><td>4-X</td><td></td></tr></tbody></table>

에 대한 내피 세포의 관 형성의 분석<em&gt; 체외</em&gt; 혈관 신생 연구

Endothelial Cell Tube Formation Assay for the In Vitro Study of Angiogenesis

혈관 신생은 정상 조직의 발달과 상처 치료를위한 중요한 과정이지만 또한 병적 다양한 조건과 연관된다. 이 프로토콜을 이용하여, 혈관 신생은 신속하게 정량 시험 관내에서 측정 할 수있다. 차 또는 불멸화 된 내피 세포는 조절 된 매체와 혼합 기저막 매트릭스 상에 플레이 팅된다. 내피 세포는 조절 된 배지에서 발견 된 혈관 형성 신호에 반응하여 추천 모세관 구조를 형성한다. 관 형성은 혈관 내피 세포는 1 시간 및 루멘 함유 세관은 2 시간 내에 표시하기 시작하고 내 자신을 정렬하기 시작 신속하게 발생합니다. 튜브를 위상차 도립 현미경을 이용하여 가시화 될 수 있거나, 또는 세포를 형광 공 촛점 현미경 분석을 통해 시각화 및 튜브에 대한 종래의 칼 세인 AM으로 처리 될 수있다. 분기 사이트 / 노드의 수는 루프 / 메쉬, 또는 번호 또는 형성된 튜브의 길이를 쉽게 vitr에서의 측정 값으로서 정량화 될 수있다오 혈관 신생. 요약하면,이 분석은 유전자와, 빠른 재생 가능한 한 정량적 방식으로 추진 또는 혈관 신생의 억제에 관여하는 경로를 식별하기 위해 사용될 수있다.

마우스 3B-11은 내피 세포 성장 감소 응고 인자 BME에 시딩 하였다 -이 분석에서, 생성물은 사용 된 마트 리겔 - 시간이 지남에 따라. 도 1에 도시 된 바와 같이, 하나의 마우스 케 라티노 사이트 또는 섬유 아세포에서 분비되는 혈관 신생 인자는 시간에 관 형성을 유도 할 수있다. 내피 세포 마이그레이션 및 도금의 1 ~ 2 시간 내 작은 나뭇 가지를 형성하기 시작한다. 최대 관 형성 이전에 각질 세포에서 얻은 컨디셔닝 미디어를 사용하여 4-6 시간에 도달했습니다. 24 시간으로 몇 가지 남아 있지만, 세포의 대부분은 세포 사멸되었고, 튜브 분리하기 시작했다. 셀 수는 관 형성에 지대한 영향 (그림 2). 세포의 수가 불충분 행렬에 시딩 때 몇 튜브의 네트워크 형성은 최소이다. 더 많은 셀들이 시딩 같이, 튜브 네트워크는 더 광범위해진다. 그러나, 너무 높은 농도에서 세포 덩어리를 형성하기 시작하거나단층 및 ...

관 형성 분석법은 시험관 내 혈관 신생을 측정하기위한 신속하고 정량적 방법이다. 내피 세포는 조절 된 미디어와 결합 기저막 추출물에 도금된다. 튜브 형성은 시간 이내에 발생하고 새로 형성된 세관은 쉽게 정량화.

Angiogenesis is a vital process for normal tissue development and wound healing, but is also associated with a variety of pathological conditions. Using ...

이 실험 절차의 전체적인 목적은 신속하고 정량적인 인비트로(in vitro) 방법을 사용하여 혈관 신생에 관여하는 유전자 또는 경로를 결정하는 것입니다. 이를 위해 먼저 분석 전날 일차 배양 또는 불멸화된 혈관 내피 세포를 혈청 기아 상태로 만듭니다. 두 번째 단계는 혈관 내피 세포를 calcine과 함께 30분 동안 배양한 후, PBS로 세포를 세척하는 것입니다.다음으로, 혈관 내피세포를 트립신 처리하고 필터링하여 덩어리를 제거한 뒤 세포 수를 측정합니다. 마지막 단계는 가능한 혈관 형성 인자가 포함된 조건 배지와 혈관 내피세포를 혼합하여 응고된 기저막 추출물 위에 분주하는 것입니다. 최종적으로 광학 또는 형광 현미경을 사용하여 튜브 네트워크를 시각화하며, 이는 전문 컴퓨터 프로그램을 통해 정량화할 수 있습니다.혈관 신생을 분석하는 다른 방법들과 비교했을 때 이 기술의 주요 장점은 설정이 쉽고 비용이 상대적으로 저렴하며, 수 시간 내에 관 구조를 형성하여 정량화가 가능하다는 점입니다. 이 기술을 시연하는 사람은 American University 생물학과 대학원생인 Erica Bullwinkle입니다. 최적의 결과를 얻기 위해, 분석 시작 2일 전에 적절한 배지를 사용하여 three B 11 세포를 새 플라스크로 옮기십시오. 세포는 계대 배양 2~6대 사이일 때 사용하는 것이 좋습니다.다음으로, 보충된 dmm에서 세포를 24시간 동안 배양합니다. 세포가 준비되면 혈청 기아 상태로 만듭니다. 배지를 저혈청 배지로 교체하여 혈청 기아 세포를 추가로 24시간 동안 더 배양합니다.최상의 결과를 얻으려면 BME 스톡 솔루션의 농도가 10 mg/mL인지 제조업체를 통해 확인하는 것이 중요합니다. 환원 성장 인자 BME를 냉장고에서 해동하십시오. BME는 온도가 높아지면 응고되므로, 사용 전까지 차갑게 보관해야 합니다.다음으로 형광 또는 공초점 현미경 시각화 분석에 필요한 배지를 해동하고, 최종 농도가 2 µg/mL가 되도록 Calcein AM을 배지에 첨가합니다. Calcein AM이 표지된 세포를 약 30분에서 45분 동안 암소에 둡니다. 이 시간이 지나면 배지를 제거하고 3B11 세포를 DPBS로 세척합니다. 다음으로 1 mL의 Trypsin-EDTA를 첨가하여 세포를 트립신 처리합니다. 트립신 처리가 완료되면.세포를 최종 부피 10 milliliters가 되도록 재현탁합니다. 보충제가 첨가된 dmm에서 100 micrometer 세포 스트레이너로 여과하여 세포 덩어리를 제거합니다. 세포 수를 측정한 후, 튜브 형성 분석을 시작하기 위해 세포를 정확한 최종 농도로 재현탁하여 냉각합니다.로딩 20~30분 전에 24웰 플레이트와 1mL 팁을 준비합니다. 이는 파이펫팅을 시작할 때 BME가 조기에 응고되는 것을 방지하기 위함입니다. 24웰 플레이트의 각 웰에 환원 성장 인자가 포함된 BME 250 µL를 파이펫으로 분주합니다. 이때 파이펫을 끝까지 누르지 않도록 하여 기포가 생기지 않게 주의하십시오.피펫팅을 할 때, 웰에 시료를 채운 후 웰 중앙에 충분한 양의 BME가 남아 있는지 확인하십시오. 메니스커스가 형성될 때 매트릭스가 너무 얇으면 세포가 단층으로만 형성됩니다. 그런 다음, BME를 응고시키기 위해 플레이트를 30분 동안 배양하십시오.BME가 응고되면, 조건 배지 약 300 µL와 재현탁된 three B 11 세포 10 µL를 혼합하고, 이 세포 현탁액을 플레이트의 웰에 분주합니다. 플레이트를 인큐베이터에 넣으면 2~4시간 이내에 튜브가 형성되기 시작합니다. 조건 배지 내의 혈관신생 인자 농도에 따라 최대 튜브 형성은 3~12시간 사이에 일어날 수 있습니다. 분석 시점은 개별 연구 조건에 맞게 최적화해야 합니다.튜브는 대개 18시간 이내에 퇴화하기 시작하며, 튜브 형성의 정점 단계에서 내피세포의 세포사멸(apoptosis)이 일어납니다. 튜브 네트워크가 파괴되지 않도록 웰에서 배지를 조심스럽게 흡입하여 제거하십시오. 그다음, 즉각적인 시각화를 위해 각 웰을 1 mL의 DPBS로 세척하십시오.각 웰에 신선한 DPBS 1 mL를 추가하고, 이후 시각화를 위해 관 네트워크를 고정하고자 공초점 현미경으로 관 네트워크를 촬영합니다. 흡입된 각 웰에 4% 파라포름알데히드를 추가하고 실온에서 15분 동안 배양합니다. 파라포름알데히드를 제거한 후 DPBS로 2회 세척하고, 다시 각 웰에 신선한 DPBS 1 mL를 추가합니다. 이 이미지들은 마우스 각질 형성 세포 또는 섬유아세포에서 분비된 혈관 형성 인자가 관 형성을 유도할 수 있음을 보여줍니다.시간이 지남에 따라, 내피세포는 플레이팅 후 1~2시간 이내에 이동하여 작은 분지들을 형성하기 시작합니다. 최대 관 형성(tube formation)은 4~6시간 후에 도달하였습니다. 24시간이 지나자 일부 분지는 남아 있었으나, 많은 세포가 세포사멸(apoptotic) 상태가 되었고 관들이 끊어지기 시작했습니다.세포 수는 관 형성(tube formation)에 지대한 영향을 미칩니다. 충분하지 않은 수의 세포를 분주하면 관이 거의 형성되지 않고 네트워크가 최소화되는 반면, 더 많은 세포를 분주할수록 관 네트워크가 더 광범위해집니다. 하지만 농도가 너무 높으면 세포가 뭉치거나 단층(monolayers)을 형성하기 시작하여 처리군 간의 차이가 가려질 수 있으므로, 적절한 관 형성을 보장하기 위해 세포는 최소 2회 이상의 계대 배양을 거쳐야 합니다.B 11의 성장 속도는 매우 빨라, 세포의 25%를 계대 배양한 다음 날이면 플라스크가 완전히 충전(confluent)됩니다. 여기서는 calcine AM 염색된 관 네트워크에서 전체 노드, 망 형태의 결합 튜브 및 네트워크 상의 병합된 부분을 검출하기 위해 angiogenesis 플러그인이 설치된 image J를 사용합니다. 또한, 이 프로그램을 사용하여 노드, 튜브 또는 망을 개별적으로 검출하고 정량화할 수 있습니다.이 영상을 시청하고 나면, 일반적인 실수들을 방지하면서 빠르고 신뢰할 수 있는 방식으로 in vitro 혈관 신생 실험을 수행하는 방법에 대해 충분히 이해하게 될 것입니다.

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이 동영상은 체외의 angiogenesis 분석에의 프로토콜을 보여줍니다 angiogenesis의 recapitulates 여러 단계의 것을. 시간 저속 돋아의 이미지, 루멘 형성, 분기 및 문합 - angiogenesis의 주요 기능은 - 표시됩니다.

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혈관을 조사하기 위해 신생아 마우스 망막의 전체 마운트 면역 형광 염색<em&gt; 생체 내</em

이 원고는 통제된 환경에서 내피 세포관 형성을 사용하여 혈관 신생에 대한 주어진 화합물 또는 조건의 효과를 정량화하기 위한 튜브 형성 분석을 설명합니다.

전략적 내피 세포 관 형성의 분석 : 감소 세포 외 매트릭스 세포 외 기질과 성장 인자를 비교

우리는 매트릭스 겔 플러그 혈관 분석의 변형을 사용하여 마우스에서의 인간 내피 주연 세포의 상호 작용을 연구하는 프로토콜을 제시한다.

마우스의 매트릭스 젤 플러그 분석을 사용하여 인간의 내피 - 주연 세포 상호 작용의 생체 내 연구에

여기서, 우리는 겔화 된 지하 매트릭스에 튜브 형성 분석을 사용하여 혈관 네트워크 형성에 루타 graveolens의 물 추출물의 효과를 평가한다.

HUVEC 튜브 형성 분석은 혈관 신생에 천연 물의 영향을 평가하기 위해

The aim of this method is to obtain fibroblast-derived 3D matrices as a natural scaffold for subsequent cellular assays. 섬유아세포는 전처리된 배양판에 씨를 뿌리고 매트릭스 생성을 위한 아스코르브산으로 자극된다. 행렬은 탈세포화되고 관련 세포(예를 들어, 내피 세포)를 배양하도록 차단된다.

섬유 아세포 유래 3D 매트릭스 시스템은 내피 튜브 형성 분석에 적용

여기서 제시된 것은 혈관 형성에서 엔도글린의 역할을 연구하기 위해 환자 유래 유도 만능 줄기 세포 유래 내피 세포에서 제브라피쉬 및 튜브 형성 분석에서 의 제브라피시 및 튜브 형성 분석에서 전체 마운트에 대한 프로토콜이다.

혈관 발달에서 엔도글린의 역할을 연구하기 위해 iPSC-ECs의 제브라피시 배아 및 튜브 형성 분석에서 시투 혼성화에 대한 전체 마운트

이 분석은 3D 콜라겐 젤에서 배양된 배아체로 분화된 마우스 배아 줄기 세포를 활용하여 시험관 내에서 발아 혈관신생을 제어하는 생물학적 과정을 분석합니다. 이 기술은 약물 테스트, 질병 모델링 및 배아적으로 치명적인 결실의 맥락에서 특정 유전자를 연구하는 데 적용될 수 있습니다.

체외 혈관 질환 모델링 및 약물 검사를 위한 마우스 배아 줄기 세포를 이용한 혈관신생의 3차원 발아 분석

현재 프로토콜은 영양막 세포와 같은 세포가 세포외 기저막 매트릭스 층에 걸쳐 모세관 같은 구조로 조직되는 고전적인 체외 혈관 형성 분석에서 형성된 튜브와 같은 구조를 복구할 수 있도록 합니다. 회수된 구조는 다양한 생화학 분석을 위한 RNA 및 단백질 분리에 사용됩니다.

분화 마커 발현 분석을 위한 Angiogenesis-Tube Formation Assay에서 영양막 세포 회수

학습하세요 내피 세포의 관 형성 분석을 통해 혈관 신생 연구를 수행하는 방법을. 이 기법은 유전자 및 경로를 신속하게 정량화하여 시각화할 수 있는 효과적인 체외 분석 도구입니다.

에 대한 내피 세포의 관 형성의 분석

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