Name: 비치 스케일 곤충에 대한 저항에 대한 미국 밤나무를 (화면에 기술 크립토 fagisuga 린드.) (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2014-05-27T14:00:00.000+00:00
Duration: 12 min 47 s
Description: 학습하세요 미국 밤나무의 비치 스케일 곤충 저항성 선별 방법을. Cryptococcus fagisuga 수집 및 인공 감염 기법으로 내성 및 감수성 나무를 식별하여 산림 병리학 연구에 활용합니다.

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저자는 기꺼이 개발, 수정 및 저항과 너도밤 나무 규모의 곤충에 감염 될 수 있습니다 나무를 식별하기 위해 여기에 설명 된 프로토콜의 응용 프로그램을 지원 한 미국 산림청 산림 건강 보호 평가 모니터링 및 특별 기술 개발 프로그램의 자금 지원을 인정합니다. 우리는 또한 홀덴 수목원, 커틀 랜드에 감사하고, OH, 우리의 미국 너도밤 나무의 저항 검사 프로그램의 자신의 지속적인 협력과 지원을위한.

1 공장 물자 :. 성숙한 필드 나무, 화분에 심는 모종, 또는 화분 이식 <ol><li> 필드 테스트의 경우, 가능한 한 저항 테스트를위한 대규모 감염 또는 질병의 흔적을 보여 성숙한 건강한 미국 너도밤 나무를 선택합니다. 가시 나무 감수성 또한 제어 (도 1)로서 사용되는 식별 될 필요가있을 것이다. </li><li> 화분에 심은 모종 또는 이식을 테스트하기 위해, 수집하고 코흐 &amp; 캐리, 2004 년 캐리 등, 2013 년 한 바와 같이 이식 귀공자의 설명에 따라 beechnuts 발아. </li><li> 47g의 미량 영양소, 477g 완효성 비료 15N-3.9P-9.9K, 700g의 굵은 펄라이트 2.8 CU 당 75g 황산 알루미늄과 개정 토양 혼합 배양토에 모종이나 이식을 성장. 피트 가방. 성장시기에 나중에 필요할 경우, 200 ppm의 질소에 용해 17N-1.3P-14.1K 매주 식물을 비옥. </li><li> 성장시기 동안, 그늘 집에서 식물을 유지합니다. 공장 이전을 이동하는 가을에 외부 휴면 이동 허용온도 제어 저장 시설에 (~ 4 ° C) 4 월 중 11 월 ~. </li></ol> 너도밤 나무 규모 달걀 2. 컬렉션 <ol><li> BBD 득실 거리는 대에서 8 월 중순에 월 중순에서 일반적으로 풍부한 달걀의 존재를 확인하기 위해 손 돋보기 (쉽게 &quot;시키&quot;외관, 그림 1A에 의해 식별) 심하게 오염 된 나무를 검사합니다. </li><li> 부드럽게 플라스틱 밀봉 일갤런 수집 부대 (그림 1B)로, 성인 규모의 곤충, 계란과 다른 파편의 흰색 밀랍 덩어리를 브러시 페인트 브러시를 사용합니다. 적어도 12m 떨어져 세 가지 다른 나무의 최소에서 수집합니다. </li><li> 필요한 경우, 4 ℃에서 최대 두 주 동안 봉인 된 가방 컬렉션에 계란을 저장 테이프가 건조 계란을 방지하기 위해 가방의 내부에 진동 방지 발포 폴리에틸렌의 작은 조각 (2.5 cm의 사각형). </li><li> 성인 (0.60 mm)과 debri에서 규모 달걀 (0.15 × 0.25 mm)를 구분합니다의, 2 &#39;PVC 파이프의 짧은 조각 250 마이크론 나일론 메쉬의 정사각형 조각 (그림 2)을 지원하기 위해 커플 링을 사용하여 체를 구성. </li><li> 체에 성인, 왁스, 계란, 컬렉션 가방에서 파편의 혼합물을 비우고 가볍게 아래 유리 페트리 접시에 메쉬를 통과 계란을 장려하기 위해 작은 페인트 브러시를 사용합니다. 그들은 어려운 계란을 이동하고, 더 많은 정전기를 개최하기 때문에 플라스틱 페트리 접시는 피해야한다. 계란 전과 체질 후의도 3에 나타낸다. </li><li> 정제 한 알은 적어도 일주일 동안 39 ° C에서 배양 접시에 저장 될 수있다. 건조에서 계란을 방지하기 위해 뚜껑에 거품의 젖은 부분을 테이프와 파라 필름으로 밀봉. </li></ol> 3. 계란 생존 분석 실험 <ol><li> 달걀 생존력을 평가하기 위해, 60mm 유리 페트리 접시의 바닥의 주위 (도 4a 주위 바셀린의 얇은 링을 적용하는 10 CC 주사기를 사용 </stroNG&gt;). </li><li> , 링의 중심으로 약 100 계란 전송 페트리 접시에 뚜껑을 배치하고 파라 필름으로 밀봉. 계란 전에 분석을 시작으로 4 ° C에 보관 한 경우 밀봉 된 페트리 접시 2 주 또는 3 주 동안 실온에서 그대로 유지 할 수 있습니다. </li><li> 부화 약충은 석유 젤리에 갇혀 될 것입니다 쉽게 계산 될 수 있고, 빈 계란은 쉽게 자신의 색상과 광택 (그림 4B)에 의해 부화 계란에서 구별된다. 빈 계란 플러스 잔여 전체 달걀의 합 님프의 수를 나누어 생존을 계산한다. 좋은 가능성은 75 % ~ 90 % 부화 계란의 범위에 있어야합니다. </li></ol> 필드에 큰 성숙한 너도밤 나무 나무 4. 스케일 저항 검사 <ol><li> 정량 시험을 부드럽게 발포 폴리에틸렌의 predampened, 오픈 셀 (10) X 15 X 1.3 cm의 사각형의 중심을 가로 질러을 뿌려 해부 현미경을 사용하여 작은 주걱을 사용하여 500 계란을 계산합니다. 에거품을 저해 가능한 한 많은 물을 짜낸 후 젖은. 정성 시험, 500 계란 아웃 카운트 할 수 있고, 작은 유리 바이알 및 약 500 계란의 추가 배치를 측정 할 수있다 그려진 &quot;채우기&quot;라인에 배치. </li><li> 껍질에 직면 계란면 테스트 트리에 폼 패드를 놓습니다. 로프, 끈, 감기, 또는 플라스틱 코팅 하드웨어 와이어 장소에 패드를 누릅니다. 플라스틱 또는 금속 기반의 재료는 오히려 더 쉽게 야생 동물에 의해 소기 천연 섬유 소재보다 사용되어야한다. </li><li> 라인 맨과 아세테이트 기반의 실리콘 접착제와 수증기 투과성 방수 하우스 랩의 규격에 맞게 자르는 23 X 30cm 조각의 측면과는 거품 테스트 패드에 놓습니다. 방수 씰을 만들기 위해 나무에 집 랩의 가장자리를 누릅니다. 동안 접착제 세트 (그림 5)을 제자리에 고정하는, 나무와 집 랩의 주위에 나일론 꼬기 또는 플라스틱 코팅 하드웨어 와이어를 놓습니다. </li><li> 두 가지의 최소 배치바람직하게는 점토의 양측에 각각의 테스트 트리에 테스트 패드. 각 사이트에서 컨트롤로 (분명 자연 규모의 침략에) 적어도 2 감염 나무에 시험 패드를 배치합니다. 이전 제어 나무의 테스트 패드를 배치하는, 회사는 브러시를 곤두 사용하는 모든 자연적으로 발생하는 규모의 곤충이나 알을 제거합니다. 주 : 계란 거품 패드는 또한 침입 레벨이 낮은 영역에서 특히 유용 할 수있는 사육 치수 계란의 목적 나무에 배치 될 수있다. </li></ol> 화분에 심은 묘목 또는 이식의 5. 스케일 저항 검사 <ol><li> 테스트를 위해, 그들에 배치 된 적어도 2 개의 별도의 테스트 패드를 가질 정도로 키가 1cm (5cm 토양 라인 위에 캘리퍼스)의 최소 직경 화분에 심은 나무를 선택합니다. 필요한 경우 테스트 패드를위한 공간을 만들기 위해 작은 쪽 가지 치기. </li><li> 150 계란을 계산하고 규격에 맞게 자르는 통해 그들을 흩어 해부 현미경을 사용하여 2.5 X 7.6 X 1.3 cm 오픈 셀 폴리에틸렌 파이프를 적신렌 거품 패드. </li><li> 플라스틱 코팅 된 와이어를 사용하여, 나무 껍질에 계란 측과 모종에 폼 패드를 붙입니다. 다만 거품 위의 모종의 주위에 집 랩의 작은 사각형을 감싸고 (그림 6A 참조) 아세테이트 기반의 실리콘으로 밀봉. </li><li> 컨트롤로 취약 모종의 가족이나 이식 알려진 포함한다. </li></ol> 6. 데이터 수집 참고 : 약 52-57주 테스트 나무에 폼 패드와​​ 계란을 배치 한 후, 데이터를 수집 할 수 있습니다. 그것은이가 성인이 재현 할 수있는 능력을 판별 할 수 있도록 알을 낳기 시작했다 때까지 수행되지 않습니다하는 것이 중요합니다. 일부 저항 나무에 성인 적은 수의 확립 볼 드문되지 않습니다하지만 재생이 발생하지와. <ol><li> 조심스럽게 폼 패드를 제거하고 손으로 렌즈 나 돋보기 (10X)를 사용하여 껍질에 설립 된 성인 규모 곤충의 수를 계산합니다. </li><li> 폼 패드가 제거 될 때, U 아니다거품 나무의 탈옥하는 일부 성인과 대부분의 계란 클러스터 ncommon (그림 7 참조). 해부 현미경을 사용하여 계란 클러스터와 폼 패드에 부착 남아있다 성인을 계산합니다. </li></ol>

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</ol>

저자는 더 경쟁 재정적 이익이 없다는 것을 선언합니다.

이 분석의 성공을 위해 필요한 중요한 단계는 계란의 생존 능력 테스트 및 테스트를 각 사이트에서 민감한 컨트롤의 사용, 화분에 심는 재료를 수행 있습니다. 이는 트리 또는 모종 당 하나 이상의 테스트 패드를 사용하는 것도 중요하다. 우리는 필드와 화분에 심은 식물에 더 많은 제어 테스트에서 모두 오류의 잦은 소스 패드 실패 할 수 있다는 것을 발견했다. 예를 들어, 필드에, 심지어 물이 줄기는 나무의 한 쪽을 선호하고 테스트 패드의 손실이 발생할 수 아래로 흐르는, 과도한 습기를 방지하기 위해 집 랩 테스트 패드를 포함하는 우리의 수정과. 정확한 결과를 얻기 위해서는, 패드 밑에 트리 표면 및 폼 패드 자체를 모두 점수로 중요하다. 인원수와 달걀 클러스터 이외에, 스케일주기의 단 이동상 I 약충, 또한 관찰 될 수있다 형태라고. 결국 이러한 모바일 님프폼 II 요정이되고, 나무의 껍질에 자신의 먹이 탐침을 삽입합니다. 큰 성인...

너도밤 나무 껍질 질병 (BBD)은 1890 년대 후반 노바 스코샤의 캐나다 지방의 침략 너도밤 규모의 곤충, 크립토 fagisuga의 도입 이후 북미에서 미국 밤나무에 해로운 영향을 미쳤습니다. 너도밤 나무 규모 곤충 곰팡이 (Neonectria의 ditissima 또는 Neonectria의 faginata)의 Neonectria 종 중 하나에 감염 입구의 통로를 제공하는 작은 균열을 만드는 나무 껍질로 그 먹이 탐침을 삽입 할 때이 곤충 질병 단지는 시작됩니다. 곰팡이 균사의 성장에 따라, 조직의 큰 영역은 결국 완전히 나무 가드 링, 죽을 수있다. 질병의 피해는 강풍 4 스냅에이 발생하기 쉬운 만들기, 나무를 약화. 질병의 첫 전파 사망률 수준은 50 % 5만큼 높은 것으로보고되었다. cankers는 나무 제품으로 나무의 가치를 감소시키는 형태로 남아있는 나무는 종종 심각하게 변형된다.0; 이러한 나무는, 설립 스탠드 (6)의 경제적, 생태 학적 가치를 감소에서 다른 더 바람직한 종을 방지 &quot;너도밤 나무 덤불&quot;의 형성에 이르게 루트 발아에 대한 성향이있다. 너도밤 나무 껍질 질병은 미국 너도밤 나무의 멸종으로 이어질 가능성이 아니지만, 그것은 야생 동물 7,8 음식과 서식지의 감소로 이어지는 구성과 건강을 서 변경합니다. 몇 년 동안 BBD의 영향을 스탠드에서, 질병의 증상 무료 남아 나무가보고되었습니다. 인공 접종 시험은이 나무가 규모의 곤충 2에 저항하는 것으로 나타났습니다. 규모 침입하지 않고, Neonectria 감염에 대한 약간의 기회가 곰팡이의 영향을 최소화 할 수있다. 이전 규모 감염의 부재에 Neonectria 감염으로 인해 미국의 너도밤 나무에서 대규모 사망은 결코 없다보고, 그래서 한 BBD에 대한 저항의 너도밤 나무 규모 곤충 결과에 대한 저항. BBD의 관리에 대한 최근의 연구는 식별, 전파, 번식, 그리고 너도밤 나무 규모의 곤충에 대한 저항과 미국의 너도밤 나무의 보존에 초점을 맞추고있다. 유전자 연구는 규모의 곤충에 대한 저항은 유전과 저항 나무의 신중한 선택과 번식이 하나의 세대 9 크게 향상 될 수있는 것으로 나타났습니다. 이 발견은 복원 재배 (10, 11)에 유 전적으로 다양한 BBD 저항 씨의 소스를 제공하기 위해 저항하는 미국 밤나무의 지역 씨 과수원을 설정하는 미국의 주 및 국가 산림 관리자의 노력을 자극했다. 연구는 또한 감염 나무와 저항 나무의 보존을 제거하여 스탠드 유전학의 조림 조작 스탠드 개선 9,12 발생할 수 있음을 지적했다. &lt;/ P&gt; 트리 개선 활동을 통해 또는 조림 처방전을 수행을 통해 BBD의 관리를위한 선택 너도밤 나무 스케일 방지 및 감염 나무를 구별 할 수있는 능력이 필요합니다. 여기에 제시된 방법은 먼저 인위적으로 너도밤 나무 규모의 계란 1 모종을 접종 데이브 휴스턴, 도입 방법에서 적응되었습니다. 이 방법은 저항 또는 유전자 연구에 저항하고 취약 화분 모종 또는 이식 ramets 구별하는 관련 양적 형질 유전자좌 (QTL)를 식별 할 수있는 검사 도구로 사용할 수 있습니다. 대안으로, 시드 필드 과수원 개발 또는 보존에 대해 저항하는 트리를 식별하는 필드 성숙한 나무의 스크리닝에 사용될 수있다. 감염되기 쉬운 나무 식별과 질병에 미치는 영향을 최소화하기 위해 제거 할 수 있습니다.

<table><tbody><tr><td>나일론 메쉬 시트, 250 마이크론</td><td><a href="http://www.amazonsupply.com/dp/B000FMWH1S/ref=sp_dp_g2c_asin" target="_blank"><img src="/img/new_window.png"> 소형 부품</a></td><td>CMN-0250-D</td><td>메시 개구부 크기: 250 마이크론 사각형, 개구율: 34%, 와이어 직경: 180 마이크론, 너비: 24&amp;rdquo;, 길이: 12&amp;rdquo;, 패키지 수량: 1</td></tr><tr><td>Tyvek 홈 랩</td><td><a href="http://www.lowes.com/pd_14582-2020-D13499991_0__" target="_blank"><img src="/img/new_window.png"> DuPont</a></td><td>D1349991</td><td>9피트 x 150피트 롤, 절반으로 절단 요청 가능.</td></tr><tr><td>폴리에틸렌 폼, &amp;frac12;&amp;rdquo; 두꺼운&amp;nbsp;</td><td><a href="http://www.colsfoam.com/apcfp/products.htm" target="_blank"><img src="/img/new_window.png"> Columbus Foam Products</a></td><td></td><td>2피트 x 50피트 롤</td></tr><tr><td>MetroMix 510</td><td><a href="http://sungro.com/products_displayProduct.php?product_id=118&amp;amp;brand_id=17" target="_blank"><img src="/img/new_window.png"> Sun Gro Horticulture</a></td><td></td><td>2.8 cu. ft. 수피, 피트 모스, 질석, 수피 재, 초기 영양분 공급원(석고 포함), 완효성 질소 및&amp;nbsp;백운석 석회암</td></tr><tr><td>Osmocote Plus 15-9-12</td><td><a href="http://everris.us.com/product/15-9-12" target="_blank"><img src="/img/new_window.png"> Everris</a></td><td>E903206</td><td>표준 3-4개월 출시</td></tr><tr><td>사이트 세이버(Sight Savers) 10배율</td><td><a href="http://www.amleo.com/Bausch---Lomb-Illuminating-Codington-Magnifier-10x/p/CM10/" target="_blank"><img src="/img/new_window.png"> Bausch &amp;amp; Lomb</a></td><td>813434</td><td>10배 확대 조명식 코딩턴 렌즈</td></tr><tr><td>Nikon 미니 필드 스테레오 현미경</td><td><a href="http://www.opticsplanet.com/nikon-fieldmicroscope.html" target="_blank"><img src="/img/new_window.png"> Nikon</a></td><td>7314</td><td>20배 배율</td></tr><tr><td>실리콘 II 투명</td><td><a href="http://www.midlandhardware.com/159538.html" target="_blank"><img src="/img/new_window.png"> 유전자 발현 (Gene Expression)</a></td><td>159538</td><td>2.9 oz 투명 창 &amp;amp; 문 틈새 메움재</td></tr></tbody></table>

비치 스케일 곤충에 대한 저항에 대한 미국 밤나무를 (화면에 기술<em&gt; 크립토 fagisuga</em&gt; 린드.)

A Technique to Screen American Beech for Resistance to the Beech Scale Insect (Cryptococcus fagisuga Lind.)

크게 약화 및 변형 생존자 나무 뒤에 남겨두고 너도밤 나무 껍질 질병 초기 ​​사망률이 높은 수준에서 (BBD) 결과. 질병은 곰팡이의 Neonectria 종 중 하나에 의해 감염에 대한 진입 점을 만들어 침략 너도밤 규모의 곤충, 크립토 fagisuga의 활동을 공급함으로써 시작된다. 규모 침입하지 않고, 곰팡이 감염에 대한 약간의 기회가있다. 인위적으로 크게 BBD 영향을 스탠드에 건강한 나무를 만연하는 규모의 계란을 사용하면이 나무는 질병의 복잡한 1의 규모 곤충 부분에 저항 이었다는 것을 보여 주었다. 여기에서 우리는 우리가 현장에서 작은 화분에 심은 모종 이식의 스케일 방지 나무에 대한 화면으로 사용할 수있는 휴스턴에 의한 인공 감염의 기술을 기반으로 개발 한 프로토콜을 제시한다. 스케일 방지 나무의 식별은 나무를 통해 BBD의 관리의 중요한 구성 요소입니다개선 프로그램 및 조림 조작.

그림 6은 감수성의 다른 정도를 나타내는 저항 모종 (C)와 두 개의 취약 모종 (D, E)를 보여줍니다. 인공 감염 테스트를 설정 한 후 감염 성숙한 나무가 57주 모습의 예는 그림 (b)에 표시됩니다. 발포체가 얻어 트리로부터 박리되면 개각충 드물지가 아니며,도 7에 도시 된 바와 같이 남아 그들의 달걀 클러스터는 트리 폼 패드 모두로부터 데이터를 수집하는 것이 필수적이다 이유있는, 발포체에 붙어 . 그림 8은 두 개의 서로 다른 스탠드, 펜실베니아에있는 앨러 게니 국유림 (ANF)와 한 딩턴 주립 공원 (LSP)에있는 다른, 미시간에서 인위적으로 감염 나무에 100 계란 당 설립 성인 곤충의 평균 수를 보여줍니다. 두 스탠드는 BBD와 함께 각 스탠드에 만연 된 건강한 나무의 클러스터발 식별...

너도밤 나무 껍질 질병은 껍질에 곰팡이 진입 점을 만들 너도밤 규모 곤충의 활동을 공급함으로써 시작된다. 스케일 곤충에 강한 나무는 질병에 저항하는. 여기에서 우리는 우리가 너도밤 나무 규모의 저항에 대한 개별 너도밤 나무를 화면에 개발 한 프로토콜을 제시한다.

Beech bark disease (BBD) results in high levels of initial mortality, leaving behind survivor trees that are greatly weakened and deformed.&#160;The ...

이 절차의 전반적인 목표는 해변나무껍질병(beach bark disease)에 저항성이 있는 미국너도밤나무와 감수성이 있는 나무를 구별하는 것입니다. 이는 먼저 미국너도밤나무에서 성체 해변깍지벌레와 그 알을 직접 수집함으로써 수행됩니다. 두 번째 단계는 성체 및 기타 이물질로부터 알을 분리하여 균질한 알 배치를 얻는 것입니다.다음으로, 알의 개수를 세어 폼 패드에 배치한 후 시험 수목의 수피에 부착합니다. 동시에 알의 생존력을 확인하기 위한 시험을 설정합니다. 약 1년 후, 시험 패드를 제거하고 성충의 수와 알 덩어리의 수를 측정합니다.궁극적으로, 너도밤나무에 너도밤나무 깍지벌레를 인위적으로 감염시키는 이 기술은 너도밤나무 껍질병에 저항성이 있거나 감수성이 있는 나무를 식별하는 데 사용됩니다. 이전에 Dave Houston이 개발한 인위적 깍지벌레 감염 기술과 비교했을 때 이 기술의 장점은 대조군 나무와 알 생존력 분석을 활용하며, 유전학적 연구가 가능할 만큼 정량적이고 재현성이 높다는 점입니다. 이 방법은 어떤 나무가 질병에 저항성이 있어 수확 과정에서 보존해야 하는지, 또는 너도밤나무 깍지벌레가 심하게 감염된 미국 너도밤나무 중 종자원 포함을 위한 최적의 후보가 될 수 있는지를 결정함으로써 너도밤나무 껍질병 관리 의사결정에 도움을 줄 수 있습니다.곤충들은 하얗게 덮인 외관으로 쉽게 식별할 수 있습니다. 수동 확대경을 사용하여 알의 존재를 확인하십시오. 알은 보통 7월 중순부터 8월 중순 사이에 풍부하게 관찰됩니다. 감염된 나무 줄기에 1갤런 용량의 플라스틱 밀폐 수집 봉투를 테이프로 고정한 후, 붓을 사용하여 성체 깍지벌레, 알 및 기타 잔해물이 섞인 흰색 왁스 덩어리를 봉투 안으로 부드럽게 쓸어내십시오.최소 12m 이상 떨어진 서로 다른 세 그루 이상의 나무에서 알을 수집합니다. 2.5cm 정사각형의 폴리에틸렌 폼 조각을 적셔 봉투 안쪽에 테이프로 고정하여 알이 마르는 것을 방지합니다. 그런 다음 봉투를 밀봉합니다.알을 운반하는 동안 보호용 공기 쿠션을 형성하기 위해 백 안에 숨을 불어넣습니다. 채집된 알은 밀봉된 백 상태로 4°C에서 최대 2주까지 보관할 수 있습니다. 성체 및 부유물로부터 비늘알을 분리하기 위해, 샌드위치 방식으로 체를 제작합니다.2인치 PVC 파이프의 짧은 조각과 커플링 사이에 250 micron 나일론 메쉬의 정사각형 조각을 설치합니다. 체 아래에 유리 페트리 접시를 놓은 다음, 수집 백에 들어있는 성충, 왁스, 알 및 잔해 혼합물을 체 위에 붓습니다. 그런 다음 작은 페인트 붓을 사용하여 알이 메쉬를 통과해 아래의 유리 페트리 접시로 부드럽게 내려가도록 유도합니다.알이 건조되는 것을 방지하기 위해, 젖은 폼 조각을 뚜껑에 테이프로 고정하고 파라필름으로 밀봉합니다. 정제된 알은 4 °C의 페트리 접시에 최소 일주일 동안 보관할 수 있습니다. 생존 가능한 깍지벌레를 얻으려면, 먼저 성체 산란충을 식별하고 시핑(sipping) 과정을 통해 알과 분리해야 합니다.마지막으로, 난생 생존능력 분석법을 사용하여 이 알들의 생존력을 확인할 수 있어야 합니다. 알의 생존력을 평가하려면, 10 cc 주사기를 사용하여 60 millimeter 유리 페트리 접시 바닥의 둘레를 따라 바셀린을 얇은 고리 모양으로 도포하십시오. 스패튤라로 알을 약 100개 정도 떠서 고리의 중앙으로 옮깁니다.그 다음 페트리 접시에 뚜껑을 덮고 perfil로 밀봉합니다. 밀봉된 페트리 접시를 실온에서 2주 동안, 알을 4 °C에서 보관했던 경우에는 3주 동안 그대로 둡니다. 2~3주 후, 해부 현미경을 사용하여 부화한 약충의 수를 세며, 약충들은 흔히 바셀린에 붙어 있는 상태로 발견됩니다.그런 다음 불투명하고 황색을 띠는 부화하지 않은 알의 수와, 색이 더 밝고 반투명한 부화한 알의 수를 셉니다. 부화한 약충의 수를 빈 알의 수와 남은 부화하지 않은 알의 수의 합으로 나누어 생존율을 계산합니다. 양호한 생존율은 부화한 알 기준 75에서 90% 사이여야 합니다.해변깍지벌레(beach scale)에 대한 저항성 범위 야외 시험. 정성적인 테스트만 필요한 경우, 휴대용 해부 현미경을 사용하여 알 500개를 세어 정량적으로 곤충 시험을 수행할 수 있습니다. 약 500개씩의 추가 배치를 측정하는 데 사용할 수 있는 충전선이 표시된 작은 바이알에 알 500개를 넣으십시오.다음으로 개방형 셀 폴리에틸렌 폼 직사각형 조각을 적신 후, 물기를 최대한 짭니다. 작은 금속 실험용 스패튤라를 사용하여 500개의 알을 적신 폼 중앙에 조심스럽게 뿌립니다. 이제 알을 인공 감염에 사용할 준비가 되었습니다.깍지벌레, 해충 침입 또는 질병의 징후가 없는 성숙하고 건강한 미국너도밤나무를 선택하십시오. 시험 나무에 나일론 밧줄을 묶은 다음, 폼 패드의 알 모양 면이 수피에 닿도록 나무 위에 배치하십시오. 밧줄을 패드 위로 밀어 넣어 고정하십시오.나무의 반대편 로프 아래에 두 번째 패드를 밀어 넣습니다. 각 나무에는 최소 두 개의 패드가 배치되어야 합니다. 로프, 끈 또는 노끈은 야생 동물에 의해 쉽게 수거될 수 있으므로, 그 대신 플라스틱 또는 금속 기반 소재를 사용해야 합니다. 미리 절단하십시오.23 by 30 cm 크기의 증기 투과성 방수 하우스랩 조각을 준비하고, 상단과 측면을 아세테이트 기반 실리콘 접착제로 도포합니다. 그런 다음 하우스랩을 폼 테스트 패드 위에 놓고 가장자리를 나무에 밀착시켜 방수 씰을 만듭니다. 접착제가 굳는 동안 하우스랩을 고정하기 위해 나무와 하우스랩 주위에 나일론 끈이나 플라스틱 코팅 하드웨어 와이어를 두릅니다. 대조군으로 사용할 가시적으로 감수성이 있는 나무를 선택하십시오.뻣뻣한 솔을 사용하여 테스트 패드가 놓일 부위에서 자연적으로 발생한 깍지벌레나 알을 제거하십시오. 그런 다음 각 테스트 사이트의 감수성 나무 최소 두 그루에 테스트 패드를 배치하십시오. 먼저 증강 배양토 혼합물에서 묘목이나 접목묘를 재배하는 것으로 시작하십시오.화분에 심은 묘목이나 접수(grafts)의 테스트는 성장기 후반에 차광시설(shade house)에서 수행합니다. 성장기 동안 필요에 따라 매주 식물에 시비를 하고, 식물을 차광시설에 유지하십시오. 가을철에 4 °C 저장고로 옮기기 전, 외부에서 식물이 휴면 상태에 들어가도록 합니다.1~2년 후 11월부터 4월 사이, 줄기가 충분히 자라 최소 2개의 별도 테스트 패드를 부착할 수 있고, 토양선에서 5cm 위 지점을 캘리퍼스로 측정했을 때 최소 직경이 1cm가 되면 테스트 준비가 된 것입니다. 테스트 패드를 부착할 공간을 확보하기 위해 필요한 경우 작은 측지를 전정하십시오. 해부 현미경을 사용하여 알 150개를 세어 미리 절단하여 적셔 둔 오픈 셀 폴리에틸렌 폼 패드 위에 흩뿌립니다.플라스틱 코팅 와이어를 사용하여 알이 닿는 면이 수피에 밀착되도록 묘목에 폼 패드를 고정합니다. 폼 바로 윗부분의 묘목 주위를 하우스 랩 작은 정사각형 조각으로 감싸고 아세테이트 기반 실리콘으로 밀봉합니다. 대조군의 경우, 알이 포함된 폼 패드를 감수성이 확인된 묘목 가계 또는 접목묘에 부착합니다.약 1년 후, 나무에 부착했던 폼 패드를 묘목 또는 성목에서 조심스럽게 제거하십시오. 그 다음 핸드 렌즈 또는 10배 확대경을 사용하여 수피에 정착한 성체 깍지벌레의 수를 측정하십시오.폼 패드를 제거할 때, 일부 성충과 대부분의 알 집단이 폼과 함께 나무에서 떨어져 나가는 경우가 흔히 발생합니다. 해부 현미경 하에서 폼 패드에 부착된 알 집단과 성충의 수를 측정하십시오. 여기 저항성 묘목의 모습이 제시되어 있습니다.검은색 선은 폼 패드의 범위를 나타냅니다. 수피의 감염은 관찰되지 않았습니다. 여기에 보이는 두 개의 감수성 묘목은 서로 다른 정도의 감수성을 보입니다.인공 감염 57주 후의 감수성 성숙목이 여기에 제시되어 있습니다. 나무들은 펜실베이니아주 Allegheny 국립 산림과 미시간주 Luton 주립 공원에서 깍지벌레 알을 이용해 인공적으로 감염시켰습니다. 이 그래프는 저항성 나무와 감수성 대조군 나무를 비교한 것입니다.각 그룹에서 테스트한 나무의 수는 괄호 안에 표시되어 있습니다. 공급된 알 100개당 성충 수는 그룹 내 모든 나무에 대해 평균을 냈습니다. 감수성 나무에 정착한 성충 수에는 많은 변동이 있지만, 감수성 나무와 저항성 나무 사이에는 뚜렷한 차이가 검출됩니다.이 기술을 시도할 때는 하우스 랩(house wrap)이 나무에 단단히 밀봉되었는지 확인하는 것이 중요합니다. 이는 폼 패드에 과도한 수분이 축적되는 것을 방지하며, 수분이 너무 많으면 분석 결과가 훼손될 수 있습니다. 이 영상을 시청한 후에는 깍지벌레 알을 수집 및 정제하고, 이를 사용하여 너도밤나무가 깍지벌레에 저항성이 있는지 또는 감수성이 있는지 결정하는 테스트를 설정할 수 있을 것입니다.깍지벌레는 실제로 해안 수피병(beach bark disease)을 유발하는 곰팡이와 함께 인과 복합체의 일부를 구성합니다.

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