Name: 기본 마우스 조골 세포에서 골 세포 배양을 구하는 레티노 산의 적용 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2014-05-13T23:35:00.000+00:00
Duration: 7 min 13 s
Description: 배우세요 기본 마우스 조골 세포에서 레티노산을 이용해 성숙한 가지 형태의 골 세포를 배양하는 방법을. 이 기술은 신생아 마우스 뼈에서 조골 세포를 분리하고 ATRA로 분화를 유도하여 단기간에 충분한 골 세포를 확보할 수 있습니다.

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기금은 &quot;PROGETTO concorso 폰다 치오 IRCCS 오스 페달 마조 레 Policlinico 2009년부터 2010년까지&quot;MD, 그리고 Associazione 밤비노 Nefropatico ABN Onlus, 밀라노에 의해 제공되었다

모든 동물 실험은 국립 과학적인 목적을 위해 사용하고 검토와 밀라노 대학의 윤리위원회에 의해 승인 된 동물의 보호에 관한 유럽의 현재의 규정에 따라 수행되었다. 차 조골 세포의 1. 격리 상기 방법은, 사소한 수정으로, Dodig 등 (14)에 의해 기술 된 절차를 따른다. <ol><li> 0.1 % 콜라게나 제 P와 0.05 %를 추가하여, 매체를 소화 준비 HBSS 매체 (행크스 균형 소금 솔루션, 아니 칼슘, 마그네슘, 또는 페놀 레드)에 (2.5 % 트립신 10 배, 아니 페놀 레드에서 시작) 트립신. </li><li> 3~4일 이전 마우스를 사용하여 (절차 1 마우스 적은에 적용될 수있다.) </li><li> 잘린 희생. 70 % 에탄올로 머리를 살포하고 얼음에 보관. 핀셋과 해부 / 외과 가위로 피부와 근육 층을 제거합니다. </li><li> 부드럽게 정수리 뼈를 제거하고두 반쪽의 시상 봉합에 따라 구분합니다. 반드시 뼈를 봉합하고 자기편 조직 무료입니다 확인하고 절차가 완료 될 때까지 HBSS 매체를 포함하는 잘 접시에 개별 뼈 조각을 배치합니다. </li><li> HBSS를 취소하고 각 웰에 추가 37 ℃에서 15 분 동안 소화 매체 </li><li> 상층 액을 버린다. </li><li> 다시 37 ℃에서 15 분 동안 소화 매체를 추가 </li><li> 이 시간은 상등액을 저장하고 10 % FBS (태아 혈청)과 1 % 스트렙토 마이신 / 페니실린과 보충 α-MEM (최소 필수 중간)에 배치합니다. </li><li> 반복은 1.7 및 1.8 배 단계를 반복합니다. </li><li> 5 분 425g에 원심 분리하여 세 수집 분수, 스핀 세포 해변, 상층 액을 버린다 세포 펠렛을 재현 탁하는 보충 알파-MEM 3 ㎖를 추가하고, 전송 25cm 2 플라스크. </li><li> 파편과 죽은 세포를 제거하는 24 시간 후에 매체를 변경합니다. </li><li> 50 ㎍ / ㎖의 아스 코르 빈산 (AA)과 글리 3 밀리미터 추가cerol 2 - 인산이 나트륨 염 α-MEM 배지로 하이드레이트 (GP). </li><li> 그 후, 매일 (α-MEM 플러스 AA / GP) 매체를 변경합니다. </li></ol> 2. ATRA 프로토콜 <ol><li> 불 활성화를 방지하기 위해 어두운 방에 ATRA (모든 - 트랜스 레티노 산) 모든 실험을 실시한다. </li><li> HBSS 매체 1X 트립신 용액을 제조하고 사용할 때까지 37 ° C로 유지한다. </li><li> subconfluent 세포에서 매체를 제거하고 조심스럽게 HBSS로 세척. </li><li> 1 ML 트립신을 추가, 부드럽게 모든 세포는 트립신에 의해 보호 될 수 있도록 플라스크를 회전하고, 37 ℃에서 3 분 동안 품어 </li><li> 거꾸로 현미경으로 세포의 실제 분리를 확인합니다. </li><li> 트립신을 불 활성화하는 α-MEM 배지 3 ㎖를 추가합니다. </li><li> 세포를 복구하고 425g에서 15 분 동안 원심 분리. </li><li> 신선한 배지에서 세포 펠렛을 재현 탁. </li><li> 혈구 계산 챔버의 하락을 놓고, 몇 분 동안 정착 할 수 있도록하고 CE를 계산LL 번호. </li><li> 10,000 세포 / α-MEM 플러스 AA / GP와 cm 2의 밀도로 25cm 2 플라스크에 넣고 세포. 세포 밀도 세포 프로세스와 세포 간 접촉의 최적의 개발에 관련된주의하십시오. 초기 밀도 이상 10,000 세포 / cm 2가 세포 프로세스의 적절한 발달을 저해하지만, 낮은 세포 수로 인해 세포 간 접촉의 부재로, 조기 ​​세포 사멸의 원인. </li><li> 매 24 시간 매체에 5 μm의 ATRA를 추가합니다. </li><li> 형태 학적 변화는 일반적으로 48 시간 후에 관찰 : 형태를 평가하기 위해 매일 세포를 모니터링합니다. 제 24-48 시간 후에, 세포 증식이 정지되어있는 경우, 상기 밀도 replate. 성숙한 골 세포의 균일 한 인구 4 ~ 5 일 후에 존재합니다. 필요에 따라 12 ~ 15 일까지의 임의의 시점에서 전지를 사용한다. </li><li> 세포 (예 : 커버 슬립이나 잘 플레이트와 같은) 다른 지원에 도금하는 경우, 위의 밀도가 유지되어 있는지 확인하고사용할 때까지 ATRA마다 24 시간을 추가로 진행합니다. 실험하기 전에 적어도 24 시간에 대한 새로운 지원을 준수 세포를 둡니다. </li></ol> 3. 면역 염색 <ol><li> 면역 염색의 경우, 커버 슬립에 세포를 플레이트 (버리 (15) 예를 들어 참조) 설치 방법을 따르십시오. </li><li> 예를 들어, 간접 면역 형광에 대해, 30 분 동안 RT에서 어두운 이차 형광 표지 된 항체와 그 후, 가습 챔버 내에서 1 시간 동안 RT에서 일차 항체로 순차 부화, 4 % 파라 포름 알데히드 또는 차가운 아세톤으로 고정 가습 실에서. </li><li> 핵 counterstaining에 DAPI 또는 유사체를 사용하고 중간 안티 페이딩에 탑재합니다. </li></ol> 4. 알리자린 레드 염색 및 추출 <ol><li> 커버 슬립에 세포를 접시. </li><li> 10 분 동안 70 % 에탄올에 coverslip에 침지하여 세포를 고정합니다. </li><li> 알리자린 레드 염색 액의 일부 방울 (1 ㎎ / ㎖, pH를 5.5)와 함께 세포를 커버30 분. </li><li> 수돗물로 커버 슬립을 씻으십시오. 유리 슬라이드에 글리세롤의 드롭으로 장착하고 수직 배의 현미경 20X 배율을 사용하여 이미지를 가지고. </li><li> 위의 과정 후, 수돗물에 슬라이드를 담가 커버 슬립을 복구 할 수 있습니다. </li><li> 웰 플레이트의 각 coverslip에 넣습니다. </li><li> 60 % 과염소산 (양 완전히 세포를 커버 할 수있을 정도로 충분히 커야합니다)를 추가하고 교반과 함께 4 ° C에서 O / N 두십시오. </li><li> 450 nm 파장에서 분광 광도법에 의해 상층의 광학 밀도를 참조하십시오. </li><li> 세포 수에 대한 값을 정규화하기 위해, 10 분 동안 세포 제제 다루 야누스 그린 (PBS에 0.​​2 % 용액)를 추가한다. </li><li> 초순수로 조심스럽게 세척 할 것. </li><li> 0.5 N 염산을 (양 모든 세포를 커버 할 수있을 정도로 충분히 커야합니다)를 추가하고 몇 초 동안 손으로 가볍게 흔들어. </li><li> 분광 광도계로 615 nm에서 흡광도를 참조하십시오. </li></ol>

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</ol>

저자가 공개하는 게 없다.

지난 몇 년 동안 골 세포가 뼈에서 가장 중앙 세포로 떠오르고있다. 연구의 발전은 점진적으로 뼈 질환의 다양한 소설과 더 나은 치료를 디자인하는 엄청난 가치가 이전에 의심받지 검증되지 않은 골 세포의 속성의 수를 공개하고 있습니다. 그러나, 골 세포 생물학의 연구는 골 세포와 같은 세포 라인 MLO-Y4가 제공되기 전에 조골 세포가 오랜 기간 동안 대리 세포로 사용되어왔다있을 정도로 체외 모델의 제한된 가용성을 앓고있다. 최근 조건부 불후의 세포 라인은 sclerostin 및 FGF23 표현 후반 골 세포를 분지하는 차별화 할 수있는 같은 그룹에 16 일 소개했다. 이들 세포주의 극한값이 질문하에 있지인데, 그것은 매우 잘 일차 전지보다 생체 내 상황을 닮고 차 골 세포의 FR을 얻을 가능성을 제공하는 것으로 알려져있다톰 형질 전환 동물의 특정 분자 경로에 대한 연구 기능을 수행 할 수 있습니다. 격리 먼저 5,6이...

골 세포, 가장 풍부한 뼈 세포 유형은 깊게 골격 내에있는 고도로 분지의 말단 분화 세포이다. 성숙한 골 세포의 세포체는 뼈 lacunae에 포함되는 다양한 형태를 가지고있다; 둥근 골 세포가 뼈 소주 1에서 더 자주 반면 신장 세포 기관과 골 세포는 대뇌 피질의 뼈에서 발견된다. 분지 수상 돌기는 다른 골 세포와, 또한 다른 뼈 세포 유형, 골수, 혈관과 관련된 혈관 주위 세포와뿐만 아니라 여러 연락처를 만드는 복잡한 웹을 형성, 눈물 소관이라는 작은 채널에서 세포체에서 연장 상주합니다. lacunae 및 소관에 함유 간질 유체를 통해, 골 세포는 그러므로 지역뿐만 아니라 전신적인 이벤트 및 그 반대의 동작은 로컬 및 전신의 변화 (2)에 의해 조절 될 수뿐만 아니라 영향을 미칠 수있다, 또한 궁극적으로 순환 시스템에 연결된다. 골 세포의 연구는 최근, 이러한 조직과 세포 고유의 형질 전환 동물의 발생, 강력한 현미경 기술과 높은 처리량 분자 스크리닝 3,4의 사용과 같은 몇 가지 기술적 진보, 덕분에 힘을 얻고있다. 그러나, 이들 세포의 기술은 주로 시험 관내 모델에서의 적절한 상대적 부족에 여전히 불완전하다. 사실, 골 세포로 인해 깊은 위치의 획득과 문화에 유지하는 것이 곤란하고, 이러한 분화 된 세포 유형을 특징 짓는 확산의 낮은 수준했습니다. 그들은 일반적으로 낮은 세포 수율을 생산하고 심지어 몇 오염 아세포 급속 골 세포 8 자라다 할 위험을 가지고 있지만 년 함께, 다수의 방법은, 일차 5-7 골 세포를 분리하기 위해 개발되었다. 이러한 이유로, 체외 작업에 대부분의 실험은 잘 확립 된 골 세포의 세포 L에 지금까지 실시 된오프라인 MLO-Y4 9. 추가 시험 관내 방법이 세포 연구의 가능성을 향상시킬 수와 골 세포 생물학 및 병태 생리의 분석을 향상시킬 수 있습니다. 주로 채택 될 것으로, 이러한 방법은 쉽게 재현해야하며, 세포 성숙에 도달하기 위해 특수 장비 또는 매우 긴 시간이 필요하지 않을 것입니다. 일차 전지에 적용 할 경우 중요한 것은, 그들은 그것이 가능한 형질 전환 동물을 활용하도록 만들 것입니다. 우리는 최근 조골 세포주 MC3T3-E1 지점 레티노 산과 차 조골 세포의 치료는 골 세포 (10)의 형태 및 분자의 특징을 담 분지 셀 균질 집단의 발전을 선도 급속한 표현형의 변화를 유도하는 것을 설명했다. 모든 - 트랜스 레티노 산 (ATRA)는 핵 레티노 산 수용체 (RAR들)을 결합하여 유전자 전사를 조절하는 비타민 A의 활성 대사 제품입니다. RAR의궁극적으로 레티노 산 (RA) 응답 표적 유전자 (11)의 변조로 이어지는, 레티노이드 X 수용체 (RXRS)와 이종로 DNA에 결합. ATRA는 신경 세포 (12)와 족 세포 (13)와 같은 다른 분지의 세포가 그 (것)들의 사이에서, 여러 종류의 세포 분화와 성숙을 조절하는 것으로 알려져있다. 여기서 설명한 방법은 일차 골아 세포에 ATRA의 첨가에 기초한다. 효과적이기 위하여, ATRA는 정의 된 밀도에서 도금 셀에 정확한 성숙 단계에서 첨가 할 수있다; 우리의 경험에서 이러한 조건은 조골 세포의 골 세포로 표현형의 스위치를 얻을 중요합니다.

<table><tbody><tr><td>콜라겐 분해 효소 P</td><td>Roche 응용 과학</td><td>11213857001</td><td></td></tr><tr><td>Trypsin</td><td>Gibco, Life Technologies</td><td>15400054</td><td></td></tr><tr><td>HBSS</td><td>Gibco, Life Technologies</td><td>14175129</td><td>37 &deg에서 사전 예열; C 사용 전</td></tr><tr><td>알파 - MEM</td><td>Invitrogen, 생명 기술</td><td>22571038</td><td>37 °C에서 사전 예열; C 사용 전</td></tr><tr><td>FBS</td><td>시그마-알드리치</td><td>F4135</td><td></td></tr><tr><td>스트렙토마이신/페니실린</td><td>시그마-알드리치</td><td>P4333</td><td></td></tr><tr><td>아스코르브산</td><td>시그마-알드리치</td><td>A4403</td><td></td></tr><tr><td>글리세롤 2-인산이나트륨 염 수화물</td><td>시그마-알드리치</td><td>G9422</td><td></td></tr><tr><td>ATRA</td><td>시그마-알드리치</td><td>R2625</td><td>빛으로부터</td></tr> <tr><td>ATRA 보호파라포름알데히드</td><td>시그마-알드리치</td><td>P6148</td><td>사용 전에 PBS에 용해시키고 여과하십시오. 항상 화학 물질 후드 아래에서 작업하십시오.</td></tr><tr><td>DAPI</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>32670</td><td>2차 항체에 추가 가능</td></tr><tr><td>Alizarin red</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A5533</td><td></td></tr><tr><td>Janus Green</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>201677</td><td></td></tr><tr><td>Perchloric acid</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>176745</td><td>주의해서 사용하십시오(피부와 눈 보호 권장)</td></tr><tr><td>HCl</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>320331</td><td>주의해서 사용하십시오 (피부와 눈 보호 권장)</td></tr><tr><td>Glycerol</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>G5516</td><td></td></tr><tr><td>Fluorsave</td><td>Calbiochem - Merck</td><td>345789</td><td></td></tr><tr><td>Economy 핀셋 #7, 0.40 x 0.5 mm 팁</td><td>World Precision Instruments</td><td>501981</td><td></td></tr><tr><td>Economy 핀셋 #4, 0.40 x 0.45 mm 팁</td><td>World Precision Instruments</td><td>501978</td><td></td></tr><tr><td>해부 가위, 스트레이트, 10cm 곡선</td><td>World Precision Instruments</td><td>14394</td><td></td></tr><tr><td>수술용 가위, 14cm, 스트레이트, S/S</td><td>World Precision Instruments</td><td>501218</td><td></td></tr><tr><td>배양 플라스크</td><td>Corning</td><td>430168</td><td></td></tr><tr><td>웰 플레이트</td><td>Corning</td><td>3335</td><td></td></tr><tr><td>Thermanox 커버슬립</td><td>Thermo Scientific Nunc</td><td>12-565-27</td><td></td></tr><tr><td>현미경</td><td>Zeiss Apotome</td><td></td><td></td></tr><tr><td>분광계</td><td>Safas Xenius</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

기본 마우스 조골 세포에서 골 세포 배양을 구하는 레티노 산의 적용

Application of Retinoic Acid to Obtain Osteocytes Cultures from Primary Mouse Osteoblasts

<html> 골 세포 배양의 필요성은 잘 뼈 연구원의 지역 사회에 알려져있다; 기본 골 세포의 분리가 어렵고, 낮은 세포 수를 생산하고 있습니다. 따라서, 가장 광범위하게 사용되는 셀룰러 시스템은 골 세포 조의 MLO-Y4 세포주이다. 여기에서 설명하는 방법은 형태 학적 및 분자 골 세포의 기능과 분지 세포의 균일 한 인구를 생성하는 레티노 산의 사용을 말합니다. 쥐의 두개골로부터 골아 세포의 분리 후, 모든 - 트랜스 레티노 산 (ATRA)이 세포 배지에 첨가하고, 셀 모니터링 도립 현미경으로 매일 수행된다. 첫 번째 형태 학적 치료와 차별화 2 일 후에 탐지 가능하면 수상 돌기 세포 외 기질을 생산하는 능력의 손실, 조골 세포 마커의 다운 규제의 점진적 발전과 함께 5 일에서 일반적으로 완료까지 규제 골 세포 특정 분자의. 콘텐츠는 &quot;&gt; 일일 셀 모니터링 때문에 일차 세포의 고유 변동의 필요, 및 프로토콜은 상이한 마우스 균주로부터 얻어진 형질 전환 모델에 적용된 셀에 최소 변화에 적응 될 수있다. 방법은 수행하기 쉽고, 특수 장비를 필요로하지 않으며, 이는 높은 재현성으로, 급속 무제한 생물학적 응용을위한 이들 세포의 사용을 허용하는, 세포 외 기질의 완전한 부재 하에서 성숙한 골 세포 집단을 생성한다.

결과는 5 개의 독립적 인 실험 10을 얻었다. 세포 형태 AA / GP는 일차 전지는 대부분 조약돌 같은 기능, 성숙한 조골 세포의 특성을 가지고 처리. 산재 분지 세포 (그림 1A에서 빨간색 화살표로 표시된)을 가능성이 골 세포를 대표하는 찾을 수 있습니다. ATRA 치료로, 세포는 빠르게 일반적으로 이일 후 관찰되는 파급 효과를 표시하기 시작합니다. 도 1b에 도시 된 바와 같이, 분지 세포들은 수상 돌기를 확장하는 공간을 필요로한다. ATRA의 진행과 치료로, 파급 효과가 점진적으로 수와 복잡성의 증가, 1C 및 1D 피규어. 로다 민 - 라벨 phalloidin도에 의해 사상 굴지의 염색은 phalloidin도, 그림 2에 표...

레티노 산으로 기본 마우스 조골 세포의 치료는 골 세포의 형태 학적 및 분자 기능 베어링 분지 세포의 균일 한 인구를 생산하고 있습니다. 방법은 획득 및 배양 주 골 세포를 유지의 어려움을 극복하고, 형질 전환 모델 유래 세포를 연구하는 것이 유리할 수있다.

The need for osteocyte cultures is well known to the community of bone researchers; isolation of primary osteocytes is difficult and produces low cell ...

이 실험 절차의 전반적인 목표는 일차 골아세포(primary osteoblasts)로부터 성숙한 분지형 골세포(ramified osteocytes)를 얻는 것입니다. 이를 위해 먼저 신생 생쥐의 뼈에서 일차 골아세포를 분리하고, 이들이 성숙할 수 있도록 배양합니다. 그 다음, 합쳐진(confluent) 골아세포를 트립신 처리합니다.그 후 세포 수를 측정하고 특정 밀도로 다시 분주하여 성공 가능성을 보장합니다. 이어서 세포 증식을 억제하고 골세포 형태(osteocyte morphology)로의 완전한 분화를 유도하기 위해 all trans retinoic acid 또는 ATRA를 세포 배지에 첨가합니다. 그 결과, ATRA 존재 하에서 세포가 빠르게 분지형 형태를 획득하고, 세포외 기질 생산을 중단하며, 골세포 마커의 발현을 통해 확인되는 성숙한 골세포 표현형으로 분화함을 보여줍니다. 일차 골세포의 분리 또는 3차원 매트릭스 내 조골세포 분화와 같은 기존 방법과 비교했을 때 이 기술의 주요 장점은 며칠 내에 충분한 수의 골세포를 생성할 수 있다는 점입니다.주변 지표의 부재 덕분에 이러한 세포들을 N 세포 생물학 및 분자 생물학 분석에 활용하기 용이합니다. 또한, 이 방법은 형질전환 마우스에 적용할 수 있어 관심 분자에 대한 기능 연구가 가능합니다. 해당 실험 절차는 저희 연구실의 박사 과정생인 Deborah가 시연하겠습니다.먼저 Hank's balanced salt solution(HBSS)에 0.1% collagenase P와 0.05% tryin을 첨가하여 소화 배지를 준비합니다. 생후 3~4일 된 마우스를 희생시켜 머리를 절단한 후, 머리 부위에 70% ethanol을 분무하고 얼음 위에 올립니다. 그다음 핀셋과 해부용 가위를 사용하여 피부와 근육층을 제거합니다.두정골을 조심스럽게 제거하고 시상봉합을 따라 두 개의 절반으로 분리합니다. 봉합선과 부착된 조직을 모두 제거한 후, 개별 뼈 조각들을 HBSS 배지에 넣습니다. 다음으로, HBSS를 버리고 각각에 소화 배지를 추가합니다.그 다음 37 °C에서 15분 동안 배양합니다. 상층액을 버린 후, 신선한 소화 배지를 추가하고 배양 과정을 반복합니다. 두 번째 배양 후 상층액을 수집하여 FBS와 pen strep가 첨가된 alpha mam과 혼합합니다.소화를 두 번 더 반복합니다. 상층액을 배지와 합친 후, 모은 분획물을 425 Gs에서 5분 동안 원심분리합니다

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연구

JoVE Journal

Biology

생물학

이 비디오는 Alizarin Red 염료를 사용하여 배양된 1차 조골세포에서 광물화 또는 칼슘 침착 정도를 감지하기 위한 염색 기술을 보여줍니다.

Alizarin Red Staining: 배양된 조골세포에 의한 광물화를 시각화하는 기술

이 비디오에서는 인간 말초 혈액 단핵 세포 유래 파골세포로 배양된 인산칼슘 코팅 세포 배양 플레이트에 대한 체외 파골 흡수 분석에 대해 설명합니다. 파골세포는 세포 배양 플레이트의 인산칼슘으로 코팅된 매트릭스에 특징적인 액틴 고리를 형성하고 액틴 고리 영역 내의 매트릭스를 분해하여 칼슘 및 인산염 이온을 방출함으로써 분해된 매트릭스 내에 뚜렷한 흡수 구덩이를 형성합니다.

Resorption Pit Assay: Calcium Phosphate-Coated Culture Plate를 사용하여 성숙한 골세포의 칼슘 흡수 활성을 정량화하는 In Vitro 기술

파골 세포는 신체의 주요 뼈 재 흡수 세포이다. 많은 수의 파골 세포를 분리 할 수​​있는 능력은 파골 세포 생물학의 이해에 상당한 발전을 가져왔다. 이 프로토콜에서는 배양 및 in vitro에서 파골 세포 활성을 정량화, 단리하는 방법을 설명한다.

마우스 골수에서 파골 세포의 유도

노치 신호는 세포 간의 직접 접촉에 의존하는 셀룰러 통신의 한 형태입니다. 체외에서 Notch 신호를 적절하게 유도하려면 Notch 리간드를 고정된 상태의 세포에 제공해야 합니다. 이 프로토콜은 마우스 파골세포 전구체에서 Notch 신호의 체외 자극 방법을 설명합니다.

마우스 파골 세포 전구체의 노치 신호 전달의 자극

이 원고 osteoclast 형성에서 복잡 한 1 rapamycin의 포유류/기계적 대상의 역할을 연구 하 고 마우스 골 수에서 분리 및 문화 osteoclasts에 생체 외에서 프로토콜을 설명 합니다.

RANKL 기반 Osteoclast 문화 분석 결과의 마우스 골 수 mTORC1 Osteoclast 형성에의 역할을 조사 하

이 문서에서는, 우리는 분리 하 고 마우스 긴 뼈에서 골 수 기질 세포와 조 혈 줄기 세포 분화 방법 제시. 두 개의 서로 다른 프로토콜에는 저조한 다른 세포 인구 확장 및 차별화 osteoblasts, adipocytes, osteoclasts에 적합 되 게 됩니다.

절연, 문화, 및 골 수 기질 세포와 생쥐에서 Osteoclast 창시자의 차별화

큰 뼈 장애 복구에 대 한 설계 새로운 생체 재료의 수는 지속적으로 뼈 이식 수술과 관련 된 합병증을 극복 하 고 뼈 치유 향상을 목표로 확장 됩니다. 여기, 우리는 뼈 수리에 대 한 생체의 전 임상 생체 적합성 테스트를 위한 종합 전략을 제시.

뼈 재생을 위해 생체에서 생물학적 호환성 프로필

파 골 세포는 조 혈 간세포의 대 식 세포 혈통에서 유래한 조직 특유의 대 식 세포 폴 리 에틸렌 이다. 이 프로토콜은 기존의 방법에서 발견 되는 사고의 위험을 줄이면서 많은 양의 파 골 세포를 얻을 수 있도록 골 수 셀을 분리 하는 방법을 설명 합니다.

쥐 골 골에서의 파 골 세포 전 구체의 분리, 정제 및 분화

이 프로토콜은 형광 활성화 세포 분류(FACS)를 위한 골세포 준비 외에도 신생아 dmp1-topaz 마우스 두개골의 해부와 세포 소화 및 분획을 통해 녹색 형광 단백질을 발현하는 골세포의 분리를 설명합니다.

GFP 발현 골세포의 쥐 두개골 분획을 통한 1차 골세포 획득

여기에서, 우리는 인산칼슘 코팅 세포 배양 플레이트를 이용한 재흡수 구덩이 분석을 위한 간단하고 효과적인 분석 절차를 제시한다.

시험관 내에서 파골세포 재흡수를 시각화하고 정량화하는 간단한 구덩이 분석 프로토콜

본 연구는 유도성 조골세포 계통 특이적 Stat3 녹아웃 마우스를 사용하여 교정력 하에서 뼈 리모델링을 연구하기 위한 프로토콜을 제공하고, 치아 교정 운동 중 치조골 리모델링을 분석하는 방법을 설명하여 골격 기계 생물학에 대한 실마리를 제공합니다.

유도 가능한 조골 계통 특이적 Stat3 녹아웃 마우스를 사용하여 교정 치아 운동 중 치조골 리모델링 연구

배우세요 기본 마우스 조골 세포에서 레티노산을 이용해 성숙한 가지 형태의 골 세포를 배양하는 방법을. 이 기술은 신생아 마우스 뼈에서 조골 세포를 분리하고 ATRA로 분화를 유도하여 단기간에 충분한 골 세포를 확보할 수 있습니다.

기본 마우스 조골 세포에서 골 세포 배양을 구하는 레티노 산의 적용

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