Name: 감염 프로토콜 예쁜 꼬마 선충와 살모넬라 티피 뮤 리움 (Salmonella typhimurium) (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2014-06-26T15:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 50 s
Description: 배우세요 C. elegans를 이용한 Salmonella typhimurium 감염 프로토콜로 숙주-병원체 상호작용을 연구하는 방법을 익히세요. RNAi로 유전자 발현을 억제하고 생존률을 분석하여 방어 유전자를 식별하는 실험 기술을 습득하세요.

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우리는 원고의 비판적 읽기 박사 다이앤 Baronas - 로웰 감사합니다. 이 작품은 과학 씨 그랜트의 FAU 찰스 E. 슈미트 대학 KJ에 엘리슨 의료 재단에서 노화 장학금 지원

1. XLD (크 실리 톨 리신 데스 옥시 콜레이트) 한천 플레이트 XLD 한천 XLD 한천 플레이트에 검은 식민지로 나타납니다 살모넬라 균에 대한 선택 성장 매체입니다. 오염 될 우려가없는 경우에는, 정규 LB 플레이트가 치환 될 수있다. <ol><li> 5 ㎖의 탈 이온수에 5.5 g의 XLD 한천과에 resuspend를 달다. </li><li> 모든 한천 젖은 때까지 철저하게 섞는다. 모든 덩어리가 사라과 매체가 완전히 재현 탁 될 때까지 탈 이온수 95 ML을 추가합니다. </li><li> 완전히 (압력솥하지 않음) 용해 매체를 끓인다. </li><li> 50 ℃의 실온에서 매체를 냉각 </li><li> 각 95 x 15mm (직경 x 높이) 플레이트 (파라 필름으로 밀봉 플레이트가 1 달 동안 4 ° C에 저장할 수 있습니다)에 25 ㎖의 한천을 부어. </li></ol> 2. 선충류 성장 중간 (NGM)의 RNAi는 플레이트를 먹이는 C. 준비 엘레 NGM 플레이트는 이전에 설명 된 19. 다음 절차는 짧게 RNAi의 먹이 접시를 만들기 위해 NGM 미디어에 항생제 암피실린 및 RNAi의 화학 유도 이소 프로필 β-D-1-티오 갈 락토 피 라노 시드 (IPTG)를 추가 할 설명되어 있습니다. <ol><li> 3g의 NaCl 1 L 탈 이온수 2.5 g 박토 펩톤을 녹입니다. </li><li> 미디어에 17g의 박토 한천을 추가합니다. </li><li> 45 분 동안 미디어를 압력솥 수욕에서 50 ° C로 미디어를 냉각. </li><li> 1 ㎖ 콜레스테롤 (95 % 에탄올에 5 ㎎ / ㎖) 1 ㎖ 1 M 염화칼슘, 1 ㎖ 1 M 망초, 25 ㎖의 1 M 인산 칼륨 완충액 (pH 6.0) : 다음과 같은 솔루션을 추가합니다. 잘 섞는다. </li><li> 1 ㎖ 1 M IPTG 500 ㎕의 암피실린 (멸균 100 ㎎ / ㎖)를 추가합니다. </li><li> 잘 솔루션을 섞어 피펫 보조를 사용하여 멸균 절차에 따라 25 ㎖의 혈청 피펫 (60) X 15mm (직경 x 높이) 페트리 접시에 붓는다. 12 ML 한천 각 접시를 채우십시오. 플레이트는 최대 1 달 동안 4 ° C에 저장할 수 있습니다. </li></ol> autophagy에 필수적인 유전자는 BEC-1은 살모넬라 감염에 대한 방어의 숙주 유전자의 기능을 검사하는 예로서 사용된다. 실험 절차는도 1 및 표 1에 도시된다. 감염의 RNAi-처리 된 동물의 제조 프로토콜은 괄호 안에 각 실험 단계의 일로, 다음과 같다. <ol><li> BEC-1 RNAi의 먹이를 접종 및 100 ㎎ / ㎖ 암피실린 (1 일) 보충 2 ㎖ LB 배지에 -80 ° C 냉동 박테리아의 조각을 배치하여 빈 벡터 L4440 RNAi의 박테리아 먹이를 제어 할 수 있습니다. 신선한 RNAi의 세균을 가지고 전체 실험 기간 동안 일주일에 한 번이 단계를 반복합니다. 사용하지 않을 경우 4 ° C의 냉장고에 문화를 저장합니다. </li><li> RNAi의 접시에 하룻밤 RNAi의 세균 배양을 100 ㎖의 종자. 세 BEC-1 RNAi의 세 제어 빈 V를 준비RNAi의 판을 엑터. 37 ° C에서의 하룻밤 (2 일)에서 번호판을 품어. </li><li> 37 ° C의 배양기에서 RNAi의 플레이트를 제거하고 벤치에서 실온까지 냉각 할 수 있습니다. 잘 공급 L4 야생형 N2 자웅 동체를 들고 그들을의 RNAi-1 벡 빈 벡터 RNAi의 판을 제어하는 전송. 세중의 플레이트에 플레이트에 세 벌레를 놓습니다. 단계 3.2 (3 일)에 설명 된대로 같은 날, RNAi의 판을 준비합니다. </li><li> 3.3 단계에서 제조 된 신선한 해당 RNAi의 플레이트에 36-40 시간 및 전송 웜에 대한 20 ° C 배양기에서 벌레와 RNAi의 번호판을 품어. 웜이 전송 된 후, 64 시간 (4 일)에 20 °의 C 배양기에서 접시를 품어. </li></ol> 4. 감염 살모넬라 준비 <ol><li> 줄무늬 살모넬라 -80 ° C 냉동 1 XLD 한천 접시에 하룻밤 (5 일 37 ° C에서 접시를 품어 </st룽&gt;). </li><li> 잘 고립 된 검은 살모넬라 식민지를 선택하고 (6 일) 밤새 진탕 37 ° C에서 2 ㎖ LB 배지에 접종. </li><li> 1 C.에 씨 80 ㎖의 살모넬라 균 배양 물 엘레 60 X 15mm (직경 x 높이) NGM 한천 플레이트와 총 6 판을 준비합니다. 6 시간 동안 실온에서 번호판을 품어. 세균 배양 접시 (주 7)에 잔디를 건조 형성한다. </li></ol> 살모넬라 5.을 감염 RNAi의 처리 벌레 <ol><li> 이동 BEC-1 RNAi의 처리 및 살모넬라 판에 빈 벡터 RNAi의 처리 L4 N2의 자웅 동체 (3 단계에서 설정 벌레의 자손)을 제어 할 수 있습니다. 각 그룹에 대해 3 접시에 접시 당 40 벌레를 놓습니다. 48 시간 (주 7) 20 ° C에서 웜 번호판을 품어. </li><li> 단계 3.1 및 3.2 (일 7에 설명 된대로 신선한 RNAi의 접시의 한 세트를 준비하고 <stroNG&gt; 8 일). </li><li> 48 시간 감염 후, 단계 5.2에서 제조 된 해당 RNAi의 접시에 살모넬라 균에 감염된 웜을 전송하고 20 ° C (9 일)에 품어. </li></ol> 6. 생존 분석 <ol><li> 매일 벌레의 생존을 점수와 알을 낳는 시간 동안 신선한 해당 RNAi의 플레이트로 웜을 전송합니다. 단계 3.1 및 3.2에 설명 된대로 이전에 각 웜 전송에 신선한 RNAi의 접시 세트를 준비합니다. 부드럽게 끝 평평 백금 와이어 웜 몸 (머리, 중간 부분 및 꼬리)를 터치합니다. 웜 본체의 어떠한 움직임이 관찰되지 않은 경우 웜 죽은로서 획득된다. </li><li> 매일 웜 또는 매일의 생존을 점수와 벌레가 산란을 중단 한 후 일주일에 두 번 신선한 해당 RNAi의 플레이트로 웜을 전송합니다. </li><li> 모든 벌레가 죽은 후에, 하나의 데이터 세트로 세중 판에서 생존 데이터를 풀. 같은 그래프 패드 P 적절한 통계 소프트웨어에 각 그룹의 입력 생존 데이터생존 곡선을 생성하고 Kaplan-Meier 생존 분석을 수행 할 rism. 전체 실험의 결론을 확인하기 위해 한 번 이상 반복한다. </li></ol>

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</ol>

저자는 더 경쟁 재정적 이익이 없다는 것을 선언합니다.

C. elegans의는 영양원으로 세균을 먹는 간단한 유전자 모델 생물이다. 따라서, C. 사이의 상호 작용을 조사하기 위해 장내 병원체 정상 세균 음식을 대체하기 쉽다 엘레 및 선택 병원체. 여기 프로토콜은 살모넬라 균 감염과 C를 결합하여 설명 엘레 RNAi의 살모넬라 균 감염에 대한 방어의 호스트 유전자의 역할을 조사하는 치료를 먹이. 이전 감염 프로토콜은 C. 노출 엘레의 일생 (20) 동안 살모넬라 균 등 병원성 세균에 웜. 본 프로토콜에서는, 살모넬라는 2 일 기간에 웜을 감염. 그 후, 웜은 살모넬라 균에 노출이 더 이상 없습니다. 이 살모넬라 감염은 현저히 C.의 수명을 감소 야생형 동물 엘레 간스. 따라서, 살모넬라 균 내부에 벌레를 복제하고 동물 10을</su...

독립 생활 토양 선충 Caenorhabditis의 엘레 많은 생물학적 질문을 연구하는 데 사용하는 간단하고 유 전적으로 다루기 쉬운 모델 생물이다. C. 엘레 지배적 자기 시비 자웅 동체로 존재합니다. 남성은 자발적으로 배우자 형성 1,2 동안 X 염색체의 비 분리에 의해 생성됩니다. 풍부한 음식, C.의 존재 엘레 지속적으로 성인 네 애벌레 단계를 통해 개발. 온도는 C.에 영향을 elegans의 개발; 빠른 개발은 높은 온도에서 관찰된다. 실험실에서, C. 엘레 음식 1,2 시드 박테리아 대장균 (주 OP50)와 한천 플레이트에서 20 ° C의 표준 온도에서 배양. 지난 10 년, C. 엘레 호스트 병원체 상호 작용 3-5을 연구하는 무척추 생물로 떠오르고있다. 자연에서, C. 엘레는 nutrien으로 박테리아를 먹는다T 소스, 2. 정상 세균 실험실 음식, OP50은 쉽게 C. 사이의 상호 작용을 조사하기 위해 다른 병원체로 치환 될 수있다 엘레 및 선택 병원체. 이러한 조건에서, 대장은 감염의 기본 사이트이다. 실제로, 세균성 병원체의 넓은 범위는 치명적 C. 감염을 보였다 엘레 3-5. 그람 음성 박테리아 살모넬라 균은 전 세계적으로 6,7 인간 식중독을 일으키는 위장 병원체이다. C. 이 박테리아가 복제 및 지속적인 장내 감염 8-10 전시로 엘레는 살모넬라 티피 뮤 리움 (Salmonella typhimurium)에 대한 좋은 모델 호스트입니다. C. 엘레 참신한 모두를 식별하는 데 사용되었으며, 이전에 공지 된 살모넬라 병원성 11 요인. 흥미롭게도, C. elegans의 면역 체계가 성공적으로 살모넬라 균의 복제를 제한합니다. 그것은 그 저해에게 이전에보고 된autophagy에 유전자의 ition는 C. 증가 살모넬라 복제를 렌더링 엘레 감염된 웜 (10)의 조기 사망의 결과. (여기에 autophagy라고 함) Macroautophagy이 저하 12 리소좀에 배달 세포질과 세포 기관을 격리시키는하기 위해 세포 내 세포막의 재 배열을 포함하는 역동적 인 과정이다. 에 autophagy는 C.에서 살모넬라 복제를 제한하기 위해보고되었다 엘레와 포유류 10, 13에. C. elegans의 게놈 염기 서열 첫 번째 다세포 진핵 생물의 게놈이었다; 이는 RNAi의 치료 14-16에 응답한다. 또한,이 RNAi의 RNAi의이 (16, 17)를 먹이로 알려진 표적 유전자의 이중 가닥 RNA를 포함하는 박테리아를 섭취하도록 웜을 실시함으로써 효과적으로 투여 될 수있다. 전체 게놈 RNAi의 먹이 라이브러리는 게놈 전체의 RNAi는 16, 18 심사에 대해 생성되었습니다. 여기서, 살모넬라 균 감염 프로프로토 콜은 RNAi의이 테스트 C. 허용하도록 먹이와 결합 살모넬라 균 감염으로부터 보호하기 위해 자신의 능력에 대한 관심 elegans의 유전자.

<table><tbody><tr><td>LB 국물</td><td>Fisher</td><td>BP9723-500</td><td></td></tr><tr><td>XLD 한천</td><td>EMD 화학 물질</td><td>1.05287.0500</td><td></td></tr><tr><td>Bacto 한천</td><td>Fisher</td><td>DF0140-01-0</td><td></td></tr><tr><td>펩톤</td><td>Fisher</td><td>BP1420-500</td><td></td></tr><tr><td>염화나트륨</td><td>Fisher</td><td>S671-500</td><td></td></tr><tr><td>염화칼슘</td><td>Fisher</td><td>C69-500</td><td></td></tr><tr><td>마그네슘 황산</td>염 <td>피셔</td><td>M65-500</td><td></td></tr><tr><td>IPTG</td><td>골드 생명 공학</td><td>12481C50</td><td></td></tr><tr><td>콜레스테롤</td><td>시그마</td><td>C8667-25G</td><td></td></tr><tr><td>암피실린</td><td>피셔</td><td>BP1760-25</td><td></td></tr><tr><td>살모넬라 티피무리움</td><td>ATCC</td><td>ATCC14028</td><td></td></tr><tr><td>페트리 접시 95 x 15mm</td><td>피셔</td><td>FB0875714G</td><td></td></tr><tr><td>페트리 디쉬 60 x 15 mm&nbsp;</td><td>Fisher</td><td>08-757-13A</td><td></td></tr><tr><td>Falcon Serological 피펫</td><td>Fisher</td><td>13-668-2</td><td></td></tr><tr><td>Falcon Express Pipet-Aid</td><td>Fisher</td><td>13-675-42</td><td></td></tr><tr><td>MaxQ6000 쉐이킹 인큐베이터&nbsp;</td><td>Thermo Scientific</td><td>SHKE6000-7</td><td></td></tr><tr><td>인큐베이터</td><td>Percival</td><td>I-36DL</td><td></td></tr></tbody></table>

감염 프로토콜<em&gt; 예쁜 꼬마 선충</em&gt;와<em&gt; 살모넬라 티피 뮤 리움 (salmonella typhimurium)</em

A Protocol to Infect Caenorhabditis elegans with Salmonella typhimurium

지난 10 년, C. 엘레은 그람 음성 박테리아 살모넬라 티피 뮤 리움 (Salmonella typhimurium)에 대한 숙주 방어를 포함하여, 호스트와 병원체 사이의 상호 작용을 연구하는 무척추 생물로 떠오르고있다. 살모넬라 균은 C.의 소장에서 지속적인 감염을 설정 엘레 감염된 동물의 조기 사망의 결과. 면역기구의 수는 C.에서 확인되었다 살모넬라 균 감염에 대해 방어하는 엘레. autophagy에, 진화 적으로 보존 된 리소좀의 분해 경로는 C에서 살모넬라 균의 복제를 제한하기 위해 표시되었습니다 엘레와 포유류. 여기서, 프로토콜은 C. 감염 설명 벌레가 인간의 살모넬라 균 감염과 유사한 제한된 시간에 대한 살모넬라 균에 노출 된 살모넬라 티피 뮤 리움 (Salmonella typhimurium)와 엘레. 살모넬라 균 감염은 크게 C.의 수명을 단축 엘레 &lt;/ EM&gt;. 예를 들어 필수 autophagy에 유전자 BEC-1을 사용하여, 우리는 C.으로이 감염 방법을 결합 엘레 RNAi의 접근법은 먹이와이 프로토콜은 C.의 기능을 검사하는 데 사용될 수 보였다 살모넬라 균 감염에 대한 방어 엘레 호스트 유전자. 이후 C. elegans의 전체 게놈 RNAi의 라이브러리를 사용할 수 있으며,이 프로토콜은 포괄적 C.에 대한 화면으로 가능하게한다 게놈 전체의 RNAi 라이브러리를 사용하여 살모넬라 균 등 장내 병원균에 대한 보호 elegans의 유전자.

20 ° C에서, 야생 형 N2 벌레의 평균 수명은. 살모넬라 균 감염이 크게 10.5 일 N2 웜의 평균 수명을 감소 십칠일 (그림 2A 및 표 2)는 (P = 0.0002, 로그 순위 검정) (그림 2A ). 만약 C. 엘레 유전자는 살모넬라 감염에 대한 방어에 중요한 역할을, 그것은 그것의 억제는 살모넬라 감염에 대한 감수성을 부여 할 것으로 예상된다. 사실, 살모넬라 균에 감염된 제어 RNAi의 처리 N2 동물에 비해, 살모넬라 균에 감염된 BEC-1의 RNAi 처리 N2 웜의 평균 수명은 (그림 9 일 (p &lt;0.0001, 로그 순위 검정) 10.5 일에서 감소 2b 및 표 2). 최대 ...

C. elegans의 호스트 병원체 상호 작용을 연구 할 수있는 새로운 유전자 모델로 떠오르고있다. 여기에서 우리는 C. 감염 프로토콜을 설명 살모넬라 감염에 대한 방어의 숙주 유전자의 역할을 조사하는 이중 가닥의 RNAi 간섭 기법과 결합 된 살모넬라 티피 뮤 리움과의 elegans.

감염 프로토콜<em&gt; 예쁜 꼬마 선충</em&gt;와<em&gt; 살모넬라 티피 뮤 리움 (Salmonella typhimurium)</em

In the last decade, C. elegans has emerged as an invertebrate organism to study interactions between hosts and pathogens, including the host defense ...

이 실험 절차의 전체적인 목적은 숙주-병원체 상호작용을 조사하기 위해 C. elegans에 salmonella를 감염시키는 것입니다. 우선 RNAi를 통해 숙주 유전자의 발현을 억제함으로써 이를 수행합니다. 절차의 두 번째 단계는 RNAi 처리된 벌레에 salmonella를 감염시키는 것입니다.감염된 벌레를 비병원성 rna eye 먹이 플레이트로 옮겨 감염을 중단시킵니다. 마지막 단계는 감염된 벌레의 생존 여부를 기록하는 것입니다. 이 데이터로부터 생존율을 계산하고, 최종적으로 salmonella에 대한 보호에 필수적인 유전자를 식별합니다.실험 절차 시연은 실험실 기술자인 Julie John이 진행합니다. 먼저 필요한 배양 플레이트를 준비하십시오. 우선, XLD agar 플레이트를 제작합니다.이 배지는 살모넬라에 선택적이며, 살모넬라는 해당 플레이트에서 검은색 콜로니로 나타납니다. XLD agar를 전체 부피의 물에 혼합하기 전에 1 g/mL 농도로 물에 재현탁하십시오. 오토클레이브(고압증기멸균)하지 마십시오.이 한천(agar)은 핫플레이트로 가열한 상태입니다. 플레이트당 25 milliliters의 한천을 부어 직경 95 millimeter의 XLD 플레이트 제작을 진행하십시오. RNAi 플레이트라고 불리는 RNAi 포함 NGM 공급 플레이트를 준비하려면 표준 방법을 사용하며, 간단히 설명하자면 고압 증기 멸균 후 배지에 암피실린(ampicillin)과 RNAi 화학적 유도제인 IPTG를 첨가합니다.냉각되면 60 millimeter 플레이트에 12 milliliters의 한천을 분주합니다. 이 플레이트들은 사용 전 4 °C에서 보관할 경우 최대 한 달 동안 사용할 수 있습니다. 먼저 박테리아와 함께 배양합니다. 이 예시에서 Beck 1은 salmonella에 대한 방어에 필수적이므로 표적 유전자입니다.먼저 RNAi 및 대조군 배양액을 준비합니다. -80 °C 보관함에서 냉동된 박테리아 조각을 ampicillin이 포함된 2 mL의 lb에 첨가합니다. 박테리아는 RNAi를 발현하거나, 발현하지 않더라도 공벡터(empty vector)를 포함하고 있어야 합니다.이 두 배양액을 인큐베이터로 옮겨 하룻밤 동안 배양합니다. 다음 날 즉시 박테리아를 사용할 수 있도록 이 작업은 매주 수행해야 합니다. 배양액 100 µL를 RNA eye 플레이트에 접종합니다.실험군과 대조군 각각에 대해 플레이트 유형별로 최소 3개씩 제작하십시오. 이 플레이트들을 37 °C에서 하룻밤 동안 배양하십시오. 다음 날, 플레이트를 상온으로 가져와 온도를 맞추십시오.그런 다음, 충분히 먹이를 준 L4 야생형 N2 자웅동체 벌레를 플레이트로 옮깁니다. 플레이트당 3마리의 벌레면 충분합니다. 같은 날 이 플레이트들을 20 °C에서 배양합니다.배양된 박테리아를 사용하여 RNAi 플레이트를 추가로 준비합니다. 20°C에서 36~40시간 후, 첫 번째 RNAi 플레이트에서 새로운 RNAi 플레이트로 벌레를 옮깁니다. 그 다음 20°C에서 64시간 동안 더 배양합니다.-80 °C 냉동 보관된 salmonella 스톡을 XLD 플레이트에 스트리킹하며 시작합니다. 플레이트를 37 °C에서 하룻밤 동안 배양합니다. 다음 날, 플레이트에서 독립된 검은색 콜로니를 선택하여 2 mL의 lb에 접종합니다.다음 날 아침까지 37 °C에서 하룻밤 동안 진탕 배양하도록 설정하십시오. 접종된 LB 배지를 사용하여 6개의 NGM 플레이트를 시딩합니다. 실온에서 6시간 후, 각 플레이트에 80 µL를 분주하면 박테리아 배양액이 건조되어 NGM 플레이트 위에 잔디 모양(lawn)으로 형성될 것입니다.그런 다음 RNAi 처리된 웜과 대조군 처리된 웜을 6개의 플레이트로 옮깁니다. 각 플레이트에 40마리의 웜을 분주하고 20 °C에서 48시간 동안 배양합니다. 이 시점부터 매일 새로운 RNAi 플레이어를 준비하기 시작하십시오.이는 생존 분석을 위해 2일 후 및 그 이후 매일 준비된 상태가 되도록 하기 위함입니다. 48시간 후, 감염된 벌레를 새로 준비한 RNAi 플레이트 또는 빈 벡터 대조군 플레이트로 다시 옮깁니다. 그 후, 이 플레이트들을 매일 알 낳기 시간 즈음에 20 degree Celsius 인큐베이터로 다시 넣습니다.충의 생존 여부를 확인하고, 생존한 충들을 새로운 RNA eye 플레이트로 옮겨 생존율을 측정합니다. 납작하게 만든 백금선으로 충을 부드럽게 자극하십시오. 반응이 없으면 충은 죽은 것입니다.산란기 동안에 수행합니다. 먼저 벌레를 확인한 후 내부 위생 관리를 통해 제거해야 합니다. 이러한 벌레들은 적시에 제거되어야 합니다.이 단백질 벌레를 실험군 벌레로 명확히 구분하여 계수하면 데이터가 상당히 체계적으로 정리될 것입니다. 벌레가 산란을 멈추면 일주일에 두 번만 신선한 RNAI 플레이트로 옮겨주면 됩니다. 개체군이 모두 폐사하면 해당 데이터를 통합하여 Kaplan-Meier 곡선에 생존율을 도식화하십시오.결론과 관계없이, 확실한 결과를 위해 실험을 최소 두 번 수행하십시오. 20 °C에서 야생형 N two 웜의 중앙 생존 기간은 17일입니다. Salmonella 감염은 N two 웜의 중앙 생존 기간을 10.5일로 유의미하게 감소시키며, 이는 Beck one RNAi 처리에 따른 예상 결과와 일치합니다.살모넬라 감염 후 생존율 감소. 평균 수명은 10.5일에서 9일로 감소했으며, 최대 수명 또한 유의미하게 짧아졌다. 이는 감염에 맞서 sea elegance를 방어하는 Beck one의 역할에 대한 근거를 제공한다.Beck one RNAi로 처리되었으나 살모넬라(salmonella)는 처리되지 않은 동물들입니다. 수명에 뚜렷한 변화가 없었습니다. 이 영상을 시청한 후, 살모넬라 감염에 대한 방어 과정에서 숙주 유전자의 역할을 조사하기 위한 RNAi 접근법과 감염 프로토콜을 수행하는 방법에 대해 충분히 이해하게 될 것입니다.

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Research

연구

JoVE Journal

Immunology and Infection

면역학 및 감염학

출처: 첸, Y. 외. Caenorhabditis elegans 모델에서 에어로모나스 감염의 병원성 및 병인기전 평가. J. Vis. 경험 (2018)이 영상은 C. elegans 를 이용한 생존 분석으로 에어 로모나스 병태를 모델링하며, 경구 섭취가 장내 감염과 사망률을 유발하여 살아있는 숙주 시스템에서 박테리아의 병원성을 정량적으로 평가할 수 있게 합니다.

생존 분석법을 이용한 C. elegans의 에어로모나스 병태 모델링

wormsorter 형광 기자의 표현에 따라 웜을 정렬하여 예쁜 꼬마 선충의 유전자 화면을 용이하게한다. 여기에서, 우리는 새로운 사용 설명 : GFP - 표현 병원체에 의한 식민지에 따라 정렬을, 우리는 면역 반응을 시작하기에 병원체의 인식의 불완전하게 이해 역할을 조사하기 위해 그것을 사용합니다.

의 자동 분리<em&gt; C. 엘레</em&gt; 가변 세균성 병원체에 의해 식민지

C. elegans의는 일반적으로 고체 한천 플레이트에 성장 또는 액체 문화에서 E. 씨앗을 품고있다 대장균. 독성 및 영양 연구를 혼동에서 세균의 부산물을 방지하기 위해, 우리는 다운 스트림 응용 프로그램의 범위에 대한 웜의 수가 증가하고 동기화, 무균 액체 배지, CeHR을 이용했다.

배양 예쁜 꼬마 선충 미세 폭격에 의한 무균 액체 미디어 및 형질 전환 웜의 생성에

여기, 선물이 미생물 상호 작용을 공부 하는 다양 한 호스트 모델로 선 충 류 꼬마 선 충 .

선 충 꼬마 선 충-모델을 다양 한 비보에 호스트-미생물 상호작용 연구

Zebrafish (Danio rerio) 널리 사용 된 척추 동물 모델 미생물 식민과 병에 대 한 되 고 있다. 이 프로토콜 zebrafish 애벌레에 식품을 매개로 감염에 대 한 차량으로 Paramecium caudatum protozoan의 사용을 설명합니다. P. caudatum 쉽게 박테리아를 유입 하 고 애벌레 zebrafish 자연 먹이 행동에 의해 촬영 얻을.

Zebrafish 애벌레에 음식 감염에 대 한 차량으로 Protozoan Paramecium caudatum 를 사용 하 여

이 프로토콜은 갈모넬라 구동 장 섬유증의 마우스 모델을 설명합니다 이는 국외 염증과 섬유증을 포함하여 크론병의 주요 병리학 적 특징을 닮았다. 이 방법은 C57Bl/6 유전 적 배경에 유지 돌연변이 마우스를 사용하여 섬유성 결과를 변경 호스트 요인을 평가하는 데 사용할 수 있습니다.

만성 살모넬라 감염 유도 장 섬유증

다음 프로토콜은 프로테오스타시스의 변화 평가로서 폴리글루타민 응집체를 정량화하기 위한 웜 배양, 형광 이미징 및 자동화된 이미지 처리를 위한 고처리량 워크플로우의 개발 및 최적화를 설명합니다.

Caenorhabditis elegans의 집계 정량화 자동화

microsporidian 기생충 Nematocida parisii에 의한 Caenorhabditis elegans의 감염은 웜이 동일한 병원균에 매우 저항력이있는 자손을 생산할 수있게합니다. 이것은 유전 된 면역의 예이며, 잘 이해되지 않는 후성 유전 적 현상입니다. 본 프로토콜은 유전적으로 견인성 웜 모델에서 유전된 면역의 연구를 기술한다.

Caenorhabditis elegans Model of Microsporidia Infection에서 유전 된 면역 연구

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Caenorhabditis elegans 건강에 영향을 미치는 미생물 분리물의 고처리량 스크리닝

이 프로토콜은 외부 박테리아를 제거하기 위해 감기 마비 및 표면 표백에 이어 박테리아 식민지화 된 Caenorhabditis elegans의 96-well 파괴를 설명합니다. 생성 된 현탁액은 한천 플레이트에 도금되어 많은 수의 개별 웜에서 박테리아 부하의 정확하고 중간 처리량 정량화를 허용합니다.

단일 웜 데이터를 사용하여 예쁜꼬마선충-박테리아 상호작용의 이질성 정량화

배우세요 C. elegans를 이용한 Salmonella typhimurium 감염 프로토콜로 숙주-병원체 상호작용을 연구하는 방법을 익히세요. RNAi로 유전자 발현을 억제하고 생존률을 분석하여 방어 유전자를 식별하는 실험 기술을 습득하세요.

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