Name: 에서 전기 생리학 기록 초파리 Labellar는 Sensilla 맛 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2014-02-26T23:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 32 s
Description: 학습하세요 Drosophila의 labellar 미각 감각소에서 활동전위를 기록하는 전기생리학 기술을. 이 방법은 미각 수용 메커니즘 연구와 신경과학 실험에 필수적인 시각적 가이드를 제공합니다.

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이 작품은 (RD에) NRSA predoctoral 부여 1F31DC012985에 의해 JC에 NIH 보조금에 의해 지원되었다 우리는 도움을 컴파일하는 인물에 대한 원고, 라이언 박사 요셉에 도움이 코멘트 박사 리니 와이즈에게 감사하고, 도움이 기술적 조언 박사 프레드릭 마리온 - 설문 조사 것이다. 우리는 또한 네 개의 검토의 도움 의견을 인정하고 싶습니다.

다음 프로토콜은 예일 대학의 모든 동물 보호 지침을 준수합니다. 1. 시약 및 장비 제조 <ol><li> 녹화 장비 설치 (그림 1A). <ol><li fo:keep-together.within-page="always"> 온도 나 습도에 큰 변화의 무료 또한 냉장고, 원심 분리기 등의 전기 및 기계 소음의 원인으로부터 격리 장비 설치를위한 공간을 선택합니다. <img alt="그림 1" fo:content-width="5in" fo:src="/files/ftp_upload/51355/51355fig1highres.jpg" src="/files/ftp_upload/51355/51355fig1.jpg" /> 그림 1. 녹화 장비 설치의 (A) 개요. 실체 (a)는 미세 조작기를 통해, (b). 기준 전극 홀더 (c)가 headstage (d) 대향 플랫폼 상에 장착되는 진동 방지 플랫폼에 장착된다. 비행 준비에 지시 가습 공기 흐름을 제공하는 아울렛 플라스틱 관 (E)도 t에 장착플랫폼 그. headstage는 PC (h)에 접속되어 디지털 수집 시스템 (DAS) (g)에 접속되는 증폭기 (f)에 접속되어있다. 전극과 출구 관 (B) 구성 :. 기준 왼쪽에 전극, 오른쪽에 기록 전극 및 비행 준비에 직접 공기 흐름 배출 튜브 <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/51355/51355fig1highres.jpg" target="_blank">큰 이미지를 보려면 여기를 클릭하십시오.</a> </li><li> 방진 테이블이나 플랫폼의 중심에 마운트 실체. </li><li> 자기 스탠드를 사용하여 각각 현미경의 왼쪽과 오른쪽에 기준 전극 / 곤충 준비와 headstage / 기록 전극 용 미세 조작기를 연결합니다. </li><li> 관 개구가 비행 준비의 위치를 향해 지적되도록 지향 현미경의 후방합니다 (그림 1B 참조)에 대한 제 3의 미세 조작기에있는 마운트 출구 플라스틱 튜브. </li><li> 에서, 유연한 플라스틱 튜브를 사용하여부분적으로 물이 가득 진공 플라스크에 타코미터 출구 플라스틱 튜브. 플라이 향해 출구 플라스틱 튜브를 통해 가습 된 공기 스트림을 생성하는, 플라스크 내의 물을 통해 버블 공기 소형 수족관 펌프를 연결한다. </li><li> 직접 준비 아래 흰색 카드 종이 조각을 통해 빛을 반사하여 준비를 조명 출력을 향하게 진동 테이블로 마운트 광섬유 광원. 광원 테이블에 올려 놓지 않도록하십시오. 참고 : 종이 디스크에 광원을 반영하는 이점은 두 가지이다 : 그것은 시각화 sensilla 더 쉽게, 콘트라스트를 향상하고, 직접 빛으로부터 초래 준비의 가열을 방지합니다. </li><li> 공급 업체의 설명서에 따라, 디지털 수집 시스템 (DAS) 및 개인 컴퓨터에 DAS에 tastePROBE 앰프를 연결합니다. 에 발 페달 트리거를 연결하고 작업 공간에서 준비한다. 참고 : 전기적으로 절연 벽 앰프 용 소켓 및 DAS가 매우한다 desir 있습니다수. </li><li> 전기 악어 클립 및 절연 전선 및 전기 테이프의 길이를 사용하여 테이블에 금속 부품을 연결하여 현미경, 미세 조작기, 광원을 접지. 전기 접지 또는 전원 플러그를 통해 접지 DAS를, 건물에 연결하여 금속 플랫폼을 접지. </li><li> 개인용 컴퓨터에 대한 선택의 DAS에 대한 적절한 수집 소프트웨어를 설치합니다. 참고 : 디지털 획득 드라이버는 PC의 운영 체제와 호환되는지 확인합니다. </li><li> 소프트웨어 증폭 (10-100X)를 구성하고, 신호를 필터링하고 샘플링 레이트 (적어도 10 KHz에서) (전형적 베셀 대역 통과 필터는 100 Hz에서-3, 000 Hz에서 집합). 참고 : 미각 뉴런에서 신호 진폭이 0.5 MV 범위에서 일반적이다, 그래서 디스플레이 스케일이 자신의 시각화를 용이하게하기 위해 설정된다. 참고 : 100 Hz에서 필터는 외부의 전기적 노이즈를 제외하는 데 도움이 있지만, 그것은 스파이크의 모양을 변경하고 고급 스파이크 정렬 MOR을 만들 수 있습니다전자 도전. 대안 적으로, 1 Hz에서 필터가 사용될 수있다. </li><li> 선택적으로, 패러데이 케이지는 전체 진동 테이블 주위에 설정할 수 있습니다. 단, 알루미늄 박의 작은 시트는 일반적으로 외부 환경 또는 조사에 의해 생성 된 소음을 감소시키기에 충분하다. </li></ol></li><li fo:keep-together.within-page="always"> 유리 전극의 제조 <img alt="그림 2" fo:content-width="5in" fo:src="/files/ftp_upload/51355/51355fig2highres.jpg" src="/files/ftp_upload/51355/51355fig2.jpg" /> 그림 2. 참조 및 기록 전극. ​​(A)와, 기준 전극으로 뽑아 유리 모세관의 확대에 따라 깨진 (B) 끝없이 사진 및 기록 전극 (C). 흰색 막대 2 밀리미터를 나타냅니다. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/51355/51355fig2highres.jpg" target="_blank">더 큰 이미지를 보려면 여기를 클릭하십시오.</a> <ol><li> 참조를 당겨피펫 풀러 악기를 사용하여 유리 모세관에서 전극. 참고 : 피펫 풀러 프로그램의 정확한 설정이 기기에서 기기로 변화 할 것이다. 매우 긴 점차적으로 테이퍼를 달성하려고합니다. 그러나, 충분한 허용하지되는, 전극의 테이퍼 길이의 직경도 너무 얇은 것을 확인; 팁 플라이 제조 (도 2A 및 2B) 전에 갈라지기 때문에 끝에 기공 크기는 중요하지 미각 신경을 손상 시키거나 침샘 파열 수 labellum의 고정, 또는 너무 큽니다. </li><li> 피펫 풀러 악기를 사용하여 필라멘트를 가진 붕규산 유리 모세관에서 기록 전극을 당깁니다. 기준 전극의 그것보다 얕고 테이퍼, 약 10-15 μM (도 2c) (28)의 세공 직경을 달성하려고. </li></ol></li><li> Tastant 솔루션 준비 <ol><li> 교구 - 에프 뤼 씨 벨소리 솔루션을 사용하여기 (B &amp; E) 기준 전극 전해질로서. B &amp; E 중 하나 리터하려면, 7.5 g의 NaCl, 0.35 g의 KCl, 및 0.279 g의 염화칼슘을 용해 2 ∙ 초순수 중 하나 리터 2H 2 O. -20 ° C에서 작은 분취를 저장 </li><li> 쓴 설탕 GRN 응답을 측정 할 경우, 기록 전극 전해질 및 tastant 솔루션 (25)에 대한 용매로 30 ㎜ tricholine 구연산 용액 (TCC)를 사용합니다. 수상 세포의 반응을 측정 할 경우에 대안 적으로, 1-3 mM의 염화칼륨 용액을 사용할 수있다. </li><li> tastant 솔루션을 만들기 위해 분말 형태로 tastant의 적절한 양을 무게와 초기 재고 농도를 만들기 위해 TCC을 추가 할 수 있습니다. 테스트를 원하는 농도를 얻을이 초기 재고에서 시리얼 희석하기 위해 사용합니다. 참고 : tastants은 물에 쉽게 용해되지 않는 경우, 에탄올과 같은 다른 용매가, 초기 재고 농도를 만들기 위해 사용될 수있다. 적절한 제어 TCC의 솔루션과 tastant없이 용매이 경우에 사용되어야한다. </li><li> -20 ° C에서 저장 분량 씩 장기 tastant의 화학적 특성에 따라 최대 일주일 동안 사용을 기록하는 4 ° C에서 tastant 솔루션 중 하나 일 분취 량을 저장합니다. </li></ol></li></ol> 2. 초파리 준비 <img alt="그림 3" fo:content-width="5in" fo:src="/files/ftp_upload/51355/51355fig3highres.jpg" src="/files/ftp_upload/51355/51355fig3.jpg" /> 그림 3. 녹음 비행의 준비. 파리의 지느러미 가슴에 기준 전극의 (A) 삽입 위치. 흰색 화살표는 기준 전극을 나타냅니다. (B) 기준 전극의 중간 위치 : 목과 머리를 통해 고급, 코가 아직 확장되지 않습니다. (C, D)는 labellum 내부 전극의 끝, 그리고 코와 최종 위치에서 기준 전극으로 비행완전히 확장. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/51355/51355fig3highres.jpg" target="_blank">더 큰 이미지를 보려면 여기를 클릭하십시오.</a> <ol><li> 온도 및 습도 제어 조건에서 재배 잘 유지 플라이 문화에서 기록 새로 eclosed 파리를 수집하고 기록하기 전에 신선한 문화 유리 병 5 ~ 10 일 동안 저희에게를 나이. </li><li> 비행을 준비하기 전에 15 ~ 30 분 동안 얼음에 현미경 판을 풀어. </li><li> 부드럽게 백필 유리 기준 등 척추 바늘과 1 ML의 주사기로 0.5 mm 직경의 긴, 얇은 플라스틱 바늘을 사용하여 B &amp; E 솔루션 전극과는 거품을 누릅니다. 집게를 사용하여 오프 팁 소량의 휴식과 해부 현미경 하에서 관찰, 조직에 남아있는 거품을 그리는 모세관을 사용합니다. </li><li> 슬라이드 B &amp; 공기 방울을 소개 않도록주의하면서, 기준 전극 홀더의 와이어에 기준 전극을 E-채웠다. </li><li> 대기음 내장 플라이 흡인기를 사용하여 P200 피펫 팁으로 비행튜브에서, 메쉬, 피펫 팁, 30 ~ 60 초 동안 얼음 양동이와 냉기에 29 곳. </li><li> 얼음에서 현미경 플레이트를 제거 습기를 닦아 현미경 아래에 위치. 조심스럽게 현미경 판에 피펫 팁의 비행기로 누릅니다. 참고 : 비행 충분히 쉽게 조작 할 고정되어야한다. </li><li> 포셉의 다른 쌍의 흉부의 안정을 유지하면서 낮은 배율에서 부드럽게 집게 일쌍으로 앞다리를 제거합니다. 지느러미 쪽이 위로 향의 복부 측면에 파리를 놓습니다. 참고 : 항상 기계적 손상을 최소화하기 위해 준비 과정에서 항상 집게로 labellum에 손이 닿지 않도록주의하십시오. </li><li> 집게 일쌍과 장소에서 비행을 잡고, 후방 등의 흉부의 중간 선에서 기준 전극을 삽입합니다. 엔트리의 제안 각도 헤드 (도 3a)의 방향으로 약 45도이다. </li><li> 기준 electrod 보안파리가 높은 배율의 현미경 아래에 볼 수 있도록 점토와 전자 홀더. 두 쌍의 집게를 이용하여 기준 전극 홀더를 향해 비행을 슬라이딩하여 목과 머리를 통해 유리 전극 책략 및 각도. 참고 : 신속하지만 부드럽게 작동, 비행 여전히 차가운 (그림 3B)에서 고정되는 동안이 단계를 완료하는 것이 더 쉽습니다. </li><li> 더 유리 기준 전극 아래로 비행을 슬라이딩하면서 전극의 끝이 labellum 내부와 코가 완전히 (그림 3C 및 3D)으로 확장 될 때까지 조심스럽게, 집게 일쌍과 코를 확장합니다. 주 : 이것은 플라이를 손상 및 / 또는 뉴런 맛과 기록 품질에 영향을 미칠 수 있으므로, 코 조직의 일부를 천공하거나 기준 전극으로 labellum의 가장자리를 넓히다 않도록주의. </li></ol> 3. Labellar Sensilla에서 기록 <p class="jove_content" fo:keep-together.within 페이지 = &quot;항상&quot;&gt; <img alt="그림 4" fo:content-width="5in" fo:src="/files/ftp_upload/51355/51355fig4highres.jpg" src="/files/ftp_upload/51355/51355fig4.jpg" /> 고배율에서 오른쪽에있는 연락처에 대한 정렬 된 기록 전극 왼쪽에 비행 준비의 그림 4. 즉석에서 녹음. (A) labellum. (B) 기록 전극과 높은 배율에서 접촉 labellum에 단일 sensillum은. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/51355/51355fig4highres.jpg" target="_blank">더 큰 이미지를 보려면 여기를 클릭하십시오.</a> <ol><li> 항상 전 과정을 기록하는 동안 장비를 터치에 진동 방지 테이블 또는 플랫폼의 금속 표면을 만져 접지! 참고 : 그 회로에 손상을 수 headstage에 정전기를 제공하지 않는 매우 중요합니다. </li><li> 미세 조작기에 대한 보안 기준 전극 홀더 recordin의 공기 테이블에 장착G 장비. 높은 배율 (일반적으로 적어도 140X)에서보기의 현미경 분야에서 labellum의 위치 하나 엽, 가습 공기 흐름에 맞춰. </li><li> 가습 공기 흐름, 컴퓨터, DAS, 앰프의 전원을 켭니다. 열기 수집 소프트웨어. </li><li> 린스 원하는 tastant 유리 기록 전극을 입력합니다. <ol><li> 튜브 적어도 10 시간을 통해 소량의 물을 끌어 주사기 및 플라스틱 튜브 (28)를 사용하여 초순수 유리 기록 전극을 헹군다. </li><li> tastant으로 5 배 이상을 기록 전극을 씻어. 약 3 분의 1 tastant와 반쯤 전체 기록 전극을 채우고 튜브에서 제거합니다. 기포가있는 경우에, 방출 또는 단순히 전극 리필 탭. </li><li> 공기 방울을 도입하지 않도록 신속하고 원활하게 headstage의 실버 와이어에 전극을 밀어 넣습니다. </li></ol></li><li> tastant 가득한 기록 전극과 하나의 sensillum을 자극한다. <ol><li> micromanipu를 사용그 sensillum에 맞춰 기록 전극을 가지고 lator. </li><li> 앰프의 수집 모드를 실행하기 위해 발 페달을 누릅니다. </li><li> 이 sensillum과 녹음이 시작됩니다의 끝이 닿을 때까지 조심스럽게 미세 조작기의 미세 조절 손잡이로 기록 전극을 사전. </li><li> 1 ~ 2 초 후 전극을 제거합니다. </li><li> 원하는 경우, 다른 sensilla와 단계 5를 반복합니다. 참고 : 같은 sensillum에 프리젠 테이션 사이에 최소 1 분을 기다립니다. 오랜 시간 동안 하나의 tastant로 촬영하면 tastant 솔루션은 건조 할 수 있으며 팁의 솔루션은 더 집중되고있다. 이 부드럽게, 모세관 작용에 의해 소량의 액체를 제거하기 위해 부드러운 종이, 유리 전극의 선단을 접촉시킴으로써 해결할 수있다. </li></ol></li><li> 다른 tastant에 대한 응답을 기록 씻어 새 tastant와 부하 기록 전극 및 3.4 단계를 반복합니다. 참고 : 철저 tastants 사이의 전극을 헹구는 복근이다교차 오염을 방지하기 위해 olutely 매우 중요합니다. </li><li> 날짜, 유전자형 및 tastants 등의 정보를 식별 주기적으로 데이터 파일을 저장합니다. 참고 : 데이터 분석에 대한 세션을 녹음하는 동안 tastant 각 프리젠 테이션의 sensillum 정체성의 서면 기록을 유지하는 것이 중요합니다. </li></ol>

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저자가 공개하는 게 없다.

Labellar sensilla 인해 형태와 해부학 적 조직의 차이에 따라 기록의 용이성에 따라 다릅니다. 때때로 sensillum은 어떤 tastants에 긍정적 인 반응을 유도하는 것으로 알려져 한 마리도 응답하지 않습니다. 이 문제가 발생하는 빈도는 sensillum 유형에 따라 달라집니다. L의 sensilla 가장 일관되게 응답하는 인해 자신의 길이에 접근하기가 비교적 쉽다. 일반적으로, S의 sensilla는 지속적으로 반응하지만, 자신의 짧은 길이와 labellum에 위치가 좋은 상대가 도전합니다. I는 제제의 각도에 따라,보다 용이하게 액세스 할 수 sensilla 있지만, 그들은 더 자주 응답이다. 주어진 비행 준비에, 나는이 sensilla의 큰 비율은 L 또는 S의 sensilla 이상 응답하지 않을 수 있습니다. 유전 적 배경뿐만 아니라 미 반응의 일관성에 영향을 미칠 수있다. 형질 전환 유전자가 GE에 영향을 미칠 것으로 추정하기 때문에 예를 들어, 일부 형질 전환 초파리는 야생형보다 일관된 응답을 표시...

맛의 감각은 벌레가 녹는 화학 물질의 광대 한 범위를 감지 할 수 있으며 영양 물질의 수용에 중요한 역할, 또는 유해 독성 하나의 거절을한다. 맛도 페로몬 1-5의 검출을 통해, 친구 선택에 역할을하는 것으로 생각된다. 이 중요하고 다양한 기능 감각 시스템은 환경 신호를 관련 행동 출력으로 변환하는 방법에 곤충 맛 시스템 조사의 강력한 대상 만들었습니다. 초파리의 맛 시스템의 기본 단위는 맛 머리, 또는 sensillum입니다. 분자는 팁 2,6에서 기공을 통해 sensillum을 입력합니다. Sensilla는 labellum, 다리, 날개 마진 및 인두 6에서 찾을 수 있습니다. labellum에서 sensilla의 수와 위치는 틀​​에 박힌됩니다. 길이 (L), 중간 (I), 짧은 (S : 세 가지 형태의 길이에 따라 sensilla의 클래스가 있습니다<html> ) 7,8 sensilla. 각 sensillum 두 (I 형) 또는 4 개 (L-및 S-타입) 미각 수용체 뉴런 (GRNs) 9 중 하나가 포함되어 있습니다. 다른 GRNs 맛 자극의 서로 다른 카테고리에 응답 쓴, 설탕, 소금, 삼투압 7,10 및 미각 수용체 8,11-13의 다른 하위 집합을 표현한다. 만 I과 S-타입 sensilla 쓴 응답 GRNs 8,10가 포함되어 있습니다. subesophageal 신경절 (SOG)과 맛의 분자에 의해 자신의 활성화에 GRNs 프로젝트는 행동 반응 6 결과, 디코딩을위한 높은 중추 신경계로 전달된다. 뉴런의 상대적으로 적은 수의 분자 및 행동 분석에 복종 할 의무가 초파리의 맛 시스템 일반적으로 미각 시스템의 조사를위한 훌륭한 모델을합니다. 시스템이 유전 적 돌연변이 또는 GAL4-UAS 발현 시스템을 통해 조작 될 수있는 상대적 용이성은 또한 유용한 도구 14,15로서 기능한다. 이러한 sensilla가 labellum의 표면으로부터 돌출되어 있기 때문에 &quot;ontent&gt; 이들은 전기 생리학에 대한 우수한 표적을 만든다. GRNs의 소성은 세포 외 기록을 사용하여 모니터링 할 수있다. 역사적 삽입 유리 전극을 사용하여 측벽 기록 방법, sensillum 신경 활성을 기록하는, (26)이 사용되었다. 그러나,이 방법을 실시 할 기술적 도전과 롱 각 제제로부터 대해 기록하는 것이 곤란하다. 전극과 뉴런의 응답을 측정 팁 기록 방법, 즉 동시에 tastant을 제공, 이후 선택 9,16의 방법이되고있다. 그것은 초파리 8,10,17,18의 맛 시스템뿐만 아니라 다른 곤충 종의 19 ~ 23의 숫자를 조사하기 위해 활용되고 있습니다. 그것은이 크게 보상하여 팁 기록 방법의 주요 단점 중 하나를 극복 tastePROBE 증폭기의 개발에 의해 촉진 된GRN의 활동 전위가 과도한 증폭 또는 필터링 (24)없이 기록 할 수 있도록 상기 기준 전극 및 곤충 sensillum간에 큰 전위차. 또 다른 중요한 발전은 기록 전해질 (25) 등 tricholine 구연산을 사용했다. TCC는 삼투압에 민감한 GRN에서 반응을 억제하고 25 분석 훨씬 쉽게 쓴 설탕 tastants에 의해 생성 된 응답을하고, 소금에 민감한 GRN를 자극하지 않습니다. 여기에서 우리는 초파리 labellar의 sensilla의 팁 녹화가 현재 칼슨 실험실에서 수행되는 방법에 대해 설명합니다. 이 프로토콜은 적절한 전기 생리학 방법 비행을 준비하는 장비, 방법과 맛 녹음을 수행하는 방법을 설정하는 방법에 대해 설명합니다. 이 작업을 사용하는 경우 우리는 또한 초파리 sensilla의 하위 집합뿐만 아니라, 몇 가지 일반적인 문제와 발생할 수있는 잠재적 인 솔루션에서 기록하여 얻은 몇 가지 대표적인 데이터를 제공기술.

<table><tbody><tr><td>스테레오 줌 현미경</td><td>Olympus</td><td>SZX12 DFPLFL1.6x PF 접안렌즈: WHN10x-H/22</td><td>긴 작동 거리로 ~150X 배율 가능 테이블 마운트 스탠드</td></tr><tr><td>방진 테이블</td><td>Kinetic Systems</td><td>BenchMate2210</td><td></td></tr><tr><td>Micromanipulators</td><td>Narishige</td><td>NMN-21</td><td></td></tr><tr><td>마그네틱 스탠드</td><td>ENCO</td><td>모델 #625-0930</td><td></td></tr><tr><td>참조 전극 홀더</td><td>Harvard Apparatus</td><td>ESP/W-F10N</td><td>확장된 범위를 위해 5ml 혈청학 피펫에 장착 가능</td></tr><tr><td>Silver Wire</td><td>World Precision Instruments</td><td>AGW1510</td><td>직경 0.3-0.5mm</td></tr><tr><td>레토르트 스탠드</td><td></td><td></td><td>일반</td></tr><tr><td>콘센트 플라스틱 튜브</td><td></td><td></td><td>일반, 직경 1cm</td></tr><tr><td>유연한 플라스틱 튜브</td><td>Nalgene</td><td>8000-0060</td><td>VI 등급 1/4 인치 내경&nbsp;</td></tr><tr><td>500 ml 원뿔형 플라스크</td><td></td><td></td><td>일반, 사이드 암 포함</td></tr><tr><td>수족관 펌프</td><td>수생 정원</td><td>에어 펌프 2000</td><td></td></tr><tr><td>광섬유 광원</td><td>Dolan-Jenner Industries</td><td>Fiber-Lite 2100</td><td></td></tr><tr><td>화이트 카드 / 종이</td><td>Whatman</td><td>1001-110</td><td></td></tr><tr><td>디지털 수집 시스템</td><td>Syntech</td><td>IDAC-4</td><td>대안 : National Instruments NI-6251 &nbsp;</td></tr><tr><td>헤드 스테이지</td><td>Syntech</td><td>DTP-1</td><td>Tasteprobe</td></tr><tr><td>Tasteprobe 증폭기</td><td>Syntech</td><td>DTP-1</td><td>Tasteprobe</td></tr><tr><td>악어 클립</td><td>Grainger</td><td>1XWN7</td><td>모든 브랜드는 괜찮습니다</td></tr><tr><td>절연 전선</td><td></td><td></td><td>일반</td></tr><tr><td>금 커넥터 핀</td><td>세계 정밀 기기</td><td>5482</td><td></td></tr><tr><td>개인용 컴퓨터</td><td>Dell</td><td>Vostro</td><td>디지털 수집 시스템 및 소프트웨어와의 호환성 확인</td></tr><tr>수집<td>소프트웨어</td><td>Syntech</td><td>Autospike</td><td>Autospike는 IDAC-4와 함께 작동합니다. 또는 NI-6251</td></tr><tr><td>알루미늄 호일 및/또는 패러데이 케이지</td><td></td><td></td><td></td></tr>와 함께 LabView를 사용하십시오. 전자기 노이즈 차폐 <tr><td>붕규산 유리 모세 모세 측정기</td><td>World Precision Instruments</td><td>1B100F-4</td><td></td></tr><tr><td>피펫 풀러</td><td>Sutter Instrument Company</td><td>모델 P-87 Flaming/Brown 마이크로피펫 풀러</td><td></td></tr><tr><td>Beadle 및 Ephrussi Ringer 솔루션</td><td></td><td></td><td>프로토콜 섹션의 레시피 참조</td></tr><tr><td>트리콜린 시트레이트, 65%&nbsp;</td><td>Sigma</td><td>T0252-100G</td><td></td></tr><tr><td>실체 현미경</td><td>Olympus</td><td>VMZ 1x-4x</td><td>10-40X 배율</td></tr><tr><td>가능 얼음 양동이</td><td></td><td></td><td>일반</td></tr><tr><td>p200 피펫 팁</td><td></td><td></td><td>일반</td></tr><tr><td>척추 바늘</td><td>Terumo</td><td>SN * 2590</td><td></td></tr><tr><td>1 ml 주사기</td><td>Beckton-Dickenson</td><td>301025</td><td></td></tr><tr><td>플라이 흡인기</td><td></td><td></td><td>P1000 피펫 팁, 유연한 플라스틱 튜빙 및 메쉬로 조립</td></tr><tr><td>모델링 클레이</td><td></td><td></td><td>일반</td></tr><tr><td>집게</td><td>파인 사이언스 도구 By Dumont</td><td>11252-00</td><td>#5SF (초미세 팁)</td></tr><tr><td>10 ml 주사기</td><td>Beckton-Dickinson</td><td>301029</td><td></td></tr><tr><td>플라스틱 튜빙</td><td>Tygon</td><td>R-3603</td><td></td></tr></tbody></table>

에서 전기 생리학 기록<em&gt; 초파리</em&gt; labellar는 sensilla 맛

Electrophysiological Recording From Drosophila Labellar Taste Sensilla

곤충의 주변 맛 응답 강력 전기 생리학 기술을 조사 할 수 있습니다. 여기에서 설명하는 방법은 연구자가 곤충 신경계는 환경에서 맛의 자극에서받는 감각 입력을 반영, 직접 정량적으로 미각 반응을 측정 할 수 있습니다. 이 프로토콜은이 기술을 수행하는 모든 주요 단계를 설명합니다. 등 필요한 장비 및 녹음에 적합한 환경의 선택과 같은 전기 생리학 장비를 조립에서 중요한 단계가 묘사되어있다. 우리는 또한 적절한 참조 및 기록 전극을 만들어 녹음을 준비하는 방법에 대해 설명하고, tastant 솔루션을 제공합니다. 우리는 상세히 코를 고정화하기 위해 플라이로 유리 기준 전극을 삽입하여 곤충의 제조에 사용되는 방법을 설명한다. 우리는 설탕과 쓴 화합물에 대한 응답으로 맛의 신경 세포에 의해 해고 전기 자극의 흔적을 보여줍니다. 프로토콜의 측면들은 t 아르으로 말하면 도전과 우리는 신호 또는 시스템의 과도한 소음의 부족, 그리고 잠재적 인 솔루션으로 발생할 수있는 몇 가지 일반적인 기술 과제의 광범위한 설명을 포함. 기술은 시간적으로 복잡한 자극을 전달 배달을 자극 직전에 발사 배경을 관찰하거나, 편리 불용성 맛 화합물을 사용할 수없는 등의 제한 사항이 있습니다. 이러한 한계에도 불구하고, (프로토콜에서 참조하는 약간의 변동 사항을 포함한다)이 기술은 화합물을 맛 초파리 신경 세포의 반응을 기록 광범위하게 허용 절차 표준입니다.

그림 (a)는 설탕, 자당 L의 sensillum의 반응을 보여줍니다. 같은 sensillum가 쓴 화합물에 반응하지 않는, 베르베린. 그림 (b)는 쓴 반응 신경 세포를 포함하는 I 형 sensillum는, 베르베린에 대한 응답으로 큰 진폭 스파이크, 자당에 대한 응답으로 작은 진폭 스파이크를 표시 것을 보여줍니다. 내가 TCC 사실상 응답 (그림 5)를 표시하지 sensilla 동안 L은, 용매 제어, TCC에 대한 최소한의 배경 응답을 표시 sensilla. labellar GRNs의 소금과 물을 반응에 대한 자세한 내용은 Hiroi 10을 참조하십시오. <img alt="그림 5" fo:content-width="5in" fo:src="/files/ftp_upload/51355/51355fig5...

이 프로토콜은 초파리에서 labellar 맛 뉴런에 의해 트리거되는 액션 잠재적 인 반응의 세포 녹음을 설명합니다.

에서 전기 생리학 기록<em&gt; 초파리</em&gt; Labellar는 Sensilla 맛

The peripheral taste response of insects can be powerfully investigated with electrophysiological techniques. The method described here allows the ...

본 절차의 전반적인 목표는 초파리 labum에 있는 개별 미각 감각기의 반응을 측정하는 것입니다. 이를 위해 먼저 전기생리학 장치를 구축하고 필요한 모든 장비를 설정합니다. 두 번째 단계는 기록을 위해 초파리를 준비하는 것입니다.다음으로, 뉴런 반응을 동시에 기록하면서 개별 lum을 미각 화합물로 자극합니다. 최종적으로, 개별 label silla에서의 전기생리학적 팁 기록을 통해 서로 다른 미각 화합물에 대한 taste illa의 반응을 보여줍니다. 초파리 표본 제작 단계는 기술적으로 까다롭고 습득하기 어려울 수 있으므로, 이 방법의 시각적 시연이 매우 중요합니다.이 절차에서는 잘 관리된 초파리 배양군에서 갓 우화한 ELOs 초파리를 수집합니다. 그 후, 기록 전까지 새로운 배양 바이알에서 5~10일 동안 노화시킵니다. 초파리를 준비하기 전, 현미경 플레이트를 얼음 위에서 15~30분 동안 냉각하십시오. 다음으로, 유리 참조 전극에 B 및 e 용액을 다시 채웁니다.그런 다음 해부 현미경으로 관찰하며 하단의 기포를 가볍게 두드려 제거합니다. 핀셋을 사용하여 팁의 작은 부분을 떼어냅니다. 이후 모세관 현상을 이용하여 조직과 함께 남아 있는 기포를 모두 뽑아냅니다.그 다음 B와 E가 채워진 기준 전극을 전극 홀더의 와이어 위로 밀어 넣고, 이후 공기 방울이 유입되지 않도록 주의하며 초파리 한 마리를 P 200 피펫 팁으로 흡입합니다. 이를 아이스 버킷에 넣고 30초에서 1분 동안 냉각합니다. 이어서 현미경 플레이트를 얼음에서 꺼내 습기를 닦아낸 후 현미경 아래에 배치합니다.그다음 파이펫 팁에 든 초파리를 저배율 현미경 아래의 현미경 플레이트 위로 조심스럽게 쳐서 옮깁니다. 한 쌍의 핀셋으로 초파리를 안정적으로 고정한 상태에서 다른 한 쌍의 핀셋을 사용하여 다리 4개를 제거합니다. 초파리의 배쪽이 바닥을 향하고 등쪽이 위를 향하도록 배치합니다.준비 과정 중에는 핀셋으로 라벨 빔(label beum)을 건드리지 않도록 주의하여 기계적 손상을 최소화하십시오. 한 쌍의 핀셋으로 초파리를 고정한 상태에서, 기준 전극을 가슴 후측 등면의 중앙선에 머리 방향으로 약 45도 각도로 삽입합니다. 그런 다음, 현미경 고배율에서 초파리가 잘 보이도록 모델링 클레이로 기준 전극 홀더를 고정합니다. 유리 전극의 넥(neck)과 헤드(head) 부분을 조작하여 각도를 맞춘 후, 두 쌍의 핀셋을 사용하여 초파리를 기준 전극 홀더 쪽으로 밀어

electrophysiological-recording-from-drosophila-labellar-taste-sensilla

Research

연구

JoVE Journal

Neuroscience

신경과학

여기 Drosophila의 유충의 신경근육학 교차점에서 시냅스 전송을 측정 electrophysiological 방법을 설명합니다. Evoked 릴리스는 모터 신경의 axons을 자극하여 인공적으로 시작되며, NMJ을 통해 전송은 근육에 evoked postsynaptic 반응에 의해 측정할 수 있습니다.

Drosophila의 애벌레의 NMJ에서 시냅틱 후보를 녹음 Electrophysiological 방법

에 Electrophysiological 녹음 Drosophila 엠브료

odorants에 후각 감각 뉴런의 Electrophysiological 반응은 단일 sensillum 레코딩을 사용하는 곤충에서 측정할 수 있습니다. 이 비디오를 문서에서 우리는 식초 파리의 안테나에서 단일 sensillum 레코딩을 수행하는 방법을 보여줍니다 것입니다...

곤충의 단일 Sensillum 레코딩 Drosophila melanogaster과 아노 펠 레스 gambiae</em

거대한 섬유 시스템은 성인의 간단한 회로의...

의 거대한 섬유 패스에서 Electrophysiological 레코딩 D. melanogaster</em

이 비디오는 움직이지 못하는 초파리의 눈에서 광수용체 활동의 전기생리학적 기록을 위한 프로토콜을 간략하게 설명하여 광 자극에 대한 반응으로 전압 변화를 정밀하게 측정할 수 있도록 합니다.

빛 자극에 대한 초파리 망막 광수용체의 전압 반응에 대한 전기생리학적 기록

이 비디오에서는 전기생리학 연구를 위해 살아있는 초파리 파리가 튜브에 장착되어 있습니다. 전극은 파리의 후각 수용체 뉴런과 함께 페로몬에 대한 특정 뉴런 반응을 기록하기 위해 감각의 기저부에 위치합니다.

휘발성 냄새 물질에 대한 반응으로 Drosophila Sensilla의 전기 생리학적 기록

초파리의 앞다리와 주둥이는 미각 감각 뉴런의 풍부한 레퍼토리를 포함하고 있습니다. 여기에서는 칼슘 이미징을 사용하여 미각 페로몬의 외인성 적용 시 살아있는 파리의 앞다리와 주둥이에 있는 감각 뉴런의 생리적 반응을 측정하는 방법을 제시합니다.

의 생리적 반응을 측정<em&gt; 초파리</em&gt; 라이브 칼슘 이미징을 사용하여 지질 페로몬에 감각 뉴런

이 프로토콜의 전반적인 목표는 장쇄 사상 페로몬에 반응하는 Drosophila 후각 수용체 뉴런으로부터 단일 감각 기록을위한 낮은 휘발성의 냄새 물질을 제시하는 방법을 입증하는 것입니다.

에서 전기 생리 학적 기록<em&gt; Drosophila</em&gt; 낮은 휘발성의 냄새에 반응하는 Trichoid Sensilla

이 프로토콜 비용 효율적이 고 편리한 약리학 대리인, 신경 단백질의 유전자 돌연변이의 테스트를 가능 하 게 초파리 melanogaster 중앙 신경 시스템의 하강 전기 활동을 기록 하는 방법을 설명 합니다. 또는 미개척된 생리 적인 통로의 역할입니다.

제 3-탈피 초파리 Melanogaster 의 중앙 신 경계 활동의 electrophysiological 녹음

드물게 사용되는 전기생리학적 기록 방법인 염기 기록은 기존의 기록 방법으로는 검사할 수 없는 맛 코딩의 특징을 분석할 수 있습니다. 또한 염기 기록을 통해 기존의 전기생리학적 방법으로는 연구할 수 없는 소수성 자극에 대한 맛 반응을 분석할 수 있습니다.

염기 기록: 초파리에서 미각 뉴런의 반응을 분석하는 기법

칼슘 이미징 접근법은 용액이 라벨에 적용되는 동안 깨어 있는 파리의 뇌에서 미각 유도 반응을 기록할 수 있습니다. Drosophila melanogaster 의 1차 미각 반응이 예로 사용되지만 이 프로토콜은 다운스트림 뉴런 또는 다른 종을 연구하는 데 적용할 수 있습니다.

생체 내 성체 초파리에서 미각 유도 신경 반응의 칼슘 이미징

학습하세요 Drosophila의 labellar 미각 감각소에서 활동전위를 기록하는 전기생리학 기술을. 이 방법은 미각 수용 메커니즘 연구와 신경과학 실험에 필수적인 시각적 가이드를 제공합니다.

에서 전기 생리학 기록

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