Name: 이소성 마우스 심장 장기 이식에 대한 수정 방법 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2014-06-23T19:00:00.000+00:00
Duration: 11 min 29 s
Description: 학습하세요 마우스 이소성 심장 이식의 미세수술 기법으로, 냉 생리식염수 보존과 혈관 문합술을 포함합니다. 이 방법은 이식 거부 반응 메커니즘 연구에 필수적인 모델을 제공합니다.

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이 작품은 Microsearch 호주의 재단, 및 Myee 코드 링턴 의학 연구 재단에 의해, 호주 프로젝트 그랜트 1,029,205의 국립 보건 의학 연구위원회 (NHMRC)에 의해 지원되었다.

이전 실험의 시작에, 계획 한 실험에 대한 관련 기관의 동물 관리 윤리위원회의 승인을 얻을 수 있습니다. 교육 기관의 요구 사항에 따라 쥐를 유지한다. 다음 프로토콜은 시드니 대학과 로얄 프린스 알프레드 병원위원회에 의해 승인되었습니다. 이전에 수술을 시작으로, 모든 장비는 철저하게 청소해야하고 80 % 에탄올에 담가 살균. 일부 기관은 그러나이 장기간에 걸쳐 미세 미세 수술 장비를 손상시킬 수있는 고압 증기 멸균을 규정. 가능하면 사용 멸균 일회용 장비. 1. 마취 <ol><li> 밀폐 된 용기에 이소 플루 란으로 마우스를 마취 한 후 신속하게 마취 코 콘을 연결, 운영 칠판에 부정사 배치합니다. 더 반사가 없도록하기 위해 뒷발을 곤란하게하여 마취의 시험 적정성. </li><li> 수술 칼날로 피부를 면도80 % 에탄올로 소독. 또, 70 % 이소 프로필 알코올 2 % 클로르헥시딘 피부 소독을 위해 사용될 수있다. 마취 유도시 이소 플루 란 농도는 3 %이지만, 유지 보수를 위해 1.5 %에이를 줄일 수 있습니다. 일반 호흡과 심장 박동을 유지하기 위해이 농도에 약간의 조정을합니다. 가열 패드에 동물의 온도를 유지한다. </li></ol> 2. 기부자 운영 <ol><li> 가슴 벽의 플랩을 형성하는 흉부의 검상 부부의 수준에서 가로 컷 다음에 겨드랑이에 리브의 가장자리에서 흉곽의 양쪽을 통해 가슴을 절단하여 심장과 혈관을 노출하는 개흉술을 확인합니다. 머리 옆이 플랩을 올리고 운영 보드에 핀. 심장과 혈관을 노출 심낭을 벗겨. </li><li> 한 손과 IVC를 통해 마음에 다른 주사 1 ㎖ 차가운 헤파린 식염수 근위부와 집게로 하대 정맥을 들어 올린 다음 예방과하는 IVC에 작은 동맥 클램프를 넣어다시 바늘 구멍을 통해 관류 액의 T 흐름. </li><li> 거즈와 면봉을 사용하여, 상행 대동맥과 폐동맥을 노출 아래로 마음을 철회. 대동맥과 폐동맥의 번들 채널 (가로 동) 후부를 통해 microscissors 한 쌍 중 하나 블레이드를 전달하고 문합에 충분한 길이를 확보하기까지 원심 가능한 한 함께 대동맥과 폐동맥을 절단. </li><li> 넥타이와 IVC 오른쪽 우수한 대정 맥 (SVC)에 나누어은 6-0 실크 실을 사용하여 SVC 및 폐 혈관을 떠났다. 별도로 IVC 오른쪽 SVC를 연결 한 후 폐 혈관과 함께 왼쪽 SVC를 둘러싸고을 묶어 심장에 단일 스레드의 후방 배치합니다. 이식 될 때까지 4 ° C에서 저온 멸균 식염수에 보관 한 후, 관계에 말초 혈관을 절단하여 기증자 사이트에서 마음을 수확. 이 일어난 과다 출혈로 기증자의 사망을 초래한다. </li></ol> 3.받는 작업 <ol><li> 마취(섹션 1) 상기와받는 사람. 조심스럽게 견인기를 형성하기 위해 절곡 흉부의 검상 부부와 종이 클립을 사용하여 철회 치골의 중간 선 절개 개복술을 한 후, 자극을 방지하기 위해 복부를 면도. 따뜻한 멸균 식염수 적신 거즈로 장을 감싸고 복부의 오른쪽 상단에 철회. </li><li> 인프라 신장 대동맥과 IVC를 노출하려면 소작 장치를 사용하여 허리 혈관에서 그들을 나누어 장골 분기에 왼쪽 신장 동맥과 정맥에서 대동맥과 IVC의 번들 세그먼트를 무료. 소작 정확한 온도와 용기의 끝을 분할하고 밀봉 할 수있는 충분한 시간을 사용하는 것을주의하십시오. </li><li> 대동맥 및 원심과 근위 IVC 세그먼트에 작은 atraumatic 혈관 클램프를 적용합니다. 제 30 G 바늘 구멍을 천공하여 대동맥의 전방 벽에 절개를; 다음 기증자의 대동맥의 크기에 맞게 microscissors 수직으로 절개를 잘라. 모든 BL을 제거하기 위해 헤파린 식염수로 대동맥 루멘을 세척짐 우드 혈전. </li><li> 차가운 식염수에 적신 거즈로 덮여받는 사이트에 기증자의 심장을 가지고 복부의 오른쪽에 놓습니다. 기증자의 대동맥이받는 사람의 대동맥과 다음받는 사람 IVC에 위치 기증자의 폐 동맥에 다음 절개 부위에 위치되어 있는지 확인합니다. </li><li> 동물이 180 °를 회전 무대되는 말단 구석을 도달 할 때까지 첫 번째 왼쪽에 인접 코너와 봉합부터 10-0 나일론 봉합사를 실행하여받는 사람의 대동맥에 기증자의 대동맥 엔드 - 투 - 측면을 Anastomose. 부드럽게 대동맥 우측을 노출하고 기단부에 말단에서 대동맥 벽의 우측을 통해 봉합을 계속 복부 좌측 공여체 심장을 이동. 대동맥 문합을 닫기 전에, 온화하게 어떤 응고 및 공기를 제거하기 위해 헤파린 식염수로 루멘을 세척하십시오. </li><li> 받는 사람 IVC와 기증자 폐동맥 (PA) 엔드 - 투 - 측면을 Anastomose. 절개 버전을학적으로 동맥 문합에 따라 사이트의 IVC의 전면 벽에 microscissors와. IVC의 루멘 내에서 좌측 벽의 선단부터 10-0 나일론 봉합사를 실행하여 수신자 IVC에 도너 PA를 Anastomose. 근위 끝에 도달 한 후 문합을 완료 말단부까지 전면 오른쪽 벽을 따라 봉합을 계속합니다. 문합을 닫기 전에, 온화하게 어떤 혈전과 공기를 제거하기 위해 루멘을 세척하십시오. </li><li> 지혈이 될 때까지면 주걱 혈관 클램프, 문합 사이트의 주위에 Gelfoam 대신 조각 및 적용 부드러운 압력을 해제하기 전에. 재관류시에, 근위 클램프이어서 제 원위 클램프를 해제. </li><li> 재관류 후에는 복구를 지원하기 위해 외부에서 이식에 37 ° C에서 따뜻한 식염수를 적용합니다. 이식은 일반적으로 즉시 세동을 시작하고 몇 분 이내에 동 율동에 자발적으로 되돌아갑니다. 따뜻한 0.6 ㎖를 주입받는 사람의 수분을 유지하기 위해 생리 식염수를 피하. 수술 전에 완료에 진통제에 부 프레 노르 핀의 피하 주사 </li><li> 두 층을위한 하나의 5-0 흡수 실행 봉합과 복부 상처를 닫습니다. 내부 층을 작성하여 시작하고 피부를 따라 계속합니다. </li></ol> 4. 복구 및 이식 모니터링 <ol><li> 감염의 예방을 위해 암피실린을 주입 및 복구를 위해 37 ° C에서 가열 패드에받는 사람을 배치합니다. 대부분의 동물은 신속하게 복구하고 일반적으로 마시는 종종 3 시간 이내에 먹고있다. 마우스가 고통의 흔적이있는 경우, 원인을 파악하기 위해 긴밀하게 검사합니다. 명백한 원인이있는 경우, 부 프레 노르 핀과 치료와 밀접하게 모니터링 할 수 있습니다. 증상이 심한 또는 8 시간 이상 지속되면 수의사를 상담하고 안락사를 고려하십시오. 필요한 경우, 증상이 해결 될 때까지 부 프레 노르 핀의 12 시간마다 주사를 계속 제공합니다. 마우스가 고통의 흔적이있는 경우 8 시간 후, 계속 12 줄부 프레 노르 핀의 시간당 주사가 해결 될 때까지. 증상이 더 이상 48 시간 동안 계속하고 필요한 경우 안락사 경우 수의사에게 문의하십시오. </li><li> 직접 복부 촉진으로 이식 심장 박동을 모니터 + + + + 등의 건강한 발달에 의한 거절에 약한 비트에 대한 +에 이식하고 이길의 강도를 기록 - 이식의 거부 반응을 완료 할 예정이 아닌 구타로. 실험 기간 동안 일주일 후 배 처음 10 일 동안 매일 마우스를 모니터링합니다. </li></ol>

<ol><li>Aramaki, O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Interleukin-10+but+not+transforming+growth+factor-beta+is+essential+for+generation+and+suppressor+function+of+regulatory+cells+induced+by+intratracheal+delivery+of+alloantigen%5BTitle%5D)+AND+%22Transplantation%22%5BJournal%5D)">Interleukin-10 but not transforming growth factor-beta is essential for generation and suppressor function of regulatory cells induced by intratracheal delivery of alloantigen.</a> Transplantation. 79, 568-576 (2005).</li>
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</ol>

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마우스 심장 이식 마스터에 상당한 수술 기술을 필요로하는 어려운 미세 수술 방법입니다. 가장 어려운 부분은 혈관의 작은 직경이다. 또, 수신자 동작 시간 및 출혈을 제한하는 것이 필요하다. 마우스의 심장 이식에 대한 기술은 첫 번째 코리 등으로 설명했다. 1973 년 이후에 모트 람 등 (12)에 의해. 우리의 수정은 다음 사항을 포함한다. 첫째, 곧 관류 후 대동맥과 폐동맥 번들의 개흉술과 절개 다음 차가운 헤파린 식염수 기증자의 심장을 즉시 살포 수확하는 동안 따뜻한 국소 빈혈을 방지 할 수 있습니다. 둘째, 대신 기증자 전에 수신자를 준비 곧 기증자 수확 완료 후받는 사람의 준비, 시작, 생존 결과의 개선과받는 사람의 복부 노출 시간을 줄일 수 있습니다. 마지막으로, 작은 atraumatic 용기의 사용은 B로 클램프받는 사람 대동맥 / IVC 번들 대신 관계의 혈액의 흐름을, 잠금, 일반적으로 혈관에 덜 손상을 초래하고 뒷다리 마비의 발생을 줄일 수 있습니다. ...

장기 이식 동물 모델은 임상 이식 환자의 치료를 개선하기위한 가치있는 정보를 제공 할 수있다. 마우스 모델에 의한 유전자 변형 쥐와 다른 동물 모델 1-3을 사용할 수 없습니다 생쥐의 특정 시약의 넓은 범위에 장기 이식 거부 나 수용의 면역 메커니즘을 연구하는데 특히 유용하다. 이식 마우스 모델 도전은 만족스러운 결과를 달성하기 위해 상당한 전문적인 기술을 필요로하는 기증자와받는 사람의 작은 크기입니다. 기술은 첫 번째 이후 코리 등 (5)에 의해 마우스의 심장 이식을 위해 적응 된 쥐 4 마음의 이소성 이식에 대해 설명했다. 이 기술은 전에 기증자의 작업에 대한받는 사람과 이식 된 심장 또는 t의 생존을 손상 할 가능성이 둘 중 기증자의 심장, 전혀 살포를 준비하고 참여그가받는 사람. 원래 이식 거부와 관용 6-8의 메커니즘을 조사하는 바와 같은 절차는 널리 사용되어왔다. 기타 마우스 9,10 심장 이식 오노와 린지의 원래 쥐의 심장 이식 절차를 적용했다. 최근 기술은 코리 등 11의 방법과 관련된 몇 가지 문제를 극복 마우스 심장 이식 출판되었다. 프로토콜은 여기에 설명 포함 모트 람 등 (12)의 방법에 따라 트립 변형, 통합 : 시츄 관류 차가운 헤파린 식염수로 즉시 개흉술 후 수신자 동작 시간을 최소화하기 위해받는 운전 이전 도너 동작을 수행한다. 또한, 우리는 작은 atraumatic 혈관 클램프 대신 6-0 실크 넥타이를 사용합니다. 혈관 클램프가 더 많은 공간을 복용의 단점이 있지만 그들은 너무 빡빡하거나 느슨하게해서는 안되는, 넥타이보다 제어하기가 쉽습니다및 클램프보다 제거 덜 간단합니다. 초기 학습에 대한 대안이 봉합의 균일 성을 보장하고, 따라서 문 합의 개통하는 근위 및 원위 모서리에 숙박 봉합사를 사용하는 스테이지 있지만, 우리의 방법은, 혈관 문합을위한 실행중인 하나의 봉합사를 사용합니다.

<table><tbody><tr><td>작동 현미경&nbsp;</td><td>Leica, Heerbrugg, 스위스</td><td>M651</td><td>10-25X 배율</td></tr><tr><td>마취기&nbsp;</td><td>Vet Quip Pty Ltd, Sydney, Australia</td><td>Vett3</td><td>공기 중에 이소플루란과 산소의 혼합물을 전달할 수 있음&nbsp;</td></tr><tr><td>운영 보드&nbsp;</td><td>철물점 또는 사무용품</td><td></td><td>공급 업체 조밀한 코르크 또는 합성 핀을 취할 수 있음</td></tr><tr><td>헤파린 식염수 (5 U/ml, 4 &deg; C)</td> <td>화이자, 미국</td><td>FW25</td><td>얼음에 23G 바늘과 1 ml 주사기에</td></tr><tr><td>일반 식염수 (37 &deg; C)</td><td>AstraZeneca Pty Ltd, Australia</td><td>4538</td><td>따뜻한 패드에 23G 바늘이 있는 1ml 주사기에</td></tr><tr><td>봉합사 10- 나일론, 5-0 Vicryl</td><td>Ethicon, Inc. NJ, USA</td><td>2870G/J421H</td><td></td></tr><tr><td>부프레노르핀(0.1ml 식염수 중 0.05mg/kg)</td><td>Reckitt Benckiser, 시드니, 호주</td><td></td><td>얼음에 23G 바늘이 있는 1ml 주사기에</td></tr><tr><td>암실린(0.1ml 식염수 중 5mg/kg)</td><td>아스펜, 시드니, 호주</td><td></td><td>1ml 주사기에 23 G 바늘 얼음</td></tr><tr><td>젤 거품</td><td>Pharmacia & Upjohn Co. USA</td><td>801289304</td><td>작은 조각으로 절단</td></tr><tr><td>고온 소작 장치</td><td>Medtronic, USA</td><td>8444000</td><td></td></tr><tr><td>가열 패드/오른쪽 온도</td><td>Kent Scientific Corporation, Turrington, CT 06790</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Microsurgery instruments:</td><td>Shanghai Medical Instruments Co. Ltd.,&nbsp; &nbsp;</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Microneedleholders</td><td>상하이, 중국</td><td>WT2020</td><td></td></tr><tr><td>Microscissors</td><td>&nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; "&nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; "</td><td>WT1020</td><td></td></tr><tr><td>마이크로핀셉스(팁이 곧은)"</td><td> &nbsp; &nbsp; &nbsp; "&nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; "</td><td>WA3010</td><td></td></tr><tr><td>마이크로 집게 (곡선 팁)"</td><td> &nbsp; &nbsp; &nbsp; "&nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; "</td><td>WA3020</td><td></td></tr><tr><td>마이크로 모기 클램프 (1 쌍)"</td><td>; &nbsp; &nbsp; &nbsp; "&nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; "</td><td>W40350</td><td></td></tr><tr><td>Microvessel 비외상 클램프 (1 쌍)"</td><td>; &nbsp; &nbsp; &nbsp; "&nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; "</td><td>W40130/W40150</td><td></td></tr></tbody></table>

이소성 마우스 심장 장기 이식에 대한 수정 방법

A Modified Method for Heterotopic Mouse Heart Transplantion

마우스는 종종 때문에 가능한 형질 전환 마우스 및 시약의 넓은 범위에 이식 면역학의 연구에서 심장 이식 기증자와받는 사람으로 사용됩니다. 어려움으로 인해 동물의 작은 크기와 심장 이식에 포함 된 미세의 상당한 기술적 과제로 제시된다. 특히, 초기 이식 후 기술적 인 실패의 높은 비율은받는 사람의 죽음과 같은 뒷다리 마비 또는 비 심장 박동 같은 수술 후 합병증이 발생할 수 있습니다. 여기에, 이소성 마우스 심장 이식을위한 완전한 기술은받는 사람 마우스로 기증자의 마음과 그 이후의 주입을 수확 포함, 보여줍니다. 기증자의 심장은 바로 상행 대동맥과 폐동맥의 차가운 헤파린 식염수와 절개와 현장 관류에 다음 수확한다. 받는 사람의 동작은 다음에, 복부 대동맥과 하대 정맥 (IVC)의 준비를 포함단일 실행 10-0 microsuture 사람과받는 사람 IVC와 기증자 폐동맥 비슷한 문합을 사용하여받는 사람의 대동맥을 가진 기증자의 대동맥의 엔드 - 투 - 측 문합. 수술 후 동물은 0.6 ㎖의 생리 식염수를 피하 주사하고 37 ° C에서 가열 패드에 복구 할 수 있습니다. 227 마우스의 심장 이식의 결과는 86.8 %의 48 시간에서 성공률 요약되어있다. 15 (6.6 %)이 48 시간 이내에 사망하는 동안 48 시간 내에 13.2 %의 실패, 5 (2.2 %), 허혈성 손상 및 / 또는 혈전증 접목에 의한 비 심장 박동을했다 뒷다리 마비, 10 (4.4 %)을 경험 .

초기 훈련 기간 후에, 우리 그룹의 마우스 이소성 심장 이식 227 케이스를 분석 하였다. 제 24 시간 이내 성공률은 90.3 %이었고, 48 시간에서 그것은 86.8 %였다. 48 시간 내에서 30 (13.2 %), 실패, 5 (2.2 %), 뒷다리 마비를 경험하고 안락사했다, 10 (4.4 %)이 동안 15 인해 이식 허혈 손상 및 / 또는 혈전증에 비 심장 박동을했다 (6.6 %)은 48 시간 이내에 사망. 일부 실험 그래프트 생존율은 스트레인 다양한 조합으로 표 1에 나타낸다. 동일하지 않은 균주 사이의 이식이 거부하는 동안 같은 기증자와받는 사람의 긴장과 심장 이식은 장기를 허용했다. 이식 된 심장의 외관은도 1에 도시된다. 심장 심장의 등장과 함께 멎 때 심장 이식 실패의 원인은 일반적으로 이식 후 시간에 의해 결정된다. 필요한 경우, 원인비트의 중단으로 심장의 조직 학적 분석으로 확인해야합니다. 예를 ...

기증자 적출 및 수혜자 혈관 문합을 위한 단순화된 방법을 포함하여 마우스의 심장 이종성 이식을 위한 미세 수술 절차를 위한 기술이 시연됩니다.

Mice are often used as heart transplant donors and recipients in studies of transplant immunology due to the wide range of transgenic mice and reagents ...

이 실험 절차의 전체적인 목표는 공여 마우스의 심장을 수혜 마우스에게 이식하는 것입니다. 먼저 공여 마우스의 흉부에서 심장을 적출하여 차가운 식염수에 보관함으로써 이를 수행합니다. 다음 단계는 수혜 마우스의 복강 내에 심장을 이식하고, 이식된 심장의 박동을 모니터링하는 것입니다.마지막으로, 육안 검사와 병리 분석을 통해 이식 거부 반응을 확인합니다. 최종적으로, 서로 다른 계통의 생쥐 사이에 이식된 심장은 거부되는 반면, 동일 계통 간에 이식된 심장은 수용되는 결과가 나타납니다. 공여자와 수혜 동물의 크기가 매우 작기 때문에 미세수술 단계에서 이 측정법을 익히는 것이 어려우며, 이에 대한 장기 비디오 시연이 매우 중요합니다.복잡한 수술 절차와 수혜측 수술 시 정확도 및 속도를 높여야 할 필요성이 있습니다. 모든 기구가 80% ethanol 용액에서 완전히 세척 및 멸균되었는지 항상 확인하십시오. 일회용 멸균 장비의 사용을 강력히 권장합니다. 공여측 마우스가 isof fluorine 챔버 내에서 마취되면, 수술대 위에 등을 대고 눕힙니다.그 후 빠르게 노즈 콘(nose cone)을 연결하여 마취제를 투여합니다. 뒷발 꼬집기 테스트를 통해 마취 상태를 반드시 확인하십시오. 움찔거리는 반응이 없으면 수술용 칼날을 사용하여 피부 제모를 시작합니다.그다음 수술 과정 전반에 걸쳐 70% isopropyl alcohol에 희석된 2% Chlorhexidine으로 피부를 세 번 번갈아 닦아 멸균합니다. 동물의 호흡과 심박수를 육안으로 모니터링하십시오. 이에 따라 isoflurane 투여량을 조절합니다.흉곽 양측의 갈비뼈 부분을 통해 가슴을 열어 심장과 혈관을 노출시키기 위한 흉강 절개술을 수행하는 것으로 시작합니다. 갈비뼈 가장자리부터 액와 방향으로, 그리고 흉골 높이에서 가로 방향으로 절개합니다. 이렇게 하면 흉벽 플랩이 만들어집니다.플랩을 머리 쪽 수술판에 고정하여 엽니다. 그다음 심장 주변의 심낭을 제거합니다. 포셉으로 하대정맥을 들어 올리고, 심장 근위측의 하대정맥에 차가운 헤파린 식염수 1 mL를 주입합니다.그런 다음 거즈와 면봉을 사용하여 용액이 바늘 구멍을 통해 역류하는 것을 방지하기 위해 IVC에 작은 동맥 클램프를 부착합니다. 심장을 아래로 이동시켜 대동맥과 폐동맥을 노출시킵니다. 횡횡동굴(transverse sinus)은 대동맥과 폐동맥 다발의 후면에 위치한 채널입니다.다음으로, 문합을 위해 혈관의 길이를 최대한 확보할 수 있도록 대동맥과 폐동맥을 최대한 원위부에서 절단합니다. 이제 하대정맥(IVC), 우상대정맥(SVC), 좌상대정맥(SVC) 및 폐정맥을 각각 분리합니다. 각 혈관은 6.0 실크사(silk thread)를 사용하여 결찰해야 합니다.먼저 하대정맥(IVC)과 우상대정맥(SVC)을 결찰합니다. 그런 다음 좌상대정맥(SVC)과 폐정맥을 결찰합니다. 이제 결찰 부위의 원위측에 있는 모든 혈관을 절단하여 심장을 적출합니다.이식 전까지 심장을 4 °C의 차갑고 멸균된 식염수에 보관하십시오. 공여자와 동일한 방식으로 수술을 위해 동물을 준비한 후, 개복술을 수행하며 시작합니다. 치골부터 흉골 끝까지 정중선을 따라 절개하십시오.종이클립을 구부려 견인기로 사용합니다. 복부를 절개하고, 장을 따뜻한 생리식염수에 적신 거즈로 감싼 뒤 복부 오른쪽 상단으로 견인합니다. 다음으로, 장골 분지(iliac bifurcation)와 왼쪽 신동맥 및 신정맥 사이의 신하대동맥(infrarenal aorta)과 하대정맥(IVC)을 노출시킵니다.묶인 대동맥과 하대정맥(IVC) 분절을 분리합니다. 그다음 교정된 전기 소작기로 요혈관으로부터 대동맥과 하대정맥을 분리합니다. 분리된 대동맥 및 하대정맥 분절의 근위단과 원위단에 작은 비외상성 클램프를 장착합니다.30 gauge 바늘을 사용하여, 수직으로 절개한 구멍을 통해 대동맥 전벽에 공여자의 대동맥 크기만한 구멍을 뚫습니다. 이때 헤파린 생리식염수로 헹구어 대동맥 내강의 혈전들을 제거합니다. 이제 차가운 생리식염수 속에 있는 공여자 심장을 삽입합니다.공여자의 심장을 수혜자의 대동맥 절개 부위 옆에 배치합니다. 10-0 러닝 나일론 봉합사를 사용하여 공여자의 폐동맥을 수혜자의 하대정맥(IVC) 옆에 배치합니다. 대동맥을 단단-측면(end-to-side) 방식으로 문합합니다.근위측 모서리에서 시작하여 좌측면을 따라 원위측 모서리까지 봉합합니다. 그다음 동물을 180도 회전시킵니다. 이어서 심장을 옆으로 옮기고 대동맥 벽의 우측면을 따라 원위측에서 근위측 방향으로 봉합을 계속합니다.문합부를 닫기 전에, 혈전과 공기를 제거하기 위해 헤파린 식염수로 루멘을 부드럽게 세척합니다. 그 다음 봉합을 마무리합니다. 다음으로, 폐동맥을 문합할 하대정맥(IVC) 전벽에 수직 절개를 가합니다.둘째로, 10-0 running suture를 사용하여 문합합니다. IVC 근위단 루멘 내의 좌측 벽 원위단에서 혈관을 시작합니다. 전측 우측 벽을 따라 계속하여 원위단까지 봉합합니다. 이 과정을 다시 반복합니다.문합을 완료하기 전에 내강을 충분히 세척하십시오. 다음으로 문합 부위 주변에 젤 폼 조각들을 배치합니다. 면봉으로 가볍게 압박하여 지혈을 수행합니다.수혜자의 혈관을 재건합니다. 먼저 원위부 클램프를 제거한 다음, 근위부 클램프를 제거하십시오. 수혜자 수술 중에는 수술의 정확도와 속도를 최적화하는 것이 매우 중요합니다.따라서 교차 클램프 시간은 이상적으로 30분 미만이어야 합니다. 회복을 돕기 위해 이식 부위에 37°C의 따뜻한 생리식염수를 도포하십시오. 심실세동이 즉각적으로 나타나야 하며, 몇 분 내에 자연적으로 동성 리듬으로 돌아와야 합니다.수술 부위를 봉합하기 전, 부프레노르핀을 근육 내로 투여해야 합니다. 모든 조직층에 대해 5-0 흡수성 봉합사를 이용한 연속 봉합으로 상처를 닫아 수술을 마칩니다. 수술 부위를 봉합한 후, 수여 동물에게 암피실린을 투여하고 생리식염수 0.6 milliliters를 피하 주사합니다.수분 공급을 돕기 위해 동물을 37 °C로 설정된 가열 패드 A 위에 올려두어 의식을 회복할 때까지 유지합니다. 대부분의 동물은 수술 후 3시간 이내에 물을 마시고 음식을 섭취하기 시작합니다. 8시간 후에도 마우스가 여전히 고통스러운 징후를 보인다면, 증상이 완화될 때까지 12시간마다 buprenorphine을 주사하십시오.수술 후 첫 10일 동안 마우스의 고통 상태가 48시간 이상 지속되면 수의사에게 문의하십시오. 복부 촉진을 통해 이식된 심장의 박동을 직접 모니터링하십시오. 매일 박동의 강도를 기록하며, 건강한 이식편의 경우 4+, 거부 반응의 진행으로 인해 박동이 약한 경우 1+로 기록합니다.10일 후 이식편이 완전히 거부되어 심장이 뛰지 않는 경우를 음성으로 기록하십시오. 227건의 이질성 심장 이식 후, 24시간 동안 90.3%, 48시간 동안 86.8%가 성공했으므로 이식된 심장의 박동을 주 3회 계속 모니터링하십시오. 실패 사례에는 후지 마비, 이식편으로 인한 심장 박동 정지, 허혈성 손상 및/또는 혈전증이 포함되었으며, 이식편 생존자의 사망 사례를 분류하였습니다.심장 이식 실패의 원인은 병리학적으로 확인되었습니다. 화살표로 표시된 이식 심장의 분석 결과, 심장 조직의 혈전증 및 경색이 이 Graft 심장의 실패 원인이었습니다. C 57 Black six 공여자와 수혜자의 계통 조합에서는 심장 거부 반응이 나타나지 않았으며, 이식된 심장은 100일 이상 생존했습니다. 본 사례의 경우, 심장이 생명 유지 상태가 아니었기 때문에 이에 따른 이차적인 근위축으로 인해 크기가 약간 감소했습니다.반면, 공여체인 DBA 2와 수혜체인 C 57 Black 6의 거부 반응 유도 계통 조합에서는, 이식된 심장이 7일째에 박동을 멈췄으며 100일째에 거부 반응의 증거를 보였습니다. 해당 심장은 적출 후 확인했을 때 완전히 섬유화되어 수축된 상태였습니다. 이 기술은 적절하게 수행될 경우 90 million 이하에서도 가능하며, SF₆ 가스를 다루는 것은 매우 위험할 수 있다는 점을 잊지 마십시오.마취 가스 제거 장치를 사용하는 것이 매우 권장됩니다.

a-modified-method-for-heterotopic-mouse-heart-transplantion

Research

연구

JoVE Journal

Medicine

의학

마우스 heterotopic 심장 이식 모델은 거부하고 면역 반응의 메커니즘을 연구를위한 중요한 방법으로 많은 수사관에 의해 입증되었습니다. 그러나, 관련 기술은 여전히​​ 도전하고 있습니다. 표준 기술을 수정하여 우리는 1000 개 이상의 이식 성공을 있었다.

마우스의 Heterotopic 심장 이식

뮤린 자궁 심장 이식 모델은, 면역뿐만 아니라 허혈 재관류 손상 연구에 매우 적합하다. 우리는 비 봉합 커프 기술을 사용하여 절차를 수정이 방법으로 1,000 개 이상의 성공적인 이식을 수행 하였다.  여기서, 우리는 비디오를 보충하기위한이 기술의 추가 정보를 제공합니다.

수정 커프 기술을 사용하여 쥐의 자궁 심장 이식 모델

원고는 마우스에 이소성 심장 이식을 수행하는 데 필요한 단계를 설명합니다.

쥐 이소성 심장 이식 기술

커프 기술은 기술적으로 어려운 작은 혈관의 봉합 문합을 피함으로써 마우스의 이소성 경추 심장 이식 모델을 단축하고 용이하게 합니다. 이 비디오 백서에 표시된 기술적 세부 사항을 통해 연구자는 실험실에서 이 모델을 설정할 수 있습니다.

마우스의 이소성 자궁 심장 이식

마우스 자궁 경부 이성애 심장 이식을 위한 커프 기술에 대한 내부 튜브 접근법을 도입하여 커프스 위에 혈관을 상회합니다. 우리는 두 경험이 풍부한 외과 의사 사이의 협력이 수술 시간을 현저하게 단축한다는 것을 발견했습니다.

뮤린 심장 이식을 위한 커프 기술의 최적화

이성애 복부 마우스 심장 이식 모델에서 혈액 회로 재건을 위한 새로운 기술이 입증된다.

복부 마우스 심혼 이식 모형에 있는 혈액 회로 재건

본 프로토콜에서, 마우스 심장 이식 모델은 심장 동종이식 거부반응의 메카니즘을 조사하기 위해 사용된다. 이 이종 심장 이식 모델에서는 수술 효율이 향상되고 수정된 커프 기술을 사용하여 심장 이식의 자궁경부 종단 간 문합에 의해 심장 이식편의 생존이 보장됩니다.

마우스 자궁경부 이종 심장 이식 모델을 위한 수정된 커프 기술

마우스 심장 이식 모델은 이식 면역학을 연구하기 위한 귀중한 연구 도구입니다. 본 프로토콜은 층류 혈류를 허용하기 위해 수혜자의 총 경동맥 및 기증자의 폐동맥 트렁크에 커프를 배치하는 것을 포함하는 마우스 이종 자궁 경부 심장 이식을 자세히 설명합니다.

혈관 수갑을 이용한 마우스 이종 자궁 경부 심장 이식

본 논문은 업데이트된 무균 기술, 진통 및 마취를 사용하여 이종 혈관 심장 이식을 위한 수정된 기술을 설명합니다.

무균 기술, 마취 및 진통의 현대 표준과 일치하는 수정된 쥐 이종 심장 이식 프로토콜

이 프로토콜은 마우스 자궁경부 심장 이식을 위한 단순화된 끝 투 측면 봉합 문합 기법을 제시하여, 이식 면역학 연구를 위한 견고하고 재현 가능한 모델을 제공합니다.

종단 간 문합 기법을 이용한 경추 이종성 마우스 심장 이식 이식 면역학 연구

학습하세요 마우스 이소성 심장 이식의 미세수술 기법으로, 냉 생리식염수 보존과 혈관 문합술을 포함합니다. 이 방법은 이식 거부 반응 메커니즘 연구에 필수적인 모델을 제공합니다.

이소성 마우스 심장 장기 이식에 대한 수정 방법

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