의 자발적인 운동 활성의 결정 초파리

이 절차의 전반적인 목표는 초파리의 자발적 운동 활동을 정량화하는 것입니다. 이것은 먼저 실험용 파리를 수집하고 숙성함으로써 수행됩니다. 두 번째 단계는 온도 조절 인큐베이터에 개체군 모니터를 설정하고 적절한 소프트웨어를 다운로드하는 것입니다.

다음으로, 파리는 유리 파일로 전송된 다음 활동 모니터가 실행되는 개체군 모니터 내부에 배치됩니다. 마지막 단계는 데이터를 분석하는 것입니다. 궁극적으로 개체군 모니터는 파리의 자발적인 신체 활동의 차이를 보여주는 데 사용됩니다.

음의 지리 축과 같은 기존 방법에 비해 이 기술의 주요 장점은 여러 파리 개체군의 자발적인 신체 활동을 간단하고 신뢰할 수 있으며 객관적으로 지속적으로 기록할 수 있다는 것입니다. 이 방법은 다양한 조작이 파리에 미치는 영향을 결정하는 데 도움이 될 수 있습니다. 절차를 시연하는 자발적인 신체 활동은 실험실의 실험실 조교인 Suzanne Kowski가 될 것입니다.시작하려면 함께 제공되는 텍스트 프로토콜에 나열된 단계에 따라 음식을 준비하고 핫 플레이트에서 지속적으로 혼합하여 식히십시오.

각 좁은 유리병에 5ml의 음식을 나누어 넣고, 음식의 양이 인구의 가장 낮은 고리 이하가 되도록 합니다. 음식이 실온으로 식은 후 모니터링하십시오. 바이알을 스폰지 마개로 덮고 최대 2주 동안 섭씨 4도에서 유지합니다.

사용하기 전에 바이알을 실온으로 예열하십시오. 다음으로 Canton S는 표준 실험실 식품과 함께 플라스틱 바이알에 담겨 날아갑니다. 바이알을 섭씨 25도의 가습 온도 조절 챔버에 12시간 라이트 다크 주기로 보관하십시오.

아침에 유리병에서 맑은 성충이 날아갑니다. 그런 다음 웰로 후 8시간 이내에 이산화탄소 패드에서 새로 동봉된 파리를 성별별로 분리하여 암컷 파리가 처녀인지 확인합니다. 5-10일 된 처녀 수컷과 암컷을 배치하여 어미 파리 10바이알을 준비합니다.

여러 알의 효모가 들어 있는 표준 식품 바이알에 들어 있습니다. 파리를 섭씨 25도의 인큐베이터에 보관하고 이틀 동안 12시간 라이트 다크 사이클로 유지합니다. 이틀에 한 번씩 파리를 새 플라스틱 바이알에 넣고 알이 나온 바이알을 섭씨 25도의 인큐베이터에 보관합니다.

그런 다음 첫날에 닫은 파리를 제거하고 버리고 바이알을 인큐베이터로 되돌려 2일차에 보다 동기화된 파리 개체군을 수집합니다. 다음으로, 이산화탄소 패드에서 금속 숟가락으로 24시간 이내에 바이알당 25마리의 수파리와 25마리의 암컷 파리를 빠르게 수집합니다. 바이알에 ELO 날짜를 적으십시오.

각각 최소 5개의 복제 바이알을 조립합니다. 실험 및 통제 그룹용. 바이알을 섭씨 25도의 온도로 조절되는 환경 챔버에 12시간 라이트 다크 사이클로 보관하십시오.

10일 동안 격일로 새 플라스틱 바이알에 파리를 넣습니다. 깔때기를 사용하여 개체군을 온도 조절이 가능한 인큐베이터에 배치합니다. 그런 다음 4선 전화 케이블이 있는 각 모니터를 5방향 스플리터를 통해 전원 공급 장치 인터페이스 장치 또는 PSIU에 연결합니다.

그런 다음 전화 케이블을 PSIU에 연결합니다. PSIU를 100-240볼트 전원 콘센트에 연결하고 전원 공급 장치 출력 커넥터를 PSIU 짝짓기 잭스 중 하나에 꽂습니다. 그런 다음 PSIU에서 사용하는 USB 소프트웨어를 다운로드하여 컴퓨터 프로그램과 PSIU 및 활동 모니터 간의 데이터 링크를 합성합니다.

프로그램을 시작합니다. 그런 다음 기본 설정에서. Macintosh용 직렬 포트 PSIU를 선택합니다.

그런 다음 읽기 간격을 선택합니다. 그런 다음 고유한 제조업체 번호로 모니터를 선택합니다. 모니터에 지정된 숫자에 해당하는 모니터 범위를 선택합니다.

녹색 표시등을 찾아 모든 모니터가 제대로 연결되어 있는지 확인하십시오. 빨간색 표시등은 연결이 끊어졌음을 나타냅니다. 검은색 상자는 시스템이 꺼져 있거나 USB 연결이 제대로 이루어지지 않았음을 나타냅니다.

같은 나이의 수컷과 암컷 파리를 분리합니다. 이산화탄소 패드에 수컷 파리 10마리와 암컷 파리 10마리를 별도의 실온에 놓습니다. 유리 vi.

각 실험 및 대조 라인에 대해 최소 3개의 바이알을 사용하고, 파리의 각 성별에 대해 파리가 이산화탄소에서 회복될 때까지 바이알을 옆으로 두어 먹이에 갇히지 않도록 합니다. 탄소 산화물로부터 회복하기 위해 실온에서 2시간 동안 그대로 두십시오. 그런 다음 바이알을 모집단 내부에 놓습니다.

인큐베이터에 보관된 모니터. 3-4일 후에 파리를 새 바이알에 넣어 음식이 건조되는 것을 피하십시오. 실험이 끝나면 데이터를 스캔하여 중복 판독값을 제거하고 기록이 완료되었는지 확인합니다.

파일 스캔 110 x를 사용하여 데이터 수집 간격을 선택하고 선택한 기간의 처음 24시간 이내에 수집된 데이터를 폐기합니다. 프로그램은 각 모니터의 현재 총 개수를 컴퓨터로 보내고 0부터 다시 계산을 시작합니다. 그런 다음 실험 이름을 선택하고 컴퓨터 데이터 폴더에서 파일을 복사하여 데이터를 저장합니다.

텍스트 파일에 수집된 데이터를 Excel 스프레드시트의 열에 조심스럽게 복사하여 데이터 분석을 시작합니다. 그런 다음 세 가지 다른 높이의 적외선 빔에서 수집된 활동의 합을 나타내는 각 모니터에 대해 원하는 시간 내의 총 활동을 계산합니다. 마지막으로, 양꼬리 학생 T-테스트를 사용하여 세 가지 생물학적 복제물을 나타내는 세 모니터 간의 평균 운동 활동과 표준 편차를 결정합니다.

초파리의 자발적인 운동 활동은 파리의 성별과 밝은 어두운 주기에 따라 다릅니다. 수컷과 암컷 파리의 평균 활동을 보여주는 이 그래프에서 알 수 있듯이 화살표는 밝은 곳에서 어두운 곳으로 전환되는 것을 표시합니다. 활동의 감소가 보이는 곳에서, 20일 된 수컷 파리의 총 활동량은 고칼로리 다이어트를 하는 파리의 감소된 활동량에 비해 저칼로리 식단에서 표준 음식의 절반을 파리에게 제공했을 때 증가합니다.

이 비디오를 시청한 후에는 초파리의 자발적인 신체 활동을 결정하는 방법을 잘 이해하게 될 것입니다. 이 방법은 다양한 유전학 또는 환경 조작이 파리의 활동에 어떤 영향을 미치는지 결정하는 데 도움이 됩니다.