Name: 마우스의 자발적인 전이성 신장 세포 암 (mRCC)를 모델링에 따라 신장 절제술 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2014-04-29T15:00:00.000+00:00
Duration: 11 min 27 s
Description: 배우세요 마우스에서 자발성 전이성 신장 세포 암(mRCC) 모델을 만드는 방법을. 정위적 종양 세포 이식, 신장 절제술, 병리 검사를 통해 전이 부담을 평가하고 실험적 치료제의 효능을 표준화된 방식으로 분석할 수 있습니다.

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우리는이 절차의 개발에 기술적 인 도움과 전문 지식에 대한 박사 로버트 S. Kerbel (토론토 대학, 서니 브룩 연구소, 토론토, 캐나다)의 실험실에 감사하고 있습니다. 우리는 또한 박사 산드라 교회의 머슴과 실험 동물 자원의 로스웰 파크 암 연구소 부서에 감사의 말씀을 전합니다. 이 작품은 (JMLE에) 로즈웰 파크 얼라이언스 재단의 수상에 의해 지원되었다.

1. 동소 신장 종양 이식 <ol><li> 세포 배양 <ol><li> 이전 동소 이식에 75 %의 포화 상태에 단층으로 마우스 RENCA LUC 세포를 성장. </li><li> 5 % FBS 함유 미디어, 1,000 rpm에서 원심 분리기 세포, 5 분 동안 4 ° C, PBS에 세척을 3 회 반복의 트립신 처리 및 재 부유 다음과 같습니다. 그런 다음 5 × 4 RENCA LUC / 5 μL의 혈청이없는 미디어의 농도로 혈청이없는 배지에서 세포를 재현 탁. 참고 : 변형 또는 사용되는 세포주에 따라 세포가 주입 후 매우 공격적인 마우스 세포의 성장과 보급을 느리게하는 리겔 혈청 무료 매체의 1:1 비율로 재현 탁 할 수있다. </li></ol></li><li> 수술과 세포 이식 참고 : 모든 동물 연구 기관 동물 관리 및 사용위원회 (IACUC) P에 따라 수행 된 실험 엔드 포인트의 유지 보수 및 결정을 포함하여 여기서 설명rotocol 로스웰 파크 암 연구소의 승인을. <ol><li> 아이소 플루 란 (2-3 %)을 사용하여 하나의 Balb / C 마우스를 마취. 발을 조이고 충분한 마취를 보장하기 위해 반사를 확인합니다. 건조를 막기 위해 눈에 수의사 연고를 적용합니다. 오른쪽 측면 드러 누움에 마우스를 놓고 앞과 뒷다리 사지 사이에 왼쪽을 면도. 무균 적으로 절개에 대한 영역을 준비하는 등의 요추 영역에 따라 알코올과 요오드를 적용합니다. </li><li> 마지막 리브 및 고관절과 길이 방향으로 1cm의 피부 절개를 시작하는 외과 용 가위를 사용한다. 무딘 해부 가위를 사용하여 피부 아래의 결합 조직을 풉니 다. 복벽에서 길이 방향으로 0.5 cm 절개를 만들기 위해 수술 가위를 사용한다. 살짝 열려있는 상처 주위에 아래로 밀어 곡선 집게를 사용 -이 신장을 외면 화하다 전에 주입 기관의 부드러운 고정화 수 있습니다. </li><li> 제조 된 세포 혼합물 μL 5와 해밀턴 주사기를 넣습니다. 서브 캡슐 IMPLAN에 대한테이션은,이 주입 방법이 사용될 수있다 : <ol><li> 표면 : 경 사진 가장자리쪽으로 신장 캡슐 아래의 길이 방향으로 지향 신장, 삽입 바늘 (그러나 실질 위) 병렬 실행. 바늘이 제자리에 있으면, 작은 흰색 거품이 형성 될 때까지의 모든 셀을 주입. 천천히 캡슐에서 바늘을 제거하고 즉시 유출을 흡수하고 세포의 확산을 방지하기 위해 멸균 면봉으로 주입에 얼룩. </li><li> 내부 : 바늘이 눈에 보이는 (하지만 천공하지) 때까지 경 사진 가장자리까지 최종 주입 사이트에 신장 반대의 측면에서 시작으로, 신장의 내부를 서브 캡슐 공간 바늘을 삽입합니다. 흰색 거품 형태 및 면봉 주사 부위가 새는 것을 방지 할 때까지의 모든 셀을 주입. </li></ol></li><li> 부드럽게 체강에 신장을 반환합니다. 흡수 5-0 Vicryl 봉합사를 사용하여 복부 신체의 벽을 닫습니다. 완료되면, 함께 피부 층을 끌어 승 2 ~ 3 배치클립을 ound. 확인 클립은 확고하고 균등하게 더 상처의 노출을 지키기 위하여 이격되어있다. 이전 복구에 0.9 %의 NaCl 500 ㎕를 피하 25 G 바늘을 사용하여 프레 놀핀 (0.01 ㎎ / ㎖)의 100 μl를 관리 할 수​​ 있습니다. 정기적으로 클립의 위치와 안정성을 모니터링하고, 10 일 이후 제거합니다. </li></ol></li></ol> 2. 신장 절제술 / 차 종양 제거 <ol><li> 섹션 (위) 1.2.1과 1.2.2에서 설명한대로 마우스 마취, 고정, 절개, 신장의 노출에 대한 동일한 프로토콜을 따르십시오. </li><li> 부드럽게 꼬리 끝에서 연결하는 지방 조직과 신장의 두개골 끝에서 부신을 제거하여 신장을 분리 포셉의 두 번째 쌍을 사용합니다. 부드럽게 신장을 잡을 경우, 요관 주위에 두 배 매듭, 신장 동맥 및 정맥을 만들기 위해 흡수 5-0 Vicryl 봉합사를 사용합니다. 천천히 안전하고 신장을 제거하는 매듭 위에 잘라. 바로 혈액 손실, 또는이의 흔적이 부족 보류의 위험이있는 경우요관, 동맥 및 정맥에 봉합하고 매듭 위에 잘라 대신 가위를 cauterizer를 사용합니다. </li><li> 신장이 제거되면, 연결 동맥에서 출혈에 대해주의 깊게 확인하고 필요한 경우 cauterizer를 사용합니다. 5-0 Vicryl을 사용하여 복부 신체의 벽을 닫습니다. 함께 피부 층을 당겨 1.2.4에 설명 된대로 같은주의 사항을 다음 2-3 상처 클립을 배치합니다. 밀접하게 출혈 고통의 흔적, 또는 제한된 이동성을위한 수술 후 매일 동물을 모니터링 할 수 있습니다. 안전하게 동물에 대한 제도적 지침을 따르십시오. </li></ol> 3. 엔드 포인트에서의 전이성 진행 상황 및 지역화를 모니터링 <ol><li> 전이성 질병 정량화 : 바이오 루미 네 센트 모니터링 <ol><li> 이전 루시퍼 라제 형질 세포를 사용하여 전이를 모니터링하고 Xenogen IVIS 이미징 시스템 (11, 12)를 사용하여 정량을 위해 정돈에 기재된 방법을 참조. </li></ol></li><li> 전이성 분포의 비교 평가를위한 시각적 부검 가이드기 <ol><li> 등의 증세, 호흡 곤란, 체중 감소, 등의 엔드 포인트를 사용하여 기관의 지침에 따라 동물을 희생 참고 : 자연 전이성 진행이 매우 다양하고 신속한 될 수있는 동물의 근접 모니터링이 중요합니다. </li><li> 낮은 하악골에 흉강을 계속 요도 위의 절개를 시작하기 위해 외과 용 가위를 사용합니다. 복부 벽의 근육으로부터 피부를 분리하는 무딘 종단 가위를 사용합니다. </li><li> 팔과 다리를 따라 절개를 시작합니다. 껍질 피부 떨어져. 밀접하게 피부 근막과 결절 복부 벽을 검토 한 후 표면 림프절 : 사타구니, 상완, 겨드랑이와 피상적 인 자궁. </li><li> 복벽에 절개를하여 격막까지 왼쪽과 오른쪽 측면을 따라 잘라. 하나의 수평 잘라 내장을 베어 복부 벽의 앞 부분을 제거합니다. </li><li> 내장 f를 그대로 모양을 검사또는 크게 주목할만한 종양. 또한 위장의 내용을 참고; 비어있는 경우, 마우스를 먹을 수있게되지 않았을 수 있습니다. 내용이 어두우면,이 상부 / 하부 위장관 출혈의 증거를 나타낼 수 있습니다. </li><li> 시각적으로 각 마우스 그룹의 총 점수를 할당, 종양의 존재 여부에 대한 각 기관의 점수 (그룹 당 4 동물 그림 1D-I에서 예제로 사용). 주 1) : 림프절의 확대는 반드시이 종양의 성장을 의미하지는 않는다; 그것은 크게 크기의 아주 확고 흰 색 경우, 그것은 가능성이 전이성 결절이다. 2) 복부에 과도한 우유 또는 흐린 액체가 복수를 나타냅니다. 복수는 특히 간장과 위장의 엽 (叶) 사이의 복부 장기에 고체 축적을 포함 할 수있다. 3) 같은 폐 등의 장기를 들어, 여러 결절 (예를 들어 13 참조) 현재와 개별 동물 사이의 비교에 대해 계산 될 수 있습니다. </li><li> 신중하게 물총 병에서 제거하고 PBS로 세척하여 간, 비장, 신장, 췌장 : 개별 복부 장기의 심​​한 종양 또는 이상을 확인합니다. </li><li> 복부 장기를 제거한 후, 요추, 천골, 신장, 및 장간막 림프절 등 복부 림프절을 검사한다. </li><li> 전이성 확산의 증거를 다이어프램을 평가합니다. 참고 : 다이어프램에 광범위한 확산이 고심한 흔적 또는 호흡의 손실로 이어지는, 그것의 수축력을 잃게 될 수 있습니다. </li><li> 다이아 프램을 제거하고 폐와 심장을 노출하는 전두엽 부분을 제거, 흉강 두 측면 절개를합니다. </li><li> 부드럽게 잡고 들어 올려 식도와 심장 위의 기관을 절단하여 폐와 심장을 제거합니다. 결절에 대한 조직을 평가합니다. 마음을 꽉 잡고. 탄력 일관성의 부족은 종양의 존재를 나타낼 수 있습니다. </li><li> 두개골을 통해 선형으로 절단하는 수술 가위를 사용합니다. 부드럽게 t까지 두개의 작은 조각을 제거그는 뇌 전체가 노출됩니다. 눈에 보이는 결절 또는 이상 색소 침착에 대한 뇌 전반에 걸쳐 봐. </li></ol></li></ol>

<ol><li>Francia, G., Cruz-Munoz, W., Man, S., Xu, P., Kerbel, R. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mouse+models+of+advanced+spontaneous+metastasis+for+experimental+therapeutics%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Rev.+Cancer%22%5BJournal%5D)">Mouse models of advanced spontaneous metastasis for experimental therapeutics.</a> Nat. Rev. Cancer. 11, 135-141 (2011).</li>
<li>Souza, B. M., Chaves, K. B., Chammas, R., Schor, N., Bellini, M. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Endostatin+neoadjuvant+gene+therapy+extends+survival+in+an+orthotopic+metastatic+mouse+model+of+renal+cell+carcinoma%5BTitle%5D)+AND+%22Biomed.+Pharmacother%22%5BJournal%5D)">Endostatin neoadjuvant gene therapy extends survival in an orthotopic metastatic mouse model of renal cell carcinoma.</a> Biomed. Pharmacother. 66, 237-241 (2012).</li>
<li>Amagai, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Combination+therapy+of+interleukin-2+and+sorafenib+improves+survival+benefits+and+prevents+spontaneous+pulmonary+metastasis+in+murine+renal+cell+carcinoma+models%5BTitle%5D)+AND+%22Jpn.+J.+Clin.+Oncol%22%5BJournal%5D)">Combination therapy of interleukin-2 and sorafenib improves survival benefits and prevents spontaneous pulmonary metastasis in murine renal cell carcinoma models.</a> Jpn. J. Clin. Oncol. 40, 503-507 (2010).</li>
<li>Steeg, P. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Preclinical+Drug+Development+Must+Consider+the+Impact+on+Metastasis%5BTitle%5D)+AND+%22Clin.+Cancer+Res%22%5BJournal%5D)">Preclinical Drug Development Must Consider the Impact on Metastasis.</a> Clin. Cancer Res. 15, 4529-4530 (2009).</li>
<li>Guerin, E., Man, S., Xu, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+model+of+postsurgical+advanced+metastatic+breast+cancer+more+accurately+replicates+the+clinical+efficacy+of+antiangiogenic+drugs%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Res%22%5BJournal%5D)">A model of postsurgical advanced metastatic breast cancer more accurately replicates the clinical efficacy of antiangiogenic drugs.</a> Cancer Res. 73, 2743-2748 (2013).</li>
<li>Day, C. P., Carter, J., Bonomi, C., Hollingshead, M., Merlino, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Preclinical+therapeutic+response+of+residual+metastatic+disease+is+distinct+from+its+primary+tumor+of+origin%5BTitle%5D)+AND+%22Int.+J.+Cancer%22%5BJournal%5D)">Preclinical therapeutic response of residual metastatic disease is distinct from its primary tumor of origin.</a> Int. J. Cancer. 130, 190-199 (2012).</li>
<li>Ebos, J. M., Kerbel, R. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Antiangiogenic+therapy%3A+impact+on+invasion%2C+disease+progression%2C+and+metastasis%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Rev.+Clin.+Oncol%22%5BJournal%5D)">Antiangiogenic therapy: impact on invasion, disease progression, and metastasis.</a> Nat. Rev. Clin. Oncol. 8, 210-221 (2011).</li>
<li>Naito, S., Walker, S. M., Fidler, I. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vivo+selection+of+human+renal+cell+carcinoma+cells+with+high+metastatic+potential+in+nude+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Clin.+Exp.+Metastasis%22%5BJournal%5D)">In vivo selection of human renal cell carcinoma cells with high metastatic potential in nude mice.</a> Clin. Exp. Metastasis. 7, 381-389 (1989).</li>
<li>Fidler, I. J., Naito, S., Pathak, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Orthotopic+implantation+in+essential+for+the+selection%2C+growth+and+metastasis+of+human+renal+cell+cancer+in+nude+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Metastasis+Rev%22%5BJournal%5D)">Orthotopic implantation in essential for the selection, growth and metastasis of human renal cell cancer in nude mice.</a> Cancer Metastasis Rev. 9, 145-165 (1990).</li>
<li>Saiki, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characterization+of+the+invasive+and+metastatic+phenotype+in+human+renal+cell+carcinoma%5BTitle%5D)+AND+%22Clin.+Exp.+Metastasis%22%5BJournal%5D)">Characterization of the invasive and metastatic phenotype in human renal cell carcinoma.</a> Clin. Exp. Metastasis. 9, 551-566 (1991).</li>
<li>Mohanty, S., Xu, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Experimental+metastasis+assay%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Vis.+Exp%22%5BJournal%5D)">Experimental metastasis assay.</a> J. Vis. Exp. 42 (1942), (2010).</li>
<li>Nunez-Cruz, S., Connolly, D. C., Scholler, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+orthotopic+model+of+serous+ovarian+cancer+in+immunocompetent+mice+for+in+vivo+tumor+imaging+and+monitoring+of+tumor+immune+responses%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Vis.+Exp%22%5BJournal%5D)">An orthotopic model of serous ovarian cancer in immunocompetent mice for in vivo tumor imaging and monitoring of tumor immune responses.</a> J. Vis. Exp. (45), (2010).</li>
<li>Ebos, J. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Accelerated+metastasis+after+short-term+treatment+with+a+potent+inhibitor+of+tumor+angiogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Cell%22%5BJournal%5D)">Accelerated metastasis after short-term treatment with a potent inhibitor of tumor angiogenesis.</a> Cancer Cell. 15, 232-239 (2009).</li>
<li>Yang, O. C., Maxwell, P. H., Pollard, P. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Renal+cell+carcinoma%3A+translational+aspects+of+metabolism+and+therapeutic+consequences%5BTitle%5D)+AND+%22Kidney+Int%22%5BJournal%5D)">Renal cell carcinoma: translational aspects of metabolism and therapeutic consequences.</a> Kidney Int. 84 (4), 667-681 (2013).</li>
</ol>

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이 프로토콜의 목적은 주입 / 절제 기술을 설명하기 위해 동계 종양 마우스 모델을 이용하여 임상 관련 자발적 전이성 질환을 평가하는 것이다. 현재, 새로운 실험적인 치료를 평가하는 전임상 연구의 대부분은 전이성 질환의 연구에 포함되지 않습니다 만 몇 가지 기본 종양의 성장, 수술 적 절제, 그리고 궁극적으로 자연 전이성 확산의 단계를 요점을 되풀이하다. 지금까지 유전자 조작 마우스 모델 (GEMMs가) 자발적 신장 세포 질병의 진행 (요약은 14 참조) 말기 전이와 수술 적 치료 전략을 포함하지 않는다을 유도하기 위해 생성 지금까지보고되지 않았다. 따라서, 자연 전이성 신 세포 암의 연구는 현재 동소 종양 세포 주입의 모델로 제한됩니다. 이 모델은 이전에 2,3를 개발되었습니다 만,이 프로토콜은 널리 특히에, 새로운 치료법의 평가에 사용되지그것이 가장 예측이있을 수 있습니다 수술 전후의 설정. 이 프로토콜은 세부 사항에 치료 평가에 더 광범위한 사용을 용이하게 할 수있다 필요한 절차를 단...

신장 세포 암 (RCC) 환자에서 사망의 주요 원인은 일반적으로 신장에서 성장하는 차 종양 제거 수술을 다음 발생 전신 전이성 질환이다. 그러나 생쥐의 실험적인 치료를 평가하는 거의 임상 종양 모델은 전이성 질환을 포함, 적은 여전히 충실하게 현지화 성장, 수술, 그리고 자연 미세 전이 개시 및 진행 1-3의 임상 단계를 요점을 되풀이하다. 테스트에서이 차이는 때때로 동물 모델에서 볼 눈에 띄는 항 종양 효과는 항상 환자 4 유사 성공적인 치료로 번역되지 않은 새로운 치료법의 평가에서 점점 중요 해지고있다. 결과에 이러한 차이는 지역화 자궁외 또는 소성을 기본 종양 모델과 말기 전이성 질환 5-7 사이의 차이 약물 효능에서 줄기 수 있습니다. RCC의 경우에는, 단지 몇 가지 연구가 확립 채용했다일반적으로 종양 베어링 신장 있었다 모방 환자가 전체 또는 부분적으로 2,3를 제거 자연 재발이 포함 nimal 프로토콜. 마우스 모델 시험이 부족에 대한 이유는 다양합니다. 첫째, 높은 동물의 비용과 종양 세포의 선택 및 전이성 잠재력을 내재 변동성이있다. (예 : 인간 세포주 유도 8-10의 설명 참조) 예를 들어, 사람의 신장 세포주 거의 전이되지 경향이 있고, 소성을 기본 착상 일관 보급 먼 병변을 형성 변이체를 유도 전이성 선택의 여러 라운드를 통해 선택해야 . 반대로, 면역 모델에서 마우스 세포 공격적 행동 경향이 있고, 저 세포 수는 즉각적인 조직 확산 3을 줄이기 매트 리겔로 주입되어야한다. 둘째, 기술 적절한 주입, 수술 적 절제 (절제)을 수행하고, 추적의 어려움 (및 정량화) 자연 metastatiC의 성장은 도전 일 수있다 (자세한 내용은 설명을 참조)이 기술을 사용하면 몇 가지 중요한 변수는 고려가 필요합니다. 이 프로토콜의 목적은 소성을 주입, 절제 (절제), 그리고 자연 전이성 신 세포 암 질환의 감시의 필수 단계 (뿐만 아니라 잠재적 인 함정)를 설명하는 표준화 된 (그리고 널리 보급)에 대한 가이드 라인을 제공하기 위해 과학 실험실 사이에 사용합니다 그 실험적인 치료의 효능을 평가합니다.

<table><tbody><tr><td>Pyr을 함유한 DMEM-높은 포도당. 및 L-글루타민</td><td>코닝</td><td>10-013-CV</td><td></td></tr><tr><td>FBS</td><td>Invitrogen</td><td>10437-028</td><td></td></tr><tr><td>0.25% 트립신 EDTA</td><td>Corning</td><td>25-053-CL</td><td></td></tr><tr><td>1x DPBS 칼슘 및 칼슘 없음; 마그네슘</td><td>코닝</td><td>21-031-CV</td><td></td></tr><tr><td>Matrigel</td><td>BD Biosciences</td><td>354234</td><td>얼음에 보관해야 합니다</td></tr><tr><td>인공 눈물 - 윤활제 안과 연고</td><td>Akorn Animal Health</td><td>17478-162-35</td><td></td></tr><tr><td>Pocket pro 애완 동물 트리머</td><td>Braintree 과학</td><td>CLP9931B</td><td></td></tr><tr><td>알코올 면봉</td><td>VWR</td><td>326895</td><td></td></tr><tr><td>Betadine 용액 면봉</td><td>VWR</td><td>67618-152-01</td><td></td></tr><tr><td>MICRO DISSECTING 시저 스트레이트, 블런트 - 25mm 블레이드 - 4.5"&nbsp;</td><td>Southpointe 외과</td><td>RS-5982</td><td></td></tr><tr><td>홍채 집게, 톱니 모양, 곡선, 10cm 길이</td><td>켄트 과학</td><td>INS15915</td> 이 10 <td>&micro 중 두 개가 필요합니다</td></tr><tr><td>. l Hamilton 주사기</td><td>Hamilton</td><td>7635-01</td><td></td></tr><tr><td>30 G, 45도, RN 바늘</td><td>Hamilton</td><td>7803-07</td><td></td></tr><tr><td>멸균 면 팁 애플리케이터</td><td>VWR</td><td>10805-144</td><td></td></tr><tr><td>고온 코터리 키트</td><td>Kent 과학적</td><td>INS500392</td><td></td></tr><tr><td>5-0 코팅 Vicryl, 일반 절단 바늘&nbsp;</td><td>Ethicon</td><td>J834</td><td></td></tr><tr><td>Reflex 클립 어플리어 7mm 클립용</td><td>Kent scientific</td><td>INS500343</td><td></td></tr><tr><td>Reflex 클립, 7mm, 비멸균</td><td>Kent scientific</td><td>INS500344</td><td></td></tr><tr><td>집게 제거, 12cm 길이</td><td>Kent scientific</td><td>INS500347</td><td></td></tr><tr><td>0.9% 염화나트륨</td><td>Baxter Healthcare</td><td>2B1322</td><td></td></tr><tr><td>부프레노르핀 0.01mg/ml</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>25 G 5/8 "바늘</td><td>VWR</td><td>BD305122</td><td></td></tr><tr><td>1 ml 주사기 w/out 바늘</td><td>VWR</td><td>BD309659</td><td></td></tr><tr><td>D-Luciferin</td><td>골드 바이오 기술</td><td>LUCK-1G</td><td></td></tr></tbody></table>

마우스의 자발적인 전이성 신장 세포 암 (mrcc)를 모델링에 따라 신장 절제술

Modeling Spontaneous Metastatic Renal Cell Carcinoma (mRCC) in Mice Following Nephrectomy

신장 세포 암 (RCC)에 새로운 실험 치료학의 향상 테스트의 핵심 과제 중 하나는 충실 초기와 말기 전이성 질환의 진행을 요점을 되풀이 모델의 개발이다. 일반적인 종양 이식 모델은 자궁외 또는 소성을 기본 종양 주입을 사용하지만, 몇 가지 임상을 모방 전신 자연 전이성 질환이 (가) 있습니다. 이 프로토콜은 RCC의 질병의 진행은 환자와 유사한 스테이지 개발하는 주요 단계를 설명합니다. 첫째, 동소 종양 세포 주입을 보여 동계 모델 높게 전이성 마우스 종양 세포주를 사용한다. 방법 누출 및 조기 확산을 방지하기 위해 리겔과 함께 세포와 하위 캡슐 공간으로 표면 및 내부 주입이 (가) 있습니다. 다음은 중요한 사전 및 사후 수술 마우스주의, 종양 베어링 신장 (신장 절제술)의 절단에 대한 절차를 설명합니다. 마지막으로, 그것은 모니터링 및 평가하는 데 필요한 단계를 설명마이크로뿐만 아니라 발광 생물 이미징을 포함하여 매크로 전이성 질병의 진행은, 전신 질환 분포를 점수에 대한 자세한 시각적 부검의 가이드를 제공합니다. 프로토콜이 설명의 목적은 미래의 치료 시험의 예측값을 개선하기 위해 임상 적 전이성 RCC 모델의 광범위한 사용을 용이하게하는 것이다.

그림 1A는이 프로토콜의 개요에 설명 된 절차를 요약 한 회로도를 보여줍니다. 몇 가지 중요한 요인은 각 단계에 대한 고려되어야한다. 예를 들어, 단계 1에서 그 신장에 서브 캡슐 종양 세포 이식을위한 두 가지 방법을 도시한다. 종양 세포는 바늘의주의 제거와 보라고 초과 탈출 유체 (그림 1B-I)에 의해 방지 누설 세포의 지역화 된 위치를 확인하는 작은 흰색 거품과 서브 캡슐 공간에 이식 할 수 있습니다. 누출을 방지하기 위해, 셀은 서브 캡슐 형상의 공간 (도 1b-II)에 도달하기 위해 내부적으로 제 주입 및 혈류로 종양 세포의 초기 분포를 방지하기 위해 매트 리겔과 결합 될 수있다. 신장의 외과 적 제거를 위해, 정확한 타이밍은 사용되는 세포주의 성장 및 전이 잠재력에 달려있다. 최적의 신장 절제술의 방법은 마우스의 고통과 회복을 최소화하기 위해 빠르고,하지만 제어, 수술을 포함한다. 티요관, 신장 동맥과 정맥을 닫습니다 Vicr...

자발 전이성 신장 세포 암종 (RCC) 질병 진행의 모델은 관련 임상 설정에서 치료를 평가하는 데 사용될 수있다. 이 프로토콜은 동소 신장 종양 세포 주입, 적절한 절제를위한 다른 절차를 설명하고, 마지막으로 전이성 부담 및 현지화의 시각 및 생물 발광 점수에 대한 부검 가이드를 간략하게 설명합니다.

마우스의 자발적인 전이성 신장 세포 암 (mRCC)를 모델링에 따라 신장 절제술

One of the key challenges to improved testing of new experimental therapeutics in renal cell carcinoma (RCC) is the development of models that faithfully ...

이 실험 절차의 전반적인 목표는 임상적으로 유의미한 자발적 전이성 신세포암을 유도하는 것입니다. 이를 위해 먼저 reka Luke 세포를 이식 가능하도록 준비합니다. 두 번째 단계로 신장 정위성 종양 세포 이식을 수행합니다.다음으로, 종양이 성장한 후 신절제술을 수행하여 원발성 종양을 제거합니다. 마지막 단계는 신절제술 후의 자발적 전이 진행 과정을 모니터링하고 다양한 부위의 질환 분포를 평가하는 것입니다. 궁극적으로, 이 프로토콜은 자발적 전이성 신세포암 질환의 모니터링을 가능하게 하며 실험적 치료제의 효능 평가를 표준화하기 위한 가이드라인을 제공합니다.이 기법이 이소성 또는 흔히 표재성이나 피하로 종양 세포를 이식하는 기존 방법들에 비해 갖는 주요 장점은, 종양 세포가 신체 나머지 부위로 전이될 수 있는 능력을 포함하여 환자에게 나타나는 신세포암(renal cell carcinoma, RCC)의 양상을 그대로 재현한다는 점입니다. 이 기법의 의의는 신세포암 치료로 확장되는데, 왜냐하면 환자에게 있어 사망의 실질적인 주원인이 바로 전신성 전이성 질환이기 때문입니다. 일반적인 마우스 모델로는 신장 절제술 이후에 때때로 발생하는 자발적 전이성 질환을 다루지 못합니다.이 방법은 자발적 전이성 RCC 질환에 대한 통찰을 제공할 수 있을 뿐만 아니라, 일차 종양 제거가 일반적이고 사망의 주요 원인이 수술 후 전이성 질환의 재발인 다른 암 유형에도 적용될 수 있습니다. 여기에는 유방암 및 흑색종 모델 등이 포함됩니다.일반적으로 이 방법에 익숙하지 않은 연구자들은 우선 신장을 찾는 것과 종양 세포를 이식한 후 국소적으로 유지하여 누출되지 않도록 하는 데 어려움을 겪을 수 있습니다. 또한, 마취가 효율적으로 수행되어 수술 후 회복이 가능하도록 하는 것 역시 중요합니다. 정위 이식 전, 마우스 luciferase 태그 reca 세포 또는 reka Luke 세포를 단층으로 배양하여 75% 합류도(confluency)까지 성장시킵니다. 트립신 처리 후 5% FBS 함유 배지에서 재현탁하고, PBS로 3회 세척하며 원심분리를 반복합니다. 그 다음, 세포를 무혈청 배지에 재현탁하여 무혈청 배지 5 µL당 5 × 10⁴ renco Luke의 농도가 되도록 준비합니다.2~3% isof fluorine로 장해 마우스를 마취시킨 후, 안구 건조를 방지하기 위해 안연고를 도포하고 발가락을 집어 마취 상태가 충분한지 확인합니다. 마우스를 우측 측와위로 눕히고 왼쪽 뒷다리와 네 번째 갈비뼈 사이 영역을 제모합니다. 그 다음 요추 배면을 따라 알코올과 요오드를 도포합니다. 외과용 가위를 사용하여 마지막 갈비뼈와 고관절 사이의 피부를 세로 방향으로 1cm 절개합니다.그 다음 둔성 해부 가위를 사용하여 피부 아래의 결합 조직을 느슨하게 합니다. 이어서 외과용 가위를 사용하여 복벽에 세로 방향으로 0.5 centimeter 절개를 가합니다. 이제 곡선 핀셋을 사용하여 열린 상처 주변을 조심스럽게 누릅니다.이 과정은 신장을 외부로 노출시켜 주입 전 장기를 부드럽게 고정할 수 있게 합니다. 표면 하피막 이식을 위해 준비된 세포 혼합물 5 µL를 Hamilton 주사기에 충전합니다. 바늘의 경사면이 위를 향하게 하여 신장의 장축과 평행하게 잡고, 신장 피막 아래이자 실질 위의 공간에 바늘을 삽입합니다.바늘이 적절한 위치에 놓이면, 작은 흰색 기포가 형성될 때까지 모든 세포를 주입합니다. 캡슐에서 바늘을 천천히 제거하고, 내부 피낭하 이식을 위해 즉시 멸균 면봉을 사용하여 주입 부위를 막습니다. 원하는 이식 부위의 반대편 신장 측면부터 시작하십시오.바늘의 사면(beveled edge)이 위쪽과 안쪽을 향하도록 잡습니다. 바늘이 보일 때까지 신장 내부로 삽입하되, 반대편의 피막 하 공간(subcapsular space)을 찌르지 않도록 주의합니다. 흰색 기포가 형성될 때까지 세포를 주입하고, 주입 부위를 닦아내어 누출을 방지합니다.신장을 조심스럽게 체강 내로 되돌려 놓습니다. 흡수성 5.0 Vicryl 봉합사를 사용하여 복벽을 폐쇄합니다. 완료되면 피부층을 모아 잡고 회복 전 2~3개의 상처 클립을 배치합니다.0.9% 염화나트륨 500 µL와 buprenorphine 100 µL를 피하 투여합니다. 이식 후 26~30일째에 동물을 마취시키고 이전과 같이 신장을 노출시킵니다. 그 다음 포셉을 사용하여 신장의 미측 끝부분에서 연결된 지방 조직을 조심스럽게 제거하고, 두측 끝부분에서 부신을 제거합니다.포셉을 사용하여 신장을 조심스럽게 잡은 다음, 흡수성 5.0 Vicryl 봉합사를 요관, 신동맥 및 신정맥 주변으로 밀어 넣습니다. 그다음, 지혈집게로 실을 고정한 후 천천히 이중 결절을 묶습니다. 가위로 매듭 윗부분을 절단하여 신장을 제거합니다.신장을 제거한 후, 요관과 동맥에서 출혈이 있는지 주의 깊게 확인하고 필요한 경우 소작합니다. 5.0 Vicryl을 사용하여 복벽을 봉합한 후, 상처 클립으로 피부를 닫습니다. 동물이 고통, 출혈 또는 이동성 제한 징후를 보이는지 매일 관찰하십시오.동물을 안락사시킨 후, 외과용 가위를 사용하여 요도 상단에서 시작해 흉강을 거쳐 하악까지 절개합니다. 뭉툭한 끝의 가위를 사용하여 복벽의 근육에서 피부를 분리합니다. 다음으로, 팔과 다리를 따라 피부를 절개하고 천천히 피부를 벗겨냅니다.피부 근막과 복벽에 결절이 있는지 면밀히 조사합니다. 그다음 표재성 림프절을 조사합니다. 복벽을 절개하고 좌우 측면을 따라 횡격막까지 절개합니다.수평으로 한 번 절개합니다. 복벽의 앞부분을 제거하여 내장을 노출시킵니다. 육안으로 확인 가능한 눈에 띄는 종양이 있는지 내장의 상태를 살펴봅니다.또한 음식물이나 출혈의 증거가 있는지 확인하기 위해 위와 장의 내용물을 관찰하십시오. 22개 부위의 체크리스트를 바탕으로 각 장기의 종양 존재 여부를 시각적으로 평가하며, 질병 분포를 비교하기 위해 특정 그룹 내 동물들의 점수를 도표로 작성합니다. 이제 간을 조심스럽게 적출하여 PBS로 세척하십시오.그 다음, 육안으로 종양이나 이상 징후가 있는지 검사하고 이전과 동일하게 점수를 매깁니다. 이어서 비장, 신장, 췌장을 적출하여 점수를 매깁니다. 다음으로 요천추, 신장 및 장간막 림프절을 포함한 복부 림프절을 검사합니다.횡격막에서 전이 확산의 증거가 있는지 평가한 후, 횡격막을 제거하고 흉강에 두 개의 측면 절개를 가하여 전면부를 제거함으로써 폐와 심장을 노출시키고, 식도를 조심스럽게 들어 올린 후 심장 위쪽의 기관을 절단합니다. 폐와 심장을 제거한 후, 조직에 결절이 있는지 평가합니다. 다음으로, 포셉을 사용하여 심장을 짭니다.탄성 복원력의 일관성 부족은 종양의 존재를 나타낼 수 있습니다. 마지막으로, 수술용 가위를 사용하여 두개골을 직선으로 절개합니다. 뇌 전체가 노출될 때까지 두개골 조각을 조심스럽게 제거합니다.다섯 가지 서로 다른 동물군에서 질환의 발생, 분포 및 중증도를 평가하기 위해 시각적 점수 체계를 사용하였습니다. 이들 군은 질환의 범위와 중증도에서 서로 다른 양상을 보였습니다. 희생 직후 실시한 생체 발광 이미징 추가 측정을 통해 미세 및 거대 전이 병변을 정량적으로 평가하였습니다.이식법을 모두 숙달하면, 적절한 절차에 따라 동물 한 마리당 5분에서 10분 내에 신장 절제술 또는 부검을 수행할 수 있습니다. 전이성 종양 세포의 유형에 따라 치료 반응이 달라지는지 확인하기 위해, 전이성 신세포암 세포를 사용하였습니다.현재 환자 유래 조직을 동물에 직접 이식하여, 개발 후 국소 및 전이성 질환의 성장을 평가하는 방식이 사용되고 있습니다. 이 기술은 RCC 분야의 연구자들이 임상적으로 유의미한 질병 진행 및 치료 반응을 탐구할 수 있는 길을 열어주었습니다. 특히, 이러한 반응이 국소성 원발 질환인지 혹은 자발적 전이 성장인지에 따라 차이가 있는지 확인하는 것이 핵심입니다.여러 차례의 수술을 받는 소형 동물을 다룰 때는 기관의 동물 실험 프로토콜 가이드라인과 무균 조건을 엄격히 준수해야 한다는 점을 잊지 마십시오. 동물의 편안함과 회복은 본 절차를 적절히 수행하기 위한 결정적인 변수입니다.

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Research

연구

JoVE Journal

Medicine

의학

이게 맹장에 피하 종양의 조각의 cecal 벽이나 이식으로 암 세포 현탁액의 주입 : 두 기술이 모델을 확립하는 데 사용할 수 있습니다. 이 모델은 대장암의 자연 진행을 공부하고 대장암에 대한 새로운 치료 요원을 테스트하는 데 유용합니다.

대장암의 Orthotopic 마우스 모델

이 비디오는 대장암 환자 유래 이종이식편(PDX)의 자연 전이 마우스 모델을 확립하기 위한 프로토콜을 설명합니다. 이러한 이종이식 모델은 인간 암종의 특징을 부분적으로 모방하고 침입 및 전이를 포함한 인간 악성 종양의 중요한 측면을 이해합니다.

자발적 전이 마우스 모델: 정소적으로 주입된 대장암 세포의 전이 가능성을 연구하는 플랫폼

이 비디오에서는 신세포암의 정소성 마우스 모델을 개발합니다. 이 모델은 주입된 신장에서 재현 가능한 원발성 종양과 폐에서 전이성 종양을 생성하여 질병 진행 및 치료를 평가할 수 있습니다.

신세포암 모델 생성: 암세포의 신장 내 이식에 의한 정소성 RCC 쥐 모델을 개발하기 위한 프로토콜

인간의 전립선 암이 동 소성 모델에 폐 종양 세포와 구별 전이의 형성을 순환, 종양 크기의 정량을 허용한다. 세포가 일차 장기 탈출해야 같이, 혈류를 입력하고, 보조 사이트에 이식,이 모델은 인간에서 효과적으로 시나리오 되풀이되었습니다.

인간의 전립선 암 전이의 동소 쥐과 모델

동소 유방암 차 종양 모델 원발 종양의 외과 적 제거가 기재되어 자발적 전이를 생성하는 마우스의 수명을 연장한다. 종양 성장 및 진행 모니터링하고 루시퍼 형광 이미징에 의해 정량화된다.

자발적 유방암 전이의 동소 이식 마우스 모델

전립선암은 미국에서 암 관련 사망의 두 번째로 흔한 원인입니다. 정소성 암 모델은 전립선암의 생물학을 이해하고 치료 요법의 효능을 평가하는 데 유용한 접근 방식을 제공합니다. 이 프로토콜은 정형소 전립선암 마우스 모델을 확립하는 데 필요한 자세한 단계를 설명합니다.

인간의 전립선 암의 전 임상 동소 이식 쥐 모델

면역 적격 마우스에서 신 세포 암의 동소 모델의 구현은 연구자에게 동일한 동물의 신장 차 종양 및 폐 전이의 존재에 의해 정의 된 임상 관련 시스템을 제공한다. 이 시스템은 전임상 생체 내에서 다양한 트리트먼트를 테스트하는 데 사용할 수 있습니다.

전임상 치료의 양적 및 종 방향 평가를위한 동계 마우스 모델 전이성의 신장 세포 암

Murine orthotopic 유 방 암 모델 및 과격 한 유 방 절제술 모델 인간의 유방암 암 진행을 모방 하기 위해 종양 부담 척도를 생물 발광 기술을 소개 합니다.

Murine Orthotopic 전이성 유방암 암 모델을 생성 하 고 수행 Murine 과격 한 유 방 절제술

이 프로토콜은 환자 유래 정형외 이종이식 모델의 생성을 중급 요뇨세포 암종 세포 또는 직장 내 대장암 세포를 비만 당뇨병/중증 복합으로 주입하여 생성하는 것을 설명합니다. 면역 결핍 (NOD /SCID) 림프절 기질 세포의 영향하에 1 차적인 종양 성장 및 자발적인 전이를 위한 마우스, 이는 인간 전이성 질병의 진행을 모방합니다.

인간 비뇨기과 세포 암 및 대장암 종양 성장 및 자발적 전이를 위한 환자 유래 직교 이종이식 모델

우리는 임상적으로 관련된 대장암 간 전이(CRLM) 종양 모델과 종양 성장 및 전이에서 간 허혈 재관류(I/R)의 영향을 상세히 기술한다. 이 모델은 간 전이성 성장의 수술 유발 승진의 근본적인 기계장치를 더 잘 이해하는 것을 도울 수 있습니다.

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배우세요 마우스에서 자발성 전이성 신장 세포 암(mRCC) 모델을 만드는 방법을. 정위적 종양 세포 이식, 신장 절제술, 병리 검사를 통해 전이 부담을 평가하고 실험적 치료제의 효능을 표준화된 방식으로 분석할 수 있습니다.

마우스의 자발적인 전이성 신장 세포 암 (mRCC)를 모델링에 따라 신장 절제술

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