Bio-layer Interferometry for Measuring Kinetics of Protein-protein Interactions and Allosteric Ligand Effects

Naman B. Shah; Thomas M. Duncan

doi:10.3791/51383

단백질 - 단백질 상호 작용 및 알로 스테 릭 리간드 효과의 속도론을 측정하는 바이오 층 간섭

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Chemistry

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Bio-layer Interferometry for Measuring Kinetics of Protein-protein Interactions and Allosteric Ligand Effects

단백질 - 단백질 상호 작용 및 알로 스테 릭 리간드 효과의 속도론을 측정하는 바이오 층 간섭

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13:57 min

February 18, 2014

DOI: 10.3791/51383-v

Naman B. Shah¹, Thomas M. Duncan¹

¹Department of Biochemistry and Molecular Biology,SUNY Upstate Medical University

Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.

여기에 프로토콜은 바이오 층 간섭과 단백질 - 단백질 상호 작용의 운동 분석을 설명합니다. 셀룰러 에너지 대사에 관여 F 형 ATP 합성 효소는, 세균에서의 ε 서브 유닛에 의해 억제 될 수있다. 우리는 ε의 억제 C-말단 도메인과 촉매 복합체의 상호 작용을 연구하는 바이오 층 간섭을 채택했다.

다음 실험의 전반적인 목표는 생물층 간섭계(BLI)를 사용하여 단백질의 동역학, 단백질 상호 작용 및 이러한 상호 작용에 대한 작은 리간드의 알로스테릭 효과를 측정하는 것입니다. 이는 특정 비오틴을 가진 단백질 중 하나를 준비하고 이를 연쇄상구균 표면에 고정시킴으로써 달성됩니다. Aden은 바이오센서를 병렬로 코팅했습니다.

두 번째 단계로, 센서 결합 단백질은 결합 파트너가 포함된 완충액에 노출되고 결합은 센서 표면의 광학 간섭에 미치는 영향에 의해 실시간으로 측정됩니다. 다음으로, 각 센서는 단백질의 실시간 해리를 측정하기 위해 결합 파트너 없이 버퍼로 전송됩니다. 단백질 복합체.

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