Name: 마우스의 신경 병증 성 통증의 좌골 신경의 바지를 접 모델 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2014-07-16T15:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 9 s
Description: 학습하세요 마우스 좌골 신경에 폴리에틸렌 커프를 삽입하여 신경 병증 성 통증 모델을 수립하는 방법을. 폰 프레이 필라멘트로 기계적 통각 과민을 평가하고 노르트립틸린 및 가바펜티노이드 치료 효과를 검증할 수 있습니다.

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이 작품은 (IY에) 두뇌 게임 및 행동 연구 재단에서 센터 내셔널 드 라 공들인 Scientifique (계약 UPR3212), 스트라스부르 대학과 NARSAD 젊은 탐정 그랜트에 의해 지원되었다. 출판 비용은 Neurex 네트워크 (프로그램 INTERREG IV 어퍼 라인)에 의해 지원된다.

프로토콜은 &quot;위원회 (CCT) D&#39; ETHIQUE EN MATIERE 디부 실험 ANIMALE 드 스트라스부르&quot;(CREMEAS)에 의해 승인되었습니다. 발 탈퇴 임계 값의 1.베이스 라인 측정 <ol><li> 마우스는 시험 절차를 시작하기 전에 이주에 적어도 10 일 동안 동물 시설 길들 허용. </li><li> 본 프레이 테스트 셋업과 4 장에서 설명하는 본 프레이 절차에 마우스를 길들. </li><li> 수술하기 전에 4.3 절에 설명 된대로 본 프레이 필라멘트와 기계 발 철수 임계 값을 평가합니다. 참고 : 적어도 세 안정적으로 연속 값이 발 철수 임계 값에 얻을 때까지 다른 일에 절차를 반복합니다. </li><li> 이 그룹은 처음 발 철수 임계 값에 차이가되지 않도록 다른 실험 그룹에 마우스를 할당합니다. </li></ol> 팔목 Implantati 2. 수술 절차에 <ol><li> 동물의 무게를 측정. 참고 : 마우스 체중 후술 커프스 삽입 절차 20g 이상이어야한다. </li><li> 케타민 (17 ㎎ / ㎖) 및 마취 약 45 분을 제공 0.9 %의 NaCl에서 자일 라진 (2.5 ㎎ / ㎖)의 혼합물을 4 ㎖ / kg의 복강 내 주사로 동물을 마취. </li><li> 핀셋 뒷 발을​​ 집어 발 반사의 부재를 확인하고 동물이 완전히 마취되어 있는지 확인하기 위해 눈 반사의 부재를 확인합니다. </li><li> 전기 면도기를 사용하여 엉덩이에 무릎에서 오른쪽 다리를 면도. </li><li> 면봉으로 눈에 눈 보호 액체 젤을 적용합니다. </li><li> 그 왼쪽에 동물을 배치하고 작은 베개에 오른쪽 뒷다리를 배치하고 접착 테이프로 베개에 오른쪽 뒷다리를 유지한다. </li><li> 거즈 패드 나 면봉을 사용하여 클로르헥시딘 70 % 에탄올로 수술 필드를 소독. </li><li> 집게 손가락을 사용하여 대퇴골을 찾아 확인약 0.5 cm의 절개는 대퇴골의 대퇴골과 약 1.5 mm 전방에 평행. </li><li> 두 멸균 스틱 대퇴골에 가까운 근육을 분리합니다. 주의 사항 : 근육을 절단하지 마십시오. 일반적으로 근육 층은 출혈없이 쉽게 분리 및 좌골 신경은 볼 수 있습니다. 출혈의 경우, 혈액을 흡수하는 멸균 면봉을 사용합니다. </li><li> 주요 지점을 노출하는 좌골 신경 아래 두 멸균 스틱을 삽입하고, 멸균 생리 용액 (0.9 % 염화나트륨)과 신경을 수화. </li><li> 분할 PE-20 폴리에틸렌 튜브 (커프스) 날카로운 강철 스틱의 도움과 불독 클램프, 0.38 mm의 ID / 1.09 mm 외경의 사전 준비 멸균 2mm 부분을 잡습니다. <ol><li> 약간을 열 때, 팔목에 날카로운 강철 막대기를 삽입합니다. </li><li> 커프 측면 개구를 사용하여, 커프스의 한쪽 끝에 불을 삽입하고 커프 평행. 그것은으로 커프를 개최 있도록 불독 (180 °) 회전측면 개방에 반대면. 불독을 닫고 날카로운 강철 막대기를 제거합니다. 참고 : 회전이 들고 온 커프 삽입에 최적화 된 위치에, 불독 클램프도 부분적으로 개방 커프를 유지하는 데 도움이되는 수 있도록하기위한 것입니다. 모델 및 불독 클램프의 크기가 절차의이 단계에 중요하다. </li></ol></li><li> 두 번째 실험은 신경에서 두 개의 스틱을 잡고 부드럽게 약 4 mm 길이입니다 좌골 신경의 한 부분에 대한 액세스를 용이하게하기 위해 스틱을 분리해야합니다. </li><li> 엉덩이에 인접하다 신경의 부분의 주위에 불에 말단 인 커프스 부분을 삽입하여 시작, 좌골 신경의 주요 지점의 주위에 2mm의 커프를 삽입합니다. </li><li> 튜브의 형태를 압박하거나 변경하지 않고, 플라이어와의 두 말단 측에 압력을 행사하여 부드럽게 팔목을 닫습니다. 올바르게 닫혀 있는지 확인하기 위해 커프를 켭니다. </li><li> 면도, 피부 층의 재치를 봉합H 수술 매듭. </li><li> 깨끗한 집 케이지의 왼쪽에 마우스를 놓습니다. 마우스가 깨어 때까지 가열 램프 아래에 보관하십시오. </li><li> 여분의 물을 추가하고 홈 케이지에 직접 어떤 중국 사람을 배치합니다. </li></ol> 샴 제어 3. 수술 절차 <ol><li> 단계 2.15-2.17으로 수행 한 다음, 2.9 단계 2.1 단계에서 전술 한 바와 같이 동일한 수술 절차를 적용한다. 가짜 컨트롤의 경우, 2.14 유일한 관심사 커프 삽입에 단계 2.10를 생략합니다. </li></ol> 4. 본 프레이 테스트 <ol><li> 부드러운 스테인리스 스틸 (1 MX 50cm, 천공 테두리 사이에 2.5 mm로 5mm의 원형 구멍)의 상승 공판에 구멍이 명확 개별 박스 (7cm X 9cm X 7cm)에 마우스를 놓습니다. 참고 : 최대 12 생쥐 병용이 세트 업에 테스트 할 수 있습니다. 운영하는 동물은 수술 후 하루 테스트 할 수 있습니다. 그러나, 복구의 3 일을 관찰 수술 후 과민 반응을 감소하는 것이 좋습니다가짜를 제어합니다. </li><li> 동물 시험을하기 전에 15 분 동안 습관화 할 수 있습니다. </li><li> 상승하는 힘의 계열의 각 뒷발의 발바닥 표면에 본 프레이 필라멘트를 적용합니다. 주의 사항 : 본 프레이 필라멘트 보정 직경의 플라스틱 머리입니다. 그들은 오래 5 cm이며, 휴대용 어플리케이터에 고정되어 있습니다. 필라멘트 애플리케이션의 속도가, 굽힘 및 애플리케이션의 재생 시간의 정도는이 테스트 3으로 수득되는 임계 값에 영향을 미칠 수있다. 마우스에서 본 절차, 가장 자주 사용되는 필라멘트는 0.16, 0.4, 0.6, 1, 1.4, 2, 4, 6, 8, 10g이다. <ol><li> 필라멘트 단지 굴절 될 때까지 왼쪽의 발바닥 표면에 선택 필라멘트를 적용합니다. 절차에게 3-5 회 연속 반복 한 다음 오른쪽 발에 동일한 작업을 수행. 필라멘트는 양쪽 발에서 테스트되면, 다음 동물을 시험한다. 참고 : 더 민감 할 수 있습니다 발 측면 테두리를하지 마십시오. 예상 응답은 발입니다철수, 갑자기 주춤하거나 발을 핥는. 적어도 세 예상 응답이 다섯 시험 중 관찰되는 경우에 긍정적으로 응답을 고려하십시오. 주어진 발은 항상 세 번 테스트,하지만 네 번째와 다섯 번째 시험이 완료되는 경우에만 1 또는 2 응답 (들)은 처음 세 개의 테스트 동안 관찰 (했다)였습니다. C57BL/6J 마우스에서 1.4 g 필라멘트와 미리 수술 테스트를 시작합니다. 수술 후, 0.4 g 필라멘트와 테스트를 시작합니다. 긍정 응답이 제 시험 필라멘트 관찰되면, 단계 4.3.2에서 (대신 그 이상) 낮은 힘의 필라멘트를 테스트한다. </li><li> 4.3.1 절차에 따라 다음 동물에 같은 필라멘트를 적용합니다. 모든 동물이 테스트되면, 더 큰 힘의 다음 필라멘트와 첫 번째 동물에 다시 시작합니다. 모든 쥐가 긍정적 인 응답을 줄 때까지 절차를 반복합니다. 주의 : 시험 각 동물 두 개의 연속 된 필라멘트가 긍정적 인 응답을 줄 때까지. 발 재치로 긍정적 인 반응을 준 낮은 필라멘트의 그램 값을 고려이 동물에 대한 hdrawal 임계 값. </li></ol></li></ol>

저자는 더 경쟁 재정적 이익이 없다는 것을 선언합니다.

&quot;커프&quot;모델은 처음에 좌골 신경 6 주위에 여러 소맷 부리의 주입과 표준화 및 재현 만성 수축 부상을 얻기 위해 쥐에서 개발되었다. 그것은 다음 몇 가지 연구 그룹은 여전히 여러 팔목 삽입 19 ~ 22를 사용하더라도 하나의 커프스 7,8 이식 수정되었습니다. 그 다음 형질 전환 동물을 사용할 수있는 가능성을 열었다 생쥐 9,23에 적응시켰다. 커프는 보통 2mm 긴하지만, 다른 길이도 쥐 22에 사용되었습니다. 폴리에틸렌 튜브는 종에 따라 다릅니다 마우스 9 PE-20, 및 쥐에서 PE-60 (24, 25) 또는 PE-90 7,8,26,27. 기계적 이질통은 본 프레이 머리카락으로 측정된다. 이 테스트에서, 발 철수 임계 값의 절대 값은 동물 28 3 구부리는 필라멘트의 기간에 스탠드하는 표면에 따라 달라질 수 있지만, 이러한 요인은하지 않습니다신경병 이질통의 검출에 영향을 미친다. &quot;커프&quot;모델은 신경 병증 성 통증의 메커니즘의 연구에 대한 관심입니다. 그것은 유수와 수초 섬유 6,29 및 감각 신경, 차 구 심성 신경과 척추 신경 19,21,22,30-35의 기능 변화의 형태 학적 변화를 연구하는 데 사용되었다. 그것은 아교 세포 활성화 및 신경 음이온 그라데이션의 중심 이동이 활동하고 척추 통각 신경 세포의 반응 및 신경 병증 성 이질통 24,36-38의 변화에 참여하는 것을 데모를 허용했다. 오피오이드 수용체 16,42-45과 니코틴 수용체 (46)의 글루타민산 염 수용체 7,39-41의 영향은이 모델을 연구 하였다. 모델의 또 다른 관심은 신경 병증 성 통증, 즉., gabapentinoids과 항우울제의 현재의 치료에 대한 응답이다. 임상 관찰과 유사 : gabapentinoids은 모두 표시N 높은 복용량에서 급성 짧은 지속되는 진통 작용 및 억제제 관련 투여 급성 진통 효과가없는 치료, 삼환계 항우울제 및 선택적 세로토닌과 노르 아드레날린 재 흡수의 몇 일 후에 관찰하지만 그들은 완화 지연 지속을 표시하는 지연 지속 완화 조치 1 ~ 2 주간의 치료 및 선택적 세로토닌 재 흡수 억제제 플루옥세틴을 요구 조치는 16 비효율적이다. 이 모델은 환자의 48 ~ 51에서 테스트하기 위해 새로운 치료 표적을 보여줄 수 있습니다 이러한 치료에게 16-18,44,45,47의 기초가되는 분자 메커니즘을 연구하는 것이 적절하다. 마지막으로, 모델은 신경 병증 성 통증의 anxiodepressive 결과의 연구를 할 수 있습니다. 임상 적으로, 이러한 결과는 신경 병증 성 통증 환자의 세 번째의 주위에 영향을 미치지 만, 전임상 적은 고통의 감각 측면보다 연구한다. 이 모델에서, 불안과 같은 및 depres의 시간에 따른 개발시브 같은 표현형은 본 (52)이며, 관련된 메커니즘 따라서 해결 될 수있다. 신경 병증 성 통증의이 마우스 모델에서 표준화 된 팔목과 절차는 기계적 이질통에 대한 낮은 interindividual 변화가 발생. 유전자 변형 동물 17,18,44-47,52, 오래 지속되는 이질통을 사용하는 가능성은, 임상 치료에 사용되는 반응과 anxiodepressive 증상의 시간에 따른 개발은 다양한 측면의 연구를위한 모델 적절한 만들고 이미 연구의이 분야에 가치있는 정보를 가져왔다 신경 병증 성 통증과 치료의 결과.

신경 병증 성 통증은 보통 만성 및 병변 또는 체성 시스템에 영향을주는 질환의 결과로서 발생한다. 중추 신경계 내에서 부상 감각 뉴런과 전체 통각 경로를 따라 부적응 변경이 복잡한 증후군에 참여한다. 다양한 모델은 신경 병증 성 통증의 치료 1-3을 연구 설치류에서 개발되었다. 당뇨병에서 관찰되는 신경 병증, 말초 신경, 중추 손상, 삼차 신경통, 항암 화학 요법, 포진 후 신경통 등으로 연속 신경 병증에 부상을 흉내 낸 알려진 원인 질환, 신경 병증 성 통증 목표의 모델에 따라 서로 다른 모델의 설치류에 말초 신경 손상은 좌골 신경에 초점을 맞 춥니 다. 이러한 모델은 압축 및 / 또는이 신경의 섹션에 따라 달라집니다. 실제로, 좌골 신경은 상대적으로 쉽게 수술을 가르치시 발 철수 반사에 따라 검사 할 수 있습니다. 미주리만성 신경 압축의 DELS 예를 들면 다음과 같습니다 : 만성 수축 손상 (CCI) 4, 5, 6-9을 정돈 해 놓을 좌골 신경, 부분 좌골 신경 결찰 (PSL) (10), 척수 신경 결찰 (SNL) 11, 또는 공통 비골 신경 결찰 12. &quot;아끼지 신경 손상&quot;(SNI)이라 모델도 널리 사용된다. 제 3 분기가 13-15 그대로 유지하면서 그들은 단단히 결찰 및 좌골 신경의 세 단자 가지 중 두 가지의 axotomy으로 구성되어 있습니다. 좌골 신경을 대상으로 신경 병증 성 통증의 다양한 모델, 부상 뒷발에 만성 기계적 이질통 (일반적으로 비 침해 성 자극에 대한 통각 응답) 결과. 여기에서, 마우스에있는 신경 병증 성 통증 &quot;커프스 모델」에 대한 상세한 수술 절차를 설명한다. 그것은 좌골 신경 6-9의 주요 지점 주위에 폴리에틸렌 커프스의 주입으로 구성되어 있습니다. 일본 프레이 필라멘트 전자의 사용은 설명한다. 이 필라멘트는이 모델에 존재 오래 지속 통각 증상 기계적 이질통을 평가 할 수 있습니다.

<table><tbody><tr><td>PE-20 폴리에틸렌 튜빙</td><td>하버드 장치</td><td>PY2-59-8323</td><td>수술 전 분할</td></tr><tr><td>케타민</td><td>센트 라벳</td><td>IMA004</td><td></td></tr><tr><td>Xylazine HCl</td><td>Sigma</td><td>X1251</td><td>수술 전 갓 준비</td></tr><tr><td>Ocry-gel</td><td>Centravet</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Pliers</td><td>FST</td><td>11003-12</td><td>52.5 mm 스트레이트</td></tr><tr><td>불독 클램프</td><td>FST</td><td>p130 18038-45</td><td></td></tr><tr><td>천공 플레이트</td><td>CTTM</td><td></td><td></td></tr><tr><td>폰 프레이 필라멘트</td><td>Bioseb</td><td>NC-12775</td><td></td></tr></tbody></table>

마우스의 신경 병증 성 통증의 좌골 신경의 바지를 접 모델

The Sciatic Nerve Cuffing Model of Neuropathic Pain in Mice

신경 병증 성 통증은 병변 또는 체성 시스템에 영향을주는 질환의 결과로서 발생한다. 부상 감각 뉴런과 중추 신경계 내에서 전체 통각 경로를 따라 부적응 변경에서이 증후군은 결과. 그것은 일반적으로 만성 치료에 도전합니다. 신경 병증 성 통증의 치료를 연구하기 위해, 다른 모델은 설치류에서 개발되었다. 이러한 모델은 따라서 말초 신경 손상, 중앙 부상 및 신진 대사, 전염성 또는 화학 요법과 관련된 신경 병증을 재현, 알려진 원인 질환에서 파생됩니다. 말초 신경 손상의 뮤린 모델은 종종 액세스하기 쉽고, 뒷발에 통각 테스트를 허용 좌골 신경을 표적으로한다. 이러한 모델은 압축 및 / 또는 섹션에 의존한다. 여기에서, 마우스에있는 신경 병증 성 통증 &quot;커프스 모델」에 대한 상세한 수술 절차를 설명한다. 이 모델에서, 표준화 된 길이 (2 ㎜)의 PE-20 폴리에틸렌 튜브의 커프스는 일방적으로 내가있다좌골 신경의 주요 지점 주위에 mplanted. 그것은 오래 기계적 이질통을 유도 즉., 본 프레이 필라멘트를 사용하여 평가 될 수있다 일반적으로 비 침해 수용성 자극에 대한 통각 반응. 자세한 수술 및 테스트 절차 외에도, 신경 병증 성 통증 감각과 anxiodepressive 측면의 연구를위한 신경 병증 성 통증의 메커니즘의 연구 및 신경 병증 성 통증 치료의 연구를위한이 모델의이자에 대해서도 설명합니다.

± SEM 의미로 데이터가 표현된다. 통계 분석은 분산의 다중 요인 분석 (ANOVA) 또는 실험 설계에 따라 짝 t 검정을 사용하여 수행 하였다. 이러한 분석을 위해, 가짜와 팔목 수술 그룹뿐만 아니라 약물 치료 대 식염수 그룹 간 요인으로 간주되었다. 해당되는 경우, 반복 측정 분석은 시간 코스 데이터를 사용 하였다. 사후 비교는 던컨 테스트를 사용하여 수행 하였다. 통계적 유의성은 P &lt;0.05에서 고려 하였다. 상술 된 절차를 사용하는 경우, 동측 이질통에서 커프스 주입 결과는도 1에 도시 된 바와 같이. 마우스가 시험 절차에 순응하면, 본 프레이 시험에서의 발 움츠림 임계 값의 값은 시간에 안정적으로 유지하고있다 가짜 동물에 도시 된 바와 같이, 그 자체 외과 적 치료에 의해 ​​영향을받지 않습니다. 그러나 그것은해야일시적인 수술 후 무해 자극 통증은 일반적으로 위장 마우스에서 관찰 할 수 있다고 지적했다. 이러한 무해 자극 통증이있을 때, 발 금단 반응은 며칠 후 수술 후 초기에 반환합니다. 팔목 마우스에서 동측 이질통은 첫 번째 일 후 수술에 이미 존재하고 2 개월 이상 유지되어 (9 참조, 그림 1, F8, 344 = 29.5, P &lt;0.001). 전술 한 바와 같이이 본 프레이 시험에 의해 측정 될 때 커프 유발 이질통은 C57BL/6J 생쥐 동측 남아 있지만, 다른 조건에있는 반대측의 발에 이질통의 존재도 8을 관찰 할 수있다. 기준선에 대한 절대 값은 C57BL/6J 생쥐 4 6g 사이 일반적이지만, 시험 프로토콜은 이러한 값에 영향을 미칠 수있다. 삼환 성 항우울제는 신경 병증 성 통증에 대한 임상 첫 선 치료 중입니다. 이 모델에서, 삼환계 항우울제 노르 트립 틸린 (5 ㎎ / kg, 복강 내, 하루에 두번) R그림 2에 나타낸 바와 같이, 치료 약 2 주 후에 신경 병증 성 이질통을 elieves (F7 = 15.3 91, P &lt;0.001, 사후 (CuffNor = 샴)&gt; CuffSal P에서 &lt;0.001 일에 29-34). 이 용량에서 우울증의 급성 진통 작용은 16, 17를 관찰하지 않습니다. 이러한 약물을 복용 환자에 존재하는 지속적인 통증을 모방하기 위해, 마우스는 후가 아닌 아침 약물 투여하기 전에 테스트 할 수 있습니다. 이러한 절차는 치료 이전 일에 끝났다 오래 지속 효과의 평가를 할 수 있습니다. 이 경우에는 신경 병증 이질통 가지는 릴리프를 관찰하는 처리를 1 ~ 2 주 정도 필요하다. 치료가 중단되면, 재발은 일반적 3-4일 (18) 내에서 관찰된다. 일부 항우울제 옆 gabapentinoids는 신경 병증 성 통증에 대한 다른 첫 번째 선택 치료합니다. 가바펜틴이 모델 (16)의 급성 및 일시적인 진통 작용을 가지고 있지만, 또한 지연 및 경도를 표시<html> G 지속 (그림 3, P &lt;0.001), 약물 투여 전에 매일 동물을 테스트 할 때 antiallodynic 조치를. 이 작업은 항우울제보다 빠릅니다. <img alt="그림 1" fo:content-width="5in" fo:src="/files/ftp_upload/51608/51608fig1highres.jpg" src="/files/ftp_upload/51608/51608fig1.jpg" /> 안정된 기준이 (베이스 라인이 그래프에 점 0에 표시된다)를 얻을 때까지 생쥐의 신경 병증 성 통증의 커프스 모델의 그림 1. 기계 발 철수 임계 값은. 성인 남성 C57BL/6J 마우스는 본 프레이 절차에 길들여졌다. 두 발을 시험 하였다. 하향 발 철수 임계 값 (그룹 당 N = 10)에 의해 보이는 것과 같이 커프 마우스는 동측의 기계적 이질통을 표시합니다. tp_upload/51608/51608fig2.jpg &quot;/&gt; 삼환계 항우울제의 그림 2. 지연 antiallodynic 조치는. 이주 수술 후 후, 마우스는 그룹별로 0.9 % 염화나트륨 또는 5 ㎎ / ㎏ 노르 트립 틸린 염산염 (N = 5 또는 6 중 하나에 하루에 두 번 (아침과 저녁) 복강 내 치료를받은 ). 본 프레이 검사는 아침에 처리하기 전에 이루어졌다. 이 절차를, 노르 트립 틸린의 지연 antiallodynic 조치는 치료 약 12​​ 일이 요구하는 관찰된다. <img alt="그림 3" fo:content-width="5in" fo:src="/files/ftp_upload/51608/51608fig3highres.jpg" src="/files/ftp_upload/51608/51608fig3.jpg" /> gabapentinoid의 그림 3. Antiallodynic 조치는. 삼주 후 수술 후, 마우스는 0.9 %의 NaCl 또는 10 ㎎ / ㎏ 가바펜틴 (그룹 당 N = 5) 하나와 함께 하루에 두 번 (아침과 저녁) 복강 내 치료를 받았다. 본 프레이 검사는 아침에 치료하기 전에 이루어졌다MENT. 이 절차를 가바펜틴의 지연과 지속 antiallodynic 조치가 관찰된다. 데이터는 치료를 시작하기 전에 및 치료의 6 일에 발표된다.

신경 병증 성 통증은 체성 시스템에 영향을 미치는 장애 또는 질병의 결과이다. 생쥐의 신경 병증 성 통증의 &quot;팔목 모델은&quot;좌골 신경의 주요 지점 주위에 폴리에틸렌 커프스의 주입으로 구성되어 있습니다. 기계적 이질통은 본 프레이 필라멘트를 사용하여 테스트된다.

Neuropathic pain arises as a consequence of a lesion or a disease affecting the somatosensory system. This syndrome results from maladaptive changes in ...

이 실험 과정의 전체적인 목표는 말초 신경 압착 후 신경병성 통증의 마우스 모델을 구축하는 것입니다. 수술을 위해 동물을 준비한 후, 좌골 신경의 주 분지를 노출시키고 신경 주위에 폴리에틸렌 커프를 삽입합니다. 그 다음 상처 부위를 봉합합니다.발의 민감도를 테스트하기 위해, 생쥐를 타공 강판 위에 놓인 투명한 상자에 넣습니다. 그런 다음 동물이 압력에 일관되게 반응할 때까지 점진적으로 더 굵은 Von Fray 필라멘트를 발에 적용합니다. 최종적으로, Von Fray 테스트를 통해 얻은 기계적 역치를 시간에 따라 그래프로 나타냄으로써, 수술한 발의 동측에서 지속적으로 나타나는 기계적 이질통의 존재를 관찰할 수 있습니다.이 모델은 신경병성 통증의 기저 기전과 같이 통증 분야의 핵심 질문에 답하는 데 도움을 줄 수 있습니다. 또한 현재의 치료법을 연구하거나 새로운 치료제를 테스트하거나, 신경병성 통증으로 인한 불안 및 우울 증상을 연구하는 데 사용할 수 있습니다. 다만, 커프(cuff)의 이식은 시각적 지원 없이는 설명하기 어려운 단계이므로 이 방법에 대한 시각적 시연이 매우 중요합니다.기계적 발 withdrawal 임계값을 평가하기 위해, 먼저 적응을 위해 마우스들을 타공 강판 위에 놓인 투명한 개별 상자에 넣습니다. 테스트 시 최대 12마리의 동물을 동시에 테스트할 수 있습니다. von Frey 필라멘트를 사용하십시오. 교정된 직경의 이 플라스틱 모들은 핸드헬드 어플리케이터에 부착되어 있습니다.굽힐 때, 각 필라멘트는 직경에 비례하는 압력을 가합니다. 마우스의 경우, 가장 흔히 사용되는 필라멘트의 범위는 16포인트에서 10g까지입니다. 가장 낮은 압력부터 시작하십시오.마우스 테스트를 위해 역치를 측정할 때, 필라멘트가 굽어지기 시작할 때까지 왼쪽 뒷발에 가합니다. 더 민감할 수 있는 발의 가쪽 가장자리는 피하십시오. 동물이 필라멘트 적용에 반응합니다.발이 움츠러들거나 물러나는 경우, 도포를 2회 더 반복하며, 동물이 3회 모든 도포에 반응하면 반대쪽 발을 테스트합니다. 그렇지 않은 경우, 반대쪽 발을 테스트하기 전에 필라멘트를 총 5회 도포합니다. 선택한 von Frey 필라멘트로 각 마우스를 연속적으로 테스트한 다음, 다음 필라멘트로 이 과정을 반복합니다.동물이 동일한 필라멘트에 세 번 반응하면 이를 양성 결과로 간주합니다. 두 개의 연속된 필라멘트에서 양성 점수가 나오면 해당 발의 테스트를 중단합니다. 발Withdrawal threshold(발 퇴각 임계값)는 해당 마우스에 대해 측정된 두 가지 그램(gram) 값 중 낮은 값으로 정합니다.이 값들은 양쪽 앞발 간에 차이가 있을 수 있습니다. 최소 3회 연속으로 임계값이 안정될 때까지 이 절차를 매일 반복하십시오. 그 후 수술을 진행합니다.동물의 체중을 측정하여 기록하며, 이때 체중은 20 g 이상이어야 합니다. 그 후 ketamine과 xylazine으로 동물을 마취시킵니다. 발이나 눈의 반사가 없는지 확인합니다. 면봉을 사용하여 눈에 보호 젤을 도포합니다.그런 다음 오른쪽 다리의 무릎부터 엉덩이까지 털을 깎습니다. 이후 작은 베개 위에 오른쪽 뒷다리를 올린 상태로 동물을 배치하고, 테이프로 해당 다리를 고정합니다. 노출된 피부를 chlorhexidine과 70% ethanol로 소독합니다.먼저 촉진을 통해 대퇴골의 위치를 찾습니다. 그 다음 대퇴골에서 후방으로 약 1.5 mm 떨어진 지점에 대퇴골과 평행하게 0.5 cm 절개창을 냅니다. 이제 오토클레이브 스틱을 사용하여 대퇴골 근처의 근육을 분리하되, 근육을 절단하지 마십시오.좌골 신경의 주분지가 보이도록 노출시켜야 합니다. 출혈이 있는 경우, 샴 대조군(sham controls)을 위해 면봉으로 반드시 닦아내십시오. 이것으로 커프를 장착할 마우스의 수술이 완료됩니다.좌골 신경 아래에 스틱 두 개를 삽입하여 신경의 주분지를 노출시킵니다. 생리식염수를 소량 분사하여 신경에 수분을 공급합니다. 이제 뾰족한 스틸 스틱과 불독 클램프를 사용하여 분할 커프를 잡습니다.그다음 불독 클램프를 삽입하고 180도 회전시켜 커프의 측면 개구부 반대편을 고정합니다. 이제 불독 클램프를 잠그고 뾰족한 막대를 제거합니다. 이어서 보조자가 신경 아래의 막대 두 개를 잡고 조심스럽게 분리하도록 합니다.신경에 접근하기 위해, 2mm 커프를 좌골 신경의 주 분지에 삽입합니다. 먼저 불독 클램프의 원위측에 해당하는 커프 부분을 고관절의 근위측 신경 부위에 삽입합니다. 그 다음, 펜치로 커프를 조심스럽게 닫아 커프가 정확하게 닫혔는지 확인합니다.반대로 돌려눕힙니다. 이제 고정 막대를 제거하고 피부를 봉합하여 닫습니다. 외과적 매듭법을 사용하고, 마우스를 왼쪽으로 눕혀 깨끗한 홈 케이지로 옮깁니다.마우스가 깨어날 때까지 가열 램프로 따뜻하게 유지합니다. 마우스가 스스로 영양을 섭취할 수 있도록 케이지에 먹이와 물을 추가로 제공합니다. 수술 다음 날부터 낮은 회피 역치 테스트를 수행할 수 있으나, 본 절차에서는 수술 후 과민 반응을 줄이기 위해 3일 동안 대기하는 것이 더 바람직합니다.커프(Cuff) 처치를 받은 마우스는 샴(sham) 대조군과 비교하여 2개월 이상 동측성 이질통(ipsilateral allodynia)을 나타냅니다. 삼환계 항우울제인 노르트립틸린(nortriptyline)을 5 mg/kg 용량으로 1일 2회 투여하자, 약 2주간의 치료 후 신경병성 이질통이 완화되었습니다.처치를 중단하면 생쥐는 보통 3~4일 이내에 재발합니다. 이 모델은 신경병성 통증의 또 다른 치료제인 가바펜티노이드(Gabapentinoids)에도 민감하게 반응합니다. 이 영상을 시청한 후에는 마취된 생쥐의 좌골 신경 주가지(main branch of sciatic nerve)를 찾는 방법과 그 주변에 커버를 삽입하는 방법에 대해 충분히 이해하게 될 것입니다.이 신경병성 통증 모델에서, 원 프레이 테스트(von Frey test)를 통해 기계적 역치를 평가하고 약물 반응을 연구할 수 있습니다.

the-sciatic-nerve-cuffing-model-of-neuropathic-pain-in-mice

Research

연구

JoVE Journal

Medicine

의학

용서해주 신경 부상 동물 모델은 나머지 sural 신경은 그대로두고, tibial 및 일반 peroneal 신경 가지를 lesioning하여 좌골 신경의 부분 denervation 다음과 주변 neuropathic 고통의 마우스 모델로 여기에 설명되어 있습니다. 기계 allodynia 인한 행동 수정은 폰 프라이 필라멘트에 의해 계량입니다.

마우스에서 유도된 기계 Allodynia의 겪었던 신경 상해 (스니) 모델

수술의 단순하고 강력한 행동 결과로 인해 좌골 신경의 만성적인 수축이 neuropathic 고통의 사전 저명한 동물 모델 중 하나입니다. 수술에 따라 24 시간 내에 통증 과민성 설립되고 양적 폰 프라이 aesthesiometer (기계적 시험)과 발바닥 진통제 측정기 (온도 시험)를 사용하여 측정할 수있다.

좌골 신경 및 쥐의 통증 과민성 시험의 만성 수축

이 비디오에서는 췌장암 세포를 좌골 신경에 주입하여 신경주위 침습을 위한 생체 내 마우스 모델을 개발합니다. 이 모델은 침입 정도를 정량화하고 암세포와 신경 간의 상호 작용을 연구하는 데 도움이 됩니다.

쥐 신경주위 침입 모델: 마우스 좌골 신경에서 신경주위 침입을 시뮬레이션하기 위한 생체 내 모델 생성

경골 신경 절개 모델은 골격 근육 위축, 잘 용납 검증 및 재현성 모델입니다. 모델 수술 프로토콜은 C57Black6 마우스에 설명 설명된다.

경골 신경 절개 - 마우스의 탈 신경에 의한 골격근의 위축에 대한 표준 모델

수정된 수술은 생쥐 또는 쥐 보존 신경 손상 모델에 대한 단순화된 방법으로, 일반 비골 신경과 천성 신경을 모두 손상시키기 위해 한 번의 결찰과 한 번의 절개만으로 됩니다.

마우스의 신경병증성 통증에 대한 수정된 보존 신경 손상 수술 모델

기계적 충돌-회피 분석은 다양한 마우스 통증 모델에서 정서적-동기 부여 반응을 더 잘 이해하기 위해 사용될 수 있는 마우스에서 통증 감수성의 비반사적 판독으로서 사용된다.

마우스의 통증 행동을 측정하기위한 기계적 충돌 회피 분석

부분 좌골 신경 결찰술은 열 및 기계적 자극에 대한 과장된 반응을 특징으로 하는 오래 지속되는 만성 신경병성 통증을 유발합니다. 이 신경병성 통증 마우스 모델은 일반적으로 통증 관리를 위한 혁신적인 치료법을 연구하는 데 사용됩니다. 이 기사에서는 표준화 및 재현성을 개선하기 위한 수술 절차에 대해 자세히 설명합니다.

부분 좌골 신경 결찰: 새로운 치료법의 항통각수용 효과를 연구하기 위한 만성 신경병성 통증의 마우스 모델

쥐의 좌골 신경통을 유도하기 위해 만성 수축 손상 모델에서 Fu의 피하 침을 사용하기 위한 프로토콜을 제시합니다.

좌골 신경통에 대한 Fu의 피하 침의 효능: 만성 수축 손상 쥐 모델의 행동 및 전기 생리학적 변화

생쥐에서 원위 안와하부 신경의 만성 수축 손상은 촉각 자극에 대한 반응으로 자발적 행동(얼굴 손질 활동 증가)과 통각 행동(von Frey 모발 자극에 대한 과민성)의 변화를 유발하며, 이는 지속적인 통증 및 이질증의 징후이며 삼차신경병증성 통증의 모델 역할을 합니다.

삼차신경병증성 통증을 연구하기 위한 마우스의 원위 안와하부 신경(DIoN-CCI)의 만성 수축 손상

이 프로토콜은 인간 신경종 통증을 모방하고 외과적 치료를 평가하기 위해 감각 신경을 사용하는 재현 가능한 쥐 모델을 제시하여 중개 신경종 연구를 위한 귀중한 도구를 제공합니다.

복재 신경을 통한 표적 근육 재신경 분포를 사용하여 신경종 통증 치료 옵션을 연구하기 위한 새로운 외과적 설치류 모델

학습하세요 마우스 좌골 신경에 폴리에틸렌 커프를 삽입하여 신경 병증 성 통증 모델을 수립하는 방법을. 폰 프레이 필라멘트로 기계적 통각 과민을 평가하고 노르트립틸린 및 가바펜티노이드 치료 효과를 검증할 수 있습니다.

마우스의 신경 병증 성 통증의 좌골 신경의 바지를 접 모델

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