Name: 고립 된 혈액 관류 쥐 폐 준비에 단일 미세 혈관 투과성의 양을 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2014-06-30T14:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 22 s
Description: 학습하세요 고립된 혈액 관류 쥐 폐에서 단일 미세혈관 투과성을 정량화하는 형광 기반 방법을. 실시간 이미징으로 폐 미세혈관 네트워크를 시각화하고 다양한 조건에서 혈관 반응을 연구합니다.

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연구 KP에 NIH HL75503에 의해 지원되었다.

테네시 건강 과학 센터의 대학의 기관 애니멀 케어 및 사용위원회에 의해 승인 된 동물에서 수행 모든 실험이었다. 관류 쥐 폐 준비를위한 1. 관 <ol><li> 그림 1에서와 같이 압력 변환기 (P23XL)를 연결합니다. 혈액 관류에 대한 타이곤 튜브 (# 18)와 튜브 시스템을 준비하고 현미경 단계에 튜브를 배치합니다. </li><li> 37 ° C의 물을 욕조의 온도를 설정 </li><li> 폐의 입구를 연결하고 타이곤 튜브와 함께 일시적으로 출구. </li></ol><img alt="그림 1" fo:content-width="5in" src="/files/ftp_upload/51552/51552fig1highres.jpg" width="500" /> 그림 1. 혈액 관류 관. 회로도는 격리 된 폐 준비를 통해 혈액 순환에 사용되는 배관 설치를 보여줍니다. 또한 관련된 구성 요소가 있습니다 표시되는 통해 튜브 나의 라우팅. 심장과 폐의 회로도는 튜브 및 폐동맥 (PA)의 접속 위치를 표시하기 위해 포함, 심방 (LA) 정맥 (파란색 점선)에 남아 있습니다. 고립 된 쥐의 폐의 2. 준비 <ol><li> 케타민 (80 ~ 100 ㎎ / ㎏)과과 자일 라진 (5 ~ 10 ㎎ / ㎏)와, 쥐 (250-300그램 남성 흰쥐)를 마취. 마취의 수술 비행기를 확인한 후, 앙와위에서 동물을 배치합니다. </li><li> 기관 절개를 수행, 기관 캐 뉼러 (PE-90)를 삽입하고 수술 봉합사로 고정. </li><li> 심장 천자 (21 G 나비 바늘)에 의해 심장에 헤파린 (100 ~ 200 U)를 주입, 60 초 및에게서 피를 뽑다 혈액 (~ 12 ~ 15 ㎖의 혈액)을 기다립니다. </li><li> 두 캐 뉼러 (, 4 cm 길이, 타이곤 튜브 3 mm 직경의 한쪽 끝에 플레어)를 준비하고 식염수로 채우십시오. </li><li> 개흉술을 수행합니다. 우심실에 절개 (3 mm)를 확인하고 폐쪽으로 절개로 정맥의 플레어 끝을 밀어동맥. 봉합 수술과 폐 동맥에 정맥을 고정합니다. </li><li> 좌심실의 정점 (3 mm)를 절개하고 절개로 두 번째 정맥의 플레어 끝을 밀어 넣습니다. 좌심방으로 정맥을 안내합니다. 제대 테이프 (2 mm 폭)과 좌심실에 캐 뉼러를 고정합니다. </li><li> 모든 결합 조직을 해부하고, 첨부 된 캐 뉼러와 함께 폐와 심장을 제거합니다. 배양 접시에 폐와 심장을 놓습니다. 횡격막 표면 위에 있도록 폐의 위치를​​ 조정합니다. 세 캐 뉼러는 동일한 방향에 직면한다. </li><li> XY 방향으로 조작 할 수있는 단계에 폐 준비를 놓습니다. 현미경으로 오는 모든 단계는 튜브 또는 필요한 경우, 내장 맞춤 제작 단계를 유지하기 위해 수정 될 수있다. </li></ol> 고립 된 쥐의 폐의 3. 혈액 관류 <ol><li> 같은 부피의 알부민 용액 (5 %)로 exsanguinated 혈액을 혼합하고 저장을 추가 할 수 있습니다. 연동 펌프를 시작하고 흐름의 R 설정14 ㎖ / 분으로 먹었다. 혈액 튜브를 채울 수 있습니다. </li><li> 션트을 열어 둔 임시 폐 입구 출구 커넥터를 제거합니다. 각각 폐의 입구와 출구에 폐동맥과 왼쪽 심방 정맥을 연결합니다. 튜브에 기포가 없는지 확인합니다. </li><li> 제 3 압력 변환기 (P23XL)에 기관의 정맥을 연결합니다. 기관 캐뉼라를 통해 30 %의 산소와 폐를 팽창시키고 5cm의 H 2 O에 압력을 유지 </li><li> 폐 관류를 시작하는 클램프 션트을 닫습니다. 폐동맥 각각 10과 3 개 cm H 2 O ~에서 좌심방의 압력을 유지한다. </li></ol> 4. 미세 혈관 주입을위한 폐 준비 <ol><li> 폐 및 보안의 수준 위의 카테터의 확장 튜브의 후단을 올립니다. </li><li> ~ 길이 30cm PE90 튜브에 40 cm 길이 PE10 튜브의 약 30 센티미터 삽입하여 주입 카테터를 준비합니다. 바늘 (30 G)에서에 PE10 튜브의 노출 끝을 연결합니다주사기 (1 CC)에 블. </li><li> 확장 튜브의 제기 후 단부에 카테터 조합을 삽입합니다. 이 저항을 만날 때까지 좌심방을 통해 폐에 카테터 조합을 안내합니다. 이 저항을 충족 할 때까지, 폐에 더 혼자 PE10 카테터를 밀어 넣습니다. 카테터를 삽입 할 때 과도한 힘을 적용하면 폐를 손상되므로주의. </li><li> 링거액과 함께 1 CC의 주사기를 입력하고 주사기 펌프에 연결합니다. 10 μL / min으로 주입 속도를 설정합니다. </li><li> 주입 사이트는 폐의 나머지 부분에 비해 창백 될 것입니다. </li><li> 식염수로 폐를 적셔 발견 주입 사이트를 떠날 정도로 큰 구멍을 가진 플​​라스틱 포장으로 폐를 포함한다. </li><li> O-링 (맞춤 제작)의 바닥에 약간의 꼭지 그리스를 면봉 O-링의 바닥에 유리 커버 슬립 (# 1.5, 22mm 직경)를 배치합니다. 부드럽게 주입 사이트의 커버 슬립과 O-링을 배치합니다. 표준 테스트 튜브 홀리와 O-링을 고정데르. 최근 15를보고 커버 슬립 / O-링의 조합은, 그 아래 폐포 구조를 왜곡하지 않습니다. </li><li> O-링 위의 형광 현미경의 목적 (20X)를 놓고 폐 표면에 초점을 맞 춥니 다. </li></ol> 미세 혈관을 통해 5. 이미징 형광 덱스 트란 교통 <ol><li> 영상 FITC 개화에 대한 현미경을 준비합니다. </li><li> 이미지에 표시 할 영역을 선택하고, 이미지 수집 소프트웨어를 사용하여 1/minute의 속도로 이미지를 수집. </li><li> 주사기 펌프를 사용하여 FITC-덱스 트란 20 kD의 (0.5 ㎎ / ㎖)의 주입을 시작합니다. 혈관에 형광이 점차 증가하고 최대에 도달 할 것입니다. 60 분 동안 주입을 계속합니다. </li><li> 그런 내강 형광을 씻어 링거 주입으로 전환합니다. 10여 분 동안 주입을 유지한다. 워시 오프 동안 분당 1에서 이미지 수집을 계속합니다. </li></ol> 6. 이미지 분석 <ol><li> 이미지 수집 파일을 엽니 다. </li><li> 장소 지역이미지 프레임 내의 미세 혈관에 관심. </li><li> 이미지 파일을 프레임을 재생하고 모든 프레임에 대한 관심의 각 영역에서의 형광 강도를 기록한다. </li><li> 시간의 함수로서 각각의 관심 영역에 대한 형광 강도의 변화를 그린다. </li><li> 최대 형광 강도 및 washoff 10 분 후의 잔류 형광 강도를 계량화한다. </li><li> 관심의 지역과 관련된 미세 혈관의 투과성 인덱스를 얻기 위해 각 관심 영역에서 잔류 형광 강도에 최대의 비율을 계산합니다. </li></ol>

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</ol>

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실시간 영상과 함께 고립 된 혈액 관류 폐 준비는 단일 폐의 미세 혈관의 투과성 변화의 측정을위한 간단한 도구를 제공합니다. 우리는 LPS의 주입에 대한 응답으로 투자율 변화를 정의하려면이 방법을 적용했다. 우리의 데이터는 명확하게 LPS 주입은 미세 혈관 투과성의 증가를 야기하는 것이 좋습니다. 또한, 데이터는 LPS에 의해 유도 투자율 변화 세정맥과 모세 혈관에서 모두 유사 하였다 것을 나타낸다. 따라서,이 기술의 주요 장점은 하나의 미세 혈관의 leakiness뿐만 아니라 혈관의 글로벌 네트워크를 정의 할 수있는 기능입니다. 이 기술은 또한 해외 투자율 변화를 산출 감안할, 이러한 중량 분석과 같은 다른 일반적으로 사용되는 방법을 이용하여 얻어진 것을 사용하여 이러한 값을 비교하는 것이 가능하다. 따라서, 본 방법은 또한 다른 연구에서보고 그와 미세 혈관 유체 누설 정보의 비교를 허용한다. 비교더 널리 혈관 투과성의 변화를 결정하기 위해 기술을 사용, 실시간 영상 기반 ...

폐에 증가 된 미세 혈관의 투과성은 폐포 부종과 손상 가스 교환의 개발에 이르게 및 급성 폐 손상 (ALI) 1-3의 주요 특징입니다. 따라서, 혈관 투과성의 평가는 폐 손상과 제안 된 치료 적 개입의 효과의 범위를 정의하는 데 중요합니다. 혈액 무료 폐 습윤 건조 비율과 미세 혈관의 여과 계수와 같은 중량 분석 널리 투자율 4.5을 추정하는 방법을 사용합니다. 다른 방법은 폐 조직 6-8 방사성 형광 프로브의 유지를 정량화 있습니다. 그러나, 상기 방법은 투자율 데이터 해명 향해 폐 조직 샘플 postexperiment 가공을 필요로한다. 동물은 단일 치료 프로토콜에 대해서만 이용 될 수 있기 때문에 더욱, 큰 동물 번호는 완전한 연구를 위해 필요할 수도있다. 상기 방법의 일반적인 특징은 그들이 뜻 혈관 투과성을 결정한다는 것이다조직 샘플 내의 모든 혈관. 그러나, 잘 폐 마이크로 및 매크로 혈관 9 표현형 달라 확립된다. 따라서, 투과성 반응뿐만 아니라 9,10 다양한 용기 세그먼트 사이에서 이기종 수 있습니다. 따라서, 조직 샘플에있는 모든 폐 혈관의 평균 투자율을 정량화하는 것은 적절이 이질성을 반영하지 않을 수 있습니다. 절연 혈액 관류 폐 제제에서, 폐 표면에 혈관 직립 현미경 4,11,12 의해 시각화 될 수있다. 이 응답 (13)에서 임의의 이질성을 어드레싱, 따라서 단일 혈관의 특징 인 응답을 가능하게하고. 또, 미세 혈관의 형광 이미징을 이용하여 형광 분석법을 기반으로 통합 될 수있다. 또한, 좌심방 microcatheter 혈관 11,14으로 에이전트 및 형광 프로브를 전달하기 위해 사용될 수있다. microcatheter 작은 폐 영역에 배달 제한, 따라서 전주입 에이전트 및 형광에 지역 내에서만 혈관을 포즈. 이것은 동일한 폐 내의 체류 소 영역이 연구에 필요한 동물에서 전체적인 감소로 이어지는 별도의 실험에 사용되는 것을 허용한다. 실시간 영상은 혈관과 분리 된 폐 준비의 하나의 미세 혈관의 혈관 외 형광의 역동적 인 변화를 캡처 할 수 있습니다. 따라서, 이미지 필드 내의 각각의 미세 혈관에 대해, 형광체 및 washoff의 주입 동안 형광의 변화를 기록하고, 오프라인 (14)을 정량 할 수있다. 최대 및 잔류 혈관 형광의 값을 사용하여, 촬상 필드 내의 각 미세 혈관 투과성에 대한 인덱스가 결정될 수있다. 염증성 또는 유해한 제제에 응답 투자율 변화를 결정하기 위하여, 원하는 에이전트 제 투여 될 수 후 투자율 인덱스가 결정. 또, 이미지 필드는 주입에 의해 폐 영역 내의 아무 설정할 수microcatheter, 따라서 원하는 혈관 네트워크를 선택에서 높은 수준의 유연성을 가능하게한다. 따라서, 실시간으로 영상과 연계하여 고립 된 혈액 관류 폐 준비는 단일 폐의 미세 혈관의 투과성을 정량화 할 수있는 매력적인 실험 모델을 제공합니다.

<table><tbody><tr><td>Tygon Tubing</td><td>Fisher Scientific</td><td></td><td>#18</td></tr><tr><td>압력 변환기</td><td>Data Sciences International</td><td>P23XL</td><td>수량 필요</td></tr><tr>3 버터<td>플라이 니들</td><td>Greiner Bio-One</td><td>450081</td><td>21 G</td></tr><tr><td>연동 펌프</td><td>Cole Parmer</td><td>Masterflex L/S</td><td></td></tr><tr><td>PE-90 튜빙</td><td>Becton Dickinson</td><td>427421</td><td>30 cm 필요</td></tr><tr><td>PE-10 튜빙</td><td>Becton Dickinson</td><td>427401</td><td>40cm 필요</td></tr><tr><td>주사기 펌프</td><td>Braintree Scientific</td><td>BS8000</td><td></td></tr><tr><td>O-링</td><td></td><td></td><td>20mm 직경의 구멍과 O-링을 홀더에 고정하기 위한 손잡이로 맞춤 제작</td></tr><tr><td>직립 형광 현미경</td><td>Olympus America</td><td>BX61WI</td><td></td></tr><tr><td>이미지 수집 소프트웨어</td><td>분자 장치</td><td>변형</td><td></td></tr><tr><td>FITC 덱스트란 20KD</td><td>시그마 알드리치</td><td></td><td>0.5 mg/ml (계산된 투과성 지수 값을 기반으로 시험 실험에서 적합성을 나타내는 경우 분자 크기가 다른 덱스트란을 선택할 수 있음)&nbsp;</td></tr><tr><td>지질다당류</td><td>시그마 알드리치</td><td></td><td>혈청형 0111:B4</td></tr></tbody></table>

고립 된 혈액 관류 쥐 폐 준비에 단일 미세 혈관 투과성의 양을

Quantifying Single Microvessel Permeability in Isolated Blood-perfused Rat Lung Preparation

고립 된 혈액 관류 폐 준비 널리 시각화하고 하나의 미세 혈관에 신호를 정의하는 데 사용됩니다. 실시간 이미징이 혼합물을 결합함으로써, 각각의 폐의 미세 혈관 투과성의 변화를 결정하기 위하여 가능해진다. 여기에서 우리는 쥐의 폐를 분리하고자가 혈액을 perfuse하는 단계를 설명합니다. 다음, 우리는 작은 폐 영역으로 microcatheter를 통해 형광 또는 대리인을 주입하는 단계를 설명합니다. 설명이 절차를 사용하여, 우리는 박테리아 리포 폴리 사카 라이드의 주입에 대한 응답으로 쥐의 폐의 미세 혈관의 투과성이 증가 결정. 데이터는 리포 폴리 사카 라이드가 모두 세정맥과 모세 혈관의 미세 혈관의 세그먼트에 걸쳐 유체 누출을 증가 것으로 나타났습니다. 따라서,이 방법은 가능한 혈관 세그먼트 구비 투과성 응답과 비교함으로써, 어떤 응답 이질성을 정의 할 수있다. 폐 투과성을 정의하기 위해 일반적으로 사용되는 방법으로는 폐 조직 샘플의 후 처리를 필요로하지만실시간 이미징의 사용은 본 방법에서 명백한 바와 같이 이러한 요구를 미연에 방지한다. 따라서, 실시간으로 영상과 함께 격리 된 폐 준비는 폐의 미세 혈관의 투과성을 결정하는 기존의 방법에 비해 여러 가지 장점을 제공합니다, 아직 개발하고 구현하는 간단한 방법입니다.

관류 배관 및 관련 장비에 연결된 절연 혈액 관류 폐 제조는도 2에 도시된다. 본 명세서에 기재된 방법은 랫트 ​​종으로 이용 될 수 있지만 설명을 위해, 우리는 스프 라그 돌리 래트를 사용 하였다. 좌심방 microcatheter 통해 주입은 폐의 작은 영역에 도달한다. 주입 영역 주입 유도 탈색 (도 3)에 의해 식별 될 수있다. 실시간 이미징 위치로 폐 제제는도 4에 도시된다. <img alt="그림 2" fo:content-width="6in" src="/files/ftp_upload/51552/51552fig2highres.jpg" width="600" /> 그림 2. 혈액 관류 폐 준비입니다. 사진은 관류 튜브에 연결자가 혈액 관류 고립 된 쥐의 폐를 보여줍니다. 폐의 ...

고립 된 혈액 관류 폐 준비는 폐 표면에 미세 혈관의 네트워크를 시각화하는 것이 가능합니다. 여기에서 우리는 실시간 형광 이미징을 사용하여 격리 된 폐의 단일 미세 혈관의 투과성을 정량화하는 방법을 설명합니다.

The isolated blood-perfused lung preparation is widely used to visualize and define signaling in single microvessels. By coupling this preparation with ...

본 실험 절차의 전반적인 목적은 형광 기반 방법을 사용하여 분리된 쥐 폐의 단일 미세혈관 투과성을 정량화하는 것입니다. 이는 먼저 쥐의 폐를 분리하고 자가 혈액을 관류함으로써 수행됩니다. 절차의 두 번째 단계는 좌심방 미세카테터를 폐의 작은 영역에 삽입하여 형광 표지된 덱스트린을 주입하는 것입니다.그런 다음 표지된 덱스트린을 주입하는 동안 폐 미세혈관의 이미지를 수집합니다. 마지막 단계는 소프트웨어를 사용하여 이미지로부터 단일 미세혈관의 투과성을 정량화하는 것입니다. 최종적으로, LPS 처리 후와 같은 서로 다른 조건 하에서 폐 미세혈관의 투과도 정도를 확인할 수 있습니다.이 절차는 저희 연구실의 박사후 연구원인 Kava Kasami 박사가 시연하겠습니다. 먼저, 마취 상태가 확실히 유지되고 있는 수컷 쥐의 기관 절개술을 수행하십시오. PE 90 기관 캐뉼라를 사용하고 봉합사로 고정합니다. 다음으로, 21 gauge 버터플라이 바늘을 사용하여 심장에 100 to 200 units의 heparin을 주입하십시오.1분간 기다린 후 혈액을 전부 제거합니다. 제거한 혈액을 수집하여 식염수와 함께 따로 보관합니다. 길이가 4cm이고 한쪽 끝이 확장된 3mm tigon 튜브로 제작된 캐뉼라 2개를 채웁니다.이제 흉강 절개술을 수행합니다. 우심실로 캐뉼라를 삽입할 수 있을 만큼만 충분히 절개한 후, 한쪽 캐뉼라의 확장된 끝부분을 폐동맥 방향으로 밀어 넣습니다. 봉합사로 캐뉼라를 고정합니다.동일한 기술을 사용하여 다른 캐뉼라를 좌심실의 심첨부에서 좌심방 방향으로 삽입합니다. 2mm 너비의 탯줄 테이프로 이를 고정합니다. 이제 방해가 되는 결합 조직을 제거하고, 캐뉼라가 삽입된 상태의 폐와 심장을 함께 적출합니다.폐의 횡격막 표면이 위를 향하게 하고 세 개의 캐뉼라를 모두 정렬시킨 상태로 페트리 접시에 옮깁니다. 해부된 표본을 압력 트랜스듀서에 연결된 18번 티곤 튜브(tigon tubing)가 유입 및 유출 튜브 역할을 하도록 설치된 조절 가능한 스테이지로 이동시킵니다. 이제 수집한 혈액을 동일한 부피의 5% albumin 용액과 혼합합니다.이 혼합물을 로딩 리저버에 넣습니다. 펌프를 14 milliliters per minute의 속도로 작동시킵니다. 튜브 내부에 기포가 없는지 확인하십시오.준비 단계에서 폐동맥을 폐 유입 튜브에 연결하고, 좌심방 캐뉼라를 유출 튜브에 연결합니다. 튜브 내에 공기가 없는지 다시 한번 확인하고, 션트가 열려 있는지 확인하십시오.기관 캐뉼라를 세 번째 압력 변환기에 연결합니다. 30% oxygen으로 기관 캐뉼라를 통해 폐를 팽창시킵니다. 폐를 5 cm H₂O 압력으로 유지합니다.이제 션트를 클램프로 고정하고 펌프를 14 milliliters per minute로 가동합니다. 폐 관류를 시작하려면, 관류 중에 펌프를 조절하여 폐동맥압을 약 10 centimeters of water로 유지하고 좌심방압을 3 centimeters of water로 유지하십시오. 혈액이 주입된 폐를 준비하는 것부터 시작하십시오.먼저, 30cm 길이의 PE 90 튜빙 안에 40cm 길이의 PE 10 튜빙을 삽입하여 주입 카테터를 제작합니다. PE 10 튜빙의 반대쪽 끝을 1cc 주사기에 연결된 30게이지 바늘에 부착합니다. 폐에 연결된 튜빙의 끝부분을 준비된 시료 위로 가져온 후, 주입 카테터를 여기에 연결합니다.주입 카테터를 좌심방으로 안내한 다음, 저항이 느껴질 때까지 폐 안으로 진입시킵니다. 과도한 힘을 가하면 폐에 손상을 줄 수 있습니다. 마이크로카테터로 인해 폐에 손상이 발생하면 프로토콜의 성공률이 낮아지므로, 마이크로카테터의 적절한 삽입이 매우 중요합니다.다음으로, 주사기에 Ringer액을 채워 펌프에 연결합니다. 분당 10 µL의 속도로 용액을 천천히 주입하십시오. 주입 부위를 제외한 폐 표면을 촉촉하게 유지하기 위해 플라스틱으로 빠르게 감싸면, 점차 주입 부위가 폐의 나머지 부분에 비해 창백해질 것입니다.이제 폐를 시각화하기 위해 22 millimeter 커버슬립에 O-링을 부착하여 관찰창을 만듭니다. 스톱콕 그리스를 사용하여 O-링을 시험관 홀더에 고정하십시오. 그런 다음 관찰창을 주입 부위 위에 배치합니다.20 x 대물렌즈를 커버슬립 위로 회전시켜 위치시키고 폐에 초점을 맞추어 설정을 완료합니다. 시각적 왜곡은 발생하지 않아야 합니다. 이제 선택한 용액을 폐에 주입하십시오.이 예시에서는 식염수 투여 후, 시린지 펌프를 사용하여 1 mL의 ZI 결합 덱스트린을 60분에 걸쳐 폐에 주입합니다. 이미징 소프트웨어를 사용하여 1시간의 주입 과정 동안 1분마다 한 장의 이미지를 기록하고, 이어지는 세척 단계 동안 10분 더 기록을 계속합니다. FITC-덱스트린 주입이 끝나면 동일한 유량으로 링거액을 최소 10분 더 주입하여 이를 세척합니다. 이후 획득한 이미지를 분석할 때, FITC 주입 중 관심 영역의 최대 형광 강도를 측정합니다.그 다음, 10분간의 세척 후 잔류 형광의 최대 형광 강도를 측정합니다. 혈관 투과성의 변화는 박테리아 리포폴리사카라이드 처리 후 fitzy dextrin 주입을 사용하여 조사되었으며, 이는 LI의 널리 사용되는 모델입니다. Ringer액으로 처리한 미세혈관에서는 잔류 fit e 형광이 낮게 나타났으나, LPS로 처리한 혈관에서는 높게 나타났습니다. 또한, Ringer액 주입과 비교하여 LPS 주입은 투과성 지수의 유의미한 감소를 유발했으며, 이는 이미지 영역 내 모든 혈관에서 전반적인 투과성 증가가 일어났음을 시사합니다.또한, 링거액 주입과 비교하여 LPS 주입은 투과성 지수를 유의하게 감소시켰으며, 이는 영상 영역 내의 모든 혈관에서 전반적인 투과성 증가가 일어났음을 시사합니다. 이 영상을 시청한 후에는 고립된 조류 폐를 준비하고, 왼쪽 꼬리에 마이크로카테터를 삽입하며, 마이크로 수준에서 투과성을 정의하는 방법에 대해 충분히 이해하게 될 것입니다.

quantifying-single-microvessel-permeability-isolated-blood-perfused

Research

연구

JoVE Journal

Biology

생물학

다음 프로토콜은 환기를 분리하고 오른쪽 심실 afterload에 혈액의 흐름, 공기 흐름,기도 변화와 혈관 변화의 효과를 계량하기 위해서는 안정이나 타악기 폐동맥 혈관 압력 유량 관계를 측정하는 마우스 폐가 instrumenting 과정을 설명합니다.

절연, 환기 및기구 마우스 폐의 특성화는 타악기 흐름 Perfused

<em&gt; 생체 내</em혈관 투과율을 테스트하려면&gt; 분석

저산소 폐 혈관 수축 (HPV)은 폐포 저산소증 폐 관류가 환기와 일치하는 중요한 생리학적 현상이다. HPV에 기여하는 주요 혈관 세그먼트는 인트라 아시나르 동맥입니다. 여기서, 우리는 직경 20-100 μm의 뮤린 폐 혈관의 HPV의 분석을 위한 우리의 프로토콜을 기술합니다.

Murine 정밀 절단 폐 슬라이스를 사용하여 폐 내 동맥의 저산소 폐 혈관 수축의 비디오 형태 측정 분석

본 연구의 목적은 쥐의 동계 내피 세포와 성상 세포의 공동 문화를 포함하는 생체 BBB 모델의 재현성을 확인하는 것이 었습니다. 내피 세포 단일 층은 높은 봉사자 낮은 LY 투과성을 발표했다. 특정 TJ 단백질의 발현은 염증과 운송 및 수용체의 기능에 기능적인 응답은 평가했다.

설정 - 업<em&gt; 체외</em쥐 뇌 혈관 벽의&gt; 모델 (BBB)​​ : BBB 불 침투성 및 수용체 매개 운송에 초점

폐쇄 흉부 폐폐 생체 내 현미경을 사용하여 자동화된 방식으로 쥐의 흉막 표면 전이에서 미세순환 혈류 속도를 측정하는 방법을 제시합니다. 이 모델은 설치류의 폐 전이에 대한 생리학적 연구를 수행하기 위한 광범위한 도구로 사용될 가능성이 있습니다.

쥐의 폐 전이의 미세 혈류 속도의 자동 측정

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modified Landis 기법은 미세관류 기법을 사용하여 통제 및 테스트 조건에서 정상 및 유전자 변형 쥐의 장간막에서 개별 미세혈관의 수압 전도도를 쌍으로 측정할 수 있습니다. 생리학적 조건에서 미세혈관 투과성과 경혈관 교환을 조절하는 메커니즘을 평가하는 편리한 방법을 제공합니다.

Microperfusion 기술은 쥐 장간막에서 미세 혈관 투과성의 규정을 조사하기 위해

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고립 된 토끼 폐 제제는 폐 연구에서 금 표준 도구입니다. 이 간행물은 기도 반응성, 폐 보존 및 폐 이식 및 폐 부종의 전임상 연구에 관여하는 생리적 및 병리학 적 메커니즘의 연구를 위해 개발 된 기술을 설명하는 것을 목표로합니다.

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여기에서는 Isolectin B4의 단일 염색을 사용하여 전체 마우스 폐 조직에 대한 폐 미세혈관 밀도의 편향되지 않은 정량화를 수행하는 간단하고 경제적인 프로토콜을 설명합니다.

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고립 된 혈액 관류 쥐 폐 준비에 단일 미세 혈관 투과성의 양을

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