Rapid Isolation And Purification Of Mitochondria For Transplantation By Tissue Dissociation And Differential Filtration

Janine M. Preble; Christina A. Pacak; Hiroshi Kondo; Allison A. MacKay; Douglas B. Cowan; James D. McCully

doi:10.3791/51682

JoVE Journal
Biology

A subscription to JoVE is required to view this content. Sign in or start your free trial.

JoVE Journal Biology

Rapid Isolation And Purification Of Mitochondria For Transplantation By Tissue Dissociation And Differential Filtration

조직 해리 차동 여과 이식 미토콘드리아의 신속한 분리 및 정제

Full Text

39,763 Views

10:35 min

September 6, 2014

DOI: 10.3791/51682-v

Janine M. Preble¹, Christina A. Pacak², Hiroshi Kondo¹, Allison A. MacKay², Douglas B. Cowan², James D. McCully¹

¹Division of Cardiothoracic Surgery,Beth Israel Deaconess Medical Center and Harvard Medical School, ²Department of Anesthesiology, Perioperative and Pain Medicine,Boston Children's Hospital and Department of Anesthesia, Harvard Medical School

Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.

포유 동물 조직 생검에서 미토콘드리아의 신속한 분리를위한 방법을 설명한다. 쥐 간 또는 골격근 제제 상용 조직 dissociator 균질화하고, 미토콘드리아는 나일론 메쉬 필터를 통한 여과에 의해 미분을 분리 하였다. 대안적인 방법을 사용하여 100 분간 - 미토콘드리아 분리 시간은 60 비교 <30 분이다.

이 절차의 전반적인 목표는 쥐 조직에서 순수 호흡 능력이 있는 미토콘드리아를 신속하게 분리하는 것입니다. 이는 먼저 조직 샘플을 연관시키고 균질화함으로써 달성됩니다. 다음 단계는 subin A를 균질화에 혼합하고 얼음에서 배양하는 것입니다.

그 다음에는 BSA에서 균질화 혼합을 여과하고 다시 여과합니다. 마지막 단계는 여과액을 스핀다운하고 미토콘드리아 펠릿을 호흡 완충액에 다시 현탁시키는 것입니다. 궁극적으로, 결과는 호흡 분석 및 A TP 발광 분석을 통해 분리된 미토콘드리아가 실행 가능하고 호흡에 적합하다는 것을 보여줄 수 있습니다.

View the full transcript and gain access to thousands of scientific videos