Name: 복구하는 새로운 미세 절제 접근 결핵균 특정 성적 증명서 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2014-06-05T14:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 42 s
Description: 배우세요 메조디섹션 기법을 이용하여 포르말린 고정 파라핀 포매 조직에서 RNA를 추출하는 방법을 Mycobacterium tuberculosis 육아종 연구에 적용하여 유전자 발현 분석을 수행합니다.

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사단 이미징 소프트웨어를 사용하여 1. 보정 Mesodissection 악기 사단 이미징 소프트웨어는이 문서의 나머지 부분에 대한 소프트웨어 또는 프로그램 중 하나라고한다. 이 단계는 정확하게 화상을 추적 할뿐만 아니라, 다수의 슬라이드 프레임을 정렬하는 데 필요하다. <ol><li> 악기와 컴퓨터를 켭니다. </li><li> 오픈 소프트웨어 및 &quot;보정기구&quot;를 선택합니다. </li><li> 조이스틱을 사용하여 스테이지 이동을 보정합니다. 왼쪽 상단 위치로 무대를 이동합니다. 프로그램의 1 단계를 눌러 &quot;설정&quot;. </li><li> 올바른 위치를 낮은 단계로 이동합니다. 프로그램의 2 단계를 눌러 &quot;설정&quot;. </li><li> 먼저 헤드 어셈블리를 높이기 위해 &quot;Z 버튼&quot;을 눌러 포부를 보정합니다. 조이스틱을 눌러 &quot;대기음 펄스&quot;버튼과 &quot;해부&quot;버튼을 플런저 제어봉까지 최고 위치에 도달. 프로그램의 3 단계에서 &quot;SET&quot;키를 누르면,. </li><li> 을 눌러 &quot;대기음 리셋과# 8221; 버튼을 누릅니다. 플런저는 4 단계에서 아래의 위치를​​ 눌러 &quot;설정&quot;에서 정지되면. </li><li> &quot;규모 탭&quot;을 클릭합니다. </li><li> 빈면에 교정 통치자를 놓습니다. </li><li> 필요한 경우 현미경 초점을 맞 춥니 다. </li><li> 마우스를 사용하여 두 개의 스케일 바 사이에 선을 그립니다. </li><li> 2 단계. 보도 &quot;계산&quot;버튼을 표시 상자에 거리를 입력합니다. </li><li> &quot;십자&quot;탭을 클릭합니다. 1 모터 속도를 켭니다. </li><li> 헤드 어셈블리에 xScisor를 삽입합니다. &quot;z 축&quot;버튼을 누름으로써, Z 축 준비 위치로 니더 헤드 조립체. 참고 : 헤드 어셈블리 베스트 해부 악기의 큰 구조입니다. xScisor이 문서의 나머지 부분에 대한 소비 밀 비트라고한다. </li><li> 조이스틱 버튼을 &quot;해부 참여&quot;를 클릭합니다. 참고 :이 버튼이 조이스틱의 상단에 위치하고 있습니다. </li><li> 시각적으로 회전 중심을 정의합니다. 이렇게하려면 정의하여 회전 중심에 십자선의 중심을 이동프로그램의 1 단계에서 d 매개 변수. 십자선을 정렬하는 픽셀을 조정하기 위해 &quot;X&quot;와 &quot;Y 축&quot;바에서 아래 화살표를 사용합니다. &quot;완료&quot;탭을 클릭합니다. </li><li> &quot;홈&quot;아이콘을 클릭합니다. 참고 :이 작업은 오른쪽 상단 모서리에있는 집 이미지로 표현된다. </li></ol> 2. 참조 이미지 만들기 <ol><li> 무대에서 H &amp; E 슬라이드를 놓습니다. 슬라이드 상단에 불투명 커버를 놓습니다. H &amp; E 슬라이드의 원하는 영역에 조이스틱을 움직여서 기기를 구동한다. 생성 된 이미지를 저장합니다. 참고 : &quot;캡처 참조&quot;탭 또는 &quot;해부&quot;탭 하나가이 단계를 완료하는 데 사용할 수 있습니다. </li></ol> 3. 해부를 위해 조직을 맞 춥니 다 <ol><li> 홈 화면에서 &quot;조직을 해부&quot;옵션을 클릭합니다. </li><li> &quot;연산자&quot;, &quot;해부 접근 번호&quot;, &quot;참조 기탁 번호&quot;, &quot;xScisor 바코드 번호,&quot;&amp; #을 입력합니다8220; 해부 유체 로트 번호 &quot;,&quot;xScisor 크기 &quot;및&quot;설정 &quot;탭에서&quot;설명 &quot;. </li><li> &quot;조직을 찾아&quot;탭을 클릭합니다. </li><li> 가져 오기 이전에 참조 이미지를 저장. </li><li> 무대에서 5 미크론 두께의 흠 FFPE 슬라이드를 놓습니다. 참조 화상에 도시 한 것과 같은 영역으로 스테이지를 이동. &quot;이미지 삽입&quot;탭을 클릭합니다. </li><li> &quot;정렬&quot;탭을 클릭합니다. 흠없는 이미지에 대한 참조 이미지를 정렬하는 마우스와 관련된 화살표를 사용합니다. </li></ol> 4. 슬라이드에 주석 달기 <ol><li> &quot;주석&quot;탭을 클릭합니다. </li><li> microdissected 될 슬라이드의 원하는 영역 주위에 원을 그리려면 마우스를 사용합니다. </li></ol> 5. 소모품 밀 비트로드 <ol><li> 유체 운동에 위아래로 여러 번 플런저를 잡아 당겨,​​ 여기에 원하는 버퍼, PKD 버퍼와 소모품 밀 비트를 입력합니다. 반드시 공기를 제외 할 수 있도록거품. </li><li> &quot;Z-축&quot;버튼을 눌러 Z 축 올립니다. </li><li> 기계로 소비 밀 비트를 넣습니다. 기계의 정상에 소비 밀 비트를 슬라이딩하여이 작업을 수행 할 있도록 소모품 밀 비트에 검은 색 줄까지 기기 라인에 흰색 선. 플런저가 올바른 위치로 낮출 수 있도록 압박 &quot;포부 리셋&quot;버튼을 클릭합니다. 참고 : 소모품 밀 비트를 밀어 쉽게해야합니다. 그렇지 않은 경우, 노치가 제대로 정렬되어 있는지 확인하십시오. </li><li> 다시 &quot;Z 축&quot;단추를 눌러 니더 Z 축. </li></ol> 6. 조직을 해부하다 (그림 4) <ol><li> &quot;해부&quot;탭을 엽니 다. </li><li> 1 모터와 흡입 속도를 켭니다. </li><li> &quot;쇼 추적&quot;확인란을 선택합니다. 주의 : 이는 사용자가 박리 공정 동안 해부 영역을 시각화 할 수있다. </li><li> 해부 할 준비가 완료되면, 버튼을 &quot;참여&quot;뿐만 아니라 &quot;대기음 &amp; # 계속 보유8221; 버튼 조직을 절개하기 위하여 반 시계 방향으로 조이스틱을 이동시키면서. </li><li> 대기음이 &quot;전체&quot;탭이 빨간색으로 변합니다 때까지 반 시계 방향으로 절개를 계속합니다. </li></ol> 7. 소모품 밀 비트를 비우고 제거 <ol><li> 소모품 밀 비트의 끝에서 0.5 μL의 미세 원심 분리 튜브를 놓습니다. </li><li> 을 눌러 &quot;열망&quot;제어봉 신속의 미세 튜브에 샘플을 꺼냅니다. </li><li> 사용되는 소모품 밀 비트를 배출 증가 힘으로 누르십시오. </li><li> 플런저를 다시 잡아 당겨 조직 조각을 씻어. 소모품 밀 비트에 남아있는 샘플을 표현하기 위해 앞으로 플런저를 밀어 넣습니다. 조직 조각은 지금의 미세 튜브에 포함됩니다. </li></ol> 열 처리하여 테 K 소화 8.를 Lyse 샘플 <ol><li> 조직 샘플을 복구하는 단백질 분해 효소 K의 5 μg을 포함 70 μL의 TE 산도 8.5을 추가합니다. </li><li> 프로그램 히터 통에 샘플을 놓고. </li><li> 다음 설정에서 프로그램 히터 통을 사용하여 완전한 소화 : 1,500 rpm에서 30 분 동안 60 ˚ C; 1,500 rpm에서 15 분 동안 82 ˚ C; 450 rpm에서 1 분간 25 ˚ C. 샘플은 현재 다운 스트림 응용 프로그램에 대한 준비가되어 있습니다. </li></ol>

<ol><li>Fend, F., Raffeld, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Laser+capture+microdissection+in+pathology%5BTitle%5D)+AND+%22J+Clin+Pathol%22%5BJournal%5D)">Laser capture microdissection in pathology.</a> J Clin Pathol. 53 (9), 666-672 (2000).</li>
<li>Esposito, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Complementary+techniques%3A+laser+capture+microdissection--increasing+specificity+of+gene+expression+profiling+of+cancer+specimens%5BTitle%5D)+AND+%22Adv+Exp+Med+Biol%22%5BJournal%5D)">Complementary techniques: laser capture microdissection--increasing specificity of gene expression profiling of cancer specimens.</a> Adv Exp Med Biol. 593, 54-65 (2007).</li>
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</ol>

저자는 더 경쟁 금전적 이해 관계가 없음을 개시한다.

Mesodissection 병원균의 광대 한 배열로 인한 병적 병변 슬라이드로부터 RNA 추출에 적용 할 수있는 기법이다. 이것은 사용자가 콘텐츠를 추적하고 정확하게 이미지를 정렬 필요성이다. 이 작업을 수행하기 위해 장비는 이미징 소프트웨어의 지침에 따라 보정해야합니다. 해부 할 때 해부하고 그 슬라이드와 영역이 정렬되지 않는 경우, 사용자는 장비를 다시 교정해야합니다. 해부 과정에서 또 다른 중요한 단계는 이전의 해부 (5.1 단계)에 거품이없는 상태가되도록하는 방식으로 소비 밀 비트를로드하는 것입니다. 우리는 거품의 존재가 해부 수율을 감소한다는 것을 발견했다. 이 문제를 해결하기 위해, 우리는 여러 번 추진과 플런저를 표현하는 것이 좋습니다. 사용자는 제조업체에서 권장하는, 거품을 시각화하는 연습 버퍼에 식용 색소를 추가하여 연습 할 수 있습니다. 유효하면, 사용자는 통상의 절개를 진행한다. 라세인트 중요한 단계는 반 시계 방향으로 샘플을 해부하는 것입니다. 반 시계 방향의 기계 선반; 따라서, 우리는 반대 방식으로 원...

The corresponding author was changed for the article, <a href="http://www.jove.com/video/51693">A Novel Microdissection Approach to Recovering Mycobacterium tuberculosis Specific Transcripts from Formalin Fixed Paraffin Embedded Lung Granulomas</a>. The corresponding author was changed from:
Teresa A. Hudock
to:
Deepak Kaushal

The corresponding author was changed for the article, <a href="http://www.jove.com/video/51693">A Novel Microdissection Approach to Recovering Mycobacterium tuberculosis Specific Transcripts from Formalin Fixed Paraffin Embedded Lung Granulomas</a>.

Erratum: A Novel Microdissection Approach to Recovering Mycobacterium tuberculosis Specific Transcripts from Formalin Fixed Paraffin Embedded Lung Granulomas

샘플은 전통적으로 수동으로 전체 조직이나 바늘과 메스를 사용하여 슬라이드 하나에서 microdissected되었습니다. 이것은 그 조직의 부와 주변 조직의 2 항 사이의 명확한 분리를 필요로한다. 분자 프로파일 기술에서 현재 발전으로, 세포 수준에서 조직을 평가할 필요성이 증가되고있다. 때문에 수동 미세 절제의 제한, LCM 등의 기술이 큰 절연 정밀도 수 있도록하기 위하여 설립되었다. 이 기술은 다음과 같은 연구가 유전자 발현 프로파일 링과 같은 하류 분석법에 사용할 수있는 다양한 세포 및 슬라이드 타입으로부터 특정 세포 집단을 분리 할 수​​있다. 다운 스트림 분석에 매우 효과적이지만, LCM은 제한이없는 것은 아니다. 첫째, LCM은 비용과 시간이 소요되는 과정입니다. 또한, 때문에 RNA의 불안정한 특성으로 종종 LCM 샘플 2에서 고품질의 RNA를 얻기 위해 도전하고있다. 때문에 디에LCM의 sadvantages은, 미세 절제 기술의 새로운 발전은 여전히​​ 저렴하고 시간에 민감한 방법으로 연구자의 큰 숫자에 더 접근 할 수 있도록하기 위해 필요합니다. 사용할 미세 절제 기술의 하나의 발전은 mesodissection로 알려진 기술이다. 이 기술에서 기계 공장 관심 주석 조직 섹션을 사용하고 소모품 밀 비트 3에를 흡입한다. 다음에,이 샘플 포집 관으로 흡인하고 다운 스트림 애플리케이션에 사용될 수있다. 이 시스템의 장점은 훨씬 적은 비용과 시간이 중요한 것이있다. 우리의 경험에서, 시스템 10 분의 폐 육아종 조직 부분의 절개를 할 수 있습니다. 한편, 기존의 LCM 가능성 프로세스를 완료하기 위해 시간을 필요로한다. 시스템은 오퍼레이터에 대한 주석의 비교뿐만 아니라 도구로 사용하는 기준 슬라이드를로드 할 수있다. 또한 보고서는 개요 일을 생성해부 된 슬라이드의 전자 영역입니다. mesodissection하는 두 가지 주요 단점이 있습니다. 복수의 셀을 추출하는데 효과적이지만, 그것은 하나의 세포를 분리하기 위해 도전. 또, 생성 된 화상의 정밀도는 다른 촬상 현미경을 사용하는 경우만큼 명확하지 않다. 결핵 (TB)는 주요 전염병 전세계 인류의 킬러와 Mtb의 감염의 결과입니다. 결핵균 에어로졸에 노출 된 개인의 대부분에서, 감염은 잠재적으로 제한됩니다. 매년 적어도 천만명에서, 활동성 결핵 4가 발생합니다. 잠복 감염시, Mtb의는 육아종로 알려진 병적 인 폐 병변 내에 포함되어 있습니다. 따라서 그것의 mtb 감염의 결과를 육아종 5 수준에서 결정되고 있다고 주장하고있다. 여기에서 우리는 mesodissection는 Mtb의에 의한 육아종을 microdissect하는 데 사용할 수있는 방법을 보여줍니다. 사용 된 슬라이드감염된 붉은 털 원숭이에서 FFPE의 폐 조직에서이다. 이 데모의 목적을 위해, 우리는 그 전체 육아종 해부 것이다. 또한 RNA가 회복 조직으로부터 추출 될 수 있다는 것을 보여준다. 이 기술은 다양한 다른 표본으로부터 조직 샘플에인가하고 하류 분석법 다양한 위해 사용될 수있다.

<table><tbody><tr><td>MeSectr</td><td>AvanSci Bio</td><td></td><td>메소디스섹터</td></tr><tr><td>400 nm xScisors</td><td>AvanSci Bio</td><td></td><td>다른 크기도 사용 가능</td></tr><tr><td>THOR</td><td>AvanSci Bio</td><td></td><td>프로그래밍 가능한 히터-쉐이커</td></tr><tr><td>NanoDrop2000</td><td>ThermoScientific</td><td>ND-2000</td><td></td></tr><tr><td>RNeasy FFPE 추출 키트&nbsp;</td><td>Qiagen</td><td>73504</td><td></td></tr><tr><td>Ovation RNA-Seq FFPE 시스템&nbsp;</td><td>Nugen</td><td>7150</td><td></td></tr><tr><td>QIAquick PCR 정제 키트&nbsp;</td><td>키아겐</td><td>28104</td><td></td></tr></tbody></table>

복구하는 새로운 미세 절제 접근<em&gt; 결핵균</em폐 육아종 임베디드 포르말린 고정 파라핀에서&gt; 특정 성적 증명서

A Novel Microdissection Approach to Recovering Mycobacterium tuberculosis Specific Transcripts from Formalin Fixed Paraffin Embedded Lung Granulomas

미세 절제는 십년에 대한 DNA, RNA 및 단백질 수준에서의 조직 검사를 위해 사용되어왔다. 레이저 캡처 현미경 (LCM)는 오늘 사용되는 가장 일반적인 미세 절제 기법입니다. 이 기술에서, 레이저 focally 탈수 조직 섹션 1 위에 놓 열가소성 막을 용해하는 데 사용됩니다. 조직 절편 복합체이어서 들리고 막으로부터 분리된다. 이 기법은 조직 검사를 위해 성공적으로 사용될 수 있지만, 시간 소모적이고 비싸다. 또한,이 기술을 이용하여 절차의 성공적인 완료 따라서 그 사용을 제한하는, 레이저의 사용을 필요로한다. mesodissection라는 새 더 저렴하고 실용적인 미세 절제 방식은 LCM의 함정에 가능한 솔루션입니다. 이 기술은 밀에 장착 된 슬라이드 조직 샘플에서 원하는 조직을 MESO-1/MeSectr 시스템을 채택에 동시에 원하는 조직 샘플을 복구하는 유체 분배 및 흡인하면서소모품 밀 비트. 해부 과정을 시작하기 전에, 사용자는 (FFPE) 포함 된 포르말린 고정 파라핀 (H &amp; E) 기준 슬라이드 스테인드 헤 마톡 실린 및 에오신으로 밀어 맞 춥니 다. 그 후, 오퍼레이터는 소망 해부 영역에 주석 및 해당 세그먼트를 해부로 진행한다. 이 프로그램은 절개의 아카이브 이미지를 생성합니다. mesodissection의 가장 큰 장점은이 실험에서 세대를 샘플링하기 위해 설정 10 분 거리의 평균을 복용, 슬라이드를 해부하는 데 필요한 짧은 기간입니다. 또한,이 시스템은 훨씬 더 효과적인 비용과 사용자 친화적이다. 약간의 단점은 레이저 캡처 현미경처럼 정확하지 않습니다 것입니다. 이 문서에서 우리는 mesodissection은 결핵균 (Mtb의)에 의해 발생 FFPE의 육아종에서 슬라이드에서 RNA를 추출하는 방법을 보여줍니다.

상기 프로토콜은 FFPE 조직 슬라이드에서 RNA를 추출하는 새로운 mesodissection 기술을 사용하는 방법을 보여줍니다. 이 프로토콜의 효능은 다양한 감염 단계에서 Mtb의 감염 NHP에서 폐 육아종의 FFPE 슬라이드를 통해 표시됩니다. 1-3 악기. 그림 4의 이미지 들이고 해부 프로세스가 발생하는 방법을 묘사하고 소프트웨어. 표 1에 의해 생성 된 결과 이미지 각각의 감염 상태에서 NHP에서 육아종와 RNA 추출의 결과를 보여줍니다. RNA가 증폭 및 16S (표 2-4)의 RT-PCR 증거를 허용하도록 정제 하였다. 표 4 따라서 ​​Mtb의 리보솜 소단위 16S의 존재를 확인하고, 상기 Mtb, microdissected 샘플. <p class="jove_content" fo...

미세 절제가 광범위하게 조직 내에서 DNA, RNA, 단백질의 시험을 위해 사용되어왔다. 레이저 캡처 현미경 (LCM)는 가장 일반적으로 사용되는 방법이지만 새로운 밀링 기술 mesodissection는 최근 유효하다. 우리는 mesodissected 포르말린 고정 파라핀 결핵균 육아종의 내장 조직 슬라이드에서 RNA 추출을 보여줍니다.

Microdissection has been used for the examination of tissues at DNA, RNA, and protein levels for over a decade. Laser capture microscopy (LCM) is the most ...

이 절차의 전반적인 목표는 포르말린 고정 파라핀 임베딩(FFPE) 슬라이드에서 조직을 마이크로디섹션(microdissect)하는 것입니다. 이는 먼저 대표적인 Hematin and Eosin 염색 슬라이드로부터 참조 이미지를 생성함으로써 수행됩니다. 두 번째 단계는 이에 대응하는 염색되지 않은 포르말린 고정 파라핀 임베딩 슬라이드를 기기 스테이지 위에 놓고, 원하는 절제 영역을 참조 이미지와 일치시키는 것입니다.다음으로, 절제 영역을 표시하고 소모성 수컷 비트에 버퍼를 채운 뒤 장비에 장착합니다. 마지막 단계는 표시된 조직을 절제하는 것입니다. 최종적으로, RNA 추출 증폭과 R-T-P-C-R의 조합을 통해 감염된 Reeses Maca의 폐 육아종 내 mycobacterium tuberculosis의 전역 유전자 발현 분석에 절제된 조직을 어떻게 사용할 수 있는지 보여줍니다.이 방법은 결핵의 다양한 감염 상태 동안 인간과 유사한 생체 내 니치(in vivo niches)에서 mycobacterium tuberculosis가 발현하는 유전자의 정체와 같은 결핵 연구 분야의 핵심 질문에 답하는 데 도움이 될 수 있습니다. 또한, 이 데이터는 이러한 뚜렷한 질환 상태 내에서 병원체의 조절, 대사 및 생리적 차이를 설명하는 데 도움이 될 것입니다. 결과적으로 구체적인 약물 표적을 생성할 수 있습니다.메조 해부 기구는 두 개의 ID 이미징 소프트웨어가 통합된 디지털 현미경과 XY 스테이지 위치를 제어하기 위한 조이스틱을 갖추고 있습니다. 이 절차를 시작하기 전에, 동봉된 원고에 설명된 대로 이미징 소프트웨어를 사용하여 기구를 교정하고 참조 이미지를 생성하십시오. 먼저 헤마톡실린-에오신 염색 또는 H&amp;E 슬라이드를 스테이지 위에 놓고 슬라이드 상단에 불투명 커버를 덮으십시오.그런 다음 조이스틱을 움직여 기기를 h 및 d 슬라이드의 원하는 영역으로 이동시킵니다. 절제할 조직을 정렬하기 위해 캡처 참조(capture reference) 탭을 사용하여 생성된 이미지를 저장하십시오. 홈 화면에서 조직 절제(dissect tissue) 옵션을 클릭하십시오.설정 탭에서 작업자 박리 등록 번호, 참조 등록 번호 exci 또는 바코드 번호 박리액, 로트 번호 exci 크기 및 설명을 입력하십시오. 조직 찾기 탭을 클릭하십시오. 이전에 저장한 참조 이미지를 가져오십시오.염색되지 않은 5 µm 두께의 포르말린 고정 파라핀 매립(FFPE)

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Research

연구

JoVE Journal

Immunology and Infection

면역학 및 감염학

인간 결핵 감염은 복잡한 과정으로 체외에서 모델링하기 어렵습니다. 여기에서는 생리학적 환경에서 면역 세포의 이동 및 조기 육아종 형성을 포함하여 감염 중에 발생하는 역학을 요약한 새로운 3D 인간 폐 조직 모델에 대해 설명합니다.

에 대한 기능성 연구를위한 3D 인간의 폐 조직 모델<em&gt; 결핵균</em&gt; 감염

여기, 우리는 공간 계량 폐 결핵 육아 내 마약 배포판에 레이저 캡처 서 LC/MS 분석과 함께 사용 하 여 프로토콜을 설명 합니다. 접근은 광범위 한 적응성 높은 공간 세부 사항에서 조직 내의 약물 농도 측정 하는 있다.

레이저에 의해 폐 결핵 병 변에서 약의 공간 정량화 캡처 서 액체 착 색 인쇄기 질량 분석 (LCM-LC/MS)

우리는 가래의 열 불활성화 후에 수행된 결핵 분자 세균성 하중 분석 시험을 기술합니다. 열 불활성화는 가래 샘플을 비감염성으로 만들고 결핵 분자 검사를 위한 봉쇄 수준 3 실험실에 대한 필요성을 없애주게 합니다.

결핵 분자 세균 부하 분석 (TB-MBLA)

레이저 미세 해부 (LMD)는 신경교종 이질성과 침략을 중재하는 통로를 밝히기 위하여 이용될 수 있는 민감하고 높게 재현가능한 기술입니다. 여기에서, 우리는 전사성 분석에 선행된 레이저 LMD를 사용하여 신경교종 조직에서 이산 지역을 격리하기 위하여 최적화된 프로토콜을 기술합니다.

종양 내 이질성, 온코스트림 및 침략의 공간 및 분자 특성화를 위한 신경교종 소구역의 레이저 캡처 미세 분해

이 프로토콜은 포르말린-고정된 파라핀-포매된 조직 샘플의 퍼센트 종양 함량을 증가시키는 방법을 제시한다.

종양 거대 해부를 통한 종양 내용 향상

우리는 비브라톰과 아가로스 포매된 폐 조직을 활용하여 폐 절편을 생성하는 조직 처리 기술을 개발하여 폐 구조의 고해상도 이미지를 획득할 수 있습니다. 특정 폐 구조 마커를 사용하여 공간 단백질 발현을 관찰하기 위해 면역형광 염색을 사용했습니다.

다중 형광 이미징을 위한 Agarose-Embedded 폐 조직의 자동 진동 절편

우리는 형광 현미경을 통한 분석을 위해 폐 기도에서 곰팡이 포자의 자연스러운 위치를 보존하는 곰팡이 발병 모델에 대한 방법을 제시합니다.

기도에서 곰팡이 포자의 공간 역학을 보존하는 쥐 폐를 이미징하는 효율적인 방법

수동 IBEX 방법을 사용하여 저비용의 다목적 광조사 기술을 구현하면 상당한 네이티브 자가형광으로 인체 조직을 최적으로 이미징할 수 있습니다. 이 프로토콜은 도립 현미경, 널리 사용 가능한 시약 및 이미지 정렬 및 처리를 위한 오픈 소스 소프트웨어를 사용하여 보관된 임상 샘플에서 다중화된 전체 슬라이드 이미지를 얻는 방법을 자세히 설명합니다.

반복적인 표백을 위해 최적화된 워크플로우는 고도의 자가형광 임상 샘플의 멀티플렉시티 이미징을 확장합니다.

이 프로토콜은 체외/생체 내 기능 분석, 전사체학 및 컴퓨터 분석을 포함하여 쥐 CAF를 배양, 조작 및 분석하는 방법을 간략하게 설명합니다. 또한, 인간 유방암 종양 컬렉션에서 레이저 캡처 미세 절개 기질 및 상피 구성 요소의 공개적으로 사용 가능한 전사체를 분석하기 위해 개발된 웹 기반 플랫폼에 대해 설명합니다.

Cancer-Associated Fibroblasts from Mouse Mammary Tumors as Tools for Molecular and Computational Studies(분자 및 컴퓨터 연구를 위한 도구로서의 마우스 유방 종양에서 유래한 암 관련 섬유아세포)

이 프로토콜은 레이저 캡처 미세해부를 사용하여 파라포름알데히드 고정 및 최적 절단 온도 화합물이 포함된 마우스 간 조직의 조직학적 영역에서 RNA를 분리하는 방법을 설명하며, 이를 통해 표적 하류 유전자 발현 분석을 가능하게 합니다.

RNA 분석을 위한 파라포름알데히드 고정 마우스 간 조직의 레이저 캡처 미세 해부

여기서는 BSL-2 승인 마이코박테리움 결핵 증의 감쇠 체내 영상 프로토콜을 제시합니다. 영구 폐 창을 이용한 쥐 폐 내 스트레스. 이 접근법은 동일한 폐 미세환경 내에서 세균 위치, 혈관 역학, 대식세포 흡수 등 초기 숙주-병원체 상호작용의 종단적 단일 세포 분해 분석을 가능하게 합니다.

초기 혈관 내 감염 중 쥐 폐에서 희석된 위영양성 결핵 균의 생명체 내 영상

배우세요 메조디섹션 기법을 이용하여 포르말린 고정 파라핀 포매 조직에서 RNA를 추출하는 방법을 Mycobacterium tuberculosis 육아종 연구에 적용하여 유전자 발현 분석을 수행합니다.

복구하는 새로운 미세 절제 접근

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