Name: 화학 요법에 의한 혈관 독성 - 실시간 생체 내 선박 손상의 영상 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2015-01-07T13:00:00.000+00:00
Duration: 4 min 48 s
Description: 학습하세요 화학 요법제의 혈관 독성을 실시간 생체 내 영상으로 평가하는 방법을. 섬유형 공초점 형광 현미경을 사용하여 혈관 반응을 관찰하고 세포 수준에서 약물 효과를 분석합니다.

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윤리 문 : 모든 실험 기관 동물 관리 및 사용위원회에 의해 승인되었습니다. 동물 보호는 제도적 지침에 따라이었다. (- 8 주 오래 된 7; 25-30g) ICR 여성 마우스는 텔 아비브 대학에서 의학 학부 Sackler의 에어컨, 조명 제어 동물 시설에 수용되었다. 용어에서, 동물은 마취 과다 복용으로 안락사시켰다. 1. 섬유질의 공 초점 형광 현미경 (FCFM) 교정 <ol><li> 장치를 켜십시오. </li><li> 마이크로 탐침 (mini0이 / 30)을 연결합니다. </li><li> 제조업체의 지시에 따라 교정 장치. </li></ol> 2. 마우스 이미징을위한 준비 <ol><li> 모두 Ketaset (100 ㎎ / ㎏)과 XYL-M2 (6 ㎎ / ㎏)의 피하 주사에 의해 마취. 발가락 핀치에 응답하지 않는 문제로 적절한 마취를 확인합니다. </li><li> 순서에 사타구니 아래 피부를 절개<html> 대퇴 동맥 혈관을 알 수있다. 절개 다음 식염수 촉촉한 절개 사이트를 유지합니다. </li><li> 약 30 초 동안 따뜻한 물 (너무 뜨겁지 않은 터치)로 가득 찬 가방 (또는 장갑)를 사용하여 꼬리를 가열. 식염수 또는 화학 요법 제 중 하나의 꼬리 정맥에 주사 바늘 (30 G, 1/2 인치)를 삽입하고 여기에 1 ML의 주사기를 부착하여 FITC 덱스 트란 (조영제)의 관리를위한 정맥 주사 (IV) 션트를 준비하고 . 정맥은 식염수를 주입하여 열려 있는지 확인하십시오. 참고 : FITC 덱스 트란의 IV 관리 (고 분자량 100 ㎕의 10 ㎎을 / ㎖, 2000 kDa의)이 FCFM에 의한 대퇴 미세 혈관을 시각화 용이. 독소루비신 (100 μL; 8 ㎎ / kg, 아드리아 마이신) 또는 염수 나중에 예열 꼬리 정맥으로 IV 투여 될 것이다. </li><li> 폴리스티렌 무대에 드러 마우스를 놓습니다. 패드에 마우스를 안전하고 수술 덕트 테이프를 사용하여 위치를 유지한다. </li></ol>동안과 독소루비신 또는 식염수를 투여 한 후 FCFM에 의한 대퇴 혈관의 제목 &quot;&gt; 3. 영상 참고 : (1) 마이크로 탐침 (mini0이 / 30) :이 연구에 사용 된 다발, 공 초점 현미경은 두 개의 유닛으로 구성되어있다. (2) 레이저 스캐닝 유닛 (LSU-488; 488 nm 파장). <ol><li> LSU 488 nm 파장의 레이저를 이용하여 분석 모든 시간 바퀴를 수행합니다. 참고 : 본체 검출기는 여과 감지 (500-650 nm의) 방출 형광을. 획득 된 이미지는 이후 재구성 / 초 12 프레임의 속도로 표시됩니다. </li><li> 조심스럽게 바늘의 주사기를 분리하고 FITC 덱스 트란을 포함하는 새로운 주사기를 연결합니다. FITC 덱스 트란의 (IV) 100 μl를 관리합니다. </li><li> 대응하는 화상을 얻기 위해서, Z 축 조정 다음에, 뷰 필드에 적합한 마이크로 프로브 (mini0 / 30)를 시프트하고 흥분시키는. 명확하고 초점을 맞춘 신호가 VISI 때까지 페이드 초기 신호를 기다립니다BLE. </li><li> 짧은 안정화 기간 (~ 30 초)에 대한 기준선 혈액의 흐름을 기록합니다. 그런 다음 독소루비신 또는 식염수를 포함, 바늘에 다른 주사기를 연결합니다. IV 100 μL 독소루비신 또는 식염수를 관리 할 수​​ 있습니다. </li><li> 20 분 동안 연속적으로 주입 FITC 덱스 트란의 흐름을 모니터링한다. FCFM 관련된 소프트웨어를, 혈관을 측정하기 위해 상부에 눈금자 직경 버튼을 사용하여 분류하고 그들 작은 (&lt;15㎛ 인) 또는 큰 (&gt; ~ 15㎛). </li><li> 마취 과다 복용으로 동물을 안락사. </li></ol>

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화학 요법 - 유도 된 혈관 독성을 평가하기 때문에 실시간으로 자극에 반응하여 혈관의 역학을 시각화하는 어려움에 도전. 수많은 임상 연구는 여러 가지 화학 요법 직접 혈관 손상을 일으킬 것으로 연루, 아직이 독성의 메커니즘과 특성은 밝혀지지 남아있다. 우리는 여기에 8 ~ 10 설명 된 바와 같이 다발, 공 초점 형광 현미경으로 구성된 마우스에서 화학 요법의 잠재적 인 혈관 독성을 평가하기위한 생체 분자 이미징 플랫폼, 실시간를 설립했다. 이 마우스의 고해상도 분자 이미징 동맥 혈류 및 혈관 &#39;구조를 시각화하기에 적합하다. 또한 장기간에 걸쳐 동일한 동물에서 치료 합병증 유발 실시간으로 검출 할 수있다. 조직뿐 아니라 공지 된 독소루비신이 시험관 내에서 내피 세포에 유독 할 수있는 우리는 두 종류의 화학 요법을 평가어떠한 혈관 효과 전 증거 매우 제한되는 제어 화학 요법 10-15 독소루비신 및 파클리탁셀로 처리 된 동물로부터 얻은 ...

임상 증거는 화학 요법의 여러 클래스가 레이노 현상, 고혈압, myocardialinfarction, 뇌 혈관 공격, 간성 veno-occlusivedisease 1, 2에 의해 나타난 혈관 병변의 다양성을 이끌어내는 것을 나타냅니다. 그들은 원래 이러한 목적 3-5으로 개발되지만 적게 부과함으로써 종양 세포를 제거하도록 설계되지는 않았지만 &quot; &#39;사고&#39;항 혈관 형성 약제&quot;는 &quot;담보 가능한 혈관 신생 억제제로서 작용 종래의 화학 요법 제에 대해 설명 신종 용어이며 가능한 3과 정상 세포의 손상 &quot;. 혈청 바이오 마커를 사용하여 임상 연구에서 관찰 된 여러 화학 요법은 vasculo - 독성 물질로 암시되고있다. 이 중 에이전트 (예 : 시클로 포스 파 미드 등), 백금 (시스플라틴 등) 화합물 및 안트라 사이클린 1,2,5-7 알킬화된다. 급성 심장 혈관 합병증은 resul로 발생할 수 있습니다화학 요법에 의해 유도 된 혈관 독성 t. 그들은 늦게 혈관 사망률의 위험이 증가 동맥 경화 및 계정 등의 만성 질환으로 발전 할 수 있습니다. 그러나 임상 적 증거를 장착에도 불구하고, 혈관 독성의 메카니즘을 강조 지정된 연구가 소수이므로, 그들은 입힐 정확한 병인의 추가 해명이 보증된다. 화학 요법에 의한 혈관 독성의 메커니즘을 밝히는데 중요한 과제는 생체 내에서 혈관 기능을 조사의 복잡성에서 유래. 우리는 본원에서 혈류 및 혈관 &#39;특성을 포착 할 수 있도록 마우스에서 생체 분자 이미징에 대한 고해상도의 플랫폼을 설명한다. 이 플랫폼은 직접 유도 혈관 치료 효과의 검출을 용이하게한다 : 실시간뿐만 동일인 내의 일정 기간 동안 이들을 다음과 같이.

<table><tbody><tr><td>전신 마취</td><td>Fort Dodge Animal Health, IA, 미국 및 Biove Laboratories, 프랑스</td><td></td><td>100 mg/kg 케타셋 및 6 mg/kg XYL-M2</td></tr><tr><td>제모 크림 (Veet)</td><td>ReckittBenckiser, 브리스톨, 영국</td><td></td><td></td></tr><tr><td>30 G, 1 ml 주사기</td><td></td><td></td><td></td>에 부착된 1/2 인치 바늘</tr><tr><td>FITC 덱스트란(10 mg/ml; MW 2,000 kDa)</td><td>시그마</td><td>FD2000S</td><td>100 &mu; l 양</td></tr><tr><td>독소루비신</td><td>Teva, 이스라엘</td><td></td><td>8 mg/kg, 아드리아마이신</td></tr><tr><td>paclitaxel</td><td>Taro, 이스라엘</td><td></td><td>1.2 mg/kg의 Medexel</td></tr><tr><td>염분</td><td></td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

화학 요법에 의한 혈관 독성 - 실시간<em&gt; 생체 내</em&gt; 선박 손상의 영상

Chemotherapy-induced Vascular Toxicity - Real-time In vivo Imaging of Vessel Impairment

화학 요법은 특정 부류의 병적 혈관의 증가 된 위험에 걸리기 쉬운 환자 수 장기적인 상태로 진행​​할 수있다 급성 혈관 변화를 가할 수있다. 그러나, 장착 임상 증거에도 불구하고, 혈관 독성 때문에 혈관 / 심혈관 질환의 이종 그룹의 원인의 명확한 연구의 소수는 밝혀지지 남아있다. 또한, 혈관 독성의 기초가있다 메커니즘은 완전히 심근 손상을 유도하는 관련된 화학 요법 - 유도 심독성의 원리와 다를 수있다. 우리는 항암 치료의 잠재적 급성 혈관 독성을 평가하는 생체 분자 이미징 플랫폼에서 실시간을 확립했다. 우리는 적절한 밀폐 된 기관 및 참조 BLO 내 혈관을 시각화 생체, 마우스의 고해상도 분자 영상의 플랫폼을 설정 한각 개별 반면 같은 개인 내 외경 선박은 자체 제어 역할을합니다. 혈관벽 최종 장기 손상을 조기 이벤트가 될 수있다 혈관 독성을 나타내는 고유기구, 독소루비신 투여 후 손상되었다. 여기서, 다발, 공 초점 형광 현미경 (FCFM) 기반 이미징의 방법은 동물 피험자에서 세포 및 세포 이하 수준에서의 생리 현상을 이해하기 위해 혁신적인 모드를 제공하는 설명한다.

실시간 생체 내 이미징 연속 여기에 사용되는 촬상 장치는, 혈관계의 시각화 및 화학 요법과 같은 다양한 자극에 대한 응답을 가능하게 장착 된 프로브 고화질, 다발, 공 초점 현미경이다. 깊숙히 혈관 또는 기관의 영상을 용이하게 할 수 있지만,이 프로브 작은 절개를 필요로하기 때문에이 방법은 침습적이다. 프로브 번들은 수십 섬유, 현미경 광학 및 독점 정밀 커넥터의 수천으로 구성되어 있습니다. 개략도는도 1에 도시된다. 대퇴 미세 혈관의 영상 우리는 혈관 직경에 따라 대퇴 혈액 혈관의 네트워크를 분류했다 (작은 &lt;15 μm의; 큰&gt; 15 μm의) FCFM에 의해 FITC-덱스 트란 주입 쥐. 급격한 혈관 수축 - 소형 선박 (2 5 분) 독소루비신에 의해 유도했다. 전체 disappearanFITC-덱스 트란 형광의 CE, 8 분...

우리는 여기에서 동물 피험자의 세포 및 하위 세포 수준에서 생리학적 현상을 이해하기 위한 혁신적인 모드를 제공하는 FCFM(Fibered Confocal Fluorescent Microscopy) 기반 이미징 방법을 설명합니다.

Certain classes of chemotherapies may exert acute vascular changes that may progress into long-term conditions that may predispose the patient to an ...

본 절차의 전반적인 목적은 고해상도 파이버 공초점 현미경을 사용하여 혈관계 및 다양한 자극에 대한 혈관계의 반응을 시각화하는 것입니다. 이는 먼저 현미경을 보정하고, 혈관 시각화를 용이하게 하기 위해 동물에게 fitzy dextrin을 정맥 주사함으로써 수행됩니다. 그 후, 실험적 처치 도중 및 처치 후에 파이버 공초점 형광 현미경을 사용하여 혈관을 실시간으로 촬영합니다. 궁극적으로, 이 인비보(in vivo) 분자 이미징 플랫폼은 동물 모델에서 화학요법제와 같은 약물의 잠재적 혈관 독성을 평가하는 데 사용될 수 있습니다.일반적으로 이 방법에 익숙하지 않은 개인은 시스템을 구축하고 안정적인 이미지를 캡처하는 것이 어려울 수 있기 때문에 고전할 수 있습니다. 실험실의 박사후 연구원인 Dr.Sef가 해당 절차를 시연할 것입니다. 마우스를 이미징하기 위해 준비하기 전에, 파이버 컨포컬 형광 현미경을 켜고 mini zero 30 마이크로 프로브를 연결하십시오.제조사의 지침에 따라 장치를 교정하십시오. 현미경 준비가 완료되면, 마우스를 폴리스티렌 스테이지 위에 배측으로 눕히고 수술용 테이프로 패드에 고정합니다. 그런 다음 7~8주 된 암컷 ICR 마우스의 서혜부 아래 피부를 절개하여 대퇴 동맥 혈관이 드러나게 하고, 절개 부위를 식염수로 촉촉하게 유지하십시오.꼬리 정맥이 확장되었을 때 적색 램프 광원을 사용하여 꼬리를 약 10초 동안 가열한 후, 식염수가 채워진 1 mL 주사기에 연결된 27 gauge 1/2인치 바늘을 정맥 중 하나에 삽입합니다. 식염수를 주입하여 정맥이 개통되었는지 확인합니다. 그런 다음 식염수 주사기를 10 mg/mL의 Fitz Dextrin이 들어 있는 주사기로 조심스럽게 교체합니다.다음으로, Fitz Dextrin 100 µL를 꼬리 정맥에 주입하고, 8 mg/kg의 doxorubicin이 들어 있는 시린지를 바늘에 연결합니다. 그런 다음 Z축을 조정한 후 mini zero 30 micro probe를 적절한 시야로 이동시킵니다. 절개 부위 위에 프로브를 고정합니다.이 절차에서 가장 까다로운 부분은 적절한 시야를 확보하고 프로브를 고정하여, 주입 중에 동물과 프로브가 움직이지 않게 하거나 동물의 호흡으로 인해 프로브가 헐거워지지 않도록 하는 것입니다. 우리는 많은 양의 테이프로 프로브를 고정합니다. 이제 초기 신호가 사라지고 명확하고 집중된 신호가 보일 때까지 기다립니다.그 후 약 32초의 짧은

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microCT으로 대비 향상된 작은 동물 혈관 이미징 시리얼에 대한 신속하고 비용 효율 높은 처리량...

MicroCT를 사용하여 대비 향상된 베셀 영상

우리는 안티 - 암 치료에 영상 응답하는 방법을...

유방암의 마우스 모델에서 종양 Microenvironment에 약물 응답의 영상을 라​​이브

이 논문에서는 동적 조영 증강 형광 videomicroscopy를 사용하여 생체 내에서 종양의 미세 혈관을 분석하는 방법을 제시한다. 두 정량적 파라미터를 획득 하였다 : 기능성 종양 혈관을 반영 모세관 밀도 및 내피 벽 leakiness 반사 인덱스 누설.

형광 공 초점 Videomicroscopy를 사용하여 종양 혈관의 생체 내 이미징

소설 고해상도<em&gt; 생체 내</em종양의 성장과 치료학에 두개 내 구조물의 동적 응답을 공부하기&gt; 이미징 기술

여기에서는 전이의 in vivo chicken embryo chorio-allantoic membrane(CAM) 모델과 결합된 종양 세포 대사의 실시간 모니터링을 사용하여 종양 세포를 DNA를 손상시키는 화학 요법에 감작하는 능력에 대해 새로운 항암 표적/제제를 평가하는 데 사용됩니다.

암 약물 과민 반응의 효과를 평가<em&gt; 체외</em&gt; 및<em&gt; 생체</em

이 프로토콜은 단일 셀 해상도 생체 내에서 실시간으로 상호 작용 다세포 장시간 경과 이미징을 수행하는 다 광자 현미경의 사용을 설명한다.

종양 미세 환경에서 실시간 다세포 역학의 확장 시간 경과 생체 내에 영상

이 프로토콜 셀 전용 형광 마커를 표현 하는 유전자 변형 생쥐의 intravital 영상을 설명 합니다. Intravital 이미징 생체 삽입형 윈도 통해 프로세스의 미세한 시각화는 가능한를 사용 하 여 고해상도 관측에 대 한 비-침략 적 방법을 제공 한다. 이 방법은 경도 과정 공부에 특히 유용 합니다.

Intravital 현미경 종양 관련 맥 관 구조를 사용 하 여 고급 등 유전자 변형 형광 생쥐 피부 집계 창 실

Monocytes는 주변 동맥 질병의 맥락에서 arteriogenesis의 중요 한 중개자. 지하실 막 같은 매트릭스 및 intravital 현미경 검사 법을 사용 하 여,이 프로토콜 대 퇴 동맥 결 찰 murine 모델에 monocyte 주입 후 monocyte 유도 및 종양 관련 신생을 조사 합니다.

Intravital 현미경 Monocyte 유도 및 주변 동맥 질병의 Murine 모델에서 종양 관련 신생의

우리는 쥐에 있는 고분자량 (155 kDa) dextran의 정맥 주입을 사용하여 전이 (TMEM) 출입구 기능 및 암 세포 intravasation의 종양 미세 환경과 관련되었던 과도 혈관 투과성을 평가하기 위한 2개의 방법을 기술합니다. 방법은 살아있는 동물에 있는 활력 화상 진찰 및 면역 형광을 사용하여 고정된 조직 분석을 포함합니다.

세포 내 이미징 및 고정 조직 분석을 사용하여 암 세포 보급과 관련된 전이 의 종양 미세 환경 평가

이 프로토콜은 생리학적으로 관련된 종양온어칩(tumor-on-a-chip) 모델을 제시하여 고처리량 기초 및 중개 인간 암 연구를 수행하고, 약물 스크리닝, 질병 모델링 및 로딩, 유지 관리 및 평가 절차에 대한 설명과 함께 맞춤형 의학 접근법을 발전시킵니다.

암 연구를 위한 생리학적 인간 혈관화 미세종양 모델 확립

Intravital microscopy 결과의 번역은 조직에 대한 얕은 깊이 침투로 인해 어려움을 겪고 있습니다. 여기에서는 직접적인 공간 상관 관계를 위해 생체 내 현미경 검사와 임상적으로 적용 가능한 이미징 양식(예: CT, MRI)을 함께 정합할 수 있는 등쪽 창 챔버 마우스 모델에 대해 설명하며, 이를 통해 생체 내 현미경 검사 결과의 임상 번역을 간소화할 수 있습니다.

중개 암 연구에서 생체 내 현미경 및 자기 공명 영상의 결합을 위한 Dorsal Skinfold Window Chamber 종양 마우스 모델

학습하세요 화학 요법제의 혈관 독성을 실시간 생체 내 영상으로 평가하는 방법을. 섬유형 공초점 형광 현미경을 사용하여 혈관 반응을 관찰하고 세포 수준에서 약물 효과를 분석합니다.

화학 요법에 의한 혈관 독성 - 실시간

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