마우스의 신경 병증 성 통증의 좌골 신경의 바지를 접 모델

이 절차의 전반적인 목표는 말초 신경 압박 후 신경병성 통증의 마우스 모델을 확립하는 것입니다. 동물의 수술을 준비한 후 좌골 신경의 주요 가지가 노출되고 신경 주위에 폴리에틸렌 커프가 삽입됩니다. 그런 다음 상처가 봉합됩니다.

발의 민감도를 테스트하기 위해 쥐를 구멍이 뚫린 강판 위의 투명 상자에 넣습니다. 그런 다음 점점 더 커지는 일련의 Von Fray 필라멘트를 동물이 압력에 일관되게 반응할 때까지 발에 적용합니다. 궁극적으로, 오래 지속되고 작동된 발에 동측성을 띠는 기계적 이질통의 존재는 시간 경과에 따른 Von Fray 테스트에서 얻은 기계적 임계값을 플로팅하여 관찰할 수 있습니다.

이 모델은 신경병성 통증의 기저에 있는 메커니즘과 같은 통증 분야의 주요 질문에 답하는 데 도움이 될 수 있습니다. 또한 현재 치료법을 연구하거나, neo thepath 에이전트를 테스트하거나, 신경병성 통증의 불안 우울증 결과를 연구하는 데 사용할 수 있습니다. 그러나 커프의 이식은 시각적 지원 없이는 설명하기 어려운 단계이기 때문에 이 방법의 시각적 시연은 매우 중요합니다.

기계적 발 인출 임계값을 평가하기 위해 먼저 거주할 마우스를 천공된 강판의 투명한 개별 상자에 넣고 테스트를 위해 최대 12마리의 동물을 병렬로 테스트할 수 있습니다. 폰 프레이 필라멘트를 사용합니다. 보정된 직경의 이러한 플라스틱 털은 휴대용 애플리케이터에 부착됩니다.

구부릴 때 각 필라멘트는 직경에 비례하는 압력을 가합니다. 생쥐에서 가장 자주 사용되는 필라멘트는 16g에서 10g 사이입니다. 가장 가벼운 압력으로 시작하십시오.

마우스를 테스트하기 위해 임계값을 측정할 때 필라멘트가 구부러지기 시작할 때까지 왼쪽 뒷발에 필라멘트를 적용합니다. 더 민감할 수 있는 발의 측면 경계를 피하십시오. 동물은 필라멘트 적용에 반응합니다.

발이 움찔하거나 움츠러들면 두 번 더 반복하고, 동물이 세 가지 시도에 모두 반응하면 다른 발을 시험해 본다. 그렇지 않으면 다른 발을 테스트하기 전에 필라멘트를 총 5번 바르십시오. 선택한 von Frey 필라멘트로 각 마우스를 연속적으로 테스트한 후 다음 필라멘트로 이 과정을 반복합니다.

동물이 동일한 필라멘트에 세 번 반응하면 이는 긍정적인 결과로 간주됩니다. 두 개의 연속된 필라멘트가 양성 점수를 받으면 해당 발에 대한 테스트를 중지합니다. 발 철수 임계값은 주어진 마우스에 대한 두 그램 값 중 낮은 값입니다.

이 값은 두 발마다 다를 수 있습니다. 최소 3개의 연속된 임계값이 안정될 때까지 이 절차를 매일 반복합니다. 그런 다음 수술을 진행하십시오.

20g 이상이어야 하는 동물의 체중을 기록하고 케타민과 자일라진으로 동물을 마취합니다. 발이나 눈 반사 신경이 없는지 확인하십시오. 면봉으로 보호 젤을 눈에 바르십시오.

그런 다음 오른쪽 다리를 무릎에서 엉덩이까지 면도합니다. 그런 다음 오른쪽 뒷다리를 가진 동물을 작은 베개 위에 올려놓고 이 다리를 테이프로 고정합니다. 클로르헥시딘과 70% 에탄올로 노출된 피부를 소독합니다.

대퇴골을 찾기 위해 촉진하는 것으로 시작하십시오. 그런 다음 대퇴골에서 약 1.5mm 후방으로 대퇴골과 평행하게 0.5cm를 절개합니다. 이제 오토클레이브 스틱을 사용하여 대퇴골에 가까운 근육을 분리하되 절단하지는 마십시오.

좌골 신경의 주요 가지가 보여야 합니다. 출혈이 있는 경우 가짜 통제를 위해 면봉으로 닦아내십시오. 이것으로 생쥐에게 수갑을 채우는 수술이 완료됩니다.

좌골 신경 아래에 두 개의 스틱을 삽입하여 신경의 주요 가지를 노출시킵니다. 신경에 수분을 공급하기 위해 생리식염수를 한 모금 뿌린다. 이제 뾰족한 강철 막대기와 불독 클램프로 갈라진 커프를 잡습니다.

그런 다음 불독을 삽입하고 180도 회전하여 커프의 측면 개구부 반대쪽에 커프를 고정합니다. 이제 불독을 닫고 뾰족한 막대기를 제거하십시오. 다음으로, 보조자가 두 개의 스틱을 신경 아래에 대고 부드럽게 분리하도록 합니다.

신경에 접근할 수 있도록 좌골 신경의 주요 분기 주위에 2mm 커프를 삽입합니다. 불독의 원위부에 있는 커프 부분을 엉덩이 근위부 신경 부분 주위에 삽입하는 것으로 시작합니다. 그런 다음 펜치로 커프를 부드럽게 닫아 커프가 올바르게 닫혔는지 확인합니다.

뒤집어보세요. 이제 스틱을 제거하고 피부를 봉합합니다. 외과 매듭을 사용하여 마우스를 깨끗한 가정용 케이지로 옮기고 마우스를 왼쪽에 놓습니다.

깨어날 때까지 열 램프로 따뜻하게 유지하십시오. 쥐가 스스로 영양을 공급할 수 있도록 케이지에 음식과 물을 더 넣으십시오. 동물은 수술 다음 날부터 금단 역치가 좋지 않은지 검사할 수 있지만, 이 절차로 수술 후 과민증을 줄이려면 3일을 기다리는 것이 좋습니다.

생쥐에 대한 커프는 가짜 대조군에 비해 2개월 이상 동측 이질통을 보입니다. 노르트립틸린 1kg당 5mg으로 마우스를 처리했습니다. 삼환계 항우울제는 하루 2회 약 2주간의 치료 후 신경병성 이질통증을 완화합니다.

치료가 중단되면 생쥐는 보통 3-4일 안에 재발했습니다. 이 모델은 또한 신경병성 통증의 또 다른 치료제인 가바펜티노이드(Gabapentinoids)에 민감합니다. 이 비디오를 시청한 후에는 마취된 mize에서 좌골 신경의 주요 가지를 찾고 그 주위에 덮개를 삽입하는 방법을 잘 이해하게 될 것입니다.

이 신경병성 통증 모델에서 일원 프레이 테스트를 통해 기계적 역치를 평가하고 약물 반응을 연구할 수 있습니다.