마우스에 동종 CD4 T 세포 반응을 연구하기 위해 테일 피부 이식

다음 절차의 전반적인 목표는 꼬리 피부 이식을 수행하는 것입니다. 마우스 모델에서 T-세포 매개 거부 반응 또는 내성 유도를 연구하기 위해서는 먼저 기증자 마우스에서 꼬리 피부를 채취하여 이를 수행합니다. 두 번째 단계에서는 이식 부위를 수용 동물에 준비합니다.

다음으로, 이식편을 이식하고 마지막 단계에서 조직 접착제와 붕대로 고정합니다. 이식 후 7일째에 붕대를 제거하고 이식편에 점수를 매깁니다. 궁극적으로 T 세포 매개 동종면역 반응을 연구할 수 있습니다.

이 꼬리 피부 이식 기술은 생쥐의 동종 면역 반응 중 T 세포 의존성 거부 및 내성 유도를 연구하기 위한 강력한 모델을 제공합니다. 시술을 시작하기 전에 손가락 스트립 붕대를 열고 면봉으로 상처 패드에 바셀린을 바르고 거즈가 완전히 덮였는지 확인합니다. 다음으로, 안락사 된 기증자 마우스의 꼬리를 소독액으로 소독합니다.

그런 다음 깨끗한 플라스틱 보드에 꼬리를 놓습니다. 위쪽 검은색 줄무늬를 아래쪽으로 뒤집고 꼬리의 정중선을 따라 피부를 통해 세로 표재성 절개를 만듭니다. 집게를 사용하여 피부를 벗겨낸 다음 HBSS 10ml로 채워진 10cm 세포 배양 접시에 조직을 넣습니다.

마취된 수혜자 마우스의 등쪽 부위를 면도하고 마른 거즈 조각을 사용하여 오염된 털을 제거합니다. 면도 이식 부위를 무균 용액으로 소독 한 후 등쪽 오른쪽 중간의 집게로 피부를 끼우고 구부러진 가위를 사용하여 직경 1 × 0.6cm 정도의 둥근 절개를 만듭니다. 다음으로, 메스를 사용하여 절제된 기증자 꼬리 피부에서 이식편을 자르고, 모서리를 다듬어 조직을 둥글게 만들고, 이식편을 메스에 로드하고, 멸균 면봉으로 여분의 HBSS를 닦아냅니다.

그런 다음 건조된 조직을 수혜자 마우스의 이식 베드에 놓습니다. 기증자와 숙주 피부가 겹치지 않도록 조직 접착제를 접촉 영역에만 독점적으로 적용합니다. 그런 다음 마우스의 허리에 주름이 없는 석고를 감고 접착식 비탄성 붕대를 감고 석고를 마우스에 부착하여 마우스가 붕대에 이빨을 끼우는 것을 방지합니다.

회복하는 동안 재료의 상부 복부 쪽을 3mm 절개합니다. 따뜻해진 열 패드에서 완전히 회복된 후 이식된 동물을 우리로 되돌리고 이동성을 평가합니다. 붕대가 너무 빡빡하지 않도록 7일 동안 동물의 물에 파라세타몰 시럽을 넣어 쥐를 치료하십시오.

6-7일 후, 멸균 동맥 가위를 사용하여 이식 부위가 늘어나지 않도록 주의하면서 붕대를 자르고 조심스럽게 제거합니다. 마지막으로, 이식된 마우스에서 임상 징후를 모니터링하고 피부 이식편의 거부 반응에 대한 점수를 매깁니다. 이 실험에서 C 57 BL 6 마우스에 IABM 12 동종 이식편과 IAB 사인 이식편을 이식했습니다.

붕대를 제거한 후, 이식편은 C 57 BL 6 마우스에서 접촉 영역이 닫히지 않고 상처가 치유되는 징후를 보였습니다. 1-2주 후, CD 4 양성 T 세포 매개 염증으로 인해 이식편 내부에 괴사 부위가 나타났습니다. I A BM 12 동종이식의 거부 반응은 이식 후 13일 이내에 C 57 BL 6 마우스에서 관찰되었습니다.

syn grafts는 최대 100일 동안 허용되었습니다. MHC 클래스 2 불일치 꼬리 피부의 거부 반응은 동종 CD 4 개의 양성 T 세포의 존재에 달려 있습니다. 예를 들어, T-cell deficient CD three E knockout 마우스와 t 및 B-cell deficient RAG two knockout 마우스는 완전한 상처 치유를 보이며 최대 100일 동안 I a BM 12 이식을 견딥니다.

IABM 12 불일치 꼬리 피부의 수용으로 심각한 질병 병리가 없는 마우스 모델에서 동종 CD 4개의 양성 T 세포 및 이펙터 기능을 연구할 수 있습니다. 이 꼬리 피부 이식 모델의 장점은 CD 4 개의 양성 T 세포의 기능 분석이 항원 특이적 CD 4 개의 양성 T 세포의 채택 전달에 의해 쉽게 수행 될 수 있다는 것입니다.이 대표적인 실험에서, 2 배 10 대 4 항원 특이적 형질 전환 A BM 세포의 전달은 13 일 이내에 rag two knockout 마우스에서 IABM 12 그래프의 거부를 유도하기에 충분했습니다. A BM 세포를 발현하는 V alpha two V beta eight TCR chain은 EFL six 70 dilution assay에 의해 광범위하게 증식하고 PMA 자극시 IFN Gamma를 생성하는 것이 관찰되었습니다. 함께.

이러한 데이터는 1개의 A BM 12 피부 이식편을 거부하는 데 소수의 동종 CD 4개의 양성 T 세포만 필요하다는 것을 보여주며, 이는 심각한 병리학이 없는 경우 동종 T 세포 분석에 이상적인 모델입니다. 이 비디오를 시청한 후에는 꼬리 피부 이식을 수행하고 이식 거부 반응을 성공적으로 모니터링하는 방법을 잘 이해하게 될 것입니다.