February 26th, 2014
이 프로토콜은 초파리에서 labellar 맛 뉴런에 의해 트리거되는 액션 잠재적 인 반응의 세포 녹음을 설명합니다.
이 절차의 전반적인 목표는 초파리의 소음순에서 개별 미각 감각의 반응을 측정하는 것입니다. 이를 위해서는 먼저 전기생리학 장비를 구축하고 필요한 모든 장비를 준비해야 합니다. 두 번째 단계는 녹음을 위해 플라이를 준비하는 것입니다.
다음으로, 개별 lum은 미각 화합물로 자극되는 동시에 신경 세포 반응이 기록됩니다. 궁극적으로, 개별 라벨 신라의 전기생리학적 팁 기록은 다양한 맛 화합물에 대한 미각 일라의 반응을 보여주는 데 사용됩니다. 플라이 준비 단계는 기술적으로 까다롭고 배우기 어려울 수 있으므로 이 방법을 시각적으로 시연하는 것이 중요합니다.
이 절차에서는 잘 관리된 파리 배양에서 새로운 ELO 파리를 수집합니다. 그런 다음 기록하기 전에 신선한 배양 바이알에서 5-10일 동안 숙성시키고, 파리 준비 전에 현미경 플레이트를 얼음에서 15-30분 동안 냉각합니다. 다음으로, 유리 기준 전극을 B 및 e 용액으로 되메웁니다.
그리고 해부 현미경 아래의 거품을 부드럽게 두드리십시오. 집게를 사용하여 팁의 작은 부분을 잘라냅니다. 그런 다음 모세관 작용을 사용하여 조직과 함께 남아 있는 기포를 끌어냅니다.
그런 다음 B 및 E로 채워진 기준 전극을 전극 홀더의 와이어 위로 밀어 넣고 그 후에 기포가 발생하지 않도록 주의하면서 P 200 피펫 팁에 플라이를 흡입합니다. 얼음 양동이에 넣고 30초에서 1분 동안 식힙니다. 그런 다음 얼음에서 현미경 플레이트를 제거하고 수분을 닦아낸 후 현미경 아래에 놓습니다.
그런 다음 피펫 팁의 파리를 저배율로 현미경 플레이트에 부드럽게 두드립니다. 한 쌍의 집게로 네 개의 다리를 제거하고 다른 한 쌍의 집게로 Forex를 안정적으로 잡습니다. 파리를 등쪽이 위를 향하도록 배쪽 쪽에 놓습니다.
기계적 손상을 최소화하기 위해 준비 과정에서 집게로 라벨 범벅을 만지지 않도록 항상 주의하고 한 쌍의 집게로 파리를 제자리에 고정하는 동안 머리 방향으로 약 45도의 뒤쪽 등쪽 흉부 정중선에 기준 전극을 삽입합니다. 그런 다음 고배율에서 현미경 아래에서 파리가 보이도록 모델링 점토로 기준 전극 홀더를 고정합니다. 유리 전극의 목과 머리에서 기동하고 각도를 조절하고 두 쌍의 집게를 사용하여 플라이를 기준 전극 홀더 쪽으로 밉니다.
이제 한 쌍의 집게로 주둥이를 부드럽게 펴고 전극 끝이 라벨 범 내부에 있고 주둥이가 완전히 확장될 때까지 플라이를 유리 기준 전극 아래로 더 밀어 넣습니다. 이 단계에서는 기준 전극 홀더를 에어 테이블에 장착된 마이크로 매니퓰레이터에 고정합니다. 라벨 labum의 한 로브를 현미경 시야에 배치하고 고배율로 가습된 기류와 일치시킵니다.
그런 다음 가습 기류 컴퓨터 디지털 수집 시스템 또는 DAS 및 증폭기를 켭니다. 그런 다음 주사기와 플라스틱 튜브를 사용하여 튜브를 통해 소량의 초순수를 10회 이상 끌어옵니다. 유리 기록 전극을 헹구려면 TAST로 기록 전극을 최소 5회 헹굽니다.
그런 다음 기록 전극을 맛으로 약 1/3에서 절반 정도 채우고 튜브에서 제거합니다. 기포가 있는 경우 탭하여 해제하거나 전극을 다시 채우십시오. 이제 전극을 헤드 스테이지의 은선에 빠르고 부드럽게 밀어 넣습니다.
단일 전송을 자극하기 위해 기포가 유입되는 것을 방지하려면 먼저 마이크로 매니퓰레이터를 사용하여 기록 전극을 관심 감지와 정렬합니다. 그런 다음 풋 페달을 눌러 증폭기의 획득 모드를 트리거합니다. 그런 다음 마이크로 매니퓰레이터의 미세 조절 손잡이로 맛과 채워진 녹음 전극을 센서 팁에 닿을 때까지 조심스럽게 전진시키고 녹음을 시작합니다.
1-2초 후에 전극을 제거합니다. 다른 illa로 절차를 다시 반복하고 동일한 lum에 대한 프레젠테이션 사이에 최소 1분 동안 기다립니다. 한 가지 맛으로 장기간 녹음하면 맛과 용액이 마르고 팁의 용액이 더 농축될 수 있습니다.
이는 유리 전극의 끝을 부드러운 종이로 부드럽게 접촉시켜 모세관 작용으로 소량의 액체를 제거하고 다른 맛에 대한 반응을 기록하고 헹구고 새로운 맛으로 기록 전극을 로드하고 절차를 반복함으로써 해결할 수 있습니다. 날짜, 유전자형 및 맛과 같은 식별 정보와 함께 데이터 파일을 주기적으로 저장합니다. 이 그림은 설탕 자당에 대한 centum의 반응을 보여줍니다.
동일한 centum은 쓴 화합물 베르베린에 반응하지 않으며, 이 그림은 쓴 반응성 뉴런을 포함하는 눈형 sens가 베르베린에 대한 반응으로 더 큰 진폭 스파이크를 나타내고 자당에 대한 반응으로 더 작은 진폭 스파이크를 표시함을 보여줍니다. 여기에 표시된 것은 대표적인 차선의 전기생리학적 결과입니다. 이 추적은 신호가 완전히 부족함을 나타냅니다.
이것은 외부 전기 소스의 50 또는 60 헤르츠 노이즈이며 이것은 확률 론적 노이즈입니다. 이 흔적은 메노 감각 뉴런이 단독으로 발화하는 동안 쓴 미각 수용 뉴런과 메노 감각 뉴런이 모두 발화하고 있음을 나타냅니다. 이 비디오를 시청한 후에는 Oph Atory Silla의 신경순 반응을 소음순에 기록하는 방법을 잘 이해하게 될 것입니다.
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이 프로토콜은 초파리의 입술 맛 뉴런에서의 활동 전위 반응을 측정하는 방법을 설명합니다. 이 절차는 전기 생리학 장치 설치와 개별 입술을 맛 화합물로 자극하면서 초파리를 기록을 위해 준비하는 것을 포함합니다.
Quantitative electrophysiological recording from Drosophila labellar taste sensilla enables direct measurement of neuronal responses to defined taste compounds, supporting mechanistic de-risking in early discovery. This approach provides high-resolution, stimulus-specific data critical for validating sensory targets and clarifying pathway function. The method's reproducibility and quantitative outputs position it as a foundational tool for target validation and assay development in sensory biology pipelines.
This electrophysiological method integrates at the interface of early discovery and lead identification, providing foundational data for both target validation and assay development.