Name: 쥐 이소성 심장 이식 기술 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2014-07-08T23:00:00.000+00:00
Duration: 10 min 27 s
Description: 학습하세요 쥐 이소성 심장 이식 수술 기법을 통해 동맥과 정맥 문합을 형성하고 이식편 생존을 평가하는 방법을. 매일 촉진으로 이식편 건강을 모니터링하여 면역 거부 반응 연구에 활용할 수 있습니다.

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저자는 우리의 실험실에서 그의 이전 작품 박사 비아 지오 피에트라을 감사드립니다.

모든 동물은 IACUC 승인 아래 콜로라도 바바라 데이비스 센터의 동물 시설의 대학에서 무균 조건 하에서 보관 및 NIH의 지침에 따라 마음에 든다고했다. 절차가 시작되면 마취의 깊이는 처음에 발가락 핀치에 의해 호흡 속도의 준수에 의해 판단된다. 1. 기증자 심장 수확 <ol><li> (60 ㎎ / ㎏ IP)을 펜토 바르 비탈을 주입하여 기증자 마우스를 마취. </li><li> 4 방향 감금하여 마우스를 고정화 및 모피 클립. 알코올로 피부를 닦아냅니다. </li><li> 피부를 멀리 해부 후 격막 횡 절개 단지 열등함으로써 복강을 열고. </li><li> 늑골 삽입에 다이어프램 후방을 차단하고 전방과 우량 마음을 노출 전방 흉벽을 들어 올립니다. </li><li> 가슴의 왼쪽과 오른쪽에있는 후방 측면 흉강을 잘라 전체 두께를 확장 할 수 있습니다. </li><li> 격리하대 정맥 (IVC)과 우심방으로의 삽입에 인접한 IVC 주변의 느슨한 5-0 실크 봉합사를 놓습니다. </li><li> IVC에 4 ° C 헤파린 식염수 (200 U / CC)의 1.0 CC를 주입 후 5-0 실크 봉합사와 분열과 혈관을 결찰. </li><li> 비슷한 방식으로 오른쪽 우수한 대정 맥 (rSVC)를 분리하고 5-0 실크 봉합사 및 분할로 결찰. </li><li> 부드럽게 동물의 오른쪽을 향해 마음을 굴러 왼쪽 우수한 대정 맥 (lSVC)를 분리, 5-0 실크 봉합사로 결찰 왼쪽 폐의 동맥을 노출 나눕니다. </li><li> 흉선은 거리의 주요 폐동맥 (PA)와 왼쪽과 오른쪽 PA 지점에서 해부 및 대동맥 궁을 상승 무디게하는 동안 젖은 거즈 아래에 마음을 고정합니다. </li><li> 주변 조직의 대동맥 궁 무료 해부 무딘. 마이크로 가위가 오른쪽 상완 - 두부 동맥 대동맥 근위부를 구분하는 데 사용되는, 즉 심장과 부문 사이에 지점이 없어야합니다대동맥의 포인트. </li><li> 대동맥이 섹션에서는 임플란트 처리를위한 동맥 커프를 형성한다. </li><li> PA 트렁크와 PA의 왼쪽과 오른쪽 지점을 노출 하방 대동맥 커프를 반영합니다. </li><li> 멀리 가능한 한 마음에서 주변 조직에서 왼쪽과 오른쪽 PA 지점을 해부하다 무딘. 이 주변 조직에서 PA 트렁크 쉽게 절개 할 수 있습니다. </li><li> 같은 원심의 분기점에 가능한 단지 근위와 PA 트렁크를 나눈다. 폐동맥의이 섹션에서는 임플란트 프로세스의 정맥 팔목을 형성한다. </li><li> 마음과 넥타이의 기지 주변 5-0 실크 봉합사를 놓습니다. 마음은 그 기본에서 무료로 절단하고, 4 ° C의 식염수에 배치됩니다. 총 수확 시간이 약입니다. 10 ~ 15 분. </li></ol> 2. 심장 임플란트 기술 <ol><li> 펜토 바르 비탈로받는 생쥐를 마취 (60 ㎎ / ㎏ IP 초기 용량 / kg IP 보충 량 25 ㎎을 필요한 경우). </li><li> 모피 클립과4 방향 감금하여 마우스를 무력화하고 멸균 방식으로 포비돈 - 요오드와 드레이프로 피부를 예비 학교. </li><li> 2cm의 중간 선 수직 복부 절개를 복강을 입력합니다. </li><li> 우량 창자를 집어 가슴에 구체화. 케이스를 통해 멸균 촉촉한 거즈 (멸균 식염수)에 싸서 보관하십시오. </li><li> 신장 혈관 아래의 복부 대동맥과 하대 정맥 (IVC)를 분리하고 4-0면 대동맥 주위 관계와 문 합부에 IVC 우수한 다음 열등을 배치합니다. </li><li> 필드 내의 허리 혈관을 확인하고 10-0 나일론 봉합사로 결찰. </li><li> 면 넥타이 매듭, 먼저 열등는 뛰어난 하였다. 이 방법으로 몇 가지 혈액 aortotomy 쉽게 만드는 대동맥에서 유지됩니다. </li><li> 대동맥의 루멘을 입력 30 G 바늘로 aortotomy를 형성한다. 대략 2 mm의 길이에 미세한 마이크로 가위로 절개를 확장합니다. 이 절개 긴 따라 직선으로 이루어진다용기의 itudinal 축. </li><li> 다음과 같은 방식으로받는 사람의 대동맥에 기증자의 대동맥 측 문합에 끝을 확인합니다. 기증자의 대동맥과받는 사람의 대동맥과 넥타이 절개의 떨어지는 각도에 10-0 나일론 봉합사 숙박 스티치를 놓습니다. 기증자의 대동맥과 복부 대동맥과 넥타이에 절개의 우수한 코너의 첫 번째 반대 제 10-0 나일론을 놓습니다. </li><li> 대동맥의 측면 벽에 뛰어난에서 열등에 실행 봉합 라인을 확인하고 이전에 배치 숙​​박 스티치에 넥타이. 당신이 스티치로 함께 intimas (내부 용기면)을 가지고해야합니다. 그런 다음 실행중인 패션과 넥타이 안쪽면을 봉합. 각 측의 처음과 마지막 스티치 가능한 숙박 바늘에 가깝게 배치한다. 그런 다음 5 바늘의 총을 만드는 두 가지 사이에 3 균등하게 스티치를하는 것을 목표로하고 있습니다. </li><li> 다음과 같은 방식으로받는 사람 IVC에 기증자의 폐 동맥 측 문합에 끝을 확인합니다. Punct우레 30 G 바늘 IVC와 약에 대한 절개를 확장 할 수 있습니다. 미세한 마이크로 가위로 2mm. 이 절개 용기의 종축을 따라 직선으로 이루어진다. </li><li> 10-0 나일론으로 IVC의 절개의 하부 모서리에 기증자의 폐 동맥을 묶어. 기증자의 동맥과 IVC와 넥타이 절개의 우수한 코너의 첫 번째 반대 제 10-0 나일론을 놓습니다. </li><li> 폐동맥과 IVC와 넥타이 사이의 실행 봉합 라인을 확인합니다. 각 측의 처음과 마지막 스티치 가능한 숙박 바늘에 가깝게 배치한다. 그런 다음 7 바늘의 총을 만드는 두 가지 사이에 5 균등하게 스티치를하는 것을 목표로하고 있습니다. </li><li> 원심 4-0면 넥타이 재 구축 정맥의 흐름을 놓습니다. </li><li> 정맥 문합의 지혈이 관찰되면 근위 4-0면 넥타이는 점차 느슨해 및 동맥 문합은 지혈에 관찰된다. 모두 문합이 안전한 것으로 간주되는 경우, C를 제거년 otton 마우스에서 넥타이. </li><li> 복부에 창자를 반환합니다. 복부 벽은 실행 방식 5-0 실크 봉합사를 사용하여 두 층으로 닫힙니다. </li><li> 폐쇄시 유체 인공 호흡으로 복부에 멸균, 따뜻한 생리 식염수 1.0 ml의 알약을 관리하고, 생리 식염수 0.8 ml의 수술 후 피하로 주입된다. 다른 지원 조치는 수술하는 동안 필요하지 않습니다. 온난화 담요에 동물을 복구 할 수 있습니다. 총 주입 시간이 약입니다. 초보자를위한 90 ~ 120 분, 경험이있는 45 ~ 60 분. 부 프레 노르 핀 진통제, 0.05 ㎎ / ㎏, SC, 프로 시저의 시작 부분에서 0.1 ~ 0.2 ㎖ 및 72 시간의 수술 후마다 6 ~ 12 시간을 관리 할 수​​ 있습니다. </li></ol> 3. 이식 평가 <ol><li> 트랜스 복부 촉진으로 매일 이식 기능을 평가합니다. </li><li> 이 복강 내 주사를 부여하는 것처럼 마우스를 누르고 있습니다. </li><li> 조심스럽게 복부 벽에 집게 손가락의 끝을 눌러 박동 STR를 확인이식의 ength 및 규칙. </li><li> 0으로 촉진 질 4의 점수 (표준 진폭과 주파수)를 제공 (비 박동는 이식 거부). </li></ol> 중요 사항 : 모든 악기는, 살균 멸균 장갑 절차 전반에 걸쳐 착용하고 멸균 필드가 유지됩니다. 도너 및받는 수술이 운영 현미경을 이용하여 수행된다. 문합은 &quot;깨끗한&quot;있는지 확인합니다. 즉, 바늘을 배치 할 때 다시 벽 적발되지 않습니다이다. 이것은 상당한 수축이 마비 사지에게 뒷다리에 실패한 이식 및 극단적 인 경우가 더 많은 것보다는 가능성이 결과를 흐르게됩니다. 또한, 전체 두께가 혈관 외막 및 봉합 바늘의 내막이 달성 등의 전달하는 매우 중요합니다. 가장자리의 Evertion는 밀봉 및 문합의 치유에 도움 내막 - 투 - 내막 연락이 있다는 것을 보장합니다. 또 다른 매우 중요한 사실또는 문 합부 봉합선의 긴장은 또한 최적의 것을 보장하는 것입니다. 너무 느슨하고 돌이킬 수없는 누수가있을 것입니다, 너무 꽉 흐름에 협착이 발생합니다. 정맥 측에 혼잡 한 마음이 발생할 경우 동맥 측이, 이식의 가난한 관류 될 것이다.

<ol><li>Corry, R. J., Winn, H. J., Russell, P. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Heart+transplantation+in+congenic+strains+of+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Transplant+Proc%22%5BJournal%5D)">Heart transplantation in congenic strains of mice.</a> Transplant Proc. 5 (1), 733 (1973).</li>
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</ol>

저자가 공개하는 게 없다.

이 수술 기법을 마스터하는 것은 쉽지 않다, 그러나 한 번 마스터는 강력한 연구 도구입니다. 연구원 / 의사는 기술의 일관성에 의해 및 세부 사항에 대한 관심에 의해 보상된다. 학습 단계에서 인내심이 핵심입니다. ,는 그것이 최초의 성공적인 절차 및 90 % 성공률을 달성하기 위해 78 시도를 달성하기 위하여 11 시도의 평균 소요 비디오 기반의 학습 도구의 도움으로 니미 (3)에 의해 공표. 영화는 수술 11, 12에서 중요한 교육 도구가되었다. 문제 해결 문합에서 출혈이 발생하고이 때문에 봉합의 올바른 긴장의 부족, 또는 너무 적은 봉합 하나에 가능성이있다. 이러한 Gelfoam으로 에이전트를 유도 응고 누출을 감소하는 데 유용 할 수 있지만, 우리는 외과 의사가 좋은 기술에 의존해야하는 것이 좋습니다. 혼잡 비 심장 박동으로 인해 특히 정맥 측에 너무 꽉 문합에 가장 일반적입니다. 비 beatiNG, 비 관류 이식은 일반적으로 관상 동맥 중 하나에 여행이 기포에 의해 발생합니다. 이는 혈관에 기포의 유입을 방지하기 위해 습기 - 대 - 습식 필드를 유지하는 것이 중요하다. 기술의 한계 연구원은 완벽하게 작동하는 마음에 미치는 영향을 조사하고자하는 경우이 방법은 적합하지 않습니다. 즉, 현재까지 수행하는 것은 불가능 입증했다 동소 이식 기술을 필요로한다. 기존의 방법에 대한 중요성 한 마우스에서 완전 혈관 고체 기관 이식에 대한 효과를 연구하기를 원하는 경우, 심장 모델은 아마도 마스터 가장 간단하다. 폐, 신장 및 간 이식의 마우스 모델은 존재하지만, 많이 배우고 열심히하고 완벽 않습니다. 프로토콜 내에서 중요한 단계 그것은 매우 중요합니다 그 전체 두께 P혈관 외막 및 봉합 바늘의 내막을 포함 엉덩이가 달성된다. 가장자리의 Evertion는 밀봉 및 문합의 치유에 도움 내막 - 투 - 내막 연락이 있다는 것을 보장합니다. 또 다른 매우 중요한 요인은 문합 봉합선의 장력이 또한 최적임을 보장한다. 너무 느슨하고 돌이킬 수없는 누수가있을 것입니다, 너무 꽉 흐름에 협착이 발생합니다. 정맥 측에 혼잡 한 마음이 발생할 경우 동맥 측이, 이식의 가난한 관류 될 것이다. 특히, 반복, 절차 및 세부 사항에 지속적인 관심의 일관성은 좋은 결과와 fundable이지 및 게시 가능한 데이터를 얻을 것입니다.

이 생쥐의 신장, 폐, 간, 췌장 이식을 수행 할 수 있습니다 시대에, 1973 년 이후 기본 장기 이식 면역학 연구의 초석 1-4 마우스의 이소성 심장 이식 모델 남아있다. 개입 년 동안 여러 논문이 절차 개선 / 분류의 5,6 선발 발표되었다. 고체 장기 주로 혈관 이식의 모델로이 절차는 타의 추종을 불허합니다. 일단 마스터이 절차는 동종 거부 반응 7, 만성 vasculopathies 8 허혈 재관류 손상 (9)의 메커니즘의 개발에 대한 연구 자체를 준다. 성공적으로이 과정을 학습 할 수있는 키는 다른 수술, 강사 및 세부 사항에 연수생과 관심의 부분에 인내 같습니다. 과정의 시작 부분에서 새로운 의사는 그 t를 찾을 수헤이 각각의 이식에 많은 시간을 보낼 것입니다. 경험을 얻었을 때, 수술 시간, 따라서 국소 빈혈은 크게 줄일 수 있습니다. 각 단계의 세부 사항에주의를 지불하는 것은 조만간 성공으로 이어질 것입니다. 강사가 전달하는 데 최선을 다 할 수 있고, 이러한 수술시 발생할 수있는 가능한 피트 폭포 모두를 예상 할 수 있지만, &quot;창조적 인&quot;연수생 가능성이 자신의 일부를 찾을 수 있습니다! 다음과 같이 절차의 기본입니다. 대동맥 궁을 상승 기증자는 엔드 - 투 - 사이드받는 사람 복부 대동맥과 기증자의 폐 동맥 문합입니다 엔드 - 투 - 사이드받는 사람 복부 하대 정맥 (IVC)에 문합. 혈액은 관상 동맥에 기증자의 대동맥을 통해 역행 방식으로받는 사람의 대동맥에서 흐른다. 혈액이 관상 정맥동 통해 우심방으로 빼낸 관상 시스템을 통해 유입되면, 우심실로 펌핑되며다음받는 사람 IVC에 폐동맥을 통해. 이러한 방법으로 관상 시스템은 동맥 혈액을 공급 및 동 율동은 재관류 1 ~ 2 분 이내에 이식을 반환합니다. 심장의 왼쪽 챔버에서로드 기본적으로 압력 때문에 왼쪽 심실 무료 벽은 시간이 지남에 위축됩니다.

<table><tbody><tr><td>Instrument</td><td>Roboz #</td><td>Fine Science Tools #</strong</td><td>>Arosurgical #</td></tr><tr><td>Straight micro-dissecting forcep #5</td><td>RS-5015</td><td>11295-51</td><td></td></tr><tr><td>Curved micro-dissecting forcep #7</td><td>RS-5047</td><td>11297-00</td><td></td></tr><tr><td>Curved serrated forcep</td><td>RS-5137</td><td>11052-10</td><td></td></tr><tr><td>Vannas 미세 해부 가위, 짧은</td><td>RS-5610</td><td></td><td>09.140.08</td></tr><tr><td>미세 해부 가위, 직선, 날카롭고 긴</td><td></td><td>11.602.11</td><td></td></tr><tr><td>마이크로 스프링 핸들 바늘 홀더</td><td></td><td></td><td>11.549.15</td></tr><tr><td>스트레이트 모기 집게p</td><td></td><td>91308-12</td><td></td></tr><tr><td>미세 해부 가위, 스트레이트, 뭉</td><td>툭한RS-5962</td><td>14078-10</td><td></td></tr><tr><td>미세 해부 가위, 곡선, 무딘</td><td>RS-5981</td><td>14079-10</td><td></td></tr><tr><td>마이크로 견인</td>기 <td>RS-6540</td><td></td><td></td></tr><tr><td>악기 트레이, 10" x 6 &frac12; &rdquo; x &frac34; "</td><td>RT-1350S</td><td></td><td></td></tr><tr><td>실크 봉합사, 5/0, 22.5m 스풀</td><td></td><td>18020-50</td><td></td></tr><tr><td>10/0 나일론</td><td></td><td></td><td>T4A10Q07</td></tr><tr><td>5/0 실크</td><td></td><td></td><td>E19A05N</td></tr><tr><td>장갑</td><td></td><td>Medex Supply</td><td></td></tr><tr><td>Drapes</td><td></td><td>Precept의 Biogel, #64-9012-9</td><td></td></tr><tr><td>주사기</td><td></td><td>B-D 1cc 인슐린, #329424</td><td></td></tr><tr><td>면 어플리케이터</td><td></td><td>Fisher-brand, # 23-400-100</td><td></td></tr><tr><td>포비돈 - 요오드 면봉</td><td></td><td>PDI, #B40600</td><td></td></tr><tr><td>4/0 면 넥타이</td><td></td><td></td><td>국산 면화 기구로 오토 클레이브</td></tr></tbody></table>

쥐 이소성 심장 이식 기술

Murine Heterotopic Heart Transplant Technique

이 기술이 처음 코리, 윈 러셀에 의해보고 된 이후 지금은 40 년이다. 다른 실험실에서 능숙하게이 기술을 활용하는 것이 어떤 년이 소요되지만, 그것은 널리 전세계의 많은 실험실에서 사용됩니다. 독자적인 기술에 상당한 세련미가 개발 니 이미 2001 년에보고되었다. 우리 센터에있는 3 개의 외과 (Plenter, 그라 지아, 피에트라)의 손에 년 이상에 걸쳐 진화 한 기술이 여기에 설명. 이 기술은 현재 외과 의사와 연구자의 젊은 세대에 전달되고있다. 자세한 내용은 우리가 다른 사람들이 매우 유용한 모델을 사용할 수 있습니다 방식으로 여기에 관련하기 위해 노력할 것입니다 - 주로 니 이미 경험을 바탕으로, 사용 절차는 좋은 정보에 진화했습니다. 니 이미와 마찬가지로, 우리는 학습 비디오 지원은 초보자를위한 귀중한 자원 것으로 나타났습니다.

<html> 이 수술 기법의 활용은 간단한 이식 생존 / 제거 연구, 또는 매우 복잡한 실험 프로토콜을 하나의 길을 엽니 다. 간단하게 아래 그림에서 설명하는 연구에서, 우리는 어떤 경우 공장 자동화 및 / 또는 CD4 T 세포 매개 심장 거부 메커니즘으로 퍼포으로, 참여를 정의하기 위해 노력했다. 이것은 현재 사용할 수있는 마우스 종자의 특별한 배열에 의해 가능하게되었다. 결과는 CD4 이펙터 T 세포에 의한 심장 동종 이식의 직접적인 거절 이식 공장 자동화 표현과 T 세포 퍼포 식의 대안 공헌을 요구하는 보여줍니다. 우리의 상식으로,이 CD4 T 세포에 의한 세포 용해 활성은 생체 내에서 기본 급성 이식 거부 반응에 대한 의무를 역할을 할 수있는 최초의 데모입니다. 1.JPG &quot;/&gt; . 그림 1 퍼포 및 공장 자동화가 (공장 자동화 - 리간드 결핍) CD4 T 세포가 B6 걸레를 재구성하기 위해 사용 된 의무와 CD4 T 세포 매개 심장 거부 B6, B6 PFPKO (퍼포 노크 아웃), 그리고 B6의 GLD의 병렬 진학 담당자 - / - 심장 동종 이식 LPR C3H 야생형 또는 공장 자동화 결핍 C3H받는 사람. 혼자의 FA 제거 (♦, p = NS 제어 중량 C3H 대 + B6 CD4 T 세포) 기증자의 마음 또는 CD4 T 세포 (에서 제거 또는 단독 퍼포에서 ■, p = NS 제어 중량 C3H 대 + B6 CD4 T 세포는) 거부를 폐지하지 않았다. 흥미롭게도, 이펙터 CD4 T 세포에서 FasL의 제거는 대 &lt;●, P &lt;중량 C3H + B6 CD4 T 세포 대 0.02, P &lt;중량 C3H + B6 PFPKO CD4 T 세포 대 0.01이고, p (크게 0.01 지연 거부했다 . C3H의 LPR + B6 CD4 T 세포). 그러나, 대부분의 동종 이식은 여전히​​ (5 4) 거부했다. 중요한 것은, 모두 기증자 공장 자동화 및 CD4 T 세포 퍼포의 동시 제거완전히 폐지 거부 (○, P &lt;0.002 제어 중량 C3H 대 + B6 CD4 T 세포, 중량 C3H + B6 PFPKO CD4 T 세포 및 C3H의 LPR + B6 CD4 T 세포). 이 폐기는 훨씬 더 강력한 CD4 T 세포 FasL의의 개별 파면했다 (○, P &lt;0.003 대 제어 중량 C3H + B6의 GLD CD4 T 세포). 그라 지아 등 10. 허가 재판.

원고는 마우스에 이소성 심장 이식을 수행하는 데 필요한 단계를 설명합니다.

It is now over forty years since this technique was first reported by Corry, Wynn and Russell. Although it took some years for other labs to become ...

이 실험 절차의 전반적인 목적은 생쥐의 이종성 심장 이식을 수행하고 그 건강 상태를 평가하는 것입니다. 이는 먼저 공여자의 심장을 세심하게 적출함으로써 이루어집니다. 두 번째 단계에서는 공여 조직을 이식할 수 있는 충분한 공간을 확보하기 위해 수혜자의 이식 부위를 외과적으로 조성합니다.다음으로, 동맥 및 정맥 문합술을 통해 공여자 심장을 이식합니다. 마지막 단계에서는 수혜자의 절개 부위를 봉합하기 전, 혈관 봉합선의 지혈 상태를 확인합니다. 최종적으로, 매일 촉진하여 이식편의 상태를 모니터링함으로써 다양한 요인이 공여자 이식편의 생존에 미치는 영향을 평가할 수 있습니다.문합 단계는 습득하기 어렵기 때문에 이 방법의 시각적 시연이 매우 중요합니다. 누출과 혈류 제한을 방지하기 위해 봉합사의 장력을 적절하게 유지해야 합니다. 공여 심장을 적출하기 위해, 먼저 마취된 공여 동물을 4방향 구속 장치로 고정합니다.털을 깎아낸 후, 알코올로 피부를 닦아냅니다. 피부를 절개하여 분리한 후, 횡격막 바로 아래쪽에 횡단 절개를 가합니다. 복강을 열기 위해 늑골 부착 부위 뒤쪽의 횡격막을 절개합니다.전층 절개를 통해 흉곽의 좌우 후측면을 절개하여 하대정맥(IVC)을 분리한 다음, 우심방으로 이어지는 IVC 인접 부위에 5-0 실크 봉합사를 느슨하게 두릅니다. 4 °C의 헤파린 처리된 생리식염수 1 cc를 IVC에 주입하고, 5-0 실크 봉합사로 혈관을 결찰한 후 절단합니다.그 후 유사한 방식으로 오른쪽 상대정맥(superior vena CVA)을 결찰 및 봉합한 다음, 심장을 동물의 오른쪽으로 조심스럽게 굴려 왼쪽 상대정맥(superior vena cva)을 분리 및 결찰하여 왼쪽 폐동맥을 노출시킵니다. 이제 심장을 젖은 거즈로 고정하고, 둔성 박리를 통해 흉선을 주폐동맥, 좌우 폐동맥 분지 및 상행 대동맥궁으로부터 분리합니다. 대동맥궁을 주변 조직으로부터 박리한 후, 미세 가위를 사용하여 심장과 대동맥 절단 지점 사이에 분지가 없을 때까지 오른쪽 상완두동맥(brachial cephalic artery)의 근위측에서 대동맥을 절단합니다.대동맥궁의 이 부분은 임플란트 과정을 위한 동맥 커프를 형성합니다. 다음으로, 대동맥 커프를 하방으로 젖혀 폐동맥 주간과 폐동맥의 좌우 분지를 노출시킵니다. 그런 다음, 좌우 폐동맥 분지를 주변 조직으로부터 심장에서 가능한 한 멀리 떨어진 곳까지 둔성 박리합니다.이식 과정을 위해 폐동맥 분지부 바로 근위측으로 가능한 한 원위부에서 폐동맥 간을 절단하여 정맥 커프를 형성합니다. 그런 다음 심장 기저부에 5-0 실크 봉합사를 묶습니다. 기저부에서 조직을 절단하여 분리한 후, 적출된 조직을 4 °C 식염수로 옮깁니다.공여 심장을 이식하기 위한 총 적출 시간은 약 10분에서 15분입니다. 수혜 동물을 마취하고 고정한 후, 피부를 포비돈 요오드로 닦아내고 중간마다 알코올이나 멸균수로 헹굽니다. 이 과정을 세 번 반복한 다음, 수술 부위를 멸균 방식으로 드레이핑합니다.그 다음, 복부 정중선에 2 cm 길이의 수직 절개를 하여 시술을 시작합니다. 복강으로 진입하기 위해 장을 상방으로 견인하고, 조직을 흉부 위로 외부 노출시킨 후 멸균 식염수로 적신 멸균 거즈로 감쌉니다. 이어서 신혈관 아래의 복부 대동맥과 하대정맥을 분리하고, 문합 부위의 상단과 하단에 4-0 면사(cotton tie)로 각각 묶어줍니다.시야 내에 있는 요추 혈관을 확인하고 10 T 나일론으로 결찰합니다. 하단 면사 결찰선을 먼저 봉합한 후 상단 결찰선을 봉합하여 대동맥 내에 일부 혈액을 남겨 대동맥 절개술을 더 쉽게 수행할 수 있도록 합니다. 매듭을 고정한 후, 30게이지 바늘로 대동맥 내강에 진입합니다.그다음 미세 가위를 사용하여 혈관의 종축을 따라 직선으로 약 2mm 길이까지 절개를 확장합니다. 이제 10 aut 나일론 봉합사를 사용하여 공여자 대동맥과 수혜자 대동맥 절개 부위의 하각에 스테이 스티치(stay stitch)를 실시하여, 공여자 대동맥과 수혜자 대동맥 사이의 단단측 문합술(end to side anastomosis)을 수행합니다.봉합사를 묶은 후, 공여측 대동맥의 첫 번째 봉합사와 반대편이자 절개창의 상단 모서리 및 복부 대동맥에 두 번째 10 T 나일론 봉합사를 배치하고 이 봉합사 역시 묶어줍니다. 두 번째 봉합사가 고정되면, 대동맥의 측벽에서 상단부터 하단까지 연속 봉합선을 만드는데, 이때 내막이 서로 맞닿도록 주의하며 이전에 배치한 고정 봉합사에 맞추어 묶어줍니다. 다음으로 내측을 연속적으로 봉합하고, 각 측면의 첫 번째와 마지막 스티치를 고정 봉합사에 최대한 가깝게 배치하여 묶습니다.이 두 봉합사 사이에 세 개의 봉합사를 일정한 간격으로 배치하여 총 다섯 개의 봉합사를 만듭니다. 그다음 공여 폐동맥과 수혜자 하대정맥(IVC)의 단측면 문합을 위해, 먼저 30 gauge 바늘로 하대정맥을 천자하고, 미세 가위를 사용하여 혈관의 장축을 따라 직선 방향으로 약 2 mm 정도 절개창을 넓힙니다. 이어서 10 knot 나일론 실을 사용하여 공여 폐동맥을 하대정맥 절개창의 하단 모서리에 결찰합니다.공여 동맥의 첫 번째 봉합사 반대편과 복부 하대정맥(IVC) 절개창의 상단 모서리에 두 번째 10 oh 나일론 봉합사를 배치하고 묶습니다. 그런 다음 폐동맥과 하대정맥 사이에 연속 봉합선을 만들고 묶는데, 이때 양측의 첫 번째와 마지막 바늘땀은 고정 봉합사(stay stitches)에 최대한 가깝게 배치합니다. 이 두 바늘땀 사이에 일정한 간격으로 5개의 바늘땀을 배치하여 총 7개의 바늘땀이 되도록 합니다.이제 원위측의 4-0 OTT 면사를 풀어 정맥 혈류를 재개합니다. 정맥 문합부의 지혈이 확인되면, 근위측의 4-0 OTT 면사를 서서히 풀어 동맥 문합부의 지혈 상태를 관찰합니다. 두 문합부 모두 안정적이라고 판단되면, 마우스에서 면사를 제거하고 장을 복강 내로 되돌린 후, 5-0 실크사를 사용하여 복벽을 두 층으로 봉합합니다.수술 종료 시, 수액 소생술을 위해 멸균된 따뜻한 생리식염수 1 mL를 복강 내에 일괄 투여하고, 생리식염수 0.8 mL를 피하 주사합니다. 마지막으로, 매일 복부 촉진을 통해 이식편의 기능을 평가하기 위해 복강 내 주사 시와 동일하게 마우스를 보정합니다. 그 다음 검지 끝으로 복벽을 부드럽게 눌러 이식편의 박동 강도와 규칙성을 확인합니다.촉진 품질에 대해 정상적인 진폭과 빈도인 경우 4점부터, 박동이 없는 거부된 이식편인 경우 0점까지 점수를 부여합니다. 이 수술 기법은 단순한 이식편 생존 연구뿐만 아니라 복잡한 실험 프로토콜 모두를 용이하게 합니다. 예를 들어, 본 대표 실험에서는 CD4 양성 T 세포 매개 심장 거부 반응의 메커니즘으로서 Fas 및/또는 perforin의 관여를 조사하였습니다.결과는 CD4 양성 작동 T 세포에 의한 심장 동종이식편의 직접 거부 반응에 graft fast 발현과 T-cell perran 발현의 상호 보완적인 기여가 필요함을 보여주며, 이는 CD4 양성 T 세포에 의한 세포 독성 활성이 생체 내 일차 급성 동종이식 거부 반응에서 필수적인 역할을 할 수 있음을 처음으로 시사합니다. 이 영상을 시청한 후, 건강하게 뛰는 심장 이식편을 만들기 위해 문합 부위에 봉합사를 배치하는 방법에 대해 충분히 이해하게 될 것입니다.

murine-heterotopic-heart-transplant-technique

Research

연구

JoVE Journal

Medicine

의학

마우스 heterotopic 심장 이식 모델은 거부하고 면역 반응의 메커니즘을 연구를위한 중요한 방법으로 많은 수사관에 의해 입증되었습니다. 그러나, 관련 기술은 여전히​​ 도전하고 있습니다. 표준 기술을 수정하여 우리는 1000 개 이상의 이식 성공을 있었다.

마우스의 Heterotopic 심장 이식

뮤린 자궁 심장 이식 모델은, 면역뿐만 아니라 허혈 재관류 손상 연구에 매우 적합하다. 우리는 비 봉합 커프 기술을 사용하여 절차를 수정이 방법으로 1,000 개 이상의 성공적인 이식을 수행 하였다.  여기서, 우리는 비디오를 보충하기위한이 기술의 추가 정보를 제공합니다.

수정 커프 기술을 사용하여 쥐의 자궁 심장 이식 모델

기증자 적출 및 수혜자 혈관 문합을 위한 단순화된 방법을 포함하여 마우스의 심장 이종성 이식을 위한 미세 수술 절차를 위한 기술이 시연됩니다.

이소성 마우스 심장 장기 이식에 대한 수정 방법

커프 기술은 기술적으로 어려운 작은 혈관의 봉합 문합을 피함으로써 마우스의 이소성 경추 심장 이식 모델을 단축하고 용이하게 합니다. 이 비디오 백서에 표시된 기술적 세부 사항을 통해 연구자는 실험실에서 이 모델을 설정할 수 있습니다.

마우스의 이소성 자궁 심장 이식

마우스 자궁 경부 이성애 심장 이식을 위한 커프 기술에 대한 내부 튜브 접근법을 도입하여 커프스 위에 혈관을 상회합니다. 우리는 두 경험이 풍부한 외과 의사 사이의 협력이 수술 시간을 현저하게 단축한다는 것을 발견했습니다.

뮤린 심장 이식을 위한 커프 기술의 최적화

이성애 복부 마우스 심장 이식 모델에서 혈액 회로 재건을 위한 새로운 기술이 입증된다.

복부 마우스 심혼 이식 모형에 있는 혈액 회로 재건

본 프로토콜에서, 마우스 심장 이식 모델은 심장 동종이식 거부반응의 메카니즘을 조사하기 위해 사용된다. 이 이종 심장 이식 모델에서는 수술 효율이 향상되고 수정된 커프 기술을 사용하여 심장 이식의 자궁경부 종단 간 문합에 의해 심장 이식편의 생존이 보장됩니다.

마우스 자궁경부 이종 심장 이식 모델을 위한 수정된 커프 기술

마우스 심장 이식 모델은 이식 면역학을 연구하기 위한 귀중한 연구 도구입니다. 본 프로토콜은 층류 혈류를 허용하기 위해 수혜자의 총 경동맥 및 기증자의 폐동맥 트렁크에 커프를 배치하는 것을 포함하는 마우스 이종 자궁 경부 심장 이식을 자세히 설명합니다.

혈관 수갑을 이용한 마우스 이종 자궁 경부 심장 이식

본 논문은 업데이트된 무균 기술, 진통 및 마취를 사용하여 이종 혈관 심장 이식을 위한 수정된 기술을 설명합니다.

무균 기술, 마취 및 진통의 현대 표준과 일치하는 수정된 쥐 이종 심장 이식 프로토콜

이 프로토콜은 마우스 자궁경부 심장 이식을 위한 단순화된 끝 투 측면 봉합 문합 기법을 제시하여, 이식 면역학 연구를 위한 견고하고 재현 가능한 모델을 제공합니다.

종단 간 문합 기법을 이용한 경추 이종성 마우스 심장 이식 이식 면역학 연구

학습하세요 쥐 이소성 심장 이식 수술 기법을 통해 동맥과 정맥 문합을 형성하고 이식편 생존을 평가하는 방법을. 매일 촉진으로 이식편 건강을 모니터링하여 면역 거부 반응 연구에 활용할 수 있습니다.

쥐 이소성 심장 이식 기술

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