Name: 박층 크로마토 그래피 (TLC) 분판 및 식물 추출물의 생물학적 검정법은 항균 화합물을 확인하는 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2014-03-27T22:00:00.000+00:00
Duration: 12 min 4 s
Description: 배우세요 박층 크로마토그래피와 생물학적 검정법을 이용하여 적삼추출물의 항균 페놀 화합물을 확인하는 방법입니다. 이 기술은 반추동물 영양학 연구에서 항균 대사산물을 식별하는 데 활용됩니다.

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우리는 우리가이 연구를 위해 자신의 레드 클로버 플롯에서 샘플을 사용할 수 있도록 위해, 후반 박사 규범 테일러, 소속 공장과 켄터키 대학의 토양 과학을 감사합니다. 이 프로젝트는 미국 농무부에 의해 투자되었다.

1. 식물 추출물의 제조 <ol><li> 붉은 토끼풀의 이력서에서 페놀 화합물의 추출을 위해 케이건과 Flythe 10를 참조하십시오. Kenland. </li><li> 다른 식물에 다른 화합물을 추출하려면, (대부분이 설명되어 있습니다) 식물 또는 대사 산물 별 추출 방법에 대한 식물 화학적 인 분석 문학을 확인하거나 넓은으로 많은 화합물을 분리 등 Khurram 등. 7,8의 그와 같은 프로토콜을 찾습니다 극성의 범위. </li></ol> 2. 박층 판의 제조 <ol><li> 멀리 전개 영역에서 흡착 된 오염 물질을 이동시키기 위해, 하나 이상의 극성 중성 용매에서 개발하여 클린 TLC 플레이트. <ol><li> 흄 후드에서 충분히 세정액을 제조 (아세트산 에틸 - 메탄올 2:1 예 15-100 ㎖, V / V) TLC 현상 챔버의 바닥뿐만 아니라 TLC 플레이트의 하부 에지 세트 다루 챔버 내부. </li><li> 상업적를 사용cially 가능한 유리 TLC는 또는 호 덮인 파이렉스 비커 또는 보존 항아리 (뚜껑과 함께 사용할 수있는 다양한 사이즈) 챔버를 개발. </li><li> 알루미늄 또는 가능한 현상 실에 맞게 다양한 크기 (20cm × 옆 20 센티미터 작은)에 와서 플라스틱 백업 (유연한) 실리카 겔 접시, 가위로 잘라 사용합니다. (주의 :. 실리카는 흡입하면 흄 후드에서 작업 폐 손상 및 실리카에 피부의 기름을 얻고 피하기 위해 장갑 TLC 판을 처리 할 수​​ 있습니다.) </li><li> 챔버 벽에 기대어 상판과 함께, 챔버에 플레이트를 삽입합니다. 플레이트는 서로 접촉하지 않아야합니다. 챔버 커버하고 용매를 모세관 작용에 의해 플레이트를 이동 할 수 있습니다. </li><li> 용매 플레이트의 상단에 도달하면, 실에서 접시를 제거하고 용매가 증발 할 때까지 흄 후드 내에서 서있는 위치에 배열한다. </li><li> 불순물이 볼 아래에 노란색 밴드를 찾아 TLC 판의 위쪽에 마이그레이션 한 경우 확인빛, 또는 자외선에서 형광 밴드 (UV) 빛 (그림 2B에서 &quot;불순물 앞에&quot;또는 경우 참조). 플레이트의 대다수가 여전히 황색 기미가있는 경우, 세정 공정을 반복한다. </li><li> 챔버로부터 TLC 플레이트를 제거한 후, 용매를 버린다. 잔류 용매는 프로토콜 2 챔버를 사용하기 전에 완전히 증발 할 수 있습니다. </li><li> X 20cm 플레이트 20cm, 및 X 10cm 플레이트 7cm에 대한 5 분 실리카 16 화합물의 이동에 영향을 미칠 수있는 잔여 수분을 제거하고, 100 ° C에서 건조 오븐에서 똑바로 판 소품 (10 ~ 15 분 ). </li><li> 100 ° C의 건조 오븐을 사용할 수없는 경우, 낮은 온도 (60 ° C에서, 즉 40 분)에서 시간의 긴 기간 동안 열 접시. </li><li> 플레이트는 건조 후, 그들을 적재하기 전에 주위 온도로 냉각 할 수 있습니다. </li></ol></li></ol> 3. 추출 분리 챔버를 개발 준비 <oL&gt; <li> 약간 챔버 높이 아래의 필터 종이, 폭 약 절반 실 주변을 가위로 잘라 사용합니다. 이 논문은 따라서 분리 1의 재현성을 향상 챔버 벽을 용제 및 용제 증기와 실을 포화 그릴 심지 역할을합니다. </li><li> 흄 후드에서 용제 (이 연구 아세트산 에틸 - 메탄올 4:1 V / V 등)를 혼합한다. 챔버에 혼합 용매를 붓고 포함한다. 전체 심지가 용매에 젖어있을 때까지 챔버에 접시를 넣어, 챔버의 채도를 나타내는 기다립니다. </li></ol> 4. TLC 플레이트의로드 및 개발 <ol><li> 가볍게 연필로 원산지를 표시합니다. TLC 판 흡착제 부드럽고 쉽게 손상의 경우, 가장자리에 표시를합니다. 화합물은 TLC 플레이트 챔버 내로 삽입되는 현상 용제의 표면 위에 있어야한다. </li><li> 대신 혼탁의 농축 된 용액이 충분히 유기 용매 (여기서는 메탄올)에 추출 녹여서스펜션. </li><li> 플레이트의 측면에 1cm의 경계를 떠나 마이크로 리터 주사기 또는 모세관 마이크로 피펫 좁은 밴드로 부하 시료와 표준. 밴드 (흄 후드에서 플레이트를 패닝하거나로드 할 수 있습니다) 건조하도록 허용합니다. </li><li> 샘플의 큰 농도는 건조 밴드에 다시로드 샘플에 의해 플레이트, &quot;overspot&quot;에 필요한 경우. </li><li> 핀셋이나 집게로, 포화 TLC 챔버 내부 플레이트 (들)을 설정합니다. 이 때문에 복합 마이그레이션 경로를 변경, 접촉 지점에서 접시에 용매를 제공 할 수 있기 때문에 플레이트 심지를 만지지해야합니다. 실을 커버 플레이트를 개발하자. </li></ol> 5. 생물 검정을위한 플레이트의 제조 <ol><li> 용매 전면 판의 상단에 도달하기 전에 TLC 탱크에서 플레이트 (들)을 제거하고 연필로 용매 앞의 높이를 표시합니다. 흄 후드에서 플레이트를 건조 시키십시오. <ol><li> GE의 것과 동일한 TLC 챔버에 남아있는 TLC 판을 개발유지하는 경우 전체 하루 nerally 사용할 마감했다. 챔버 내의 용매의 양이 현저하게 감소하는 경우 TLC 챔버를위한 용매 혼합물을 개작. </li></ol></li><li> 플레이트는 건조 후, 가시 광선 또는 UV 빛의 밑에 밴드를 시각화하고, 연필로 밴드를 묘사. 램프는 254 nm의 (단파 UV) 및 365 nm의 (긴 파장의 UV) 모두에서 화합물을 검출 할 수있다 특히 휴대용 UV 램프와 볼 챔버, 편리합니다. 참고 :이 시점에서 또는 다음 단계 후, 접시 호일로 덮여 플라스틱 랩에 싸서 할 수 있으며, -20 ℃에 저장 최대 저장 시간은 화합물의 안정성에 따라 달라집니다. 실리카가 중립이 아니기 때문에, 일부 화합물은 TLC 판에있는 동안이 저하 될 수 있습니다. </li><li> 번호판을 사진이나립니다. <ol><li> 오버 헤드 UV 및 / 또는 표시 등 장착 가능한 경우 젤 photodocumentation 시스템을 사용합니다. </li><li> 상업적인 photodocumentation 시스템을 사용할 수없는 경우, 상자의 내부 사진 플레이트는 위스콘신, 어두운 종이 또는 천으로 줄 지어삼각대에 카메라를 고정 및 휴대용 자외선을 토륨 17 링 스탠드에 고정. 더 형광 표시가없는 번호판을 촬영할 때, 밴드 모양 (17)을 개선하기 위해 카메라 렌즈를 통해 푸른 빛을 필터를 사용합니다. </li></ol></li><li> , 밴드의 특징을 보조 화합물 및 용매 전면이 이동 거리를 측정하고, 후자 (도 2a)에 의해 전자를 분할함으로써 고정 계수 (R의 F) 값을 계산한다. </li></ol> 6. 균 배양 및 분석 <ol><li> 준비하고 혐기성 조건에서 미디어를 접종. 이 경우에 사용되는 문화는 제임스 B. 러셀, 코넬 대학교, 이타카, 뉴욕의 문화 컬렉션에서 얻은 클로스 트리 디움 sticklandii 변형 SR했다. <ol><li> Flythe 및 케이건 (13)와 HAB 미디어에 대한 설명 자료 목록을 참조하십시오. </li></ol></li><li> 지수 또는 정지 단계로 문화를 성장. 멸균 혐기성 techniqu을을 사용하여에스 혐기성 미생물로 작업 할 때. </li><li> 이하 60 ° C로 감소 한천 (V가 승 / 0.75 %)의 온도 후 용융 한천로 (1 % V / V) 문화를 접종 부드럽게 혼합 즉시 부어 (HAB 미디어의 95 % CO 2 5 %의 H 2 분위기) 혐기성 챔버로 가져옵니다. </li><li> 15mm X 100mm 플라스틱 배양 접시에 부어 응고 할 수 있습니다. </li><li> 가위, 관심 대역 (들)을 포함하는 영역으로 TLC 판을 잘라. 밴드 TLC 판에 원래의 위치를​​ 추적 할 판 뒷면에 밴드를 표시, 한천 플레이트에 얼굴을 아래로 놓습니다. 컨트롤로 한천 플레이트에 사용하지 않는 TLC 스트립을 놓습니다. </li><li> 한천 플레이트, 아래로 한천면, 혐기성 챔버 (24 시간, 39 ° C)를 품어. </li></ol> 7. Bioassayed 한천 플레이트의 시각화 <ol><li> 그들은 혐기성 챔버에있는 동안 집게로, 한천 플레이트에서 밴드를 제거합니다. </li><li> 1 %를 추가 (w / v)의 테물에서 제조 trazolium 빨강, 한천 플레이트의 표면 상에 적가 하였다. 제어 판은 혐기성 챔버에서 제거하기 전에 완전히 빨간색으로 바뀔 때까지 색상이 적어도 20 분 동안 개발, 또는 할 수 있습니다. 혐기성 박테리아는 즉시 혐기성 챔버에서 제거 후 생존 능력을 상실하기 시작합니다, 그러나 색깔 이상 24 시간 동안 안정하다. </li><li> 가시광 사진. </li></ol>

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이 프로토콜은 화합물의 하위 집합으로 추출물을 분리하고 접촉 bioautography에 의해 그 하위 집합을 시금위한 간단한 방법을 설명합니다. 이 방법은 임질을 일으키는 세균 억제 식물 대사에 대한 화면 Chomnawang 등. (15)에 의해 사용되는 것과 매우 유사합니다. 항균성 식물 화합물 화면으로 채용 bioautography의 분류는 시험 미생물 실험실 셋업 및 생물학적 검정을 수행하는 사람 (들)의 설정 등 여러 요인에 따라 달라진다. 접점 bioautography, 본 연구에 사용 된 방법은 접종 미디어 (12)에 확산시키는 화합물의 능력에 따라 비판되었다. 성장이 diffusate 아래의 한천에 발생하는 경우 낮은 농도의 화합물에 억제, 또는 미디어로 확산 거의 기능과의 영역이 검출되지 않을 수 있습니다. 또한, 하나의 밴드에 의해 생성 억제의 영역은 밴드의 초기 넘어 확산 할 수 있습니다경계, 따라서 아마도 인접 화합물 (14)에 의해...

식물에서 항균 화합물 시금 것은, 식물 추출물의 성분을 분리하는 이러한 구성 요소에 시험 미생물을 노출하고, 미생물의 성장은 임의의 화합물에 의해 억제되는지 여부를 결정할 필요하다. 많은 화합물은 평면상에서 분리 할 수​​ 있기 때문에 종이 또는 박층 크로마토 그래피 (T​​LC 또는 PC)에 의해 분리가 편리하다. 분리 일부 화합물은 흡착제 (PC의 경우는 셀룰로오스, 및 TLC의 경우 흡착제의 종류)에 긴밀하게 결합하고 다른 하나 미만 이주와 극성에 기초한다.도 1의 상대 위치의 예를 제공한다 실리카 TLC 판에 분리 후 극성과 비극성 페놀 화합물. <img alt="그림 1" fo:content-width="5in" fo:src="/files/ftp_upload/51411/51411fig1highres.jpg" src="/files/ftp_upload/51411/51411fig1.jpg" /> 그림 1. 실리카 박층 크로마토 그래피 (TLC) 접시에 분리 후 다른 극성의 화합물의 분포를 설명하는 다이어그램. 레드 클로버 (붉은 토끼풀 L.)의 페놀 화합물은 예로서 사용된다. 같은 clovamide 등의 극성 화합물은, 실리카와 같은 극성 흡착제에 대한 강한 친화력을 가지고 원점 (OR) 근처에 남아있는 동안 같은 용매 전면 근처의 세 가지 이소 플라본 (SF), 파티션보다 쉽게​​ 용매에 덜 극성 화합물, (물, 산, 또는 염기가 포함되지 않는 실리카보다 극성되는) 멀리 플레이트까지 이동한다. TLC 플레이트의 추출물을 분리 한 후, 시험 미생물 따라서이 추출물의 활성 성분의 식별을 가속화 접시에 모든 화합물에 노출 될 수있다. 곰팡이 나 세균의 문화 크로마토 그램에 노출되어있는 경우, 미생물의 성장은 성장 억제와 지역에 제외한 모든 발생합니다Y 화합물. 억제의 영역은 곰팡이가 3 적용된 경우 균사 생장과 성장없는 영역 사이의 대비를 관찰 또는 셀 4 살아있는 감소 또는 가수 분해 할 때 색상을 변경 화합물로 분사하여 시각화 할 수있다. 항균 분석 종이 또는 얇은 층 크로마토 그램의 사용이 처음 항생제 5 살균제 3,6에 적용되었지만, 식물 추출물은 이제 자주 자주 bioautography이라이 방법으로 항균 화합물에 대한 검사를하고 있습니다. 설명하는 프로토콜은 여기에 박층 크로마토 그램의 bioautography에 적용됩니다. 비교적 신속하고 상이한 흡착제 (예 : 실리카, 전분, 알루미나)뿐만 아니라, 좋은 해상도와 감도를 제공하는 일에 수행 될 수 있기 때문에 TLC가 널리 사용된다. 식물 추출물은 여러 가지 방법으로 TLC를 위해 제조 될 수있다. 일반적인 방법은 ALC에서 추출 식물 물질을 포함그러한 가능성이 산 또는 염기의 첨가 15 80 % 에탄올 7,8 등 ohol - 물 혼합물을 포함한다. 그들은 최소한의 볼륨에 TLC 판에 적용 할 수 있도록 물을 포함 할 가능성이 산성 또는 염기성이다 이러한 용매에서 추출 후, 추출물을 집중해야합니다. 알코올 - 물 추출물의 농도는 물 - 비혼 화성 유기 용매 에이트 또는 에틸 아세테이트 - 에틸 에테르 (1:1, V / V) 10, 11와 같은 용매의 혼합물로 분할함으로써 달성 될 수있다. 다른 식물 대사는 극성에 따라 다른 유기 용매로 추출된다. 그 식물 유기 산 또는 염기가이 단계에서 유기 용매로 추출되도록하기 위해, 알코올, 물 추출물의 pH가 발생하거나 다음 그들의 nondissociated 형태로 해리 분석을 변환하는 수용성 산 또는 염기로 낮출 수있다 중립 유기 용제 9에있는 가용. 유기상은 E 일 수있다감압 하에서 또는 질소 하에서 vaporated 및 TLC의 원하는 볼륨으로 조정. 추출물의 pH는 중성 용매, 작은 최종 부피 및 분리하기 전에 TLC 판에 추출물의 증발에 분석의 분할에 의한 생물 검정 미생물에 치명적인 수 없을 수도 있습니다. 곰팡이와 세균은 모두 2 추출물 식물의 bioautography에서 시험 미생물로 사용된다. 영양소 솔루션의 판에 분사하고 몇 일 3 축축한 환경에서 배양하면 같은 클라도 스포의 cucumerinum 일부 곰팡이의 포자는, (떨어져 억제 화합물과 지역에서) TLC 판에 발아. C.의 어두운 균사체 noninhibitory 영역에 cucumerinum은 균사 생장의 자유 지역에 날카로운 대조를 제공합니다. 박테리아가 동일하게하여 4,12에서 박층 크로마토 그래피 (TLC) 플레이트에 적용되었지만, 세균도 TLC 위에 부었다한천 플레이트 표면은 13, 14를 오버레이. 예 칸디다 알비 칸스 등 효모뿐만 14 한천 오버레이에 적용 할 수있다. 또한, TLC 판은 박테리아 10,15 또는 효모 8, 연락처 bioautography 2로 알려진 방법으로 접종 한천에 내려 얼굴을 배치 할 수 있습니다. 우리는 레드 클로버 (붉은 토끼풀의 이력서. Kenland)에서 항균 페놀 화합물에 대한 화면으로 접촉 bioautography하는 방법을 설명합니다. 시험 미생물은 클로스 트리 디움 sticklandii, 반추위 하이퍼 암모니아를 생산하는 세균 (HAB) 및 혐기성을 의무입니다. 사용되는 분리 추출 할 모든 구성 요소가 해결되지 않지만, 그들은 것이 가능 항균 화합물의 풀을 축소, 항균 활성의 영역의 식별을 용이하게한다. 이 프로토콜은 TLC 1 표준 절차를 사용합니다. 이 프로토콜은 또한 배양 obli에 필요한 기술에 대해 설명이러한 분석을위한 게이트 혐기성 균, 살아있는 세포 2,4 얼룩 테트라 졸 소금, 연락처 bioautography (15)와 시각화 방법의 사용.

<table><tbody><tr><td>실리카 F254 TLC 플레이트, 알루미늄 백, 0.2 mm 두께, 20 cm x 20 cm</td><td>EMD 화학물질</td><td>5554/7</td><td>이 플레이트는 254 nm에서 형광 지시자를 포함하는 실리카로 코팅되어 있습니다. 해당 파장에서 흡수하는 화합물은 형광 녹색 배경에서 어둡게 보입니다.&nbsp; 대체 소스로는 Analtech, Selecto Scientific, Fluka가 있습니다.&nbsp; 실리카 이외의 흡착제가 필요할 수 있습니다.&nbsp; 사용하는 용제에 따라 플라스틱 뒷면 플레이트가 적합할 수 있습니다.&nbsp;</td></tr><tr><td>날카롭고 튼튼한 가위&nbsp;</td><td>Fiskars 175800-1002와 유사한</td> <td>모든 봉제 공급 회사</td><td>TLC 플레이트 절단용.&nbsp; 날카로운 칼날이 있는 종이 커터도 사용할 수 있습니다.&nbsp; 실리카 가루를 흡입하지 마십시오.</td></tr><tr><td>100°C에서 건조 오븐; C (기계적 대류)</td><td>Thermo Scientific</td><td>PR305225M</td><td>Quincy Lab, Inc, Chicago, IL (www.quincylab.com); Cascade Technical Sciences, Hillsboro, OR (www.cascadetek.com)</td></tr><tr><td>TLC 챔버</td><td>Kimble Chase</td><td>416180-0000</td><td>대체 출처:&nbsp; 알드리치. 파이렉스 비커 또는 보존 용기는 작은 접시(예: 5cm x 10cm)에 사용할 수 있습니다.&nbsp; 알루미늄 호일로 덮으십시오 (항아리 뚜껑에는 솔벤트 증기로 추출 할 수있는 물질이 포함될 수 있음).</td></tr><tr><td>50 &마이크로; l 편평한 바늘 끝이 있는 주사기</td><td>Hamilton</td><td>80965</td><td>5-10을 초과하는 표준 또는 샘플의 적재량을 위해 &마이크로;l.&nbsp; 대체 소스는 동일합니다.</td></tr><tr><td>마이크로피펫</td><td>Drummond</td><td>2-000-001</td><td>소량의 표준 또는 샘플을 로드하는 데 사용됩니다.&nbsp; 대체 출처:&nbsp; 폭스바겐.&nbsp; 또한 파스퇴르 피펫은 부탄 토치를 사용하여 더 얇은 직경으로 늘릴 수 있습니다. &nbsp;</td></tr><tr><td>여과지 (#1 등급)</td><td>Whatman</td><td>1001 917</td><td>챔버 심지 역할을 합니다.&nbsp; 다른 등급의 여과지는 괜찮습니다.&nbsp; 이 크기는 20cm x 20cm 플레이트를 수용하는 챔버에 맞게 트리밍할 수 있습니다. &nbsp; &nbsp; &nbsp;</td></tr><tr><td>비커 집게</td><td>Fisher Scientific</td><td>15-186</td><td>대형 TLC 챔버에 플레이트를 넣거나 빼는 데 사용됩니다.&nbsp; 대체 출처: VWR&nbsp;</td></tr><tr><td>플랫 에지 집게</td><td>Fisher Scientific</td><td>10-275</td><td>작은 챔버에 플레이트를 넣고 뺄 수 있습니다. 대체 소스: VWR </td></tr><tr><td>단파 및 장파 UV 조명용 4W 또는 6W 전구가 있는 소형 휴대용 UV 램프(각각 254 및 365nm)</td><td>자외선 제품</td><td>95-0271-01</td><td>대체 소스: Spectronics Corporation(www.spectroline.net)</td></tr><tr><td>휴대용 UV 램프와 함께 사용하기 위한 보기 캐비닛</td><td>자외선 제품</td><td>Chromato-Vue C-10E</td><td>UV 활성 밴드는 플레이트를 여기에 설정할 수 있는 경우 더 쉽게 원을 그릴 수 있습니다.&nbsp; 대체 출처: Spectronics Corporation.&nbsp;</td></tr><tr><td>오버헤드 UV 램프와 가시 램프가 있는 사진 문서화 시스템</td><td>Kodak</td><td>Gel Logic 200</td><td>&nbsp; 대체 출처: 자외선 제품(www.uvp.com).&nbsp; 홈메이드 대안에 대한 프로토콜을 참조하십시오.</td></tr><tr><td>혐기성 챔버, 타입 A, 비닐</td><td>코이</td><td>7150000</td><td>이 챔버는 설명된 바와 같이 Clostridium sticklandii와 같은 혐기성 박테리아에 적합합니다. &nbsp; 그러나 성장 조건은 분석에 사용된 유기체에 맞게 조정되어야 합니다.&nbsp; 생물 안전 캐비닛 및 기타 예방 조치는 병원성 유기체를 사용하는 경우 취해야 합니다. 대체 소스: Anaerobe Systems, BioRad, Plas Labs, 기타&nbsp;</td></tr><tr><td>테트라졸륨 레드</td><td>시그마-알드리치</td><td>T8877</td><td>대체 공급원: MP Biomedicals, Santa Cruz Biotechnology, Alfa Aesar</td></tr><tr><td colspan="4">Ingredients for HAB media</td></tr><tr><td>Pyridoxamine &middot; 2HCl</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P9380</td><td>이 시약과 이 표의 다른 모든 시약에 대해 대체 공급원은 동일합니다.</td></tr><tr><td>리보플라빈</td><td>시그마-알드리치</td><td>R4500</td><td></td></tr><tr><td>티아민 HCl</td><td>시그마-알드리치</td><td>T3902</td><td></td></tr><tr><td>니코틴아미드</td><td>시그마-알드리치</td><td>N3376</td><td></td></tr><tr><td>칼슘 D-판토텐산</td><td>시그마-알드리치</td><td>C8731</td><td></td></tr><tr><td>리포산&nbsp;</td><td>시그마-알드리치</td><td>T5625</td><td></td></tr><tr><td>p-아미노벤조산&nbsp;</td><td>시그마-알드리치</td><td>A9878</td><td></td></tr><tr><td>엽산</td><td>시그마-알드리치</td><td>F8798</td><td></td></tr><tr><td>비오틴</td><td>시그마-알드리치</td><td>B4639</td><td></td></tr><tr><td>코발라민&nbsp;</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>C3607</td><td></td></tr><tr><td>피리독살 HCl</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P9130</td><td></td></tr><tr><td>피리독신</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P5669</td><td></td></tr><tr><td>EDTA</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>E6758</td><td></td></tr><tr><td>황산철 &middot; 7H2O</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>F8263</td><td></td></tr><tr><td>황산아연&middot; 7H2O</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>Z0251</td><td></td></tr><tr><td>염화망간 &middot; 4H2O</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>M8054</td><td></td></tr><tr><td>붕산</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>B6768</td><td></td></tr><tr><td>염화 코발트 &middot; 6H2O</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>C8661</td><td></td></tr><tr><td>염화구리 &middot; 2H2O</td><td>Sigma-Aldrich</td><td></td><td></td>459097</tr><tr><td>니켈 클로라이드 &미드 도트; 6H2O</td><td>시그마-알드리치</td><td>203866</td><td></td></tr><tr><td>몰리브덴산나트륨 &미드도트; 2H2O</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>331058</td><td></td></tr><tr><td>Trypticase (카제인의 췌장 분해물)</td><td>Thermo Fisher</td><td>B11921</td><td></td></tr><tr><td>인산칼륨 일염기성 무수</td><td>Thermo Fisher</td><td>P284</td><td></td></tr><tr><td>탄산나트륨 &middot; H2O&nbsp;</td><td>Thermo Fisher</td><td>S636</td><td></td></tr><tr><td>Agar</td><td>Thermo Fisher</td><td>50841063</td><td></td></tr><tr><td>마그네슘 설페이트 &middot; 6H2O</td><td>Thermo Fisher</td><td>7791-18-6</td><td></td></tr><tr><td>염화칼슘 &middot; 2H2O</td><td>Thermo Fisher</td><td>BP510</td><td></td></tr><tr><td>Cysteine HCl</td><td>Thermo Fisher</td><td>19464780</td><td></td></tr><tr><td>칼륨 인산염 이염기성 무수</td><td>Thermo Fisher</td><td>P290</td><td></td></tr><tr><td>염화나트륨</td><td>Thermo Fisher</td><td>BP358</td><td></td></tr></tbody></table>

박층 크로마토 그래피 (t​​lc) 분판 및 식물 추출물의 생물학적 검정법은 항균 화합물을 확인하는

Thin-layer Chromatographic (TLC) Separations and Bioassays of Plant Extracts to Identify Antimicrobial Compounds

식물 항균 화합물의 일반적인 화면 (예를 들어 곰팡이 또는 세균 국물이나 한천), 미생물에 대한 시간이 성장 할 수 있도록 미생물 현탁액에 크로마토 그램을 노출, 종이 또는 얇은 층 크로마토 그래피 (PC 또는 TLC)에 의해 식물 추출물을 분리 구성 다습 한 환경, 알 수없는 미생물의 성장 영역을 시각화. bioautography로 알려진이 검사 방법의 효과는, 크로마토 그래피 분리의 품질과 미생물의 배양 조건과 함께 찍은 치료 모두에 따라 달라집니다. 이 논문은 산 발효 세균을 아미노산하는 새로운 응용 프로그램과 TLC와 접촉 bioautography을위한 표준 프로토콜을 설명합니다. 추출물은 유연한 (알루미늄 백업) 실리카 TLC 판에서 분리하고, 밴드는 자외선 (UV) 빛 아래에서 시각입니다. 영역은 시험 미생물을 접종 한천에 잘라 얼굴을 배양하고 있습니다. 억제 밴드는 한천 플레이트를 염색하여 시각화의와 테트라 졸 레드. 이 방법은 레드 클로버의 분리 (붉은 토끼풀의 이력서. Kenland) 페놀 화합물 및 클로스 트리 디움 sticklandii, 소의 반추위에 네이티브 하이퍼 암모니아를 생산하는 세균 (HAB)에 대한 활동에 대한 자신의 심사에 적용됩니다. TLC 방법은 (호기성 또는 혐기성)뿐만 아니라 진균 식물 추출물 및 다른 세균 종의 많은 유형에 적용되는 배양 조건은 종의 성장 요건에 맞도록 수정하는 경우, 시험 유기체로서 사용될 수있다.

레드 클로버 (붉은 토끼풀의 이력서. Kenland) 추출물, 페놀 화합물을 함유, 대표 실리카 TLC 분리는 그림 2에 나타내었다. 에틸 아세테이트 - 헥산에서 레드 클로버 추출물의 분리 (9:1, V / V), 8.5 cm 이상은 5 밴드, 불완전 원점에서 해결 한 (그림 2A)로 만들었습니다. 그러나,도 2b는 레드 클로버 추출물 (같은 품종에서,하지만, 같은 농장에서 별도의 플롯에서 재배)의 다른 샘플이 더 먼 거리를 통해 분리 (15cm 대신 때 두 배 정도 많은 밴드가 발표 된 것을 보여줍니다 8.5 CM) 및 다른 용매 시스템에서 두 개의 연속적인 발전과 함께. 도 2B의 크로마토 그램은 (9:1, V / V), 후 건조시키고, 아세트산 에틸 - 메탄올 분리 아세트산 에틸 - 헥산으로 처음 개발 하였다 (78:22, V / V). 이러한 결과는 보여 솔벤트 시스템 (또는 용매의 ...

방법은 식물 추출물의 박층 크로마토 그래피 (T​​LC) 분리 및 항균 대사 물질을 식별하는 접촉 bioautography에 대해 설명합니다. 방법은 소의 반추위 네이티브 하이퍼 암모니아를 생산하는 박테리아 (HAB)를 억제 레드 클로버 페놀 화합물의 심사에 적용됩니다.

박층 크로마토 그래피 (T​​LC) 분판 및 식물 추출물의 생물학적 검정법은 항균 화합물을 확인하는

A common screen for plant antimicrobial compounds consists of separating plant extracts by paper or thin-layer chromatography (PC or TLC), exposing the ...

이 실험 절차의 전반적인 목표는 혐기성 박테리아에 대해 항균 활성을 가진 식물 대사산물을 식별하는 것입니다. 이는 먼저 박층 크로마토그래피(TLC)를 통해 식물 추출물을 분리함으로써 수행됩니다. 그다음, 크로마토그램을 하나 이상의 화합물이 포함된 구역으로 절단합니다.그 다음 이 구역들을 혐기성 박테리아가 접종된 한천 배지에 올리고 배양합니다. 배양 후, 구역들을 제거하고 플레이트를 염색하여 박테리아 성장을 억제하는 화합물을 식별합니다. 결과 데이터는 항균 작용을 하는 식물 대사산물의 존재 여부를 나타냅니다.이 방법은 특정 미생물의 영양소 이용에 식물 이차 대사산물이 미치는 영향과 같은 반추동물 영양학 분야의 핵심 질문에 답하는 데 도움이 될 수 있습니다. 이 방법은 반추위 박테리아를 억제하는 식물 화합물을 밝혀내지만, 다른 박테리아나 곰팡이를 억제하는 화합물을 밝혀내는 데에도 적용할 수 있습니다.본 프로토콜에서는 레드 클로버의 페놀 화합물을 사용하여 접촉 생물학적 분석법(contact biography)을 통한 항균 화합물의 식별 방법을 시연합니다. 먼저 흄 후드 내에서 박층 크로마토그래피 또는 TLC 플레이트를 세척하는 것부터 시작하십시오. TLC 전개 챔버의 바닥면과 TLC 플레이트의 하단 가장이를 충분히 덮을 수 있을 만큼의 세척 용매를 준비하십시오.챔버 내부를 설정한 후, 에틸 아세테이트와 메탄올을 2:1 비율로 혼합하여 준비합니다. 다음으로, 장갑을 착용하고 흄 후드 내에서 작업하십시오. 가위를 사용하여 알루미늄 또는 플라스틱 배면의 유연한 실리카 플레이트를 전개 챔버 크기에 맞게 자릅니다.플레이트의 윗부분이 챔버 벽면에 기대도록 하여 챔버 안에 넣습니다. 이때 플레이트끼리 서로 닿지 않아야 합니다. 챔버의 뚜껑을 덮고 모세관 현상에 의해 용매가 플레이트를 따라 올라가게 합니다.용매가 플레이트 상단에 도달하면, 챔버에서 플레이트를 꺼내 용매가 증발할 때까지 흄 후드 내에 세워 둡니다. 플레이트가 마르면, TLC 플레이트 상단 부근으로 불순물이 이동했는지 확인합니다. 불순물은 가시광선 아래에서는 노란색 띠로, 자외선 아래에서는 형광 띠로 나타납니다.플레이트의 대부분에 여전히 노란색 색조가 남아 있다면, 동일한 용매를 사용하여 동일한 TLC 챔버에서 세척 과정을 반복하십시오. 챔버에서 TLC 플레이트를 꺼낸 후, 용매를 버리십시오. 프로토콜의 다음 단계를 위해 챔버를 사용하기 전, 잔류 용매가 완전히 증발

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Research

연구

JoVE Journal

Chemistry

화학

극지 지질 추출물의 조성과 개별 glycerolipids의 지방산 조성은 간단하고 강력한 지질 프로파일 실험에서 결정됩니다. 이를 위해 glycerolipids는 얇은 층 크로마 토그래피에 의해 격리되고 그들의 아실 그룹의 transmethylation를 받게. 지방산 아실 methylesters는 기체 - 액체 크로마 토그래피에 의해 계량입니다.

씬 크로마 토그래피 (TLC)에 의해 Arabidopsis thaliana 폴라 Glycerolipid의 프로파일은 기체 - 액체 크로마 토그래피 (GLC)와 결합

천연 제품은 신약 및 치료제 개발을 위한 유망한 출발점을 나타냅니다. 그러나, 높은 화학 다양성으로 인해, 식물에서 새로운 치료 화합물을 찾는 것은 도전적이고 시간이 많이 소요되는 작업입니다. 우리는 식물 추출물과 분획에서 항균 및 항바이오필름 분자를 식별하는 단순화된 접근법을 설명합니다.

식물의 추출물과 분획에서 새로운 항균 및 항바이오필름 분자를 식별하여 치과 용 충치를 방지하기 위한 체계적인 접근법

본 프로토콜은 청색 LED 조명 기술을 사용하여 TLC 플레이트 상의 화합물의 수율을 추정하는 방법을 개발하였다. 이 접근법의 장점은 안전하고 효과적이며 저렴하며 연구원이 여러 샘플을 동시에 측정 할 수 있다는 것입니다.

청색 LED 조명 기술을 통한 TLC 플레이트의 화합물 수율 추정

병원균 Sclerotinia sclerotiorum 및 생물 살충 Bacillus isolates 를 모델 시스템으로 사용하여 진균 병원체에 대한 길항 작용을 나타내는 미생물 천연 제품을 식별하기 위해 박층 크로마토그래피, 직접 생체 자폐 분석 분석 및 액체 크로마토그래피-질량 분석법을 사용하는 방법을 설명합니다.

박층 크로마토그래피에 의한 생물제어를 위한 천연물의 생물학적 분석 유도 식별-직접 생체 자폐 촬영

이 연구는 고성능 액체 크로마토그래피와 삼중 사중극 질량분석법(HPLC-QQQ-MS) 방법을 결합하여 Anisodus tanguticus 내 트로판 알칼로이드(히오시아민, 아니소다민, 스코폴라민)를 식별하고 정량하는 방법을 개발했습니다. 이 방법은 약용 식물의 고처리량 분석에 있어 신속하고 정확하며 신뢰할 수 있음이 입증되었습니다.

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박층 크로마토 그래피 (T​​LC) 분판 및 식물 추출물의 생물학적 검정법은 항균 화합물을 확인하는

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